Curso Basico de Cromatografia

CURSO BASICO DE CROMATOGRAFIA DE GASES
CURSO BSICO DE CROMATOGRAFIA DE GASES. Introduccin.

En anlisis se precisa utilizar dos tcnicas totalmente necesarias para llegar a la identificacin final de los componentes. 1- Usar una adecuada tcnica de separacin de los componentes. 2- Aplicarles las adecuadas tcnicas de identificacin.
Mtodos de identificacin.
Se han desarrollado numerosas tcnicas para lograr la identificacin de los diversos componentes de un problema analtico. Entre ellos se pueden citar: - Espectrofotometra (visible, ultravioleta, infrarrojos). - Espetrofotometra de Absorcin Atmica. - Resonancia magntico nuclear. - Espectrometria de masas. - Polarografa. - Etc... Todos estos mtodos precisan en mayor o menor grado que la matera a analizar tenga un cierto nivel de pureza. Para ello, en bastantes casos hay que utilizar previamente un mtodo que separe el producto a identificar de aquellos con los que va mezclado en el producto problema.
Mtodos de separacin.
Son poco numerosos y en general de una efectividad relativa. Los principales son: - Destilacin. - Cristalizacin fraccionada. Pero actualmente se dispone de un mtodo casi perfecto de separacin. La cromatografia.
Generalidades sobre la cromatografa.

Es un proceso bastante simple en su concepto, sin embargo, de un muy alto poder se separacin. En 1906 Tswett utiliz por primera vez esta tcnica para separar los pigmentos verdes de las hojas. Se crea que la clorofila era un pigmento verde, pero mediante el experimento de Tswett, se comprob que era una mezcla de varios pigmentos y no precisamente de color verde. En la fig.1 se puede ver la tcnica utilizada. Mont un tubo de vidrio, con una tubuladura en su parte interior, rellena con almina activada. Extrajo con alcohol los pigmentos de hojas verdes y el extracto fue vertido en la parte superior de la columna, y luego este fue arrastrado a traves de ella con mas disolvente. Se logr separar el pigmento en varias zonas bien diferenciadas con colores diferentes. Dejando eluir las zonas fuera de la columna se pudo llegar a a la separacin de los pigmentos. Por utilizar separacin de las capas coloreadas se llam a esta tcnica CROMATOGRAFIA (cromos=color, graphos=escritura). Como base se puede distinguir: 1- Un producto a separar = pigmentos (SOLUTO). 2- Una fase mvil = disolvente + alcohol (FASE MVIL). 3- Un slido separado = Almina (FASE ESTACIONARIA). En 1952, James y Martin utilizaron GAS como fase mvil para lograr la separacin de cidos grasos en fase vapor. Haba nacido la CROMATOGRAFA DE GASES. Los elementos que participan en ella son: - Fase mvil = Gas. - Soluto = En fase vapor o gas. - Fase estacionaria = Slida o liquido sobre un slido. Se producen una serie de equilibrios de distribucin del soluto entre ambas fases (estacionaria y mvil), que no se van a describir. A consecuencia de ello se obtienen diferentes velocidades de arrastre para cada uno de los componentesde la mezcla a travs de la columna, lo que se traduce en la separacin de los componentes que van saliendo separados unos de otros y arrastrados fuera de la columna por el Gas que constituye la Fase mvil y al que llamaremos de ahora en adelante como Gas portador.
Tipos de cromatografia.
Los distintos tipos de cromatografa se caracterizan y designan en relacin con el tipo de relleno que se utiliza en la columna.
TIPO ADSORCIN
INTERCAMBIO INICO GEL POROSO
REPARTO
FASE ESTACIONARIA SOLIDO ADSORBENTE SILICA GEL TAMICES MOLECULARES CARBN ACTIVO ALUMINA ETC... SOLIDO RETICULADO CON IONES EN SUS NODOS SLIDOS CON POROS DURAPAK DE DIMETRO PORAPAK CARACTERSTICO PORASIL ETC... LIQUIDA SOBRE FASES POLARES SOPORTE INERTE DE FASES GRAN SUPERFICIE APOLARES ESPECFICA
NOMBRE CROMATOGRAFIA GAS-SOLIDO G.S.C.
INTERCAMBIO INICO GEL PERMEATION
Partes de un cromatgrafo.
En la figura se esquematiza el cromatografo de fases mas simple. 1- Botelln conteniendo a presin el GAS PORTADOR (FASE MVIL). Este gas suele ser inerte en la gran mayoria de los casos. Los mas frecuentes en su uso son: - Helio. - Argon - Nitrgeno. - Hidrgeno(en algn caso).
2- Medidor y regulador de presin y flujo del gas portador. Esta medicin ha de ser de ajuste muy fino y estable, pues cualquier variacin podr hacer variar los tiempos de elucin de los diferentes componentes. 3- Bloque de inyeccin. Es la zona del aparato por la que se introduce la muestra en la columna. Puede ser calentable y con regulacin automtica de la temperatura, a fin de mantener esta zona a temperatura superior al punto de ebullicin de la muestra si esta es lquida, con el fin de vaporizarla y que pase a columna en estado vapor. - Puede disponer de septum de goma especial para poder inyectar la muestra mediante una jeringa.estas jeringas pueden ser de dos tipos: Normales de 0.5-50 cc. Si se ha de inyectar muestra gaseosa. Microjeringas de 0.1-1000 microlitros si la muestra a inyectar es lquida. 4- Columna. Es el corazn del cromatgrafo. En ella se realiza la separacin de los distintos componentes. Los materiales en que se construyen pueden ser: - Tubo de vidrio = Muy usado en bioqumica. - Tubo de acero inoxidable = Uso industrial muy frecuente. - Tubo de aluminio = Uso industrial muy frecuente. - Tubo de cobre = Uso industrial muy frecuente. Las columnas de cobre no deben utilizarse cuando las muestras contienen hidrocarburos acetilnicos, por formar acetiluros de cobre, muy explosivos. Los dimetros normalmente usados son de y 1/8 de pulgada. Longitud variable entre 0.5 y 10 m. Para cromatografa capilar se pueden usar columnas de vidrio o acero inoxidable de 0.1 a 0.5 mm. de dimetro. Las longitudes entre 15 y 200 m. Las columnas macro (1/4 1/8) se rellenan con fase estacionaria. Los distintos tipos de columnas se diferencian unas con otras por la llamada RELACION DE FASES, que es el cociente volumen de la fase mvil volumen de la fase estacionaria
5- Horno. En el horno est contenida la columna. Tiene un sistema de regulacin termosttica de la temperatura, un sistema de calefaccin mediante resistencias elctricas y un agitador, tipo ventilador para mantener agitado y a igual temperatura el aire del horno. La temperatura con la que trabaja el horno puede ser: - Isoterma: Es decir , fija y estable. - Programable: Es decir, creciente a velocidad programada de calentamiento. El horno, mediante adecuados sistemas de refrigeracin (CO2 o N2 lquido), se puede utilizar a temperatura sub-ambiente, es decir, por bajo de la temperatura ambiente. 6- Detector. Es un dispositivo situado a la salida de la columna, que mide de forma continua una caracterstica fsica del gas portador y que se modifica sensiblemente cuando este se impurifica con otros productos aunque sea en cantidades muy pequeas. Los mas usados se basan en medicin de: - Conductividad trmica del gas. - Corriente de ionizacin.
- Afinidad electrnica. Hay muchos tipos de detectores basados en otros principios. 7- Amplificador. Dada la dbil seal que dan los detectores, es preciso amplificar esta seal para hacerla facilmente registrable. 8- Registrador. Es un registrador normal, de campo de lectura de 1-2 mV, dotado de plumilla escritora que registra en un papel adecuado, el llamado cromatograma.
PEQUEAS BASES TERICAS Y PARAMETROS FUNDAMENTALES. Circulacin del gas portador a travs de la columna.
Supongamos una columna cromatogrfica rellena en la que se disponen varios manmetros para medir la presin en varios puntos a lo largo de ella.
Si la presin al principio de la columna es P1, en un punto intermedio de la misma, la presin P2 ser menor que P1 y en el extremo opuesto, es decir, a la salida de la columna, la presin P3 ser todavia mas baja que P2. Es decir, la presin disminuye a lo largo de la columna. Por otra parte, la velocidad del gas portadores pequea al principio de la columna (U). En un punto intermedio, la velocidad U es mayor que la U correspondiente al principio de la columna. En la zona final de la columna, la velocidad se hace cada vez mayor. Es decir, la velocidad del gas portador aumenta a lo largo de la columna. Con esto, Darcy estableci la ley que lleva su nombre y cuya expresin matemtica es: K dP U = , dz Donde: - U = velocidad lineal del gas portador en un punto de la columna situado a la distancia 2 de la entrada de la columna. - Z = distancia desde la entrada al punto que se considera. - = viscosidad del gas portador. - dP = gradiente de presin en el trozo de la columna de longitud dz. - K = constante que depende de las caractersticas de cada columna. Se llama pemeabilidad. Se puede apreciar que la velocidad del gas portador se afecta fuertemente por la mayor o menor viscosidad del gas portador. Por ello, la velocidad de paso de hidrgeno ser mayor que la de paso de helio.
Como la viscosidad vara con la temperatura en proporcin inversa, se ver que la velocidad del gas aumenta con el aumento de la temperatura. Por ello, a alta temperatura, el cromatograma ser mas rpido en su elucin que a baja temperatura. En general se puede decir que:
P U = constante = PS U S
Siendo Ps y Us las presiones y velocidades de salida de la columna. De la ecuacin de Darcy, por calculos que no describiremos se obtiene:
Z Pe 2 P 2 = L Pe 2 Ps 2
Donde: - Z = distancia a la entrada de un punto de la columna. - P = presin en ese punto de la columna. - Pe = presin a la entrada de la columna. - Ps = presin a la entrada de la columna. - L = longitud de la columna. Para cada valor P/Ps, se obtiene una curva.
Se ve que en la zona de cabeza hay fuerte presin y poca velocidad. Se ve que en la zona de salida hay fuerte velocidad y caida brusca de presin. Por ello, en la parte final de la columna, el fraccionamiento no es bueno. La separacin que se logra de la columna, se realiza en las partes iniciales de la misma. Como se dijo, la representacin grfica final del anlisis cromatogrficoconsiste en el llamado cromatograma.
Cuando en el cromatgrafo no se ha introducido muestra alguna, el registrador debe producir una lnea recta, limpia y sin picos, paralela al borde del pape, es a lo que llamamos lnea base. Si la lnea base presenta irregularidades connuas y frecuentes, se tiene lo que se llama ruido de fondo, que suele estar ligado generalmente a la suciedad que tenga el detector. Si se produce este ruido, debe generalmente procederse a su limpieza, o incluso, al cambio si fuera necesario. En el cromatograma de la figura se observa que los picos A y B son picos triangulares limpios y en general se corresponden a picos producidos por un componente puro o a varios componentes que eluyen exactamente al mismo tiempo. Los picos C y D, son picos correspondientes a componentes que no se han separado perfectamente. Manteniendo fijas la temperatura y la presin de entrada del gas portador en la columna y haciendo varios cromatogramas de una misma muestra, se ver que los cromatogramas obtenidos se pueden superponer perfectamente unos sobre otros. Son como calcados. Ello nos conduce a decir que en esas condiciones, cada componente eluye de la columna exactamente en el mismo tiempo. Esto nos conduce al concepto de Tiempo de retencin. Hay otro punto fundamental: Se dijo que el fraccionamiento se produce por la distinta solubilidad del soluto o muestra en la fase mvil y en la estacionaria. Pues bien, el aire prcticamente no presenta diferencias con el gas portador en cuanto a solubilidad, por lo que avanza por la columna a la misma velocidad de este. Por ello, inyectando una muestra que contenga algo de aire, el primer pico que se obtenga en el cromatograma correspondera al aire y da la medida del tiempo que tarda el gas portador en recorrer la columna. Es el llamado Tiempo muerto (tM). En un cromatograma, los picos iniciales, normalmente son picos de base pequea y agudos, mientras que a medida que los tiempos de retencin son mayores, los picos son de base cada vez mas ancha. Normalmente, si el cromatograma se dispone a mxima sensibilidad, con objeto de poder detectar en el cromatograma los picos correspondientes a los componentes en forma de trazas, todos los picos no caen dentro de la escala del registrador, bastantes de ellos se salen de la escala.
Hay que apelar entonces a atenuar la seal para que los picos queden dentro de la escala, la atenuacin se logra con un mando que disminuye la seal en el orden de las potencias de 2, es decir = 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, 512, 1024, etc.veces menor. Los tiempos de retencin se toman en el momento en que la plumilla del registrador alcanza la maxma altura del pico. Estos tiempos se pueden medir bien en cronmetro en tiempos o bien midiendo las distancias en el cromatograma, desde el momento de la inyeccin hasta la coronacin del pico en milmetros o centmetros.
Parametros fundamentales.
Vamos a describir someramente algunos parmetros importantes en cromatografa, trantando de introducirlos sin gran uso de las matemticas y con la posibilidad de determinarlos mediante operaciones y medidas sencillas, por uso de tiempos o distancias.
Coeficiente de reparto.
Es la relacin entra la concentracin del soluto en la fase estacionaria y la concentracin del mismo en la fase mvil. K= S S =concentracin de soluto en la fase estacionaria. m
m =concentracin de soluto en la fase mvil.
Factor de capacidad.
Supongamos el cromatograma arriba dibujado. A partir del momento que se inyecta la muestra que contiene algo de aire, se v que el primer pico en aparecer es el aire y aparece en el tiempo muerto (tM) o lo que es lo mismo, la distancia (do). Queremos ver el factor de capacidad K para un componente de la mezcla a analizar. m V t t d do K'= s = K s = r M = mm Vm tM do Frmulas donde: ms= masa del soluto en la fase estacionaria. mm= masa del soluto en la fase mvil. Vs = volumen del relleno(fase estac.) en la columna. Vm = volumen de intersticios (poros) en la columna. K = coeficiente de reparto. El factor de capacidad puede determinarse para cada uno de los picos del cromatograma y eso tendr importancia para cuando veamos la posibilidad de construir columnas con dos fases estacionarias, o se hable de eficacia de una columna. Pero una vez las principales necesidades de la determinacin del factor de capacidad K lo mas cercano posible a 2 para el pico central o patrn. Para uso en gases de naturaleza petroqumica, se determinar el K para el patrn normal butano.
Relacin frontal (Rf).

Es la relacin entre las velocidades medias del soluto (muestra) y de la fase mvil (gas portador) en su recorrido por la columna. tm tm tm V 1 Rf = = = = U tm + tS tm + ts 1 + K ' tm ts
tm= tiempo que permanece el soluto (muestra) en la fase mvil. ts= tiempo que permanece el soluto en la fase estacionaria.
Tiempo de retencin (tr).

Es el tiempo que tarda el soluto (muestra) en pasar por la columna. Como es natural, cada uno de los componentes de la muestra, tendr un tiempo de retencin caracterstico. El tiempo de retencin de cada componente esta relacionado con su correspondiente K de la siguiente forma: t r = t m + t s = t m (1 + K ' )
Tiempo muerto (tm).

Es el tiempo de retencin de un insoluble en la fase estacionaria, es decir, equivale al tiempo que tarda el gas portador en recorrer la columna. En general, para determinarlo se usa el introducir aire en la columna y ver el tiempo que tarda en eluir (pico del aire).
Resolucin.
Una columna que proporciona una buena separacin debe resolver los picos contiguos de una forma satisfactoria. En el ejemplo arriba indicado, los dos picos de los componentes A y B pueden obtenerse de las cinco formas indicadas. Aunque existen artificios para poder aprovechar la separacin del caso a y del b, lo ideal es obtener la separacin de los mismos como se muestra en el caso c y mejor an en el caso d. El grado de la separacin de dos picos sucesivos se llama resolucin. La frmula que da la resolucin es: 2(d 2 d 1 ) Rs b2 + b1 Donde d2 y d1 son las distancias al punto de inyeccin de los picos y b2 y b1 las bases de los triangulos. Cuando los picos estn separados como en el caso c, el valor de Rs=1, en el ejemplo d, Rs>1.
Nmero de platos tericos de una columna.

Una columna cromatogrfica corta y una larga, rellenas con el mismo tipo de fase estacionaria proporcionan separaciones diferentes, peores en el caso de poca longitud y mejores en ciertos aspectos en las columnas de mayor longitud. Se ha ideado el concepto de plato terico viene ligado a otro sobre altura de plato terico que se obtiene a partir de la longitud de la columna y el nmero de platos tericos. Lo ideal es lograr una columna cromatogrfica corta pero con un elevado nmero de platos tericos. Para determinar el nmero de platos tericos de una columna cromatogrfica se toma un pico del cromatograma como patrn. En el caso de los gases de petroqumica es el normal butano. Se emplea para ello la frmula: 16 d 2 N= b2 Siendo: d = distancia desde la inyeccin hasta el pico patrn. b = base del pico patrn ambas medidas en las mismas unidades. Esta es la medida de la eficiencia de una columna. Una columna cromatogrfica, al igual que una columna de destilacin fraccionar mejor mientras mas platos tericos tenga.
Altura equivalente a un plato terico.

Si una columna tiene una longitud L y un nmero de platos tericos N, la altura equivalente a un plato terico sera: 10
H=
L N
Este valor se emplear cuando hablamos de optimizacin de la columna mediante la ecuacin de Van Deempter.
Nmero de picos posibles.

Se trara con ello de averiguar cuantos picos podrn entrar perfectamente resueltos en un espacio del cromatograma.
Para ello, se inyectan dos alcanos (hidrocarburos parafnicos) consecutivos. Por ejemplo, c8 y c9. se miden las distancias a ambos picos y sus bases. La frmula que nos dar el nmero de picos posibles ser: 2(d 2 d 1 ) EPN = b2 + b1
Tiempos de retencin relativos.

Si se est usando una columna cromatogrfica durante cierto tiempo, es fcil que pueda variar algo la temperatura de la misma, la velocidad del gas portador, etc.o que la fase estacionaria se impurifique por componentes pesados de las muestras analizadas. Por ello, no es de extraar que varien los tiempos de retencin absolutos. Por ello no basta con decir que para la columna tal, el componente A eluira a los x minutos. Hay que apelar a los llamados tiempos de retencin relativos, que en el caso de que varien las condiciones de la columna, estos no variarn. Para ello, hay que hacer intervenir a un producto patrn y referir los tiempos de retencin a el.
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Normalmente se elige como patrn el pico central del cromatograma. En los casos de gases del petrleo se elige el normal butano. El tiempo de retencin relativo para cada componente, se obtendra de la siguiente frmula: d do tr = n d p do Relativo al patrn A Donde: dn = distancia desde la inyeccin al pico considerado. do = distancia desde la inyeccin al pico del aire. dp = distancia desde la inyeccin al pico patrn. As, para el cromatograma anterior, se tendrn los siguientes tiempos relativos: d do t r1 = 1 d p do
tr2 = t r3 = tr4 = d2 do d p do d3 do d p do d4 do d p do
Causas del ensanchamiento de las zonas.

Supongamos que en una columna rellena, se introducen molculas M de gas muestra y que el gas portador pasa por ella a la velocidad U.
Las molculas del soluto se reparten entre la fase mvil y la estacionaria. Ocurren los siguientes hechos: 12
Las molculas disueltas en el gas, avanzarn a la velocidad U. Las molculas disueltas en la fase estacionaria se retrasan. En los canalillos de las partculas del relleno, la velocidad por el centro de ellos es mas elevada, es el llamado efecto transcanal. En los poros sin salida, el gas se estaciona, es el llamado efecto transpartcula. Unos canales tienen mayor dimetro que otros, es el llamado efecto canales prximos. La velocidad es mayor por el centro de la columna., es el llamado efecto transcolumna.
Todo esto hace que la banda de un componente, a su paso por la columna, vaya ensanchandose. Supongamos que en una columna cromatogrfica, hemos inyectado una muestra constituida por 3 componentes
Si rpidamente pudiera eluir fuera de columna la muestra (Fase A), los componentes estarian todava mezclados y se produciria por el detector un pico estrecho y agudo. Si se dejase fluir la muestra por la columna, al cabo de un cierto tiempo se comenzarian a separar los componentes y por la mayor velocidad del gas portador por el centro de la columna, la zona de la muestra iria tomando el aspecto del punto B y si pasase por el detector en ese momento, se producira un pico mas ancho que el anterior. Ms adelante, los tres componentes estaran separados ya entre s, pero no con tal perfeccin que en el cromatograma se produjesen tres picos netos. Se obtiene un pico solapado con tres cimas (Fase C). Finalmente, cuando la muestra recorriese el total de la columna, los componentes estaran perfectamente separados y al pasar por el detector se obtendran en el cromatograma 3 picos anchos perfectamente resueltos (Fase D).
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Ecuacin de Van Deempter.

Van Deempter, desarrollo una frmula ciertamente complicada, pero que simplificada convenientemente queda: B H = A + + (C l + C g ) Donde: H = altura de un plato terico. = velocidad del gas portador. A = coeficiente de difusin parsita. B = coeficiente de difusin molecular. C = coeficiente de resistencia a la transferencia de masa. Y adems: B = C V2 opt. C = tg
No se va a analizar la ecuacin en s, sino sus consecuencias. Esta frmula relaciona la velocidad del gas portador con la altura del plato terico. Representando grficamente la ecuacin anterior se obtiene la curva representada mas arriba. Por la forma de la curva, se observa que variando la velocidad (o lo que es lo mismo, la presin) del gas portador, se puede lograr variar la altura del plato terico, lo que equivale a poder variar el nmero de platos tericos de la columna. Si se comienza con muy baja presin, (velocidad), la altura de plato terico ser grande, es decir, la columna tendr pocos platos y su fraccionamiento ser defectuoso. Subiendo poco a poco la velocidad del gas, el plato terico ser cada vez mas pequeo hasta llegar a un punto en el que se tendr la altura mnima del plato terico, o nmero mximo de platos tericos, y por tanto, la velocidad optima del gas portador. A continuacin de ese punto, si se sigue aumentando la velocidad del gas, la altura del plato terico crecer, por lo que la columna trabajar cada vez peor. Esto nos sirve para optimizar las columnas, es decir, para hacerlas trabajar de forma que utilizarlas con el mayor nmero posible de platos tericos y obtener de ellas el mximo rendimiento en el fraccionamiento. Prcticamente, la optimizacin se efecta mediante un largo trabajo consistente en los siguientes pasos:
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1- Se hace trabajar la columna con muy baja velocidad del gas portador. Dejarla estabilizar. 2- Se inyecta una muestra de aire con un 10-15% del gas patrn. En el caso de gases petroqumicos, el patrn ser n-butano. Se obtendr un cromatograma con el que conociendo la distancia a partir de la inyeccin a la que eluye el n-butano y la medida de la base de su pico, se puede calcular el nmero de platos tericos, y como se conocer la longitud de la columna, se podr calcular la altura de plato terico. Se lleva a una grfica la velocidad del gas portador y la altura de plato terico y se obtendr un punto. 3- Se subir un poco la velocidad del gas portador y una vez estabilizada la columna, se volver a inyectar la muestra patrn. Igualmente obtendremos otro punto de la curva. 4- Se ir incrementando la velocidad del gas portador y repitiendo las detecciones. Con esto, se obtendrn puntos suficientes para dibujar la curva.
Entonces se llegar a obtener el punto A, para el cual se lograr la altura mnima del plato terico, lo que equivale al mximo n de platos. La columna deber ser usada en un futuro en esas condiciones optimizadas. Este trabajo solo hay que hacerlo cuando se desarrolla la columna por primera vez. Normalmente, cuando se emplea un mtodo analtico, no hace falta efectuar estas operaciones que ya fueron realizadas por quin desarrollo el mtodo. Por ello, se ver que en la descripcin de las condiciones de trabajo de la columna, figura casi siempre indicada la velocidad o el flujo del gas portador. Este es el valor de optimizacin. As por ejemplo, si en la norma dice: Gas portador Helio a 60 ml/min. Esa ser la velocidad o flujo que en las pruebas del mtodo demostr ser la ptima.
Optimizacin.
En general, se pueden dar unas reglas para lograr el ptimo rendimiento de la columna. 1- Cuanto mas agudos sean los picos obtenidos con una columna, mas fcil ser la separacin de una mezcla. 2- A igualdad de n de platos tericos, la mejor columna, ser la mas corta.
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3- Lo ideal es trabajar con una temperatura tal que el K para el patrn sea aproximado a 2 y entonces, optimizar la columna variando la velocidad del gas portador.
TIPOS DE COLUMNAS. Clsicas.

Estas columnas, normalmente usadas en el anlisis industrial se fabrican en forma de espiral o plato con tubos de , 3/16 o 1/8. Los materiales mas usuales son: - Tubo de acero inoxidable. - Tubo de aluminio. - Tubo de cobre. - Tubo de vidrio. Las columnas en vidrio, son muy utilizadas en trabajos bioqumicos. En la industria, las mas usuales se construyen en tubo de acero inoxidable flexible. El relleno debe tener un grano, al menos con tamao inferior o igual a 1/10 del dimetro interior, pero se suelen utilizar tamaos mas finos. Las columnas clsicas rellenas, no pueden ser de gran longitud debido a su baja permeabilidad a causa de su resistencia al paso del gas. Mientras mas grueso sea el soporte del relleno, mayor ser la permeabilidad. Las columnas clsicas suelen tener una longitud entre 1 y 10 metros.
Capilares.
Su dimetro es inferior interiormente a 1mm. Lo normal es que tengan de 0.1-0.5 mm. Sus longitudes varan fuertemente entre 10 y 200 m. El material mas usual para preparar columnas capilares es el vidrio. No obstante, hay columnas capilares tipo Golay construidas con tubo capilar metlico. La forma de fabricar estas columnas en vidrio, se logra con el aparato especial que se esquematiza a continuacin:
A un tubo de vidrio de 1.5 m.de 7-8 mm.de dimetro, se le introduce una varilla metlica (5) y el espacio exterior se rellena con el producto que se desea. Se coloca en el aparato y la varilla de metal se sujeta al aparato para que no avance con el tubo de vidrio. Las ruedas (1) van empujando dentro del horno (3) mientras que las ruedas (2) giran a mas velocidad que las ruedas (1), por lo que al salir del horno, el tubo se va estirando, arrastrando dentro de s parte del relleno. A continuacin el capilar pasa por un horno (4) donde se curva en una espiral continua. As se logran columnas de vidrio de grandes longitudes. Las columnas capilares pueden ser de los siguientes tipos: - Rellenas: Permeabilidad media. Se construyen suprimiendo la varilla metlica, por lo que las columnas quedan rellenas de soporte como una normal.
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Capa porosa: l
Llevan hueco en el centro. Se fabrican con varilla metlica en el eje del tubo. Llevan muy poca fase estacionaria. Pueden llegar hasta los 200 m. Mas permeables. De tubo abierto (Golay). No llevan relleno. La fase estacionaria queda impregnando la pared. