U.N.A.

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza

Análisis e identificación de lípidos de la

yema de huevo por cromatografía en capa
fina

Asesor: Fernando Francisco Hernandez Clemente

Integrantes:
Guevara Martínez Helen Jaqueline
Hernandez Lobato Yuritzi
Jimenez Antonio Jesús Armando
Ruíz Cantú Alejandra

Fecha de finalización: 03 de octubre de 2022

Fecha de entrega: 17 de octubre de 2022

# de equipo 10
Grupo: 1451
A) CUANTIFICACIÓN DE FÓSFORO:

1) Preparación del patrón: Se pesaron 0.4394 g de fosfato monopotásico y se

disolvieron en 1000 ml (solución stock). De ésta solución se tomó 1 ml y se
aforó a 10 ml (solución de trabajo);
a) Calcula la concentración de la solución de trabajo en gramos fosfato
monopotásico/ml.

Datos Cálculos
0.4394 g de KH2PO4
0.4394 𝑔 −4
= 4. 394𝑥10 𝑔/𝑚𝐿 solución stock
1000 mL de agua 1000 𝑚𝐿

Solución de trabajo 1 mL en 10 mL → 1:10 ∴

−4
4.348𝑥10 𝑔/𝑚𝐿 −5
10
= 4. 394𝑥10 𝑔/𝑚𝐿 de KH2PO4

b) Haciendo la relación molar entre el PM del fosfato monopotásico y el

peso atómico del fósforo, calcula los microgramos de fósforo/ml de la
solución de trabajo.

Datos Cálculos
KH2PO4 =136 g/mol
Hay un mol de átomos de P en el KH2PO4 ∴
P =31 g/mol
136 g de KH2PO4 ———— 31 g de P
−5 𝑔 −5 𝑔
4. 394𝑥10 𝑚𝐿
KH2PO4 ————x= 1. 0016𝑥10 𝑚𝐿
𝑑𝑒 𝑃

Conversión a μ𝑔:

−5 𝑔 1000 𝑚𝑔 1000 μ𝑔 μ𝑔 μ𝑔
1. 0016𝑥10 𝑚𝐿
( 1𝑔
)( 1 𝑚𝑔
) =10.016 𝑚𝐿
≈ 10 𝑚𝐿

c) De la solución de trabajo se tomaron alícuotas de 0 ml, 0.2 ml, 0.6 ml,

1 ml, 2 ml y 3 ml se aforaron a 10 ml y se procesaron con el método de
Fiske y Subbarow para obtener las absorbancias mostradas en la tabla
calibrando con blanco de reactivos; calcula los microgramos de fósforo
en estos tubos 1 al 5.

1
 Tubo Cantidad de patrón (mL) Absorbancia Concentración µg
1 0.2 0.051 2
2 0.6 0.081 6
3 1 0.12 10
4 2 0.208 20 Datos
5 3 0.282 30 experimentales
Fosforilado con blanco de papel 0.094 Datos del
profesor
No fosforilado con blanco de papel 0.026

Tubo 1 Tubo 3 Tubo 5

μ𝑔 μ𝑔 μ𝑔
10 𝑚𝐿
(0.2 mL) = 2 µg 10 𝑚𝐿
(1 mL) = 10 µg 10 𝑚𝐿
(3 mL) = 30 µg

Tubo 2 Tubo 4
μ𝑔 μ𝑔
10 𝑚𝐿
(0.6 mL) = 6 µg 10 𝑚𝐿
(2 mL) = 20 µg

2) Realiza la curva estándar con los datos del punto anterior y los valores de
absorbancia experimentales de tu equipo o en su defecto con los de la tabla,
recordando linealizarla (obtén r cuadrada), el título completo (el método es el
mismo del manual), unidades en X y Y, qué punto corresponde a que tubo;
Todos los datos, cálculos siguientes para la muestra problema deben ser con
otro color diferente.

