Sesiones sobre Técnicas Separativas.

• Lunes 12/diciembre.

• Cromatografía de gases.

• Nuevas tendencias: CG rápida, CG multidimensional y CGxCG.

• Aplicaciones de la CG en el CTR.

• Martes 13/diciembre.

• Técnicas combinadas con CG.

• Aplicaciones de la CG con otras técnicas en el CTR.

• Cromatografía líquida.

• Aplicaciones de la CL en el CTR.

-1-
Frases…..

“Lo que no “pue´se”, no “pue´se” y además es

imposible”

Rafael Guerra “Guerrita”

-2-
SEMINARIO DE CROMATOGRAFIA DE
GASES

Jornadas sobre Técnicas de Instrumentaci ón Analítica. 12 y 13 de Diciembre de 2005.

Comentarios al Seminario

• Pretende ser un seminario para “todos los públicos”.

“Cine para todos los públicos”

• Se anima a participar todos.

• Un objetivo: “Aprender todos un poco”.

-4-
INDICE

1. Indice general

• Historia y cronología.

• Definición

• ¿Qué es un cromatógrafo de gases?.

• Teoría de la cromatografía de gases.

• Componentes de un cromatógrafo de gases.

Inyector.

Columna

Horno

Detector
• Análisis cualitativos y cuantitativos

• Instrumentación de los servicios analíticos del CTR.

• Aplicaciones al campo petroquímico.

-5-
 Historia y cronología

1773-Scheele.
1943-Damkohler y Theiler 1957-M.J.E. Golay
Concepto:
Primer trabajo sobre Columnas capilares
Retención selectiva
cromatografía de gases abiertas.
1979-Dandeneau et
1785-Aplic. Industrial 1950-Tompkins et al. al.(H.Packard)
Purificación del ác. Tartárico Concepto: Cromatografía Columna capilares
Decoloración de aceites iónica abiertas de silice fundida
minerales

1773 1785 1897 1903 1943 1950 1951 1952 1957 1979 1983

1897-1903-Day 1951-Kritchevsky y Tiselius

Concepto: Cromatografía en fase 1983- H.Packard
Aplicación sobre el petróleo CG comercial
inversa
con columnas
capilares
abiertas
1952-James y Martin
1903-Tswett. Concepto:
Concepto: Cromatografía Cromatografía de
gases

-6-
Orígenes de la cromatografía

M. TSWEET (1903): Separación de pigmentos vegetales en columnas

rellenas con adsorbentes sólidos y disolventes variados.

éter de
petróleo
mezcla de
pigmentos

CaCO3 Separación de
pigmentos

Cromatografia =
kroma [color] + graph [escribir]
(griego)
-7-
Definición.

Ø ¿Cromatografía de gases, cromatografía en fase gaseosa o cromatografía gas-

liquido y/o gas-sólido?.

Ø Principio de toda técnica cromatografica:

ØUna fase móvil: En CG…….un gas
ØUna fase fija o estacionaria: En CG……. líquida o sólida

Ø Definición: Técnica de separación, donde el proceso de separación tiene lugar

en una columna con una fase estacionaria líquida o sólida, la fase móvil es un
gas y los componentes de la mezcla están en fase gas y con la que es posible
separar y determinar mezclas complejas de sustancias con similares
características químicas y/o físicas.

-8-
Componentes de un cromatógrafo de
gases

1 6 1. Suministro de gases :
• Portador.

2 • Gases para el
detector
• Controlador de
presión
2. Inyector.
3. Horno y columna
4 cromatográfica.
4. Detector.
5. Tratamiento y
amplificación de señal.
6. Registro y tratamiento de
datos.

5 En rojo : Zonas con control de

temperatura

3 -9-
Definiciones de los componentes

• Gases

• Gas portador -- Gas a presión que se utiliza para transportar

la muestra a través del sistema.
• Gases del detector -- Soporte para ciertos detectores, ej. FID.
• Inyector: Introducción de la muestra

• Introduce la muestra a la corriente del gas portador con

mínimos transtornos en la corriente de gas.
• Columna

• Logra la separación de los componentes de la muestra.

• Detector

• Reconoce y responde a los componentes de la muestra a

medida que eluyen de la columna.
• Adquisición de datos

• Convierte la señal del detector en un cromatograma y

permite la determinación manual o automatizada de la
identidad y cantidades de los componentes de la muestra.
- 10 -
¿Cuándo aplicar la cromatografía de
gases?

¿Qué mezclas pueden ser separadas por CG ?

(cualquier substancia que pueda ser“arrastrada” por un flujo de un gas

y debe “disolverse” – por lo menos parcialmente - en ese gas)

Mezclas cuyos componentes sean

VOLATILES (=“evaporables”)

DE FORMA GENERAL:
La CG es aplicable a la separación y al análisis de mezclas cuyos constituyentes tengan
PUNTOS DE EBULLICION de alrededor 400oC y que sean termicamente estables.

- 11 -
Comparación CG vs HPLC

Comparison of HPLC and GC

- 12 -
Papel de la muestra

La muestra determina la configuración del instrumento, es

decir: n Tipo de gas portador
n Tipo de inyector de la muestra
n Tipo de columna
n Tipo de detector
n Tipo de adquisición de datos

- 13 -
Reglas generales de la CG

• La separación tiene lugar por partición o solubilidad diferencial en la fase

estacionaria (90% de las aplicaciones).

• También son posibles fenómenos de adsorción sobre la fase estacionaria.

• Los componentes se separan según su diferente polaridad (interacción de fuerzas

dipolares).

• Generalmente: “Semejante disuelve a semejante”, es decir “Polar interacciona con

polar”.

• Ejemplo: Los alcoholes que son moléculas polares se separan en una fase líquida
polar: Carbowax

- 14 -
Modelo del proceso cromatográfico

Separación de compuestos, y
Flujo de gas
Elution.mov
A

B
Los componentes son
transportador por una fase móvil
a través de un lecho de fase
estacionaria.
Los componentes sufren un
retardo en la fase estacionaria por C
tres procesos básicamente:
-Adsorción en la superficie.
-Solubilidad relativa.
-Carga de la molécula
D

- 15 -
Parámetros de la separación en
columna
• Eficiencia: Capacidad de la columna para generar picos agudos

• Resolución: Capacidad de la columna para separar dos picos

• Selectividad: Capacidad de la columna para determinar la diferencia

química y/o física entre dos picos

GOOD GOOD
POOR POOR

- 16 -
Teoría. Definiciones básicas

TIEMPO DE RETENCION AJUSTADO, tR’ : Parámetro que mide la retención de un compuesto

(analito) a lo largo del proceso cromatográfico
tR
tR’ = t R - t M
Señal

tM

TIEMPO
tR = Tiempo de Retención (tiempo recorrido entre la inyección y el ápice del pico cromatográfico)
tM = Tiempo muerto o de un compuesto No-Retenido (tiempo mínimo para un compuesto que no interacciona
con la FE a través de la columna)
tR’ = Tiempo de Retención Ajustado (tiempo medio que las moléculas del analito pasan absorbidas/retenidas
en la FE)
- 17 -
Teoría: Aproximaciones

Dos aproximaciones pueden ser hechas para explicar el proceso de

separación:

• Teoría de los platos.- Propuesta en 1941 por Martin y Synge.

Basada en su analogía con la destilación y la extracción
contracorriente.

• Teoría Cinética.- Responde a los factores dinámicos de una

separación (1956, J.J. van Deemter).

Cada una tiene sus propias ventajas y limitaciones

- 18 -
Teoría de los platos
Coeficiente (Constante) de reparto, KC

Columna cromatográfica: serie de etapas independientes donde se produce el equilíbrio entre el analito
disuelto en la fase estacionaria y el gas portador:

Definición de Etapa: Se produce un “cuasi-equilibrio” entre el

analito adsorbido en la FE y el disuelto en el gas portador.

[ A ]S
KC = Constante de reparto. Se asume que es independiente de la concentración,
pero es afectada or varios factores: temperatura
K =
C
[ A ]M [A]S = concentración del analito en la FE
[A]M = concentración del analito en el gas

Afinidad por la FE [A]S

MENOR RETENCION !!!

Volatilidad [A]M
- 19 -
Teoría de los Platos
Fáctor de retención, K

Expresión del equilibrio en términos de masa del analito en cada fase, en lugar de la
concentración:

FACTOR DE RETENCION, k: Razón del analito

W
contenido entre la FE (Ws ) y el gas portador k = S
(WM ) W M

RAZON DE FASES, β: Razón entre los volumenes V M

de la FE y el gas portador de la columna. Depende β =
de las dimensiones de la columna V S

El factor de retención k depende de la constante

termodinámica de distribución KC y de la razón
de fases β de la columna
- 20 -
TEORIA BÁSICA
Eficiencia de los Sistemas Cromatográficos

La migración de un analito por la

columna provoca inevitablemente el
alargamiento de su banda:
TIEMPO

Efectos del alargamiento excesivo de picos:

Separación deficiente de analitos con Picos mas largos y menos intensos = menor
retenciones próximas. límite de detección

EFICIENCIA Capacidad de elución con la mínima dispersión del analito.

