Caracterización Biológica, Principales factores de virulencia y diversidad genética de

las cepas de Bacillus Cereus

Bacillus cereus es una bacteria Gram positiva que causa enfermedades transmitidas
por los alimentos y está muy extendida en la naturaleza y alimentos. También se ha aislado
de una variedad de alimentos, particularmente en los alimentos listos para el consumo como
el arroz cocido y la ensalada mixta, (Park et al, 2009; Batchoun et al, 2011; Marrollo, 2016).

todos los aislamientos fueron probados para determinar su capacidad para: hidrolizar caseína,
almidón y tributirina; fermentar lactosa; crecer a 7 ◦C / 10 días.

La capacidad de los aislamientos examinados para hidrolizar la caseína se evaluó sembrando

cultivos en placas de agar agua suplementadas con leche UHT desnatada al 15% e
incubándolos a 30 ◦C durante 24 h. La aparición de zonas claras alrededor de las colonias
indicó la degradación de la caseína.

La capacidad de hidrolizar el almidón se determinó sembrando cultivos en estrías del aislado

examinado sobre agar nutritivo secado previamente en placas de Petri a las que se había
añadido almidón soluble al 0,25% (MERCK). Las placas con los cultivos estriados se
incubaron a 30 ◦C durante 3 días. Se colocó una gota de solución de yodo de Lugol en el
borde de las colonias que han crecido durante este tiempo. Las propiedades amilolíticas
(hidrólisis del almidón) fueron confirmadas por el color amarillo del reactivo.

La hidrólisis de tributirina se probó en un medio de agar tributirina (MERCK). Los aislados

de B. cereus examinados se secaron previamente en medio de agar tributirina en placas de
Petri. Las placas se incubaron a 30 ◦C durante 3 días. Las zonas claras alrededor de las
colonias bacterianas indicaron una prueba positiva para la hidrólisis de tributirina.

Los aislados también se probaron para determinar la capacidad de fermentar lactosa de

acuerdo con las instrucciones proporcionadas por Claus y Berkeley. En resumen, se recogió
una colonia del aislado examinado con un lazo a tubos de ensayo con un medio líquido que
contenía 2 g de (NH4) 2SO4, 0,5 g de extracto de levadura, 1 g de triptona, 3,22 g de
Na2HPO4, 0,12 g de KH2PO4, 0,17 g de rojo fenol. y 5,0 g de lactosa por litro. Las mezclas
se incubaron a 30 ◦C durante 48 h. El cambio de color del medio de rojo a amarillo indica
fermentación de lactosa.

Factores de Virulencia

Bacillus cereus produce una variedad de factores de virulencia y puede entrar en el

tracto gastrointestinal a través de la ingestión, donde causa diarrea y vómitos (Jensen et al,
2003; Stenfors Arnesen et al).

La diarrea se asocia con cuatro diferentes enterotoxinas, la hemolisina BL (HBL, codificada

por hblA, hblC, y hblD), enterotoxina no hemolítica (NHE, codificada por nheA, nheB,
nheC), enterotoxina FM (EntFM, codificado por entFM) y la citotoxina K (CytK, codificada
por cytK). CytK pertenece a un miembro de la familia de β-barril-toxinas formadoras de
poros que pueden causar intoxicación alimentaria grave, piel necrosis, hemólisis e incluso
muerte. La toxina EntFM es relacionada con las peptidasas de la pared celular (CWP) que
pueden causar enfermedades como la diarrea (Tran et al., 2010; Lund et al., 2000; Beecher et
al., 1995).
Mientras que el vómito o emesis es inducido por un dodecadepsipéptido cíclico pequeño,
estable al calor y al ácido ([D-O Leu-D-Ala-L-O-Val-L-Val] 3) toxina conocida como
cereulida que es sintetizado por péptido sintetasas no ribosomales codificadas por genes ces
(Ehling-Schulz et al., 2005).

Diversidad Genética

Los métodos de tipificación epidemiológica, como MLST, se consideran crucial para

estudiar la prevalencia de bacterias transmitidas por los alimentos. MLST es un enfoque
basado en la secuencia de nucleótidos para el inequívoco caracterización de aislamientos que
se ha utilizado ampliamente para tipificación epidemiológica y análisis de riesgo de muchos
patógenos.

Se asignaron 28 cepas a ST26, incluidas 18 cepas que se encontró que contenían el gen cesB.
ST26 es una cepa asociada con intoxicación alimentaria que provoca vómitos e incluye dos
cepas clínicamente aisladas (NC7401 y F4810 / 72); (Agata et al., 2002)