Revista CENIC.

Ciencias Químicas
ISSN: 1015-8553
juan.araujo@cnic.edu.cu
Centro Nacional de Investigaciones Científicas
Cuba

Xiques Castillo, Abmel; Velázquez, Luis Ramón; Prats Capote, Anaís

Formulación liofilizada para el marcaje del HEDP con 188Re
Revista CENIC. Ciencias Químicas, vol. 41, 2010
Centro Nacional de Investigaciones Científicas
La Habana, Cuba

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=181620500020

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Formulación liofilizada para el marcaje del HEDP con 188Re.

Freeze-dried formulation for the labeling of HEDP with 188Re.

Abmel Xiques Castillo1, Luis Ramón Velázquez1, Anaís Prats Capote2.

1. Centro de Isótopos, Ciudad de La Habana, Cuba. Email: axcastillo@yahoo.com

2. Centro de Investigaciones Clínicas, Ciudad de La Habana, Cuba. Email:
anais.prats@infomed.sld.cu

La correspondencia debe ser dirigida a:

Anaís Prats Capote

Centro de Investigaciones Clínicas

Dirección: 34 # 4501 e/ 45 y 47, Kohly, Playa, C. Habana.

Teléfonos: (537)-2030087. Fax: (537)-2043298.

E-mail: anais.prats@infomed.sld.cu.
Resumen.

Introducción: El objetivo del presente trabajo fue desarrollar una formulación liofilizada
que permitiera obtener el 188Re-HEDP con elevada eficiencia. Materiales y Métodos: La
formulación fue liofilizada en dos viales: A. HEDP, floruro de estaño (II), ácido gentísico y
ácido clorhídrico 0,1 mol/L; B. perrenato de sodio, acetato de sodio 0,054 g/mL en solución
de cloruro de sodio 0,9 %. En la eficiencia de marcaje del HEDP con 188Re se estimó la
influencia de 5 factores a partir de un diseño experimental del tipo 25 (pH, tiempo de
incubación a 80 °C, relación molar Sn2+:ReO4-, relación molar HEDP: ReO4-, masa de
perrenato de sodio). Se estudió la biodistribución del compuesto en ratas Sprague Dawly,
tras la administración i.v. de 0.75 mg de HEDP marcado con 188Re. Resultados y
Discusión: A partir de los resultados del diseño, se determinó que los factores que influían
en el marcaje eran el pH ácido, la adición de portador y una relación alta de HEDP: ReO4-.
El marcaje resultó >95%, estable por 72 h. Como resultado de la biodistribución, el HEDP
mostró una cinética sangre con una rápida distribución (T1/2α=0,29 h) y una fase de
eliminación más lenta (T1/2β=8,43 h). El volumen en el estado estacionario fue de 41,05
mL. La vía de eliminación preferentemente por vía renal (60%DI a las 24 h). La captación
ósea fue satisfactoria (0,97±0,07 %DI). Conclusiones: La formulación obtenida permitió el
marcaje con una eficiencia satisfactoria y con las características adecuadas para su uso in
vivo.
Palabras Claves: HEDP, Re-188, bisfosfonatos, metastasis óseas

Abstract.

Introduction: The aim of the present work was to develop a freeze-dried formulation to
obtain high yield of 188Re-HEDP. Materials y Methods: Formulation was lyophilized into
two vials: A. HEDP, stannous fluoride, gentisic acid and 0,1 mol/L clorhydric acid; B.
sodium perrenate, 0,054 g/mL sodium acetate in saline solution 0,9 %. The influence of 5
factors on 188Re-labeling yield was assessed by mean of a 25 experimental design (pH,
incubation time at 80 °C, Sn2+:ReO4- molar ratio, HEDP: ReO4- molar ratio, sodium
perrenate amount). Biodistribution study was performed after i.v. administration of 0.75 mg
de HEDP labeled with 188Re to Sprague Dawly rats. Results and Discussion: Outcomes of
experimental design allowed establish that the factors, which improved labeling yield were:
acid pH, the presence of the carrier and an increased HEDP: ReO4- molar ratio. 188Re-
Labeling yield was >95%, stable up to 72 h. Pharmacokinetics of 188Re-HEDP showed a
rapid distribution phase (T1/2α=0,29 h) and slower elimination phase (T1/2β=8,43 h). Steady
state volume was 41,05 mL. Radiopharmaceutical was mainly excreted through renal
pathway (60% ID up to 24 h). Bone uptake was satisfactory (0,97±0,07 %ID).
Conclusions: Attained freeze-dried formulation allowed efficiently labeling of HEDP with
188Re, showing satisfactory features for its in vivo use.
Keywords: HEDP, Re-188, bisphosphonates, bone metastases
Introducción

El cáncer ocupa el segundo lugar de incidencia entre todas las enfermedades en la mayoría
de los países desarrollados y en Cuba.1 Según las estadísticas, aproximadamente el 80% de
los pacientes oncológicos en estadíos avanzados desarrollan metástasis óseas. Estas se
caracterizan por el crecimiento de células neoplásicas y la destrucción del hueso, que causa
dolor, fracturas, anemia e hipercalcemia.

Cuando las metástasis en el esqueleto son diagnosticadas, resultan usualmente incurables,

siendo el dolor, el principal problema clínico a enfrentar. Con el objetivo de aliviar el dolor
provocado por estas lesiones se han aplicado diferentes procedimientos terapéuticos.2
Dentro de los procedimientos convencionales se encuentran: el tratamiento con analgésicos,
la radioterapia con fuentes abiertas, la quimioterapia y la terapia hormonal.3 Estos presentan
desventajas que conspiran contra la calidad de vida del paciente¡Error! Marcador no definido..

Un número significativo de pacientes con metástasis óseas pueden ser beneficiados con la
terapia paliativa del dolor con radioisótopos, que permite una mejoría del estado del
paciente con un mínimo de efectos adversos colaterales.3

Muchos radionúcleidos, con diferentes características físicas y químicas, están disponibles

o en investigación inicial. Todos ellos muestran su capacidad para aliviar el dolor con
modesta toxicidad relativa cuando se les compara con otras modalidades terapéuticas. En el
año 2000, ya habían sido aprobados en los Estados Unidos y la Unión Europea 3
32 89 153
radiofármacos para su uso en este tratamiento, estos son el Na3 PO4, SrCl2, Sm-
EDTMP5-7.

188
En los últimos años, el Re- HEDP se ha convertido en una alternativa promisoria con el
fin de aliviar el dolor producido por las metástasis óseas. Poder contar con una formulación
liofilizada que permita rendimientos de marcajes adecuados, abre una nueva posibilidad a
los pacientes aquejados de esta patología en nuestro país, con las ventajas que este tipo de
terapia representa.4-7
Es por eso que el objetivo de este trabajo, es obtener una formulación de un kit liofilizado
188
para el marcaje del ácido 1-hidroxietano-1,1- bisfosfónico (HEDP) con Re y evaluar sus
potencialidades como radiofármaco.

Materiales y métodos.
Preparación de kit liofilizado.

La formulación del radiofármaco se basó en la combinación de dos bulbos liofilizados; en

el bulbo A, se concentraron las cantidades necesarias de HEDP, fluoruro de estaño (II),
ácido gentísico y ácido clorhídrico 0,1 mol/L; mientras que en el bulbo B, fueron
concentradas las cantidades necesarias de perrenato de sodio, acetato de sodio 0,054 g/mL
y cloruro de sodio al 0,9 %.

Sistemas cromatográficos.

El rendimiento de reducción del ión perrenato (ReO4-) hasta el estado 4+ se determinó

utilizando cromatografía ascendente de capa fina empleando como fase móvil solución
fisiológica de NaCl y como fase estacionaria papel Whatman 1. El ión ReO4- asciende con
el frente de solvente y la especie reducida se queda en el punto de aplicación.

188
El rendimiento del marcaje con Re del ligando HEDP se determinó usando la misma
técnica cromatográfica con dos sistemas diferentes. El primero uso metiletilcetona como
fase móvil y papel cromatográfico Whatman 1 como fase estacionaria. En este sistema el
Re libre en forma de ReO4-, se mueve con el frente del solvente mientras que el compuesto
marcado y el coloide formado se localizan en el punto de aplicación. En el segundo se
emplea solución fisiológica de NaCl e ITLC; en este el renio libre en forma de ReO4- y el
compuesto marcado ascienden con el frente del solvente y el coloide formado se queda en
el punto de aplicación. La combinación de los resultados de los dos cromatogramas permite
la determinación de la pureza radioquímica.