2
 3) En la curva anterior, interpola los datos de absorbancia de las muestras
problema (fosforilados y no fosforilados), y señala en "X" el valor numérico
obtenido para dichas muestras problema;

4) Haz las correcciones necesarias para obtener los microgramos de P en los

LF y LNF así como el P total. Para ello considera lo siguiente: Del líquido
resultante de la digestión de lípidos (LF y LNF) se tomó respectivamente 1 ml
de LF y de LNF y se aforaron a 50 ml. De éstos se tomó 1 ml, se aforó a 10
ml y se le agregaron los reactivos del método de Fiske y Subbarow para
obtener su absorbancia calibrando con blanco de papel

Tubo Absorbancia Concentración µg

Fosforilado con blanco de papel 0.094 8.0733
No fosforilado con blanco de papel 0.026 0.6010
Nota: Estos datos no fueron los obtenidos experimentalmente en nuestro trabajo ya
que su absorbancia medida, no era congruente (para cada caso) respecto al blanco.
Para obtener los PTotales:

8. 0733µ𝑔𝑃 + 0. 6010µ𝑔𝑃 = 8. 6744 µ𝑔𝑃

3
PTotales con el factor de dilución:

Se tomó 1 mL de LF y de LNF de la digestión y se aforaron a 50 mL ∴

(8. 6744µ𝑔𝑃) 𝑥 50 = 433. 7184 µ𝑔𝑃

5) Si de lípidos fosforilados la muestra que se pesó fue de "x" mg (lo que

pesaron=100%), calcula el % de P que representa el valor obtenido de P en
el inciso anterior.

Experimentalmente se pesaron 0.01 g, por lo tanto:

1000 𝑚𝑔 1000 µ𝑔
0. 01 𝑔 ( 1𝑔
)( 1 𝑚𝑔
) = 10, 000 µ𝑔

10,000 µg ------------- 100%

433.7184 µg ------------- x= 4.3372%

B) CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA: CCF: Usen sus imágenes si su equipo

obtuvo buenos resultados/imágenes de CCF. Si no tuvieron resultados aceptables o
no realizaron el experimento usen las imágenes aquí proporcionadas.

1) Usando las imágenes de CCF escriban sobre cada uno de los

cromatogramas y al lado de la marca (“mancha”) el nombre de los diferentes
lípidos observables revelados (tomen como referencia las imágenes del
documento PDF del classroom, aunque en las imágenes aquí mostradas,
pudieran no aparecer todos los que debieran).

4
Revelado con molibdato

Revelado con yodo

Revelado con ninhidrina

5
Revelado con bismuto

2) De las placas mostradas con los diferentes reveladores, seleccionen un carril

vertical y calculen los Rf´s de los lípidos con “palomita” verde, enlistándolos

6
 formato de tabla y en ese orden, mostrando los cálculos respectivos dentro
de la celda (las “palomitas señalan los que deben aparecer pero pudieran no
aparecer todos).

𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (𝑑1)

𝑅𝑓 = 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 (𝑑2)

Molibdato

Lípido Molibdato Rf

Fosfatidil-
etanolamina
✅ 𝑅𝑓 =
5.31 𝑐𝑚
6.6 𝑐𝑚
= 0. 8045

Fosfatidilcolina ✅ 𝑅𝑓 =
3.24 𝑐𝑚
6.6 𝑐𝑚
= 0. 491

Fosfatidilserina ✅ 𝑅𝑓 =
2.6 𝑐𝑚
6.6 𝑐𝑚
= 0. 394

Esfingomielina ✅ 𝑅𝑓 =
2.34 𝑐𝑚
6.6 𝑐𝑚
= 0. 355

Lisolecitina ✅ 𝑅𝑓 =
1.3 𝑐𝑚
6.6 𝑐𝑚
= 0. 197

Yodo

7
 Lípido Yodo Rf

Fosfatidil-
etanolamina
✅ 𝑅𝑓 =
6.77𝑐𝑚
7.82 𝑐𝑚
= 0. 8657

Fosfatidilcolina ✅ 𝑅𝑓 =
4.29 𝑐𝑚
7.82 𝑐𝑚
= 0. 5486

Fosfatidilserina ✅ 𝑅𝑓 =
3.5 𝑐𝑚
7.82 𝑐𝑚
= 0. 4476

Esfingomielina ✅ 𝑅𝑓 =
2.39 𝑐𝑚
7.82 𝑐𝑚
= 0. 3056

Lisolecitina ✅ 𝑅𝑓 =
1.02 𝑐𝑚
7.82 𝑐𝑚
= 0. 1304

8
 Ninhidrina

Lípido Ninhidrina Rf

Fosfatidil-
etanolamina
✅ 𝑅𝑓 =
9.28 𝑐𝑚
11.68 𝑐𝑚
= 0. 7945

Fosfatidilcolina ❌ ❌
Fosfatidilserina ✅ 𝑅𝑓 =
5.47 𝑐𝑚
11.68 𝑐𝑚
= 0. 4683

Esfingomielina ❌ ❌
Lisolecitina ❌ ❌

9
 Bismuto

Lípido Bismuto Rf

Fosfatidil-
etanolamina
❌ ❌
Fosfatidilcolina ✅ 𝑅𝑓 =
3.13 𝑐𝑚
7.29 𝑐𝑚
= 0.4293

Fosfatidilserina ❌ ❌
Esfingomielina ✅ 𝑅𝑓 =
1.85 𝑐𝑚
7.29 𝑐𝑚
= 0. 2538

Lisolecitina ✅ 𝑅𝑓 =
0.85 𝑐𝑚
7.29 𝑐𝑚
= 0. 1166

3) Incluir para cada revelador:

a) Nombre de revelador
b) Tipo general de lípidos que revela.
c) La estructura específica de un lípido de esa categoría indicando
donde reacciona el revelador (basarse en el ejemplo de la última
página del documento pdf del classroom).

10
 Molibdato

Lípido Molibdato Tipo general de Lípido específico

lípidos que revela
Fosfatidil-
etanolamina
✅ Para fosfolípidos El reactivo de
molibdato de sodio
Fosfatidilcolina ✅ para fosfolípidos en

✅
general. Reacciona
Fosfatidilserina con el grupo fosfato

Esfingomielina ✅
Lisolecitina ✅

Yodo

Lípido Yodo Tipo general de lípidos Lípido específico

que revela
Fosfatidil-
etanolamina
✅ Identifica lípidos que en
su estructura
El reactivo de yodo
para revelar lípidos
Fosfatidilcolina ✅ contengan dobles con insaturaciones.

✅
enlaces.
Fosfatidilserina

Esfingomielina ✅
Lisolecitina ✅

11
 Ninhidrina

Lípido Ninhidrina Tipo general de Lípido específico

lípidos que revela
Fosfatidil-
etanolamina
✅ Revela lípidos que Para
contienen grupos amino-fosfolípidos.
Fosfatidilcolina ❌ amino primario y

✅
secundario
Fosfatidilserina

Esfingomielina ❌
Lisolecitina ❌

Bismuto

Lípido Bismuto Tipo general de Lípido específico

lípidos que revela
Fosfatidil-
etanolamina
❌ Para fosfolípidos Lípidos que contienen
con colina. colina.

12
 Fosfatidilcolina ✅
Fosfatidilserina ❌
Esfingomielina ✅
Lisolecitina ✅

Lípidos que deben ser revelados en cada caso. A veces no se visualizan todos por
diversas razones (cantidad de muestra aplicada, elución incompleta, etc)

Lípido Molibdato Yodo Ninhidrina Bismuto

Fosfatidiletanolamina ✅ ✅ ✅ ❌
Fosfatidilcolina ✅ ✅ ❌ ✅
Fosfatidilserina ✅ ✅ ✅ ❌
Esfingomielina ✅ ✅ ❌ ✅
Lisolecitina ✅ ✅ ❌ ✅
Referencias

Túnez F. I y Del Carmen M. M. 12. Cromatografía en capa fina de lípidos. [Internet].

Disponible en:
https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/12%20CROMATOGRAFIA%20D
E%20CAPA%20FINA%20DE%20LIPIDOS.pdf

Nelson, D. L., Cuchillo Foix, C. M., Lehninger, A. L., & Cox, M. M. (2009). Lehninger:
Principios de Bioquímica (5a. ed.). Barcelona: Omega. Pp. 349-354.

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