ESCUELA DE INGENIERIA

BIOTECNOLOGICA
CURSO: BIOTECNOLOGIA ANIMAL
• III FASE PRACTICA N°9 :
• DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES POR ANALISIS
INMUNOLOGICOS: INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
• DIARREA VIRAL BOVINA
•

• OCT. 2022
INTRODUCCION
• La inmunofluorescencia es un método de diagnóstico muy
utilizado en inmunología para la detección y confirmación de
enfermedades producidas por bacterias, virus, hongos y
parásitos.
• La inmunofluorescencia es un método muy sensible y más
específico que otros métodos serológicos para el diagnóstico de
enfermedades.
 DIARREA VIRAL BOVINA
• La diarrea viral bovina (DVB) es una enfermedad viral que afecta
frecuentemente al ganado bovino.
• Es endémica en la mayoría de los países productores de ganado y
en algunos países se considera uno de los virus bovinos más
relevantes.
• La BVD afecta tanto a la reproducción como a la productividad de
los rebaños.
• Esta enfermedad puede provocar una reducción de la producción
de leche, retrasar el crecimiento, reducir la resistencia general
frente a otras enfermedades, aumentar la mortalidad en ganado
joven y reducir el rendimiento reproductivo.
BVD
INMUNOFLUORESCENCIA

• La inmunofluorescencia es una técnica

de inmunomarcación que hace uso de
anticuerpos unidos químicamente a una
sustancia fluorescente para demostrar la
presencia de una determinada molécula.
• La inmunofluorescencia directa se fundamenta en
la propiedad que tienen los antígenos (virus,
bacterias, hongos, parásitos, sustancias extrañas) de
unirse a los anticuerpos marcados con un
fluorocromo, dándole la coloración fluorescente
apropiada, la cuál será detectable ante un
microscopio de UV. (Especifico para
Inmunofluorescencia).
ENFERMEDAD DIARREA VIRAL BOVINA
• Es una enfermedad infecto contagiosa , de sintomatología variable dependiendo de la cepa infectante,
edad, estado inmune del huésped.
• Ocasionada por un Pestivirus de la familia Flaviviridae, que presenta varios genotipos: vDVB tipo 1 y
vDBD tipo 2, el ultimo presenta cuadros agudos graves e induce enfermedades respiratorias severas,
que se pueden ver complicadas con hemorragias agudas graves. Uno de los principales formas de
acción es a nivel reproductivo, provocando abortos, problemas de infertilidad, nacimientos con
malformaciones congénitas, etc. La enfermedad se presenta en todo el mundo y es endémica.
• Para su diagnóstico, se puede usar diferentes pruebas inmunológicas como ELISA,
Inmunohistoquímica,, PCR, también Inmunofluorescencia. Se puede hacer el análisis con suero y
también en vísceras de los animales , incluidos los fetos momificados
 VENTAJAS
• Más sensible
• Es rápido: en algunos casos una hora después de hecho el frotíz.
• Organismos muertos pueden ser identificados tan bien como los vivos.
• El método es de mucha ayuda para la identificación de organismos difíciles y fastidiosos como:
o Clostridium
o Leptospira. Etc.
• Evita trabajar con cultivos peligrosos para el hombre
• Puede ser usado en forma efectiva con:
• Material clínico Material de cultivos
• Ahorra tiempo y materiales
EQUIPOS
• EQUIPO:

• Microscopio de luz ultravioleta

• Cámara húmeda
• Incubadora a 37°C.
• Congeladora a -20°C.
 MATERIALES
• Láminas portaobjetos
• Láminas porta objetos con hoyos (especial para inmunofluorescencia).(Opcional)
• Láminas cubreobjetos
• Pipetas Pasteur
• Micropipeta de 100 a 1000 microlitros
• Micropipeta de 10 a 100 microlitros
• Kit par IF con el Conjugado, control positivo, control Negativo, etc (para la enfermedad con la que se esté
trabajando)
• Buffer
• Agua destilada
• Solución para el montaje : Glicerina + PBS 50:50.
• Acetona a -20°C
•
MATERIAL BIOLOGICO
• Tejidos : (Depende de la enfermedad con la que se trabaje:
Bazo, hígado, riñones, cerebro, etc).
• Bacterias
• Parásitos
• Sueros
• Secreciones y fluidos (Sueros, plasma, lágrimas, liquido
peritoneal, etc.
 PROCEDIMIENTO
• Preparar la impronta (frotiz) de la muestra y dejar secar a medio ambiente
• Fijar en acetona a -20°C por 30 minutos a 1 hora (dependiendo de la
enfermedad).
• Lavar con Buffer por 5 minutos
• Secar ó absorber el líquido con papel absorbente
• Aplicar el conjugado y poner en cámara húmeda
• Incubar a 37°C por 30 ó 40 minutos (dependiendo de la enfermedad).
• Lavar con buffer 10 minutos y agua destilada por 5 minutos.
• Secar
• Realizar el montaje con la lámina cubreobjetos (dependiendo del kit)
• Observar al microscopio
•
RESULTADOS
• Positivo: Cuando al observar al microscopio se vera la
fluorescencia
• Color verde : cuando se usa Isocianato de fluoresceína
• Color rojo : cuando se usa Rodamina
• Negativo: No se observa fluorescencia en el microscopio
•
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA BIOTECNOLOGICA

BIOTECNOLOGIA ANIMAL
PRACTICA N°8 CONTAMINACIÓN DE
ALIMENTOS PROVENIENTES DE
ANIMALES POR MICRORGANISMOS
BACTERIAS y HONGOS
OBJETIVOS DE LA PRACTICA

• OBJETIVO.-
• - Explicacción y reconocimiento de microorganismos que contaminan los alimentos provenientes de animales.
• Resultados para el comtrol de calidad de alimentos.
• - Realizar las actividades del Laboratorio Virtual, para Control de Calidad.
Control de calidad de alimentos
• La Importancia del control de calidad en los alimentos
• Existen controles de calidad muy diversos,
• En diferentes etapas del proceso de producción:
• En productos terminados
• Antes de su distribución,
• sistemas de muestreo para determinar ausencia o presencia de
elementos.
Control de calidad de alimentos

• Controles microbiológicos son para detectar patógenos como Listeria,

Salmonella, Shigella, Legionella, Vibrio, Staphyloccus, E.coli, etc.;

• Controles químicos para identificar contaminantes y residuos como

pesticidas, herbicidas, insecticidas, antibióticos, reguladores del
crecimiento, metales pesados, etc.

• Controles físicos se podrá reducir el riesgo y eliminarlo a través del

programa de pre requisitos tales como el programa de higiene y
saneamiento,
• buenas prácticas de manufactura y el plan HACCP
Validación y control de calidad de alimentos
Control de calidad de
alimentos
RESULTADOS
BACTERIAS MÁS COMUNES EN ALIMENTOS
• Salmonella. Es una de las principales causas de
gastroenteritis bacteriana
• Campylobacter. Aún más frecuente que las intoxicaciones por
salmonella.
• Clostridium perfringens.
• Bacillus cereus.
• Staphylococcus aereus.
• Listeria Monocitogenes.
• Eschericchia coli.
MICROORGANISMOS MAS COMUNES EN
ALIMENTOS
• Las bacterias son los patógenos más habituales en los alimentos, aunque no
son los únicos.
• Virus, mohos y levaduras también suelen frecuentar los alimentos.
• Las bacterias pueden causar al consumidor infección e intoxicación, son dos
consecuencias diferentes.
• La infección se produce por la ingesta de alimentos contaminados con
bacterias vivas que entran en el huésped y provocan la enfermedad.
• La intoxicación, en cambio, aparece cuando se ingieren alimentos que antes
se han contaminado con bacterias que producen toxinas, y estas últimas son
las que causan la enfermedad.
• Sin embargo, el denominador común de todas ellas son los síntomas
gastrointestinales que producen: dolor abdominal, nauseas, vómitos,
diarreas, calambres, fiebre,
Tinción y observación del moho de la cebolla
y del queso
Objetivo: Tener una primera toma de contacto
con los distintos tipos de hongos existentes.
Fundamento: Facilitar la observación
microscópica de hongos obteniendo un cultivo
sobre un portaobjetos.
Materiales:
• Azul de lactofenol
• Muestras (cultivo de hongo de la
cebolla y cultivo del hongo del queso)
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Microscopio
• Asa de siembra
• Mechero Bunsen
Tinción y observación del moho de la cebolla
y del queso
Procedimiento para ambos hongos:
1. Poner una gota de colorante sobre el
portaobjetos
2. Flamear el asa
3. Coger una pequeña cantidad de la muestra
4. Realizar el frotis sobre la gota de colorante
5. Flamear el asa
6. Colocar un cubreobjetos
7. Observar en el microscopio con un aumento
de 40X
Obtención de resultados: En ambos casos
podemos observar la morfología de los hongos e
incluso en el caso del hongo del queso
visualizamos esporas.
Medios de cultivo
Concentración / Recuento de microorganismos

En microbiología, la unidad formadora de colonias​​ es una unidad de medida que se

emplea para la cuantificación de microorganismos, es decir, para contabilizar el número
de bacterias o células fúngicas ​ viables en una muestra líquida o sólida.

UFC = Unidad Formadora de Colonias(en inglés: CFU-Colony Forming Units) es un término de la

microbiología.
Es una unidad de medida que se emplea para la cuantificación de microorganismos, es decir, para
contabilizar el número de bacterias o células fúngicas, viables en una muestra líquida o sólida.
Este valor, determinado por el número de colonias individuales, describe el número de células de
un organismo en el agua. Estos pueden ser bacterias u hongos que viven y se multiplican en el
agua.
MÉTODOS UTILIZADOS
Los métodos empleados para la valoración o recuento de microbios , se
clasifican en dos grandes grupos:
Cualitativos
Cuantitativos
Estos métodos se utilizan para detectar la posible presencia de ciertos patógenos
como Salmonella, Clostridium botulinum, Esc. Coli, Listeria monocytogenes, etc

METODOS CUANTITATIVOS:
Estructurados para determinar o calcular de manera directa o
indirecta, la carga microbiana del material analizado.
Directo E IndirectoEjm: Recuento de aerobios en placa de
petriRecuento de anaerobiosRecuento de microorganismos
TermorresistenteConteo de coliformesConteo de hongos y levaduras.
METODOS CUALITATIVOS
METODOS CUALITATIVOS PARA AISLAR
MICROORGANISMOS
Aislamiento de patógenos: determinar si una
muestra contiene o no, células o esporas viables
de un patógeno específico. (Salmonella, Listeria,
Vibrio y Shigella

1El proceso de aislamiento

Enriquecimiento previo no selectivo: reparar

células lesionadas o estresadas y proliferen hasta
una cantidad medible.
Enriquecimiento selectivo: proliferación del
patógeno específico y multiplicación abundante.
Diferenciación e identificación: desarrollo de
colonias características del patógeno y realización
de pruebas bioquímicas preliminares y serológicas
confirmativas
METODOS CUANTITATIVOS
Estructurados para determinar o calcular de manera
directa o indirecta , la carga microbiana del material
analizado.
Ejm: Recuento de aerobios en placa de Petri
Recuento de anaerobios
Recuento de microorganismos Termorresistente
Conteo de coliformes
Conteo de hongos y levaduras. Etc.
METODOS CUANTITATIVOS: CONTEO DIRECTO
1.Microscopio de contraste de fase se evidencian células coloreadas. Reportar los resultados como
cuenta microscópica por ml ó g del producto. Se reporta como cuenta microscópica por ml o g del
producto.
DESVENTA JA :No se diferencia entre células vivas o muertas; no se puede realizan en los alimentos
que contienen partículas,
la muestra debe contener más de 106 microorganismos por ml o g.
Ahora es posible el conteo de bacterias vivas, Gram (+/-) por medio de fluorescencia.

UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (UFC)

2. En medios de agar no selectivos: agar plate count, tripsina soya, agar nutritivo, agar cerebro corazón.Ej: mesófilos
aerobios 37°C 48h; Psicrotrófos 7°C 10 días y 10°C 7 días. Se cuenta el número de colonias presentes.

En medios diferenciales no selectivos:

Adicionar componentes para diferenciar características que las hacen particulares. Ej: indicador de pH púrpura de
bromocresol, sustancias como fuente de carbono como la lactosa, yema de huevo.

El reporte de UFC estará enfocado en las manifestaciones microscópicas del grupo bacteriano.
En medio de agar selectivo: se agrega uno a mas inhibidores como antibióticos o sales donde sólo pueda proliferar los
microorganismos que sean resistentes a ellos.
CONTEO INDIRECTO
1. Diluciones hasta a extinción en caldos no selectivos:consiste en preparar diluciones
seriadas de una muestra y transferir 1ml o 0.1 a 10ml de un caldo final no selectivo como
el tripticasa soya.

2. Se examinan los tubos para observar si hubo proliferación bacteriana según la

turbidez del medio.
El reporte dependerá de la cantidad de microorganismos presentes a partir de la máxima
dilución de muestra con la que se produce multiplicación microbiana.
Ej: turbidez en la dilución 10-6= células por ml / g.

3. Prueba de reducción de colorantes : Basado en el principio que algunos colorantes,

como azul de metileno tiene un color en estado de oxidación, pero son incoloros en
estado de reducción (directamente proporcional con la carga bacteriana del producto).

4. Conteo de grupos de microbios lesionados por medios selectivos:

En el caso de coliformes y células bacterianas patógenas con lesiones subletales, los
microorganismos pueden morir durante el conteo en medio de agar selectivo, ya que
desarrollan sensibilidad a los agentes agregados.
Recuento de bacterias
El conteo bacteriano señala la magnitud de la población total bacteriana.
Se puede determinar por diversas técnicas que se basan en algunos de los siguientes tipos de
medida:
1. Cuenta celular (directamente al microscopio )
2. Contador electrónico de partículas (indirectamente con cuenta colonias),
3. Masa celular (en forma directa pesando el contenido celular del nitrógeno) 4.
Indirectamente por turbidimetría, proporcional al número de células)
5. Por actividad celular (indirectamente relacionando el grado de actividad bioquímica
al tamaño de la población bacteriana).
6. Otros

6. Otros:
- recuento por plaqueo
 PETRIFILM PARA COLIFORMES , MESÓFILOS,
OTROS
La placa Petrifilm es un
Petrifilm comprende un sistema que se utiliza
agente gelificante soluble en en industrias para cultivar
agua fría, nutrientes e varios microorganismos es
indicadores de actividad y un método más eficiente
recuento. para la detección y
enumeración de bacterias
 RECUENTO DE BACTERIAS EN PLACA
•
• Una célula o un grupo de células
dará origen a una colonia luego de
la siembra e incubación.
• Por lo general se evalúan
muestras pequeñas y
representativas, por lo que se
pueden producir errores
(necesidad de repeticiones)
• Presencia de viables no cultivables
(pH, temperatura, tiempo, medio
de cultivo)
 SIEMBRA EN SUPERFICIE : METODO DE
EXTENDIDO EN PLACA
• • Siembra en
superficie
• La muestra se
inocula en la
superficie de la placa
de Petri que contiene
el medio de cultivo
adecuado.
• Microorganismos
aerobios estrictos,
facultativos
 METODO DE VERTIDO EN PLACA
•
Siembra en placa vertida
• La muestra se inocula en
el fondo de la placa de
Petri estéril y vacía y luego
se vierte el medio de
cultivo adecuado.
• Microorganismos
aerobios facultativos y
anaerobios
aerotolerantes
 Recuento de Bacterias en Placa Por Diluciones
• Conteo en placa de petri
• Método más usado para contar bacterias.
• Se prepara un caldo de cultivo, el cual posteriormente se vierte en las
placas de petri.
• Dependiendo del tipo de sembrado, puede que la muestra se encuentre
incorporada en el agar (Pour method) o
• puede que la muestra se disperse sobre el agar gelificado (Spread
method).
• Es de suponerse que cada célula o grupo de células presentes en la
muestra se reproducirá en sus múltiples alrededores para producir
"colonias de células" separadas en el agar.
• Cada colonia es llamada unidad formadora de colonias (UFC).
• Es importante considerar un número limitado de colonias pues de no ser
así, éstas pueden sobrepoblarse y dificultar el conteo de las mismas (rango
sugerido de acuerdo a FDA 25-250 colonias, otros dicen entre 30 -300
colonias)
• El conteo se facilita utilizando un contador de colonias.
• Este método es deseable porque arroja el total de células viables (sólo
células vivas); en contraste con el conteo microscópico y el conteo de peso
seco.
• Una desventaja radica en el tiempo que requiere para producir las colonias,
ya que se necesitan como mínimo 24 horas o más.
 TÉCNICA DE DILUCIONES SERIADAS
Técnica de diluciones seriadas
Muestra líquida
9 ml sol fisiológica10 -310-4 10-5
10-6 1
ml muestra + 99 ml solución
fisiológica
1 ml10 – Poner en Placa Vertida.
Las placas se incuban por un período
de 24 a 48 h a 37°C
Se cuentan las UFC en la placa en que se
observen entre 30 y 300.
El número de UFC se multiplica por la
inversa de la dilución donde se realizó la
lectura.
Ej. 80 UFC x 104 ( de la dilución 10-4)
El resultado se expresa en
UFC / mLde muestra
Conteo por filtración
• Es realizado cuando la cantidad de bacterias es muy pequeña, como en
• casos de lagos y arroyos relativamente puros.
• En esta técnica se necesitan al menos 100 mL de agua que atraviesen una
membrana delgada de un filtro, con poros tan pequeños que no permitan
el paso de bacterias, de esta forma éstas son retenidas en la superficie del
filtro.
• Posteriormente el filtro es transferido a una caja de petri que cuenta con un
caldo nutritivo, en la cual las colonias surgen de las bacterias en la
superficie del filtro. Las colonias bacterianas formadas por este método son
distintivas cuando ocupan un medio diferencial.

• Este método es aplicado frecuentemente en la detección y

enumeración de bacterias coliformes, las cuales son
indicadores de contaminación fecal en la comida o en el
agua.
 Método del número más probable (NMP)
• Es una técnica de estimación estadística basada en el hecho que a mayor número
de bacterias en una muestra, mayor será la dilución necesitada para reducir la
densidad hasta el punto en que ninguna bacteria se le permita crecer en la serie de
tubos de dilución.
• Muestras microbianas son añadidas a tubos con caldos de lactosa y la presencia o
ausencia de gas formado en la fermentación y da un estimado de número de
células.
• Este método es más útil cuando las bacterias que están siendo contados no
crecerán en medios sólidos, como en el caso de las bacterias nitrificantes
quimioautótrofas.
• También es útil cuando el crecimiento de la bacteria es en un medio líquido
diferencial, usado para identificar microbios, como en bacterias coliformes.
• El NMP es la única afirmación en la cual existe 95% de probabilidad que la
población bacteriana sea de rango correcto, siendo el número estadístico más
probable.
https://www.youtube.com/watch?v=PfuEPnp
qGm0
https://www.youtube.com/watch?v=Ro8WoU7Hg
uY
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Medios para mantenimiento de cepas: Rn

Medios para crecimiento en general: Rn Re

Re Co
Medios para identificación: Rn

Medios para aislamiento: Rn Re Co In

Requerimientos no energéticos

Requerimientos energéticos

Colorantes u otros

Inhibidores
DILUCIONES
COLIMETRIA PRESUNTIVA
• COLIMETRIA PRESUNTIVA

• Como ya se ha mencionado la Colimetría presuntiva es cuando se busca y determina el número de coliformes ,

mediante la inoculación de la muestra en diferentes concentraciones.

• Cuando la reacción es negativa en la primera prueba (tubos) indicaría que no hay presencia del microorganismo.

• Siendo el fundamento de la prueba la determinación e identificación de bacterias Coliformes, que son

bacterias:

- Gram negativas, - Aerobias ó anaerobias facultativas

- No forman esporas - Fermentan la lactosa
- Producen gas - Acido a 37°C en 48 horas

• Las coliformes fecales producen también ácido y gas a 44°C en menos tiempo (24 horas).

•
COLIMETRIA
• COLIMETRIA

• Búsqueda de
bacterias coliformes
en diferentes
cantidades de agua
así determinar la
cantidad de bacterias
viables.
 COLIMETRIA PRESUNTIVA
• BÚsqueda de y determinación del Numero de Coliformes mediante
el cultivo de distintas cantidades de agua problema 0.1, 1 y 10ml.
De agua
• Usando tubos con caldo lactosado y con campanas de Durham para
retener el gas que se genere en los procesos metabólicos de las
coliformes presentes en el agua e indicador de Ph que vire a ácido.
A las 24 horas a 48 de Incubación.
• Lo cuál se hará la lectura a través de las tablas del Numero Más
Probable (NMP)
Colimetría
Estreptometria
• En el caso de la búsqueda de Streptococcus fecalis “Enterococo”, se usa Caldo Rothe,
• tiene dentro de sus componentes la azida de Sodio la cuál inhibe el desarrollo de las
bacterias Gram (-)
Colimetria presuntiva
• El fundamento de la prueba la determinación e identificación de
bacterias Coliformes, que son bacterias:
•- Gram negativas, - Aerobias ó anaerobias facultativas
•- No forman esporas - Fermentan la lactosa
•- Producen gas - Acido a 37°C en 48 horas
• Las coliformes fecales producen también ácido y gas a 44°C en
menos tiempo (24 horas).
Lectura de colimetria presuntiva
• 1. Lectura de los tubos inoculados en la practica anterior:

• Las muestras inoculados en los tubos del caldo lactosado se debe de observar en cada
uno de los tubos inoculados las siguientes reacciones:
• a. La coloración amarilla que se dará por el viraje del indicador de pH
• b. Color amarillo que se produce debido a la fermentación de la lactosa que
acidificará el medio.
• c. Se observará la formación de gas en las campanas de Durham

• 2. Luego se hará el recuento del numero más probable (NMP), a cuán positivo sea ó
si éste es negativo.
• 3. Se evaluará los casos positivos , los cuales se van a comparar con los resultados
en la tabla de Número Mas Probable (NMP)
Estreptometria
COLIMETRIA CONFIRMATIVA
•

• COLIMETRIA CONFIRMATIVA

• Se considera una reacción positiva cuando existe ligero cambio en los tubos ó reacción muy débil.
Considerándose a éstos para poder hacer el seguimiento a través de la colimetría confirmativa, haciendo uso
de placas con diferentes agares específicos, para cada una de las bacterias a identificarse.

•
RESULTADOS DEL DESARROLLO DEL NMP
CULTIVO EN PLACA DESDE LOS TUBOS DE NMP
 Utilización de medios de cultivo

• Separación y aislamiento de las distintas especies microbianas

presentes en una muestra.
• Como paso previo para el estudio de identificación de un
microorganismo problema
• Conocer el tipo de metabolismos que presenta en función del
nutriente o sustrato que utiliza o metabolismo que produce.
• Estudio macroscópico. Visualizar las características de las colonias
en medios sólidos.
•
• AGAR EMB (AGAR
EOSINA AZÚL DE
METILENO)
AGAR EMB
Streptococcus en KF
Strptococcus en Agar KF (Kenner fecalis)
 E.M.B. Agar.
• Aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias
nutricionales. (Todas Enterobacteriaceae)
• Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un
mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos
Gram negativos.
• La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son
incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un
efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas.

• Características del medio: Placas preparadas: color púrpura.

• La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color
púrpura se restaura por agitación.
AGAR EMB : Aislamiento
selectivo de bacilos Gram negativos
de rápido desarrollo y escasas
exigencias nutricionales. (Todas
Enterobacteriaceae)
 Mac Conkey Agar.
• Aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos.
• Diferencia: bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimento
(Familia Enterobacteriaceae )
• Las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano
• La lactosa es el hidrato de carbono fermentable,
• La mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo
de gran parte de la flora Gram positiva.
• Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje
del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de
las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.
• Características del medio
Medio preparado: rojo púrpura
AGAR mCcONCKEY :
Aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo,
aerobios y anaerobios facultativos.
Diferencia: bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras
clínicas, de agua y alimento (Familia Enterobacteriaceae )

S.aureus

N.Gonorrhoeae
S.Enteritidis
 Manitol Salado Agar.
• Selectivo y Diferencial de estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos, productos cosméticos y
otros materiales de importancia sanitaria.
• También, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halófilas de Vibrio, si no se dispone de medios
apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.),
• El extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales,
• El manitol es el hidrato de carbono fermentable.
• El cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la
flora acompañante
• El rojo fenol es el indicador de pH.
• Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con
lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.
• Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.
• Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una
zona del mismo color.
• Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo
color o púrpura.
• Características del medio: Medio preparado: rojo
AGAR MANITOL SALADO:
Selectivo y Diferencial de estafilococos patogénicos a
partir de muestras clínicas, alimentos, productos
cosméticos y otros materiales de importancia
sanitaria.

Staphylococcus epidermidis
LECTURA DE LAS PLACAS
TINCION DE GRAM
PRUEBAS BIOQUIMICAS
 Pruebas IMViC
I: Producción de Indol (Tubo AP) I: Añadir unas gotas de xilol (Indol I), agitar y dejar reposar.
M: Rojo de Metilo (Tubo CG) Añadir unas gotas de reactivo de Erlich (Indol II).
M: Añadir unas gotas del indicador Rojo de Metilo
Vi: Voges Proskauer: Producción Vi: Añadir unas gotas de α-naftol (VP I) y unas gotas de KOH
al 40% (VP II) y agitar.
de acetil metil carbinol (Tubo CL)
C: Ver color del tubo.
C: Utilización de Citrato (Tubo C)

Medio Agua Peptonada Medio Caldo Glucosado Medio Clark y Lubs Medio Citrato (C)
(AP) (CG) (CL)

Indol + Indol - RM + RM - VP + VP - Citrato + Citrato -

PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA CONFIRMACION BACTERIAS
API
OTROS CULTIVOS
PETRI FILM PARA RECUENTO DE BACTERIAS
 PETRIFILM PARA COLIFORMES , MESÓFILOS,
OTROS
La placa Petrifilm es un
Petrifilm comprende un sistema que se utiliza
agente gelificante soluble en en industrias para cultivar
agua fría, nutrientes e varios microorganismos es
indicadores de actividad y un método más eficiente
recuento. para la detección y
enumeración de bacterias
AGAR CROMO PLATE
CONTADOR DE COLONIAS
OTROS MEDIOS PARA ANALISIS DE AGUA Y
ALIMENTOS
 MATERIALES
PARTE I 1. Placas Sembradas en Agar sangre y Agar McConckey
1. Muestras de vísceras del animal con el que se trabaje. 2. Tubos de caldo selenito sembrado
1. Muestras de otros especimenes 3. Medios de cultivo diferenciales: TSI y Urea
2. Placas de Agar sangre y Agar McConckey 4. Placas sembradas en Agar saboraud
3. Agar nutritivo 5. Placas sembradas en Agar sensitest
4. Agar saboraud 6. Asa bacteriológica
5. Petri film 7. Mechero
6. Agar cromoplate 8. Batería de la coloración de GRAM
7. Asa de kohlle 9. Láminas Portaobjetos
8. Mecheros 10. Agua destilada
9. Agua destilada 11. Aceite de inmersión
10. Autoclave 12. Microscopio
11. Equipo para captar las bacterias del medio ambiente •
PROCEDIMIENTO
• Para el aislamiento e identificación de bacterias de los alimentos:
1. Frente al mechero, esterilizar la hoja de bisturí, y quemar la zona del órgano del cuál se tomará la muestra
para el cultivo, hacer un corte y tomar la muestra de la parte interna.
2. Tomar la muestra e inocular con estrías suaves en Agar Sangre y Agar McConkey.
3. En las muestras líquidas hacer la inoculación, tomando la muestra directamente con una asa y realizar el
cultivo directamente en Agar Sangre y Agar McConkey
4. Incubar a 37°C por 24 horas
5. Hacer la lecturae identificar las bacterias que producen la contaminación.