Materia: Fundamentos de Biología Semestre: Cuarto

Molecular
Paralelo: 6954 Unidad: 2
NRC: 9720
Fecha: 23/06/2022 Tema: Enzimas de restricción
Alumno: Ashley Brigitte Guamantaqui Álava

Introducción
Las endonucleasas son enzimas que se encuentran en varias bacterias como enzimas que pueden
escindir cadenas de ADN o ARN mediante la escisión de enlaces fosfodiéster, también conocidas
como enzimas de restricción. Estos producen fragmentos llamados fragmentos restringidos. Es una
herramienta esencial en biología molecular y biotecnología. Su importancia radica en su gran
especificidad para reconocer secuencias cortas de ADN bicatenario e hidrolizar los enlaces
fosfodiéster de cada cadena que se encuentran siempre en la misma posición. Estas enzimas son de
diferentes tipos, como los tipos I y II, que reconocen una secuencia particular escindiéndola a
diferentes distancias del sitio de reconocimiento. Se utiliza en laboratorios de PCR para crear
sondas para hibridación e ingeniería genética. Cada enzima se caracteriza por su sitio o secuencia
de reconocimiento o restricción o secuencia diana. El fragmento de ADN resultante ayuda a iniciar
la clonación de células o sin células, el mapeo de restricción física o la detección de polimorfismos.

Objetivos
Objetivo general

Indagar conceptualmente la significancia sobre las endonucleasas o enzimas de restricción.

Objetivos específicos

● Establecer la función y tipo de las enzimas de restricción mediante una lectura comprensiva.
● Determinar el origen e importancia de las enzimas de restricción del organismo de que se
obtienen las enzimas
● Investigar la importancia de las enzimas de restricción en la biología molecular e ingeniería
genética.

Desarrollo

Enzimas de Restricción

Las enzimas de restricción también se denominan nucleasas de restricción, endonucleasas

de restricción y, en algunos casos, enzimas de restricción. Este grupo incluye una amplia variedad
de endodesoxirribonucleasas que se ha descubierto que son enzimas específicas para una variedad
de bacterias. Muchos de ellos con alta especificidad, estabilidad y pureza están actualmente en el
mercado. Las enzimas de restricción son nucleasas que escinden el ADN de doble cadena cuando
reconocen un patrón de secuencia particular. Crean fragmentos de ADN conocidos como
fragmentos de restricción. Las enzimas de restricción son herramientas esenciales en biología
molecular, ingeniería genética y biotecnología. Las enzimas de restricción son nucleasas que
escinden el ADN cuando reconocen un patrón de secuencia particular. La importancia de las
enzimas de restricción radica en su alta especificidad para reconocer secuencias cortas de ADN
bicatenario e hidrolizar los enlaces fosfodiéster de cada cadena que se encuentran siempre en la
misma posición. Por lo tanto, cada enzima se caracteriza por su sitio o secuencia de reconocimiento
o restricción o secuencia diana. El fragmento de ADN resultante es útil para iniciar la clonación de
células o sin células, el análisis de ADN, el mapeo de restricción física o la detección de
polimorfismos. Estas enzimas se clasifican de la siguiente manera:
● Tipo I
● Tipo II
● Tipo III

Las enzimas de restricción son una herramienta básica en Biología molecular: en laboratorios de
PCR, creación de sondas para hibridación, laboratorios de secuenciación de ADN, ingeniería
genética, procesos de clonación, manejo de genotecas y en muchas otras áreas de genómica. A
continuación, se muestra una tabla que indica de donde se extraen las enzimas de restricción.

Tabla 1. Enzimas de restricción

Fuente: https://www.bioted.es/protocolos/INTRODUCCION-ENZ-RESTRICCION.pdf

Sistemas de restricción-modificación (M-R)

Tipo I: En la misma enzima tiene 2 subunidades para la restricción, 2 subunidades para la
modificación (metilación) y una subunidad para el reconocimiento. Tanto la metilación como el
corte requieren de ATP. El corte se da a alguna distancia del lugar de reconocimiento. Poco valor
para la manipulación genética.
Tipo II: La restricción (división) y modificación las provocan diferentes enzimas de la bacteria,
por lo que puede haber división del DNA en ausencia de modificación. No requieren de cofactores
como ATP o S-adenosilmetionina por lo que su uso es más sencillo. El lugar de reconocimiento
generalmente es simétrico y cortan al DNA en el lugar de reconocimiento.
Tipo IIs: Son parecidos a los del tipo II, pero la restricción ocurre en lugares del DNA alejados del
lugar de reconocimiento, por lo que su uso en ingeniería genética también es reducido.
Tipo III: Tienen lugares de reconocimiento simétricos, pero se parecen en lo demás a los sistemas
del tipo I, por lo que son poco útiles. Algunas enzimas de restricción no entran dentro de esta
clasificación.

Ejemplos:

A continuación se mostraran algunos ejemplos de enzimas de restricción

ENZIMA ORIGEN BACTERIANO SITIO DE RESULTADO DE
RECONOCIMIENTO CORTE

EcoI Escherichia coli 5'GAATTC 5'---G AATTC---3'

3'CTTAAG 3'---CTTAA G---5'

BamH Bacillus amyloliquefaciens 5'GGATCC 5'---G GATCC---3'

3'CCTAGG 3'---CCTAG G---5'

DpnI Diplococcus pneumoniae CH3 CH3

| |
5'GATC 5'---GA TC---3'
3'CTAG 3'---CT AG---5'
| |
CH3 CH3

HindIII Haemophilus influenzae 5'AAGCTT 5'---A AGCTT---3'

3'TTCGAA 3'---TTCGA A---5

TaqI Thermus aquaticus 5'TCGA 5'---T CGA---3'

3'AGCT 3'---AGC T---5'

NotI Nocardia otitidis 5'GCGGCCGC 5'---GC GGCCGC---

3'CGCCGGCG 3'
3'---CGCCGG CG---
5'

HinfI Haemophilus influenzae 5'GANTC 5'---G ANTC---3'

3'CTNAG 3'---CTNA G---5'

Sau3A Staphylococcus aureus 5'GATC 5'--- GATC---3'

3'CTAG 3'---CTAG ---3'

PovII Proteus vulgaris 5'CAGCTG 5'---CAG CTG---3'

3'GTCGAC 3'---GTC GAC---5'

SmaI Serratia marcescens 5'CCCGGG 5'---CCC GGG---3'

3'GGGCCC 3'---GGG CCC---5'
 HaeIII Haemophilus egytius 5'GGCC 5'---GG CC---3'
3'CCGG 3'---CC GG---5'

AluI Arthrobacter luteus 5'AGCT 5'---AG CT---3'

3'TCGA 3'---TC GA---5'

EcoRV Escherichia coli 5'GATATC 5'---GAT ATC---3'

3'CTATAG 3'---CTA TAG---5'

Kpn Klebsiella pneumonia 5'GGTACC 5'---GGTAC C---3'

3'CCATGG 3'---C CATGG---5'

PstI Providencia stuartii 5'CTGCAG 5'---CTGCA G---3'

3'GACGTC 3'---G ACGTC---5'

Sac Streptomyces achromogenes 5'GAGCTC 5'---GAGCT C---3'

3'CTCGAG 3'---C TCGAG---5'

SalI Streptomyces albue 5'GTCGAC 5'---G TCGAC---3'

3'CAGCTG 3'---CAGCT G---5'

Sph Streptomyces 5'GCATGC 5'---G CATGC---3'

phaeochromogenesStreptomy 3'CGTACG 3'---CGTAC G---5'
ces

XbaI Xanthomonas badrii 5'TCTAGA 5'---T CTAGA---3'

3'AGATCT 3'---AGATC T---5'
Tomado de: https://www.quimica.es/enciclopedia/Enzima_de_restricci%C3%B3n.html

Nomenclatura

El nombre de cada enzima de restricción se asigna según su origen bacteriano. La nomenclatura

utilizada para nombrar estas enzimas consiste en:

● 1er: Tres letras que corresponden al nombre científico del microorganismo (ej. Escherichia
coli (Eco); Haemophilus influenzae (Hin))

● 2do: La cepa, si la hay (p. ej., EcoR, aislada de la cepa RY13 de E. coli)

● 3ro: En números romanos, número para distinguir si hay más de una endonucleasa aislada
de esa misma especie. No confundir con el tipo de enzima de restricción.

● 4to: Todos deberían llevar una restricción R o una M metilasa delante de la función de la
enzima, pero generalmente se omite.
 Origen e importancia de las enzimas de restricción

Las endonucleasas de restricción forman parte de la maquinaria con la que cuenta la bacteria
para defenderse de infecciones virales. El ADN de la bacteria que produce la enzima de restricción
no se ve afectado por su propia enzima, ya que las bacterias metilan determinadas secuencias a su
propio ADN para diferenciarlo del ADN viral por medio de una enzima metiltransferasa en bases
específicas, que generalmente son las reconocidas por sus propias enzimas de restricción.

Estas enzimas fueron descubiertas en la década del ’70 y hasta la fecha existen más de 250
enzimas de restricción. Se cree que la función natural de estas enzimas en las bacterias es
protegerlas contra ADN de virus que podrían ingresar en sus células. De esta manera, la bacteria
utiliza estas “tijeras moleculares” para cortar en pedacitos el ADN viral que la infecta. El ADN
propio de la bacteria no se corta, pues lo tiene “protegido” contra sus propias enzimas de
restricción.

Las enzimas de restricción tienen diferentes aplicaciones que son de gran importancia en
investigaciones en biología molecular y en las técnicas que emplea la biotecnología moderna:

1. Hacer mapa de restricción de un plásmido o bacteriófago. El ADN se corta con varias

enzimas de restricción, solas y en parejas, para determinar el número de sitios de corte
y sus posiciones relativas en la molécula, el orden y la distancia entre ellos.

2. Fragmentar ADN para separación por electroforesis. Los fragmentos obtenidos después
de la actuación de las distintas enzimas de restricción se pueden separar por tamaños mediante la
técnica de electroforesis y así estudiar los distintos fragmentos. Por ejemplo: para la técnica de
Southern blotting o en las usadas para identificar polimorfismos de ADN en distintos individuos.

3. Generación de fragmentos para ser clonados en los vectores apropiados, y crear ADN
recombinante. Se puede cortar una molécula de ADN con una enzima y, con el mismo tipo de
enzima, cortar el fragmento de ADN de interés para clonar. Se unen con ligasas estas dos moléculas
de ADN, generando así una molécula de ADN recombinante. Este vector recombinante puede
usarse para transformar células que expresen el gen de interés clonado (si se usó un vector de
expresión con el promotor adecuado) o puede usarse simplemente para tener clonado (“guardado”)
ese fragmento de ADN de interés. Por ejemplo: para los proyectos de secuenciación de genomas

Conclusiones

Mediante lo situado en el tajo satisfecho se puede matar que se logró justificar la recital e gravedad
sobre las enzimas de restricción, demostrando que tonada nociones indispensables, ora sea en
laboratorios ya en ingeniería genética, ora que permiten retener más sobre el organismo
desprendido y la provecho de las bacterias. Además, se logró dar con varios ejemplos de enzimas
que permitieron ganar una mejor sabiduría del sinopsis pacto y se pudo adoptar varios métodos
arraigados a las enzimas, que tonada usadas en diagnósticos de enfermedades que tonada causadas
por una ensambladura genética ora sea hereditaria ya mutada.

Bibliografías

● Bioted. (15 de 06 de 2016). Enzimas de restricción. Obtenido de

https://www.bioted.es/protocolos/INTRODUCCION-ENZ-RESTRICCION.pdf
● Contreras, R. (13 de 06 de 2015). Endonucleasa. Obtenido de
https://biologia.laguia2000.com/bioquimica/endonucleasa
● Gámez, J. G. G. (s. f.). Endonucleasas de Restricción. Slideshare.com. Recuperado
11 de enero
● Ibañez, K. (2014). Enzimas de restricción. Slideshare.
https://es.slideshare.net/Katheprink/enzimas-de-restriccion-32428385 de 2022, de
https://es.slideshare.net/JaimeGuillermoGonzle/endonucleasas-de-restriccin-
64226117
● Thomas, G. (2019, 18 octubre). Examples of restriction enzymes. Lorecentro.
https://www.lorecentral.org/2019/10/examples-of-restriction-enzymes.html
● QUÍMICA.ES. (2003). QUIMICA.ES. Obtenido de Enzima de restriccion:
https://www.quimica.es/enciclopedia/Enzima_de_restricci%C3%B3n.html