- 21 -
Teoría de los Platos.
Cuantificación de la eficacia o eficiencia de la separación

Supongamos nuevamente una columna cromatográfica como una serie de etapas donde se produce el
equilíbrio entre el analito, la FE e y el gas portador:
- No podemos medir la altura del plato (semejanza con la teoría de la destilación) pero si la altura del plato teórico.

Cada “etapa” de equilíbrio es llamado

PLATO TEÓRICO
El número de platos teóricos de una
columna (N) puede ser calculado por:

tR
Columna mas
N eficiente
wb
- 22 -
TEORIA BÁSICA
Cuantificación de la Eficiencia

ALTURA EQUIVALENTE de un PLATO TEÓRICO (H o HETP) “Tamaño” de cada

etapa de equilibrio

(L = Longitud de la columna)

Valores típicos de H y N:
dC df H N
0.10 0.25 0.081 370370
0.25 0.25 0.156 192308
0.32 0.32 0.200 150000
Capilares, L = 30 m 0.32 0.50 0.228 131579
0.32 1.00 0.294 102041
0.32 5.00 0.435 68966
0.53 1.00 0.426 70423
0.53 5.00 0.683 43924
Empaquetadas, L = 2 m 2.16 10% 0.549 3643
2.16 5% 0.500 4000

Los valores de H para las columnas capilares y empaquetadas son próximos, pero
como L para capilares es MUCHO mayor . Estas son tipicamente más eficientes
- 23 -
Teoría Cinética

• La teoría de los platos descuida los conceptos de la difusión del soluto y

trayectorias de flujos.

• La teoría cinética responde a esto y puede ser usada para predecir el efecto sobre el
comportamiento del analito en la columna de factores como:
• Las múltiples trayectorias (diferentes rutas) que toma un soluto durante su
movimiento (migración) a través del empaque de la columna, provocando
variaciones en la velocidad del flujo.
• La Difusión Axial o Longitudinal del soluto en la fase móvil.
• La cinética de la resistencia a la transferencia de masa entre las fases móvil y
estacionaria.
Tiene en cuenta: Propiedades de la fase, difusividades de los solutos, coeficientes
de partición, velocidad de las fases, espesor de fase, tamaño de poros,
porosidad del soporte y relaciones de flujos.

- 24 -
Eficacia & Velocidad lineal del gas portador.
Ecuación de Van Deemter

B La eficacia es función de
HETP = A + +C µ la velocidad lineal del gas
µ
portador o de la velocidad
de flujo.
HETP

El mínimo de la curva
representa el HETP más
DIFUSIÓN B{ C RESISTENCIA A TRANSFERENCIA pequeño (o mayor número
MOLECULAR } DE MASA de platos por metro) y con
ello, la mejor eficacia. El
término "A" no está
} A DIFUSION DE EDDY
presente para columnas
µ ( opt µ) capilares.
Presentación de
La representación de HETP vs. velocidad lineal se conoce como la ecuación de Van Deemter. Microsoft PowerPoint

El mínimo de la curva es el valor óptimo de la velócidad lineal para alcanzar la máxima eficacia en la separación.

Columnas capilares: Ecuación de Golay

(B, CM, CS = constantes)

- 25 -
Criterios numéricos sobre la Eficacia de una
columna

Empaquetada Capilar
1/8" 0.2 mm (diámetro estrecho)

Eficacia de columna N HETP, cm N HETP, cm

Excelente > 500 < 0.06 > 5000 <2x10 -4

Buena 300-500 0.06-0.10 3000-5000 2-3x10-4

3-5x10-4
Justa 200-300 0.10-0.15 2000-3000

Dudosa < 100 > 0.03 < 1000 >1x10 -3

n
Donde: N = (Platos por metro)
L

HETP = L (Altura equivalente a un plato teórico)

n

- 26 -
Efecto del tipo de gas portador sobre la eficacia y
resolución

HETP C17 a 175º C Helio

Nitrógeno Hidrógeno
(mm)
k' = 4.95 (58 cm/s) (58 cm/s) (58 cm/s)
1.2 N2 Columna WCOT

OV-101 0.4µ
1.0
25 m x 0.25 mm
He 15 m x 0.25 mm
.8
Glass WCOT
.6 SE - 52
H2
.4 Isotérmico, 150º C

.2

10 20 30 40 50 60 70 80 90
R = 1.17 R = 1.37
Velocidad lineal media (cm/s)

Curvas de eficacia para una columna WCOT de Efecto del gas portador sobre la
d.i. 25 m x 0.25 mm con 0.4 um de OV-101. resolución de n-heptadecano y pristano.

- 27 -
Influencia del gas portador

¡El hidrógeno como gas portador acelera el análisis!

A 30m x 0.32, 0.5µm HP-Wax

helium

0 5 10 15 min

10m x 0.10, 0.2µm HP-Wax

B helium

0 1 2 3 4 5 min

10m x 0.10, 0.2µm HP-Wax

C hydrogen

0 1 2 3 4 min

- 28 -
Resolución

RT = 4.41 La resolución es una medida de la

capacidad de la columna para separar

RT = 4.59

RT = 5.10
6.0E5 dos picos.

5.0E5

La resolución se mide en términos de dos

picos adyacentes, que deseamos separar.
Abundancia

4.0E5
Generalmente, se elige el par más difícil; si se
pueden separar con éxito, todos los otros se
3.0E5
resolverán igualmente.

2.0E5 1.18 ( RT2 - RT1 )

R= (W + W )
1.0E5
1 2
Resultados en la separación de la
R = 1.5 línea base.
4 4.5 5 5.5 6

Tiempo ( Min.)

- 29 -
COMPONENTES DE UN CROMATOGRAFO
DE GASES
Instrumentación
Fáctores que influyen en la separación.

Los seis factores (interrelacionados) a considerar.

Introducción de la muestra
ü Tipo de gas portador.
ü Velocidad del gas portador.
ü Temperatura de la columna (controlada por el horno).
ü Lóngitud de la columna.
ü Diámetro interno de la columna.
ü Espesor de la fase estacionaria soportada en la columna
(película de la fase).

üTipo de detector
- 31 -
Instrumentación:
Sistemas de inyección
Instrumentación
Gas portador
Gas portador ( Fase Móvil en CG): NO interfiere con la muestra, solo atraviesa la columna.
Requisitos:
- INERTE. No debe reaccionar con la muestra, fase estacionaria o las superficies del
instrumento.
- PURO. Debe estar exento de imurezas que puedan degradar la fase estacionaria.
- Impurezas típicas y sus efectos:
- H2O, O2.....................oxida, hidroliza algunas FE y es incompatible con el
detector TCD.
- Hidrocarburos............ruido en la señal del FID, saturación en algunas fases
- COMPATIBILIDAD CON EL DETECTOR. Cada detector demanda un gas
portador específico para su mejor funcionamiento.

• TCD.............. He , H2
• FID................ N2 , H2
• ECD.............. N2 (SS), Ar + 5% CH4

- 33 -
 INSTRUMENTACION.
Inyectores. Dispositivos de introdución de muestras

Los dispositivos para injección de muestras (INYECTORES o VAPORIZADORES) deben

realizar una introducción INSTANTANEA de la muestra en la columna cromatográfica.
Peligro: distorsión de frente cromatográfico
t=0

Injeção instantânea:

t=x

t=0

t=x Injeção lenta:

- 34 -
Sistemas de inyección

Propósito: La introducción de una muestra en un cromatógrafo de gases

de manera reproducible. La muestra debe ser representativa
del volúmen total introducido, y a menos que se desee
específicamente debe introducirse sin producir cambio
químico alguno.

Tipos de inyectores Control del gas

Split/Splitless EPC y no-EPC
On-column EPC
De empaquetadas con purga EPC y no-EPC
Con refrigeración en columna EPC solo
De vaporización a temperatura programada EPC solo
De Interfase volátiles EPC solo

- 35 -
Introducción de muestras: parámetros
de inyección.
Temperatura del INYECTOR .Debe ser lo sufcientemente elevada para que la muestra se
vaporise inmediatamente, pero sin descomposición.

Regla general: Tinj = 50oC por encima de la temperatura de ebullición del componente menos volátil

Volumen de Inyección. Depende del tipo de columna y del estado físico de la muestra

Muestras Muestras
COLUMNA Líquidas Gaseosas
empaquetada 0,2 µL ... 20 µL 0,1 ml ... 50 mL
∅ = 3,2 mm (1/4”)
capilar 0,01 µL ... 3 µL 0,001 ml ... 0,5 mL
∅ = 0,25 mm
Sólidos: convencionalmente se disuelve en un disolvente adecuado y se inyecta dicha solución

Control de presión (EPC). Tiene que controlar de forma exacta y precisa el flujo/presión del
gas portador que circula por la columna. Responsable último de una correcta inyección.

Película QuickTime Película QuickTime

Jeringa - 36 - Inyección
Inyector “Split/Splitless” (con/sin
división)

Modo “Split” Análisis de comp. principales

“Split” a pulsos Permite un volúmen de inyección mayor

Split.mov

Modo “Splitless” Análisis de trazas de componentes.

“Splitless” a pulsos Permite un volúmen de inyección mayor

splitless.mov

- 37 -
Diagrama de flujo “Split” (con división):
Preinyección

SEPTUM
(SEPTUM)
2 ml/min SALIDA DE PURGA
FLUJO TOTAL

50 ml/min

SALIDA DE SPLIT

48 ml/min (ENTRADA)
47.4 ml/min VALVULA DE PURGA

GAS PORTADOR

ALINEADOR

0.6 ml/min SELLO

COLUMNA

- 38 -
Diagrama de flujo “Split”: Inyección de
muestra

(SEPTUM)
SALIDA DE PURGA
FLUJO TOTAL

SALIDA DE SPLIT

(ENTRADA)
VALVULA DE PURGA

= GAS PORTADOR

= MOLECULAS DE MUESTRA LÍQUIDA

REL. SPLIT = FLUJO EN COLUMNA + SALIDA SPLIT

FLUJO EN COLUMNA
COLUMNA

- 39 -
Diagrama de flujo “Split”: Vaporización de la
muestra

(SEPTUM)
SALIDA DE PURGA
FLUJO TOTAL

SALIDA DE SPLIT
= GAS PORTADOR
= MOLECULAS MUESTRA
= MOLECULAS (ENTRADA)
DISOLVENTE VALVULA DE PURGA

La vaporización tiene lugar al

transferirse suficiente energía
térmica a la muestra. Esto
puede ocurrir en el gas portador,
pero es más probable al contacto
con una superficie sólida, como
el alineador o el medio de
mezcla.

COLUMNA

- 40 -
Diagrama de flujo “Split”: Mezcla
Muestra\Gas portador

(SEPTUM)
SALIDA DE PURGA
FLUJO TOTAL

= GAS PORTADOR SALIDA DE SPLIT

= MOLECULAS MUESTRA
= MOLECULAS DE
(ENTRADA) VALVULA DE PURGA
DISOLVENTE

Para que el concepto de RELACION

DE SPLIT sea válido, la muestra
(disolvente+ analito) debe mezclarse
con el gas portador suministrando
una mezcla homogénea.

Al fondo del puerto de inyección, una

pequeña parte de esta mezcla se
transferirá a la columna, mientras la
mayor parte de la mezcla sale del cro-
matógrafo por la SALIDA DE SPLIT.
COLUMNA

- 41 -
Problemas en el “Split”:

¡Ojo a la sobrecarga en el alineador!

(SEPTUM)
SALIDA DE PURGA
FLUJO TOTAL

= GAS PORTADOR SALIDA DE SPLIT

= MOLECULAS MUESTRA
= MOLECULAS
DISOLVENTE (INLET)
VALVULA
DE PURGA

Una gran inyección de disolvente

puede provocar sobrecargas en el
alineador del puerto de inyección.

Esto podría dar lugar a pérdidas de

muestra por la VÁLVULA DE PURGA
así como contaminación del gas
portador entrante.

COLUMNA

- 42 -
Cálculo de la Relación de “Split”

Split Ratio = Flujo por salida split + Flujo en columna

Flujo en columna

A B C D
Columna Flujo Flujo en Purga del Flujo de Relación
D.I. (um) total columna septum split Split
200 100 0.5 2.0 97.5 196:1
320 100 1.0 2.0 97 98:1
530 100 3.0 2.0 95 33:1

Flujo salida split=(Relación split)(Flujo en columna)-Flujo en columna

- 43 -
Inyector “on-column” convencional

4
1 - Septum (silicona/teflón)
2 - Alimentación de gas portador
3 – Bloque metálico termostatizable y regulable
en temperatura
4 - Punta de la columna cromatográfica

- 44 -
Inyector “on-column” convencional

1 2 3

1 –La punta de la aguja de la microjeringa es introducida en la cabeza de

la columna.
2 – La muestra es inyectada y vaporizada instantaneamente en la cabeza
de la columna.
3 - “Plug” de vapor de la muestra forzado por el gas portador a fluir por
la columna.

- 45 -
Otros inyectores

• Inyector con vaporización a temperatura programada

• Inyección de gran volúmen (LVI) con PTV para análisis de trazas de
solutos que eluyen posteriormente y muestras sucias.
• Se realizan inyecciones múltiples en un inyector frío y después
aumenta la temperatura.
• El inyector utiliza una “cabeza sin septum”
Película QuickTime

• Interfase de volátiles
• Introduce una muestra gaseosa desde un dispositivo externo como el
espacio de cabeza, purga y trampa, o inyectores de desorción térmica

- 46 -
Comparativa en la discriminación de
los inyectores

- 47 -
Ejemplo:
Inyección com PTV
Separación de PAH con PTV (Viny = 25 mL, solución 400 ppb en CH2Cl2)

Columna: HP-5 (30 m x 0.25 mm x 0.25 µm)

TC O L: 5 min a 50°C / 20°C min-1 / 2 min A 320°C

Gas portador: He @ 2 ml.min-1 Detector: FID

- 48 -
Otros sistemas de introducción de
muestra en un cromatografo
Sistemas cromatográficos combinados
Otros sistemas de introducción de muestra en cromatografía
de gases: Sistemas de preconcentración.

Ø Espacio en cabeza.
§ Inyecta al cromatógrafo los vapores producidos en la incubación de una muestra a un tiempo y temperatura
determinado. El proceso esta gobernado por el equilibrio liquido-vapor de los análitos y sus constantes de
distribución.
Ø Desorción térmica.
§ Inyecta al cromatógrafo los análitos desorbidos de una muestra, generalmente sólida, mediante un flujo de
gas y a una temperatura determinada, mediante su preconcentración previa en una trampa regulada por
temperatura.
Ø Purga y trampa.
§ Inyecta al cromatógrafo los análitos extraidos de una muestra líquida, generalmente agua, mediante el paso de
un gas y posterior preconcentración de estos en una trampa rellena de adsorbente y control de temperatura.
Ø SPME (Microextracción en fase sólida).
§ Inyecta al cromatógrafo los análitos adsorbidos en una “aguja” recubierta de material polimérico adsorbente.
La propia aguja es inyectada al cromatografo.
Ø SPE (Extracción en fase sólida).
§ Inyecta al cromatógrafo los análitos extraídos de una muestra mediante la utilización de adsorbente
específicos y eluyentes adecuados.
Ø CL o HPLC (Cromatografía líquida convencional o de alta resolución).
§ Inyecta al cromatógrafo los análitos separados previamente en un sistema de cromatografía líquida Equipo
HPLC-CG.

- 50 -
Frases

“No entiendes realmente algo a menos que seas capaz de

explicárselo a tu abuela”.
Albert Eisntein

- 51 -
Instrumentación:
Horno de columna
Horno de columna

Características básicas:

üAmplia franja de temperatura de uso. Por lo menos desde Tambiente hasta 450oC.
Sistemas criogénicos (T < Tambiente ) suelen ser necesarios en casos especiales.
üTemperatura independiente de los demás módulos. No debe ser afectado por la
temperatura del inyector y el detector.
üTemperatura uniforme en su interior. Sistemas de ventilación muy eficientes para
mantener la temperatura homogenea en todo el horno.
üFácil acceso a la columna. La operación de cambio de columna puede ser frecuente.
üCalentamiento y enfriamiento rápidos. Importante tanto en análisis de rutina como
en la puesta a punto de nuevas metodologías analíticas.
üLa TEMPERATURA TIENE QUE SER ESTABLE Y REPRODUCIBLE. (La
temperatura debe ser mantenida con exactitud y presición de ± 0,1°C)

- 53 -
Horno de columna.
Programación lineal de temperaturas

Mezclas complejas (analitos con volatilidades muy diferentes): Comportamiento en una

separación ISOTERMICA:
TCOL BAJA:

-Componentes mas volátiles son separados

-Componentes menos volátiles se retrasan en eluir,
originando picos mal definidos

TCOL ALTA:
-Componentes mas volátiles no son separados
-Componentes menos volátiles eluyen mas
rapidamente

- 54 -
 Horno de columna.
Programación lineal de temperaturas (mezclas complejas
con amplio rango de puntos de ebullición)

La temperatura del horno puede ser variada linealmente durante la

separación:
Se consigue una buena separación de los
componentes de la muestra en menor tiempo
y con picos mas agudos:

Parámetros de una programación de temperaturas: TFIM

TEMPERATURA
TINI Temperatura Inicial

TFIM Temperatura Final

tINI Tiempo Isotérmico Inicial R

TINI
tFIM Tiempo Final del Programa

R Velocidad de calentamiento
tINI TIEMPO tFIM

- 55 -
Horno de columna.
Programación lineal de temperaturas
Posibles problemas asociados a la Programación lineal de temperaturas (PLT):

Variaciones del flujo del Gas portador La viscosidad de un gas aumenta

con la temperatura.

viscosidad flujo

Deriva (“DRIFT”) de la linea de base (“sangrado”) Se produce como

consecuencia del aumento de la volatilización de la FE líquida

- 56 -
 Cromatogramas compensados de
columna

C
Cromatograma original

Cromatograma “Blanco”

Cromatograma Original “compensado”

- 57 -
Instrumentación:
Columnas
Columnas: Evolución de las columnas

EMPAQUETADA CAPILAR
∅ = 3 a 6 mm ∅ = 0,1 a 0,5 mm
L = 0,5 m a 5 m L = 5 m a 100 m
Rellena con sólido pulverizado (FE Paredes internas recubiertas con un
sólida o FE líquida depositada sobre pelicula fina (tamaño de µ m) de FE
las partículas del relleno) líquida o sólida
- 59 -
Características generales de la columnas
empaquetadas y capilares
Abierta (Capilar)
Empaquetada

Regular

Tubo abierto
con
recubrimiento
de pared
Empaquetada y Porous Bead Tubo abierto
Microempaquetada Layer Column de capa porosa
convencional
Bead

SERIES WCOT WCOT

PACKED
530 (ancho) (estrecho)
LONGITUD (metros) .5-10 5-100 5-100 5-100
D.I. (mm) 2-4 .530 .3-.75 .05-.3
VEL. FLUJO (ml/min) 10-60 4-30 1-30 0.3-1.0
CAIDA PRESION (psi) 10-90 1-20 1-40 5-90
CAPACIDAD MUESTRA 100 ng/pico 100 ng/pico 50 ng/pico
- 60 -
Tipo de columna según la fase estacionaria
Cromatografía “sólida” de gases (GSC)

10% de las aplicaciones

Adsorbente Gas
portador
Columnas empaquetadas
Relleno del adsorbente
(GSC)

Poroso con gran área de superficie

Capilar - Tubular abierto de capa porosa (PLOT)

Gas portador

- 61 -
Tipos de columnas:
Cromatografía “líquida” de gases (GLC)

Columnas Relleno de partición

empaquetadas

Gas portador

Fase líquida
Soporte sólido
Muy poroso con área de superficie muy
alta

Columnas capilares Tubular abierta con recubrimiento

de pared (WCOT)

Fase líquida
- 62 -
INSTRUMENTACION
Efecto de la temperatura sobre la columna

La interacción con FE, afecta al tiempo que tarda un analito en recorrer la columna y
depende de su PRESION DE VAPOR (p0).

Estructura química del analito

p0 = f Temperatura de la columna

Temperatura Presión Velocidad

de la de de
columna vapor migración

EL ANALITO ELUYE MAS RAPIDAMENTE (MENOR

RETENCION)

- 63 -
Comparación de cromatogramas
según los tipos de columnas

Un ejemplo: Muestra para evaluación de columna

12 4
7
Análisis de columna empaquetada: 5
6 9
11&12
8 10
5% OV101
sobre 80/100 Chromosorb

1 2 9
Semicapilar 12
7&8 10 11
5 6
30m X 0.53mm X 0.88µm 4

Capilar

30m X 0.32mm X 0.25µm

- 64 -
Tipos de columnas

Columnas capilares

- 65 -
COLUMNAS CAPILARES
Definiciones básicas
Tubo fino de material inerte con FE líquida o sólida depositada sobre las paredes internas.
sílica fundida ø = 0,1 mm
MATERIAL vidro pirex a 0,5 mm
DEL
acero inox
TUBO L=5m
Nylon
a 100 m
Silcosteel

Columnas de sílica revestidas externamente con pelicula de polímero (poliamida) para aumentar la resistencia
mecanica y química
Columnas Capilares versus Empaquetadas:
é L = é N Columnas mas eficientes
CAPILARES

FC = 1 ... 10 mL.min-1 Control de flujo mas difícil

ê Vi Dispositivos especiales de inyección

Familias de Columnas Capilares :

WCOT (Wall coated open tube) FE líquida depositada (ligada // entrecruzada) sobre las paredes internas.

PLOT (Porous layer open tube) película de FE sólida unida a las paredes internas

SCOT (Support coated open tube) Paredes internas revestidas com material de relleno similar a las columnas
empaquetadas
- 66 -
COLUMNAS CAPILARES
Diametro Interno
Valores comunes:
ê dC = é Eficiencia
0,25 mm
0,10 mm 0,53 mm
0,32 mm

1 2 3

1. Columnas de altísima eficiencia (muestras complejas, “Fast GC”); capacidad volumétrica

limitada de procesamiento de la muestra
2. Diametros mas comunes; capacidad volumétrica limitada de la muestra requiere
dispositivos especiales de inyección
3. Columnas “megabore”: menor eficiencia, mayor capacidad de procesamento permite
uso de inyectores convencionales

- 67 -
Columnas
Fases estacionarias
Características de una FE ideal

• Selectiva. Debe interaccionar diferencialmente con los componentes de la muestra.

FE Selectiva : separación adecuada de los

constituyentes de la muestra

FE poco Selectiva : mala resolución incluso

con columna de buena eficiencia

Regla general: la FE debe tener características muy similares a los solutos que se
quieren separar (polar, apolar, aromático ...)

• Amplia franja de temperaturas de uso. Mayor flexibilidad en la optimización de la separación.

• Buena estabilidad química y térmica. Mayor durabilidad de la columna, no reacción con los componentes de la
muestra.
• Poco viscosa. Columnas mas eficientes (menor resistencia a la transferencia del analito entre las fases.
• Disponible en un elevado grado de pureza. Columnas reproducibles, ausencia de picos “fantasmas” en los
cromatogramas.

- 69 -
Fases estacionarias:
FE sólidas (PLOT): Adsorción

Un fenómeno físico-químico responsable de la interacción analito

vs FE sólida es la ADSORCION

La adsorción ocurre en la interface entre el gas portador y la FE sólida

Sólidos com grandes áreas superficiales

(partículas finas, poros)

ADSORCION Solutos polares

Sólidos con gran número de sitios activos
(hidroxilos, pares de eletrones...)

- 70 -
 Fases estacionarias. GSC
FE sólidas
Características Generales:
- Sólidos finamente granulados (diámetros de partículas típicos de 105 µm a 420 µm).
- Grandes áreas superficiales (mayor que 102 m2/g).
Mas usados:
Polímeros Porosos Porapak (copolímero estireno-divinilbenceno), Tenax (polióxido de
difenileno)
Sólidos Inorgánicos Carboplot, Carboxen (carbones activos grafitizados), Alumina,
Tamiz Molecular (arcilla microporosa)
- Separación de gases permanentes
Principales Aplicaciones: - Compuestos ligeros
- Séries homólogas

GASES DE REFINERIA
Columna :Carboxen-1000 60-80
mesh; 15’ x 1/8”
TCOL: 35oC a 225oC / 20oC. min-1
Gás portador: He @ 30 ml.min-1
Detector: TCD

- 71 -
Fases estacionarias.
Familias de FE líquidas

- 72 -
Fases estacionarias.
Familias de FE líquidas

Poliglicoles muy polares; sensibles a la humedad y a la oxidación;.

Principal: Polietilenglicol (nombres comerciales: Carbowax, DB-Wax,
Supelcowax, HP-Wax, etc.)

Estrúctura Química: H O C H 2 C H2 OH

n
AMINAS ALIF ÁTICAS
Columna: 4 % Carbowax 20M s/ Carbopack B + 0,8% KOH
T COL: 200oC (isotérmico) Gas portador: N2 @ 20 mL.min -1
Detector: FID Muestra: 0,01 µ L de la mezcla de aminas

- 73 -
OTROS TIPOS DE FASES ESTACIONARIAS
FE Quirales
Separación de isómeros ópticos:

PRODUCTOS BIOLÓGICOS Distinción entre productos de origen sintético y

natural (natural = normalmente sustancias opticamente puras; sintético =
muchas veces son mezclas racémicas).

FÁRMACOS En muchos fármacos solo uno de los dos isómeros ópticos tienen
actividad farmacológica.

Propiedades físico-químicas de los isómeros ópticos son prácticamente idénticas

FE convencionales no interaccionan diferencialmente con isómeros ópticos

Separación de mezclas de isómeros ópticos solo es posible con FE opticamente activas

FE Quirales

- 74 -
FE Quirales

FE opticamente activas más importantes:

CH3 CH3

Derivados de aminoácidos: O Si O Si

CH3 CH2 CH3

Mezclas de compuestos formadores de n
CH3 CH O NH C CH3
puentes de hidrógeno.
C
C CH3
O N C* H

CH3 CH3 H CH CH3

O Si O Si CH3

CH3 CH2
n Chiralsil-Val
CH2
Organometálicos:
O

Separación de enantiomeros Ni
/
formadores de complejos. 2
O

C3F7

Chiralsil-Metal
- 75 -
FE Quirales
Derivados de ciclodextrinas alquiladas:

β-ciclodextrina:
oligosacarido cíclico
quiral

Chiralsil-Dex
- Introducidas en 1983

- Pueden ser ligadas a cadenas de polisiloxano: uso extremamente

favorable como FE líquida (viscosidad baja, estabilidad ...)
- Pueden ser quimicamente inmobilizadas en las columnas
- Columnas disponibles comercialmente
- 76 -
FE Quirales: Aplicaciones

Aceite esencial artificial de limón: separación de terpenos primarios

1 - (+/-) α-pineno
2 - sabineno
3 - (+/-) β-pineno
4 - (+/-) limoneno

Columna: Rt-ßDEXsm (30 m x 0.32 mm x 0.25 µm)

TCOL: 1 min a 40°C / 2°C min-1 / 3 min a 200°C Gas portador: H2 @ 80 cm.min-1 Detector FID
- 77 -
FE Quirales: Aplicaciones

Aroma de bergamota: distinción entre aroma natural y artificial

Esencia natural Esencia artificial

Columna: Rt-ßDEXse (30 m x 0.32 mm x 0.25 µm)

TCOL: 1 min a 40°C / 4°C min-1 / 200°C

Gas portador: He @ 80 cm.min-1 Detector: MS

- 78 -
Consideraciones para la selección de
columnas en CG.

1. Muestra a separar.

2. Diámetro de la columna.

3. Fase estacionaria.

4. Longitud.

5. Grosor de película o “% de carga”.

• Capacidad.

• Retención.

• Inercia.

• Eficacia.

• Sangrado.

- 79 -
Selección de columnas en CG.

Resumen:

Para muestras complejas, se selecciona la columna capilar con

una FE que mejor refleja la polaridad global de la muestra.

Tipicamente lo mejor es comenzar usando una columna con bajo

diámetro interno y poco espesor de fase estacionaria para
muestras generales.

- 80 -
Instrumentación
Detectores
Instrumentación:
Detectores
Detector: Dispositivo que examina continuamente el material eluido, generando señal
cuando pasan sustancias que no están presentes en el gas portador.

Gráfico Señal vs Tiempo = CROMATOGRAMA

Idealmente: cada substancia separada aparece como un PICO en el cromatograma.

- 82 -
Detector de GC – Definición general

Un detector de CG es un dispositivo que detecta la presencia de un componente

diferente del gas portador, y convierte esa información en una señal eléctrica. Esta señal
eléctrica es proporcional a la cantidad del componente.

~ 60 tipos de detectores ya usados en CG

~ 15 equipan los cromatógrafos comerciales

4 responden a la mayor parte de las aplicaciones

TCD FID
Detector por Detector por
Condutividad Ionización de
Térmica llama

ECD (DCE) MS (EM)

Detector por Captura de Detector Espectrométrico
Eletrones de Masas

- 83 -
Detectores en CG
Ø Detector de conductividad térmica (TCD)

Ø Detector de ionización de llama (FID)

Ø Detector de captura electrónica (ECD)

Ø Detector de nitrógeno - fósforo (NPD)

Ø Detector fotométrico de llama pulsado o no (FPD, pFPD)

Ø Detector de conductividad electrolítica (ELCD, HALL)

Ø Detector de fotoionización (PID)

Ø Detector selectivo de masas (MSD)

Ø Detector de infrarrojo (IRD)

Ø Detector de emisión atómica (AED)

- 84 -
Características de la respuesta del
detector

Sensibilidad: Respuesta por cantidad de muestra, es decir, la pendiente de

la curva respuesta/cantidad. La cantidad mínima en la
curva se define como el nivel mínimo detectable (MDL).

Selectividad: Es una medida de que categorías de compuestos darán

respuesta del detector.

Rango dinámico: El rango de concentraciones de la muestra para las que el

detector puede suministrar una cuantificación precisa.

- 85 -
DETECTORES
Parámetros básicos de funcionamiento

Cantidad mínima detectable. Masa de un analito que genera un pico con altura igual a
tres veces superior al nível de ruído

S
=3
N
SEÑAL
(S)

RUÍDO (N)

RUÍDO Cualquier componente de la señal generado por el detector que no es originada

por la muestra
Contaminantes de los gases
Fuentes
de Impurezas acumuladas en el detector
ruido
Derivación electrica a tierra deficiente

- 86 -
DETECTORES
Parámetros básicos de funcionamiento.

Límite de detección. Cantidad de analito que genera un pico con S/N = 3 y w b = 1 de

unidad de tiempo
Ejemplo: Mismo detector, nivel de ruido y masa de analito, PERO con diferentes
anchos de base:

wb
Detector (señal generada, ruido)
QMD = f
Anchura del pico cromatográfico

Definiendo limite de detección como:

¡ El LD es independiente de la eficiencia del sistema cromatográfico !

[QMD] = masa [LD] = masa / tiempo

(ng, pg ...) (ng.s -1, pg.s -1 ...)
- 87 -
Mayor sensibilidad con columnas capilares

Columnas empaquetadas Columnas capilares

Area = 2600 Area = 2600

S/N = 5 Altura = 10 S/N = 10
Altura = 5
Ruido = 1 Ruido = 1

Sensibilidad = Relación Señal/Ruido

- 88 -
DETECTORES
Parámetros básicos de funcionamiento
SENSIBILIDAD Relación entre el incremento de área del pico y el incremento de
masa del analito

Factor de Respuesta, S (F r):

ÁREA

inclinación de la recta Área

del pico x Masa del analito

MASA

un mismo incremento de masa causa

Fr Sensibilidad
un mayor incremento de área
En ausencia de otros factores:

A = área del pico cromatográfico

m = masa del analito
- 89 -
Comparación de sensibilidades entre tipos de
detectores de GC

TCD

FID

ECD
AED
PID
NPD IRD
(N)

NPD (P)
FPD (S)

MSD (SIM) (SCAN)

(X)
ELCD
ELCD (S or N)

10-15 10-12 10-9 10-6 10-3

fg pg ng µg mg
pptrillón ppb ppm ppmil porcentaje
1 ng 1 mg 1µ L
1 ppm = = =
1 µL Litro Litro
- 90 -
DETECTORES
Parámetros básicos de funcionamiento. Rango dinámico

Rango dinámico. Es una medida de la Respuesta vs. Cantidad (Masa). La respuesta es la señal producida
por el pico del analito (area, altura).

Rango dinámico lineal. Intervalo en el cual la respuesta aumenta proporcionalmente a medida que aumenta
la cantidad de analito.
ÁREA

A partir de cierto punto la señal deja de

aumentar linealmente
La respuesta no lineal, mientras sea reproducible, puede tratarse
utilizando técnicas de calibración lineal.
MASA

1,05 S
ÁREA / MASA

El fin de la zona de linealidad puede ser

detectado cuando la razón (Área / Masa)
diverge en mas del 5 % de la inclinación de la
recta en la región lineal: 0,95 S

- 91 - MASA
Clasificación de los tipos de
detectores

UNIVERSALES:
Generan señal para cualquier
sustancia eluida de la columna

SELECTIVOS:
Detectan solo sustancias
con determinadas propiedades
físico-química.

ESPECÍFICOS:
Detectan sustancias que
poseen determinado elemento
o grupo funcional en sus
estructuras

- 92 -
DETECTORES
Funcionamiento y características
DETECTORES
Detector por Conductividad térmica

PRINCIPIO Variación de la conductividad térmica de un gas cuando se produce la

elución de un analito.
La tasa de transferencia de calor entre un cuerpo caliente y un cuerpo
frio depende de la condutividad térmica del gas no del espacio que
separa a los cuerpos

Si la condutividad térmica del gas disminuye, la cantidad de calor

transferido también disminuye - el cuerpo caliente se calienta.

Celda de detección de un DCT:

i
1 Bloque metálico (acero)
2 Entrada de gas portador
5 3
3 Salída de gas portador
4 Filamento metálico (aleación W-Re)
4 calentado
2 5 Alimentación de corriente eléctrica
1 para calentamiento del filamento

- 94 -
DETECTORES
Características Operacionales del DCT
SELECTIVIDAD: Se observa señal para cualquier sustancia eluida diferente del gas portador =
UNIVERSAL
SENSIBILIDAD / LINEALIDAD. Dependiendo de la configuración particular y del analito: QMD =
0,4 ng a 1 ng con linealidad de 104 (ng - decenas de mg)
Flujo de gas portador: La señal es proporcional a la concentración del analito, no del gas
portador que pasa por la celda de la muestra.

Fc = 0

Flujo de gas portador constante Variación de flujo degas

durante la elución. portador durante la elución.

Con el DCT, el área de los picos cromatográficos es mucho mas dependiente del flujo
del gas portador !!!

- 95 -
DETECTORES
Características Operacionales del DCT

Naturaleza del gas portador: Cuanto mayor es la diferencia ∆λ entre la condutividad

térmica del gas portador puro, λ Α, y la del analito, λ x, mayor es la respuesta.

Como: (M = peso molecular)

CUANTO MENOR ES EL PESO MOLECULAR DEL GAS PORTADOR, MAYOR ES LA RESPUESTA

He o H2 Gas portador con DCT: He o H2

otro gas

1
2 1 2

1 Usando He o H2 como gas portador, ∆λ es maximizada: MAYOR RESPUESTA

2 Con otros gases, eventualmente λ x > λΑ: PICOS NEGATIVOS

- 96 -
DETECTORES
Características Operacionales del DCT

FACTORES DE RESPUESTA Cuanto menor es la condutividad térmica del analito, mayor es la señal.

Los factores de respuesta dependen de la condutividad térmica del analito

Cantidades iguales de sustancias diferentes generan picos cromatográficos con áreas diferentes !!!

λX ∆λ
CHCl3
Mezcla de cantidades
C2H5OH
equimolares de:
C2H6
Etano → λ = 17,5

Clorofórmo → λ = 6,0

Etanol → λ = 12,7

- 97 -
DETECTORES
Características Operacionales del DCT
Temperaturas de operación: Cuanto mayor es la diferencia entre las temperaturas de
los filamentos y del bloque metálico mayor es la respuesta.
Temperatura del filamento, TF: entre 300oC e 350oC. Es función de la corriente
de alimentación de los filamentos, i.

i TF Señal

Limitaciones:
- Corrientes excesivas pueden fundir el filamento (Ø típicos del filamento = 20 mm)
- Disminución de la vida útil de los filamentos (oxidación por trazas de O2 del gas
portador.

Temperatura del bloque, TB: mantenida tan baja como sea posible

TB Señal

Limitaciones:
- Temperaturas excesivamente bajas pueden provocar la condensación de analitos
en las celdas (errores analíticos, daños en los filamentos)
- 98 -
 DETECTORES
Características Operacionales del DCT

1 Separación y cuantificación de compuestos que no generan señal en otros detectores (gases

nobles, gases permanentes)

Separación de Gases permanentes e Hidrocarburos:

Columna: CP Sil 5CB

(50 m x 0.32 mm x 5 µm)
Gas portador: He @ 3 ml.min-1
TCOL: 40°C Detector: DCT

1 N2 2 CH4
3 CO2 4 n-C2
5 NH3 6 n-C3
7 i-C4 8 n-C4

2 Por ser un detector no-destructivo, puede ser usado en CG preparativa o en detección

secuencial con dos detectores en “tandem”

- 99 -
DETECTORES
Detector por Ionización de llama
PRINCIPIO Formación de iones cuando un compuesto es quemado en una llama de
hidrógeno y oxígeno.

El efluente de la columna es mezclado con H2 y O2 y quemado.

En una llama de H2 + O2 no existen íones, por tanto no
conduce la corriente eléctrica.

Cuando un compuesto orgánico eluye, también es quemado.

Como consecuencia de la combustión se forman iones, por tanto
la llama pasa a ser conductora de la corriente eléctrica

- 100 -
Esquema del detector de ionización de llama

Fid.mov

Detector FID

Entrada aire

Extremo columna
capilar
(1-2 mm desde la parte superior del Jet) Jet
Entrada H2
+
Auxiliar (Make-up)

Una diferencia de potencial

El arire y el H2 difunden por el
eléctrico es aplicada entre el
interior del colector, donde se
mezclan con el efluente de la jet y el colector - cuando se
forman íones en la llama,
columna y se queman:
fluye una corriente eléctrica:

Extremo de salida de la columna

- 101 -
 DETECTORES
Características Operacionales del FID
SELECTIVIDAD. Selectivo para sustancias que contienen enlaces C-H en su estructura química.
(como virtualmente todas las substancias analizables por CG son orgánicas, en la práctica el DIC es
UNIVERSAL)
Compuestos que NO producen respuesta en el DIC:

Gases nobles NH3, NxOy

H2, O2, N2 SiX4 (X = halógeno)
CO, CO2, CS2 H2O
CCl4, peralogenados HCOOH, HCHO *
CH4
FID
CO2

O2
TCD
N2

SENSIBILIDAD / LINEALIDAD QMD típicas = 10 pg a 100 pg con linealidad entre 107 y 108 (pg a mg)
- 102 -
DETECTORES
Características Operacionales del FID
FACTORES DE RESPUESTA El factor de respuesta de un determinado compuesto es aproximadamente
proporcional al número de átomos de carbono. La presencia de heteroelementos diminuye el factor de respuesta.

Número Efectivo de Carbonos (NEC) Se puede estimar con ~20% de aproximación el factor de respuesta de un
compuesto.

Átomo X
C alifático +1,00
C aromático +1,00
C olefiníco +0,95
(X = Contribución de cada C carbonila +0,00
átomo al NEC) O alcohol prim. -0,60
Cl alifático -0,12

Mezcla de cantidades
equimolares de:

C2H6 → NEC = 2,00

C2H5OH → NEC = 1,40

CH3CHO → NEC = 1,00

- 103 -
Respuesta del FID

ne
lue
10

To

l
no
xa
8

He
ol
ic

tan
no

Bu
xa

l
no
Respuesta 6

He
ic

ha
ion

Et
relativa

op

ol
an
Pr
4
(por

eth
id

eti
ac

Ac

M
peso.)
ic
rm

2
Fo

H H H H H H H

H C OH H C C OH H C C C C OH

H H H H H H H

Metanol Etanol Butanol

La respuesta es proporcional al número de enlaces carbono-hidrógeno.

- 104 -
DETECTORES
Detector por Captura de Eletrones

PRINCIPIO Supresión de un flujo de electrones causada por su adsorción por especies eletrofílicas

Película QuickTime

Un flujo continuo de electrones

lentos es establecido entre un ánodo
(fuente radioactiva β -emisora) y un
cátodo.

Durante el paso de una sustancia

eletrofílica algunos electrones son
adsorbidos, resultando una supresión
de corriente elétrica.

- 105 -
DETECTORES
Detector por Captura de Eletrones

2 1
1 Anodo (fuente radioativa b - emisora)

5
2 Salida de gases 3 Cátodo

4 Cavidad 5 Columna cromatográfica

- 106 -
DETECTORES
Características Operacionales del DCE
FUENTE RADIOACTIVA El ánodo debe estar dopado con un isótopo radioactivo β - o α- emisor

Empleo universal en DCE comerciales:

3H (β -, 0,02 MeV) 63 Ni (β -, 0,06 MeV)

Especie utilizada Ta3H3 Usado como 63Ni 0

Mayor sensibilidad Mayor linealidad

Tdet debe ser < 225oC Útil hasta ~400oC

- Mayor durabilidad (t1/2 = 100 a x 12 a

63 Ni
preferido en para 3H)
equipamientos
modernos - Mayor estabilidad térmica

- Menor riesgo de uso (radioactividad)

Raramente 85 Kr, 90 Sr, 99Tc, 147 Pm, 241 Am, 226 Ra

usados:

- 107 -
DETECTORES
Características Operacionales del DCE

POLARIZACION DE LOS ELETRODOS Varios modos de polarización posibles

VOLTAJE CONSTANTE Poco usado modernamente - picos cromatográficos pueden ser deformados.

VOLTAJE PULSADO Menos anomalias eléctricas: mayor sensibilidad y linealidad.

TEMPERATURA DEL DETECTOR Dependencia de la señal con la temperatura de operación

bastante significativa

Variación de ± 3oC en la temperatura

Error de ~ 10% en el área de los picos

¡ La magnitud y la señal del error depende del compuesto analizado !

TEMPERATURA DEL DCE DEBE ESTAR BIEN CONTROLADA

- 108 -
DETECTORES
Características Operacionales del DCE

GAS PORTADOR Funcionamiento del DCE es muy dependiente de la natureza del gas portador
N2
MAS USADOS: Generan electrones lentos cuando son
Ar + 5% CH4 bombardeados con b -

El gas debe ser lo mas puro posíble !!!

(trazas de H2O y O2 comprometen la señal del DCE)

Adsorción de contaminantes !
sobre los eletrodos causa
deformación en los picos

FLUJO DE GAS PORTADOR: La señal depende directamente del flujo de gas que pasa a través del detector

F Señal

- 109 -
DETECTORES
Características Operacionales del DCE
SENSIBILIDAD / LINEALIDAD QMD = 0,01 pg a 1 pg (organoclorados), linealidad ~ 104 (pg a ng)

10 fg Lindano (C6H6) m-ECD HP-6890

PESTICIDAS
~250 fg cada analito
1 tetracloro-m-xileno
2 a - BHC
3 Lindano
4 Heptachlor
5 Endosulfan
6 Dieldrin
7 Endrin
8 DDD
9 DDT
10 Metoxychlor
10 decaclorobifenila

El DCE es el detector preferencial para análisis de trazas de organohalogenados y similares.

Ejemplo: Nitrato de octilo en gasóleos

- 110 -
DETECTORES
Características Operacionales del DCE

SELECTIVIDAD / FACTORES DE RESPUESTA Valores de Sensibilidad maximizados para compuestos

eletrofílicos
Sensibilidades “relativas” típicas (clorobenzeno: S = 1)

hidrocarburos y esteres alifáticos, dienos

álcoholes, cetonas e aldehídos alifáticos, aminas, nitrilas, mono - Cl, mono - F

enóles, oxalatos, mono - Br, di - Cl, hexa - F

tri - Cl, cloratos de ácidos, alquil - Pb, anhidridos

mono - I, di - Br, tri - Cl, mono - nitro, CS2

di - I, tri - Br, poli - Cl, di - nitro, 1,2 - dicetonas, fumaratos, organo - Hg

I > Br > Cl > F

Comparación entre los α>β>γ
halogenados Terc > Sec > Prim
trans > cis
Tri > Di > Mono

- 111 -
DETECTORES
Aplicaciones del DCE

Contaminantes en el aire atmosférico - detección paralela DIC + DCE

FID

ECD

1, 2, 3 - Hidrocarburos aromáticos
4, 5, 6 - Hidrocarburos clorados

- 112 -
DETECTORES
Detector de Nitrogeno - Fósforo

Modificación del DIC altamente selectiva para compuestos orgánicos nitrogenados y fosforados
Perla de sal de metal alcalino:
RbCl (normal), KCl

Selectividad (S) para fosforados o nitrogenados:

10.000 x - 100.000 x en relación a hidrocarburos
similares

QMD = 0,4 pg a 10 pg (N) e 0,1 a 1 pg (P)

Pesticidas Triazínicos usando DNP:

1 Desetilatrazina
2 Desisopropilatrazina
3 Atraton
4 Atrazina
5 Trietazina
6 Secbumeton
7 Sebutilazina
8 Simetrin
9 Dipropretrina
10 Dimetametrina
11 Metroprotrina
(100 pg cada)
- 113 -
 “Fast” CG: Disminución del tiempo de
análisis

Parámetros de columna Parámetros instrumentales

• Más corta long. de columna
• Menor d.i. de columna
• Fase líquida más fina
• Diferente gas portador
• Incrementar la velocidad de
rampas de calentamiento.
• Análisis isotermos a mayores
temperaturas.
• Aumento del flujo del gas
portador.
•Mejoras en sistemas de
inyección y detección.

- 114 -
Ejemplo de utilización CG rápida.

toluene
C8 C9 plus aromatics
aromatics
0.32 mm i.d., helium
benzene
0.5µl, 200/1

naphthalenes

5 min 18.2 min

0.10 mm i.d., hydrogen

0.1µl, 800/1

1.2 min 3.5 min

- 115 -
Consideraciones sobre la CG rápida

• Utilizar columnas de pequeño diámetro

• Separaciones rápidas y de alta eficacia en muestras complejas.

• Software de “traducción” del método.

• Utilizado para predecir parámetros operativos apropiados

• “free-ware” de HP (http:\\www.agilent.com/).

• Temas de hardware

• Elevadas velocidades en el programa de temperatura.

• Altas presiones del inyector son necesarias (EPC necesario).

• Elevada velocidad de adquisición de datos es necesaria.

• Límites de la capacidad de la muestra (elevadas relaciones de split utilizadas).

• 10-20 metros de longitud de columna.

• El cambio de gas portador puede disminuir significativamente el tiempo del análisis.

- 116 -
Frases

• Definición de Weber.

“Un experto es aquel que sabe más y más acerca de menos y

menos, hasta que lo sabe absolutamente todo de nada. “

- 117 -
METODOS CUALITATIVOS Y
CUANTITATIVOS
Cromatografía y técnicas afines
 ANÁLISIS CUALITATIVO
Conceptos Generales

Identificación individual de especies contenidas en una muestra

Aplicaciones
Cualitativas de la
CG
Determinación de la identidad de la muestra propriamente dicha

Fuentes de Información Cualitativas

ØRetención: Uso de datos de retención de un analito para su identificación.

ØDetección: Detectores que proporcionen información estructural de las sustancias eluídas

Para un análisis cualitativo seguro por CG es necesario la combinación de datos

provenientes de varias fuentes

- 119 -
ANÁLISIS CUALITATIVO
Tiempos de Retención

Interacción analito / FE
t’R = f Presión de vapor del analito
Condiciones operacionales (TCOL, FC ...)
Fijas las condiciones operacionales, el tiempo de retención ajustado de un analito es una
constante

Muestra

La comparacion de cromatogramas de la
muestra y de una solución patrón del
analito desconocido
Patrón

- 120 -
ANALISIS CUALITATIVO
Tiempos de Retención

Identificación por t’R puede no ser segura:

Ø Dependencia con FC y TCOL La variación de las condiciones afectan sensiblemente a los t’R

DTCOL = ± 0,1%
VARIACION de ±
1% no asegura t’R
DF C = ± 1%

Ø Sobrecarga en la columna Aumento excesivo de la masa de material eluido puede

deformar el pico cromatográfico y alterar su t’R

La saturación de la columna cromatográfica

por un aumento de masa eluida provoca
MASA

“caudal frontal” y no pico cromatográfico y

por tanto error en la identificación.

- 121 -
ANÁLISIS CUALITATIVO
Tiempos de Retención

La comparación del t’R usando dopaje (“spiking”) de la muestra con el analito

sospechoso: asegura la identificación.

Una muestra compleja:

incertidumbre en los t’R
medidos puede elevar la
probabilidad de una
identificación erronea

La comparación del
cromatograma de la muestra
dopada permite la
identificación mas segura del
pico desconocido

- 122 -
ANALISIS CUALITATIVO
Índice de Retención de Kovàts

FUNDAMENTO Los t’R isotérmicos para una serie homóloga de compuestos depende
logaritmicamente del número de átomos de carbono de la cadena.

Separación isotérmica de una

mezcla de n-alcanos (n-C4, n-C5,
... n-C16)

La representación de log(t’R) en
función del número de átomos de
carbono del analito nC es
LINEAL

- 123 -
ANALISIS CUALITATIVO
Índice de Retención de Kovàts

El índice de retención de Kovàts I para un analito cualquiera en condiciones

isotermas se define por:

t’R (A) Tiempo de retención

ajustado del analito A
t’R (N) Tiempo de retención
ajustado del n-alcano con N
carbonos
t’R (n) Tiempo de retención
ajustado del n-alcano con n
carbonos (n = N + 1)

Interpolación
logarítmica de los
t’R

Ejemplo: Un analito con I = 874 tendría un tiempo de retención ajustado

equivalente al de un n-alcano hipotético con cadena de 8,74 átomos de carbono
- 124 -
ANALISIS CUALITATIVO
Índice de Retención de Kovàts

REPETIBILIDAD - REPRODUCIBILIDAD Los efectos de TCOL y FC en los índices de Kovàts

son pequeños

ANALITO ∆I/∆T
CHCl 3 +0,02 % Ejemplo: Dependencia de I para
algunas sustancias en una
CH3CH2OH -0,12 %
columna apolar en rampa de
CH3CHO -0,05 %
TCOL = 70oC a TCOl = 130oC
CH3(CO)CH 3 -0,04 %

Identificación por índices de retención es mas seguro que la comparación simple

basada en los t’R

ÍNDICE DE RETENCION DE KRATZ Para programaciones lineales de temperatura la relación

entre t’R y nC es lineal: el cálculo de los índices de retención se modifica según:

- 125 -
ANÁLISIS CUALITATIVO
Retention Time Locking (RTL)

PRINCIPIO Cromatógrafos con microprocesadores para los controles neumáticos y térmicos, inyectores
automáticos con alta repetibilidad y columnas cromatográficas de gran calidad posibilitan una alta precisión de los
t’R.. Esto posibilita trasladar metodologías de un instrumento a otro similar.

Cromatograma Nº1 Cromatograma Nº2

TCOL (1) TCOL (2)

FC (1) FC (2)
Columna A Columna B
El software RTL (Agilent) ajusta automaticamente las condiciones cromatográficas en un segundo CG para
reproducir los t’R obtenidos en otro instrumento.

Mediante el RTL dos cromatografos

distintos con columnas y condiciones
idénticas obtienen el mismo perfil
cromatográfico y tiempos de retención
para todos los picos.

- 126 -
Análisis Cualitativo
Acoplamiento otras técnicas de caracterización
estructural
ANÁLISIS CUALITATIVO
Métodos de detección cualitativos (y cuantitativos)

Métodos de detección que proporcionan información cualitativa sobre

los analitos eluídos:

ü Cromatografia Gaseosa con Detección Espectrométrica de Masas (CG-

EM).

ü Cromatografia Gaseosa con Detección Espectrométrica por Emisión

Atômica (CG-EA)

ü Cromatografia Gaseosa con Detección Espectrométrica por Absorción en

el Infrarrojo (CG-IR).

ü Cromatografía gaseosa con detección espectrometrica de masas por

acoplamiento de plasma inductivo (CG-ICP_EM).

ü Cromatografia de gases con acoplamiento de detectores especificos

- 128 -
Cromatografía de gases acoplada con
detector de emisión atómica
CG_AED
ANÁLISIS CUALITATIVO
Esquema Típico de un CG-AED

1. Cromatógrafo de Gases.
2. Alimentación del gas postador y generador del Plasma (He)
3. Linea de transferencia (acoplamiento CG - DEA).
4. Cavidad Resonante (generación del plasma).
5. Lente de Focalización.
6. Monocromador / Policromador
7. Detector de Luz (fotomultiplicador / diode array).
8. Amplificación / Digitalización de señal.
9. PC

- 130 -
ANÁLISIS CUALITATIVO
Emisión atómica en plasmas

PRINCIPIO El analito es fragmentado/atomizado en el plasma, los átomos son

excitados y emiten luz al retornar a sus estados fundamentales.

1 El analito es atomizado al colisionar con moléculas excitadas del gas generador del plasma.
ABCD + Hem → A+ + B + CD + He + e-
2 Los fragmentos/átomos son excitados electronicamente.
A+ + B + CD + Hem → A+* + B* + CD* + He

3 Al retornar a sus estados fundamentales los átomos/fragmentos excitados emiten luz en

determinadas longitudes características

A+* → A+ + hn1

B* → B + hn2
CD* → CD + hn3

LA MONITORIZACION DE LA EMISION DE LAS LONGITUDES DE ONDAS

CARACTERÍSTICAS DE CADA ELEMENTO GENERA CROMATOGRAMAS
ESPECÍFICOS POR ELEMENTO.
- 131 -
ANÁLISIS CUALITATIVO
Espectro de Emisión Atómica

Líneas de emisión atómica de fragmentos de analito correspondientes a distinta emisión

del plasma.

n-Hexano

Fragmentos:
C2 CN
OH NH

200 nm 800 nm

Fósforo
Naled (C4H7Br2Cl2O4P) Bromo
Cloro
l

456 nm l 566 nm
- 132 -
Análisis Cuantitativo
Principios
Métodos de cuantificación.

ü Todos los detectores producen una señal que ü ¿Qué señales utilizar?. Tipos de señales:
puede medirse mediante algún sistema
integrador, convertidor analógico-digital…. ü Altura de pico (altura ~concentración)

Ø Ventajas:

ü Cada detector producirá una respuesta por Ø Sencillez

unidad de concentración. Un patrón tendrá Ø Cálculos rápidos.
que ser usado.
Ø Desventajas

Ø La altura es mas variable que el

ü Cada método cuantitativo asume que se área.
dispone de uno o más picos bien resueltos.
Siempre será posible encontrar el principio y
ü Area de pico (área~concentración)
final de los picos.
Ø Principal desventaja: ¿picos no gaussianos?
Ø Sistemas de medida:

Ø Manuales: cortar y pesar,

planimetro, triangulación.

Ø Automáticos: registradores,
integradores y PCs
- 134 -
¿Altura o área?
Change in Peak Behavior (%)

20 Area Peak heights unaffected by flow

15 variations.
10 Peak area should be used for
badly tailing peaks.
5
Peak Height
Both are imprecise with
0
irreproducible injection volume.
-3 -6 -9 -12 -15
Flow Rate Change (%)

- 135 -
Precisión de los sistemas de integración por área

- 136 -
Procedimientos de cuantificación.

Una vez dispuesto de un procedimiento para medir las áreas (o las alturas) tenemos que
establecer una relació
relación entre la concentració
concentración y el área:
METODOS DE CUANTIFICACION

• Normalización interna.

• Método de estándar externo.

• Uso de factores de respuesta del detector.

• Método de éstandar interno.

- 137 -
Normalización interna.

• Se calcula el área total de todos los picos en una muestra y se asume:

• Cada componente produce un pico.

• La respuesta del detector no depende de la concentración.

• La respuesta del detector no depende de la naturaleza del

componente.

• El pico del disolvente, si lo hay, normalmente se ignora.

- 138 -
Método de estándar externo

• Requerimientos para un correcto empleo:

• La solución estándar contiene todos los analitos que van a ser cuantificados.

• La solución estándar de los analitos debería ser similar a la concentración de la

muestra.

• La solución estándar y la matriz de la muestra deberían ser muy similares.

• Las condiciones de los análisis de la solución estándar y la muestra deben ser

idénticos: el instrumento debe estar estable, misma inyección, mismo split…

• Primera aproximación: Se asume que la respuesta del detector es lineal en todo el

rango de concentración, podemos calcular la concentración del análito en la
muestra como:

Conc anal/muestra = Area anal/muestra / Area anal/estándar x Conc anal/estándar

- 139 -
 Estándar externo

Segunda aproximació
aproximación: Evaluació
Evaluación de la linealidad del detector en el intervalo de determinació
determinación.
Empleo de la recta de calibració
calibración con varios niveles de calibració
calibración.

Ecuación:
600
Response = 1 .18 (Amt) - 0.317
Absolute Amt of x =
500 r2= 1.000 ESTD [(Responsex x RF) - yintercept] x M x D
400
Responsex = peak area or height
A 300
RFx = Amountx
200 Responsex

100 M = Multiplier

0 D= Dilution Factor
0 100 200 300 400 500

AMT (ng/uL)

- 140 -
Factores de respuesta relativos.

• Se determina el factor de respuesta actual por unidad de concentración para un conjunto de muestra de varios componentes.

• Respuesta del detector, f= concentración/área.

Ejemplo:
Sean tres componentes 1,2 y 3.
Usando un patrón de los tres componentes con la misma cocentración, obtenemos tres areas A1 , A2 y A3.
Podemos decir:
C1 = f1 A1 , C2 = f 2 A2 , C3 = f3 A3

Puesto que C1 = C2 = C3
f1 A1 = f2 A2 = f3 A3

y por tanto

f1 / f3 = A3 / A1 & f2 / f3 = A3 / A2

Ahora podemos establecer uno de los componentes con el “normalizado”, asignándole como fáctor de respuesta la unidad (1,0000). Por
ejemplo: f 3 = 1,000
Podemos calcular los factores de respuesta relativos de los otros dos componentes como sigue:

f 1 = A 3 / A1 f2 = A 3 / A2

- 141 -
Fáctores de respuesta relativos

Solucióó n: Factores de respuestas “universales

Soluci universales”” para detectores que no está
están sujetos
a variaciones instrumentales, de operació
operación y del laboratorio.

- 142 -
Método de estándar interno

• Una sustancia conocida y de una concentración conocida es añadida a la solución estándar de

análitos y a las muestras problema.

• El estándar interno permite, al estar en una concentración conocida (y constante) determinar

errores de inyección o de preparacón de los patrones durante el análisis.

• Características del patrón interno:

• Debe ser estable y medible bajo las condiciones de análisis.

• No puede interferir con el análisis o coeluir con algún componente de la muestra.

Pure and easily obtainable.

Similar chromatographic and detector properties

with the sample.

Elute in the chromatogram during a gap.

ISTD

• Aproximaciones usadas:

• Método clasico: Patrón y muestra se pesan conjuntamente.

• Solución de PI conocida. A un volumen o peso de muestra se le añade un

volumen conocido de una solución de PI de concentración conocida.

• Representación de varios niveles de concentración.

- 143 -
Método de estándar interno

- 144 -
Método de patrón interno. Varios niveles de
calibración

Permits compensation for any variations in

peak area; i.e. sample size

Permits compensation for variation due to

sample preparation
ISTD
Equation:
Salicylamide
Actual Amt of x =
2.0 Response Ratio = 0.371
[(RFx x ResponseRatio x x Amount ISTD ) -
(Amt Ratio) + 0.000535
1.6 yintercept] x M xD
r 2 = 1.000
Response Ratio

1.2
Response Ratio = Response x
0.8 Response istd

0.4

0.0
0 1 2 3 4 5
AMT Ratio

- 145 -
Cromatografía de gases en el
CTR
Instrumentación
Instrumentación disponible en el CTR en
cromatografía de gases.
• Cromatografía de gases:

• Sistemas de inyección

• Inyector split/splitless.

• On column.

• PTV

• Detectores.

• Ionización de llama (FID).

• Conductividad térmica (TCD).

• Captura de electrones (ECD).

• Fotométrico de llama (FPD).

• Emisión atómica (AED).

• Espectrometría de masas (EM).

• Sistemas combinados.

• Espacio en cabeza-CG.

• Desorción térmica-CG

• Purga y trampa
- 147 -
Bibliografía.
• http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%Ada.
• http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Gas.htm.
• http://latina.chem.cinvestav.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/croma.htm.
• http://www.secyta.org/
• http://hplc.chem.shu.edu/NEW/HPLC_Book/
• http://ull.chemistry.uakron.edu/chemsep/lc/
• http://www.relaq.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/Gas.htm
• http://latina.chem.cinvestav.mx/RLQ/tutoriales/cromatografia/hplc.htm
• http://www.chromatography-online.org/

• http://ciencianet.com/
• http://www.colombiaaprende.edu.co/html/sitios/

• Chromatographic detectors. Chromatography Science series vol.73. R.P.W. Scott. Dekker ed.
• Cromatografía y electroforesis en columna. M.V.Dabrio y col. Springer.
• Introduction to Modern Liquid Chromatography. L.R. Snyder y J.J. Kirkland. John Wiley & Sons Editors.
• Gas Chromatography Headspace Analysis. H.Hachenberg & A.P. Schmidt. John Wiley & Sons

- 148 -
 Frases…….

“He disfrutado mucho con esta obra, especialmente en el descanso”.

Groucho Marx

- 149 -
Para terminar...............

üRuegos, preguntas, comentarios, sugerencias, peticiones,

varios, ...

- 150 -
Seminario de Cromatografía de gases
Laboratorio de Cromatografía y
técnicas afines.
Centro de Tecnología de RepsolYPF.
Luis Carlos Quintero

Móstoles, 12- Diciembre-2005

- 151 -