Estudio del proceso de reducción del ión perrenato en presencia del agente reductor
floruro de estaño (II):
Con el objetivo de establecer los niveles de la variable Rmolar(Sn2+/ReO4-) a utilizar en el
diseño de experimento, se investigó que cantidad de sustancia de fluoruro de estaño (II) es
necesaria para lograr la reducción cuantitativa del ión perrenato en ausencia del agente
acomplejante HEDP. La masa de perrenato de sodio empleada en cada experimento fue de
1 mg y se varió la masa del SnF2 de forma que se alcanzaran las relaciones molares
Rmolar(Sn2+/ReO4-) 1, 6, 17, 35, 52 y 69. Cada relación molar, se evaluó inmediatamente
después del calentamiento (15 min a 80 0C) y 24 horas después.

Estudio de las variables que determinan el rendimiento de marcaje radioisotópico del

HEDP con 188Re, mediante un modelo de diseño experimental del tipo 25:

Para la obtención de la formulación se evaluaron 5 variables: pH, tiempo de calentamiento

(tcal), relación molar Rmolar(Sn2+/ReO4-), relación molar Rmolar(HEDP / ReO4-) y presencia de
portador (m(NaReO4)). En la Tabla 1 se muestran los datos relacionados con las variables y
sus niveles. La variable respuesta evaluada fue el rendimiento de marcaje.

Tabla 1: Datos referentes a los niveles de las variables evaluadas en el plan factorial 25
masa del Masa del Selección de
Nivel reactivo Nivel reactivo niveles
Variable Unidad inferior (mg) superior (mg)
pH 2,0 6,0 Prefijado
t. calentamiento horas 0,5 2,0 Prefijado
Rmolar(Sn2+/ReO4-) 17,0 1,3 (SnF2) 35,0 2,6 (SnF2) Determinado
1,5 Prefijado
Rmolar(HEDP/ ReO4-) 20,0 (HEDP) 100,0 7,5 (HEDP)
m(NaReO4) mg Sin portador 0 Con portador 0,1 Prefijado
Prefijado: establecido sin experimento previo. Determinados: establecido después de exp. preliminar

La matriz del diseño se muestra en la Tabla 2.

Tabla 2: Matriz del diseño de experimento con plan factorial 25
Variables del diseño
Corrida pH tcal (h) Rmolar(Sn2+/ReO4-) Rmolar(HEDP/ ReO4-) m(NaReO4)
(mg)
1 2 0.5 17 20 0
2 6 0.5 17 20 0
3 2 2 17 20 0
4 6 2 17 20 0
5 2 0.5 35 20 0
6 6 0.5 35 20 0
7 2 2 35 20 0
8 6 2 35 20 0
9 2 0.5 17 100 0
10 6 0.5 17 100 0
11 2 2 17 100 0
12 6 2 17 100 0
13 2 0.5 35 100 0
14 6 0.5 35 100 0
15 2 2 35 100 0
16 6 2 35 100 0
17 2 0.5 17 20 0.1
18 6 0.5 17 20 0.1
19 2 2 17 20 0.1
20 6 2 17 20 0.1
21 2 0.5 35 20 0.1
22 6 0.5 35 20 0.1
23 2 2 35 20 0.1
24 6 2 35 20 0.1
25 2 0.5 17 100 0.1
26 6 0.5 17 100 0.1
27 2 2 17 100 0.1
28 6 2 17 100 0.1
29 2 0.5 35 100 0.1
30 6 0.5 35 100 0.1
31 2 2 35 100 0.1
32 6 2 35 100 0.1

Para el marcaje, el bulbo B se reconstituyó con 2 mL de cloruro de sodio al 0,9 %, y

posteriormente se añadió al bulbo A. Finalmente se adicionó la solución de perrenato de
188
sodio Re (7,4 ± 0.2 MBq). La reacción se llevó a cabo calentando en un baño de agua a
0
80 C durante el tiempo establecido para el experimento.

Estudio de la estabilidad in vitro del 188Re-HEDP.

En este estudio se evaluó la estabilidad in vitro de la formulación obtenida a pH 2 y a pH 5-
6, efectuando determinaciones de la pureza radioquímica al transcurrir diferentes intervalos
de tiempo desde el marcaje. Se realizaron tres réplicas de cada experimento.

Estudio de biodistribución y farmacocinética.

Se utilizaron ratas de la línea Sprage Dawly suministradas por el CENPALAB con un peso
promedio de 185,3 ± 3,6 g. En la vena marginal de la cola se administraron 0,2 mL del
188
producto marcado equivalente a 0,75 mg de Re-HEDP. Los animales se colocaron en
jaulas metabólicas (Techniplast, Italia) durante el tiempo que duraron los estudios con
acceso al agua y comida peletizada ad libitum. Cada 4 horas se colectaron muestras de
orina y heces fecales. Las muestras de sangre se tomaron del plexo ocular en capilar
heparinizado a los 15 y 30 minutos así como antes de la toma de cada imagen. En todas las
muestras se determinó el porcentaje de dosis acumulada (%D)

La toma de imágenes gammagráficas se realizó al cabo de 1, 4, 8, 12 y 24 horas con

tiempos de adquisición de 10 minutos. Después de las 2 horas (3 animales) y 24 horas (3
animales) las ratas se sacrificaron por exceso de narcosis para la disección de los órganos
de interés.

Cálculo de los parámetros farmacocinéticos.

Los datos fueron ajustados a la ecuación exponencial de segundo orden correspondiente al

modelo bicompartimental con administración en bolo endovenoso:

C(t) = A*exp(-k1*t) + B*exp(-k2*t)

Donde:

C(t) es la concentración expresada en %D/mL de sangre

A y B son las concentraciones iniciales de las fases del modelo bicompartimental.

k1, k2 son las constantes de velocidad de las fases del modelo bicompartimental.
El ajuste se realizó utilizando el programa estadístico Statgraphic Plus para Windows
(versión 4.0, 1994-1999, Statistical Graphics Corp.) Todos los cálculos incluyendo los de
biodistribución se realizaron en hojas de cálculo de Microsoft Excel, especialmente
programadas para este propósito e incorporadas a un sistema de cálculo en preparación bajo
el título de BIODIST-PK por el Dpto. de Desarrollo del CENTIS.

Resultados y discusión.
Estudio del proceso de reducción del ión perrenato en presencia del agente reductor
floruro de estaño (II):

Del análisis de las formulaciones reportadas en la literatura, se observa que siempre el

agente reductor se encuentra en exceso, esto probablemente responde a que en solución
siempre hay oxígeno disuelto, el cual compite con la especie a ser reducida. Por lo que este
exceso garantiza el proceso de reducción del ión ReO4-.

En el presente trabajo, para seleccionar los niveles de la variable Rmolar(Sn2+/ReO4-), se

determinaron previamente cuales son las cantidades mínimas de agente reductor que
garantizan un alto % de reducción del ión ReO4- en ausencia de agente acomplejante, en
este caso se seleccionó un criterio de alrededor del 90%.

Los resultados muestran que para todas las muestras con Rmolar(Sn2+/ReO4-) mayor que 17,
se logra un rendimiento de reducción superior al 90% (Tabla 3). Los valores de reducción
observados cuando no se añade estaño son inferiores al 5% y pueden deberse a la reducción
del ión perrenato en el generador producto de la radiólisis.

Tabla 3 Rendimiento de reducción del ión perrenato con Sn2+ en medio ácido para
diferentes relaciones molares Rmolar(Sn2+/ReO4-).

Corrida Rmolar (Sn2+/ ReO4-) Rend Red.(%)

1 0 4,1 ± 0,7
2 1 7,5 ± 0,4
3 6 32 ± 2
4 17 92 ± 2
5 35 91 ± 1
6 52 95 ± 5
7 69 97,8 ± 0,6
De la ecuación 1 se observa que una Rmolar(Sn2+/ReO4-) = 1.5 serias suficiente para realizar
una reacción totalmente cuantitativa, por lo que, los valores seleccionados para los niveles
de la Rmolar(Sn2+/ReO4-) garantizan un exceso de agente reductor aunque nunca a los
niveles reportados en la literatura.

Ecuación 1

Obtención de una formulación para el 188Re-HEDP

A partir de los resultados obtenidos de la evaluación del modelo experimental (Tabla 4)

fueron calculados los coeficientes representativos de cada variable y de las interacciones
dobles. Los coeficientes de las interacciones que involucran a más de dos variables no
fueron determinados debido a que estos son de difícil interpretación

Tabla 4 Resultados de la evaluación del plan factorial 25

Corrida Rend de marc (%) Corrida Rend de marc (%)
1 2,6 17 39,9
2 2,5 18 11,0
3 8,7 19 37,6
4 24,1 20 7,2
5 7,2 21 11,4
6 5,6 22 7,5
7 7,2 23 3,7
8 3,8 24 15,3
9 39,0 25 87,3
10 7,1 26 11,6
11 25,8 27 43,1
12 3,5 28 7,6
13 54,0 29 96,1
14 13,4 30 27,8
15 42,5 31 97,2
16 7,5 32 14,9

Con el objetivo de determinar la varianza del error puro (Sep2), las corridas 13 y 29 se
hicieron con una réplica (Tabla 5).

Tabla 5: Determinación de la varianza del error puro

Corrida Rend marc (%) Rend marc réplica (%) Varianza del error puro
13 54,0 56,9
2,42
29 96,1 95,4

Los coeficientes obtenidos se resumen en la Tabla 6.

 Tabla 6 Datos referentes a los coeficientes del modelo experimental
Valor Fisher significativo (Si o
Coeficiente
Significado numérico calculado No)
B0 24,2 si
pH B1 -13,5 2301,3 si
tCalentamiento B2 -2,3 71,6 no
R(Sn2+/ReO4-) B3 1,8 40,9 no
R(HEDP/ReO4-) B4 11,9 1893,8 si
m(NaReO4) B5 8,3 908,6 si
B12 2,2 61,8 no
B13 -0,4 2,5 no
B14 -10,9 1585,4 si
B15 -6,1 485,1 si
B23 0,4 1,9 no
B24 -3,6 167,9 si
B25 -1,8 42,9 no
B34 6,3 517,1 si
B35 0,0 0,0 no
B45 3,8 188,2 si
Fisher de la
tabla
161

Los coeficientes que resultaron significativos corresponden a las variables pH, presencia de
portador y la relación Rmolar(HEDP/ReO4-).

pH

El pH es la variable que más influye y el proceso se ve beneficiado con su nivel más bajo.
Esto puede ser reflejo de algunos de los siguientes factores: primero los potenciales de
reducción del ion ReO4-. en medio básico(- 0,594 V) y ácido(0,510 V)8 indican que su
reducción se ve favorecida a pH ácidos y segundo el poder reductor del ion Sn2+ se
manifiesta fuertemente en la región ácida. Por otra parte, la formación del complejo Re-
HEDP y la protonación del HEDP son reacciones competitivas a pH ácidos, por lo que
pudiera ser contradictorio que los mayores rendimientos de marcajes se obtengan en esta
zona de pH. Este resultado también ha sido reportado para el complejo de Re-MDP.9 Sin
embargo, a pesar de que no se conoce la estructura del Re-HEDP, algunos autores han
reportado que al igual que el Tc-HEDP, está compuesto por una mezcla de especies
oligoméricas y poliméricas del HEDP enlazadas al Re por los oxígenos del fosfonato,10 la
formación de las cuales pudiera estar favorecida a pH ácido. En el desarrollo de las
formulaciones encontradas en la literatura no se reportan estudios de pH, en todas asume el
trabajo a pH iguales o inferiores a 2.11-14

Presencia de portador (m(NaReO4))

Los resultados muestran que las corridas donde no se adiciona portador a la formulación (de la
1 a la 16) los rendimientos de marcaje no superan el 60% (Tabla 5). En la literatura consultada
no existe una opinión homogénea en cuanto a la influencia de adición de portador en el
rendimiento de marcaje. Verdera y col.,14 encontraron que la adición de portador es crítica para
la obtención de buenos rendimientos de marcaje en tiempos razonables. Los experimentos
donde no adicionaron portador necesitaron tiempos de reacción mayores de 6 h. Lin y col.,15
estudiaron cuatro concentraciones distintas de portador y encontraron que este no influía en el
rendimiento de marcaje utilizando un tiempo de reaccion de 15 min., obteniendo valores
superiores al 95% incluso en las formulaciones donde no añadieron portador. El resto de las
formulaciones no evalúan la influencia de este parámetro en el rendimiento de marcaje. Sin
embargo, todos coinciden en que la presencia de portador influye significativamente en el
comportamiento biológico del radiofármaco.

En principio pudiera resultar contradictorio el hecho de que una disminución de la actividad

específica del radionúclido favorezca la mayor incorporación de este a un compuesto. Una
posible explicación pudiera encontrarse en lo reportado por algunos investigadores,13, 16 donde a
partir del estudio de muestras sólidas y soluciones congeladas de Re-HEDP, encontraron una
fuerte interacción metal-metal donde la distancia entre 2 átomos de Re era 2,4 Å. Este resultado
sugirió la existencia de un triple enlace Re≡Re, lo cual se contradecía con el hecho de que cada
átomo de Re estaba enlazado a 6 átomos de oxígeno de los grupos fosfitos del ligando HEDP,
con dos distancias de enlace diferentes (2 Å y 2,1 Å). A partir de estos resultados se propuso
una estructura en la que la unión entre los átomos de renio se establece por medio de un simple
enlace (Figura 2 y Figura 3). La longitud de la unión metal-metal, se ve disminuida por la
estructura cerrada y compacta de 4 moléculas de HEDP que rodean y se enlazan
simultáneamente a ambos átomos de Re. Además, los autores plantean que el Sn se encuentra
formando parte del complejo a través de 6 enlaces Sn-O (oxígeno de grupo fosfito). Este
complejo Re-(Sn)-HEDP tendría por estructura central a una cadena de 4 átomos de Re unidos
a través de simples enlaces.

Figura 2 Posible estructura del anión [Re(H2HEDP)3]- según Elder y col.16.

Figura 3 Posible estructura para (H-Sn) ReHEDP según Elder y col.16 (a) Armazón de oxígeno
y renio. (b) Unión de 4 ligandos HEDP a la armazón en a. (c) Un átomo de Sn
tetracoordinado por un ligando de HEDP. (d) Unión de los 4 restantes ligandos
HEDP a la armazón oxigeno-renio en b y unión de 4 unidades SnHEDP como las
mostradas en c a los ligandos de HEDP expuestos.
Aunque la estructura del complejo no ha sido confirmada, si se ha confirmado la presencia
del enlace Re-Re que solo fue encontrado en aquellas formulaciones con presencia de
portador y que parece ser el responsable de los altos rendimientos de marcaje.13

Rmolar(HEDP/ReO4-)

El rendimiento de marcaje se favorece con el nivel superior de la variable

Rmolar(HEDP/ReO4-) (100). Este resultado es lógico siendo el HEDP el ligando que
acompleja al renio durante el proceso de marcaje. Adicionalmente se obtuvo que la
interacción de esta variable con el resto de las variables estudiadas fue significativa (B14,
B24, B34 y B45) de los signos de estos coeficientes se concluye que el marcaje del ligando
HEDP se ve beneficiado con el menor nivel de pH, el menor nivel del tiempo de reacción,
el mayor nivel de la relación Rmolar( Sn2+/ReO4-) y el mayor nivel de la cantidad de
portador.

El coeficiente B15 también fue significativo, nos dice que la reducción del ión perrenato se
favorece con el menor nivel del pH.

Los coeficientes B2 y B3, correspondientes a las variables tcalentamiento y Rmolar(Sn2+/ReO4-)

respectivamente, no resultaron significativos presentando un valor numérico de signo
negativo en el caso de B2 y positivo en el caso de B3. Por lo que decidimos fijar el valor de
la variable representada por B2 en su menor nivel (tcalentami igual a 30 mn) y el de la variable
representada por B3 en su nivel superior (Rmolar(Sn2+/ReO4-) igual a 35). En la literatura
consultada,11-14 se asume que la cantidad de agente reductor influye significativamente
sobre el rendimiento de marcaje, aunque no es un parámetro que se estudie, sino
simplemente se adicionan excesos de agente reductor, en este trabajo el resultado obtenido
pudiera ser contradictorio, sin embargo, hay que tener en cuenta que los niveles de esta
variable se prefijaron en un rango que garantiza un rendimiento de reducción del ion ReO4-
superior a un 90%.

Para la correcta evaluación del modelo, fue calculada la varianza de adecuación SA2 17
a
partir de los rendimientos determinados mediante la ecuación de los coeficientes
significativos. El valor de SA2 obtenido fue 78,52 y la operación SA2 / Sep2 fue de 32,43; el
cual es inferior en módulo a 161 (valor de la distribución de fisher reportado para n1= 1,
n2= 1 y α= 0,05) por lo que podemos concluir que el modelo es adecuado.

Finalmente, a partir de los resultados del modelo experimental se decidió establecer los
siguientes valores para las variables cuya influencia fue significativas: pH = 2,
Rmolar(HEDP/ReO4-) = 100 y m(NaReO4) = 0.1 mg.

La formulación obtenida en este trabajo se desarrollo tomando como base las reportadas en
la literatura. Si se compara con la desarrollada por Lin y col.12 observamos que se
diferencian en que .la primera utiliza niveles de las relaciones molares Rmolar(Sn2+/ReO4-) y
Rmolar(HEDP/ReO4 inferiores aunque el tiempo de reacción usado se duplica. (Tabla 7)

Tabla 7: Comparación entre la formulación obtenida mediante el modelo experimental y la

reportada por Lin y col.12
portador t
Formulación (mg) Sn2+/ReO4- HEDP/ReO4- pH ác gent/ReO4- (mn)
Del modelo 0,1 35 100 2 59,6 30
Reportada 0,1 53 161 2 70 15
Por último, la formulación obtenida en este trabajo esta compuesta por:

• Bulbo A: 2,63 mg de SnF2, 7,5 mg de HEDP, 3.4 mg de ácido gentísico, 1 mL de ácido

clorhídrico 0.1 mol/L.
• Bulbo: 0.1 mg de NaReO4,, 9 mg de NaCl.

Y el rendimiento de marcaje obtenido con esta formulación fue del 97 ± 1 %., el cual esta
correspondencia con lo reportado en la literatura.11-14

188
Estabilidad in vitro del Re-HEDP

Los resultados del estudio de estabilidad in vitro muestraron que la formulación obtenida
tiene una mayor estabilidad a pH 2 (47 horas), independientemente que a pH entre 5 y 6
mantiene alrededor del 95% de la pureza radioquímica a las 17 horas (Figura 4). Estos
resultados son similares a los reportados por otros autores.14, 15
 120

Pureza Radioquímica (%)

100

80

60

40

20

0
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Tiempo (h)
pH = 2. pH entre 5 y 6.

Figura 4 Estabilidad de la formulación óptima a distintos valores de pH

Estudio de biodistribución y farmacocinética:

En la Tabla 8 se muestran los resultados del estudio de biodistribución a las 2 y 24 horas

mediante la técnica de disección de órganos.

Tabla 8: Resultados del estudio de biodistribución a las 2 y a las 24 horas después de la

administración.. Valores en %D±D.E., n=3
Hora de sacrificio
2h 24 h
%D %D
Hígado 0,7±0,2 0,1±0,1
Bazo 0 0
Riñones 1,1±0,2 1,1±0,4
Corazón 0,01±0,01 0
Estómago 2,4±0,4 0,31±0,2
Intestino delgado 0,5±0,2 0,18±0,04
Intestino grueso 0,4±0,2 0,3±0,1
Vejiga 3,4±0,3 1,4±0,4
Fémur 0,81±0,01 0,97±0,07
Heces 1,4±0,2 0
Orina 50,3±0,2 60,4±0,2
Cola 1,0±0,2 1,4±0,5

Como puede verse la captación hepática es inferior al 1% y en bazo no se detectó la

presencia del trazador tanto a las 2 horas como a las 24 horas después de la administración,
indicando la ausencia de radiocoloide. De la misma forma no se encuentra captación
apreciable en corazón y en intestinos. Esto está en correspondencia con lo reportado por
Lin y col.12, 15 La acumulación de algo más del 2% de la dosis en estómago obedece a la
presencia de 188Re libre en forma de perrenato también detectado cromatográficamente.

Como se conoce, los bisfosfonatos radiomarcados se excretan fundamentalmente por vía

urinaria 12, 14 de aquí que encontremos una acumulación importante en riñones a las 2 horas,
1 % de la dosis, y en orina 50,3 % y 60,4 % a las 2 y 24 horas respectivamente. Tanto
Verdera y col ¡Error! Marcador no definido. como Lin W. y col. 15 reportan para 2 horas
después de la administración valores de excreción por orina superiores al 60 % de la dosis
administrada. La radiactividad medida en fémur fue de alrededor de un 1 % para ambos
intervalos de tiempo indicando una rápida y permanente captación en tejido óseo.
En la figura 5 se muestran las imágenes gammagráficas tomadas a las 2, 8, 24 horas
después de la administración.

2 horas 8 horas 24 horas

Figura5. Imágenes gammagráficas del 188Re-HEDP en ratas.

Como se puede observar, encontramos una correcta delineación del sistema óseo del animal,
aún cuando la resolución no es buena utilizando el colimador de altas energías y propósitos
generales. A pesar de ello podemos notar también una captación preferente en la región de las
articulaciones de huesos largos, por ejemplo en las extremidades. Esto se debe a una mayor
captación en la epífisis de los huesos que, por ser la zona de crecimiento, es también la de
mayor actividad biosintética.
La gráfica de la Figura 6 muestra el perfil de concentración sanguínea con respecto al tiempo
obtenido de la medición de las muestras seriadas de sangre.

10
%D/mL
8

0
0 4 8 12 16 20 24
t (h)

Figura 6 Perfil farmacocinético del 188Re-HEDP

Los datos se ajustaron a la ecuación biexponencial correspondiente al modelo

bicompartimental con administración en bolo endovenoso6. El coeficiente de correlación de
99.6 % y el error estimado (0.20) indican que los datos obtenidos se ajustan adecuadamente
al modelo seleccionado.

A partir de estos resultados se calcularon los parámetros farmacocinéticos expresados en la

Tabla 9.
Tabla 9 Parámetros farmacocinéticos para las muestras de sangre de los animales
sacrificados a las 24 horas post-inyección.
Parámetros calculados Unidades Valor
T1/2 de la primera fase (distribución) h 0,29
T1/2 de la segunda fase (eliminación) h 8,43
Área bajo la curva %D/mL*h 25,19
Tiempo medio de residencia h 10,34
Tiempo medio de tránsito h 2,25
Concentración inicial %D/mL 11,21
Constante Intercompartimental K21 1/h 0,45
Constante de eliminación 1/h 0,45
Constante Intercompartimental K12 1/h 1,61
Aclaramiento total mL/h 3,97
Aclaramiento renal mL/h 2.40
Volumen compartimento central mL 8,92
Volumen compartimento periférico mL 32,14
Volumen en estado estacionario mL 41,05

La curva biexponencial se encuentra aquí bien definida, obsérvese la diferencia entre los
T1/2 de ambas fases. La primera fase o de distribución ocurre muy rápidamente,
concordando con la rápida eliminación en orina y la rápida captación en el tejido óseo.

El volumen de distribución del compartimiento central (Vc) de 8.9 mL indica su

correspondencia con el compartimiento sanguíneo, mientras que los elevados valores de los
volúmenes del compartimiento periférico y el del estado estacionario indican la rápida
extravasación del trazador. El cálculo del volumen de distribución obedece a la
determinación del movimiento del fármaco en el organismo y su distribución en los fluidos
corporales. Un valor elevado del mismo puede deberse a dos factores,6 una difusión hacia
los fluidos extracelulares u otros tejidos, una captación rápida y elevada en sitios receptores
de alta afinidad o una rápida eliminación. En nuestro caso consideramos que los altos
valores de los volúmenes del compartimiento periférico y en estado estacionario obedecen a
la rápida captación ósea y eliminación en orina.

El aclaramiento total es elevado (aproximadamente 4 mL/h) pero no se explica solamente

por la eliminación en orina puesto que el aclaramiento renal es de solo el 2.4 mL/h, lo que
quiere decir que existe una componente de aclaramiento desde la sangre que pudiera ser la
fracción acumulada en tejido óseo. Esto corrobora la observación anterior acerca de la
rápida captación ósea que se estima en un 24 % a las 24 horas.
Las constantes intercompartimentales también son un indicador del movimiento del
trazador, como k12 > k21 la transferencia hacia el compartimiento periférico es alta mientras
que su regreso es más lento.

En resumen, los estudios de biodistribución y farmacocinética sugieren que el radiofármaco

obtenido con la formulación desarrollada tiene potencialidades para su uso en la terapia
paliativa del dolor asociado a la metástasis ósea.

Por primera vez se obtiene en el país un kit liofilizado para la obtención del radiofármaco
188
Re-HEDP que permitirá en el futuro su comercialización para ser usado en la terapia
paliativa del dolor asociado a la metástasis ósea.

Conclusiones.
188
1. Se obtuvo una formulación para la obtención del radiofármaco Re-HEDP con un
rendimiento de marcaje superior al 95 %.
2. La formulación obtenida presenta una estabilidad elevada in vitro con un rendimiento de
marcaje superior al 95 % hasta 47 horas a pH = 2 y hasta 17 horas a pH entre 5 y 6 .
3. El estudio de biodistribución y farmacocinética de la formulación sugiere la selectividad
del radiofármaco por el sistema óseo, así como su conveniente excreción por vía renal y su
rápido aclaramiento en sangre, lo cual esta en correspondencia con lo reportado para este
tipo de producto.

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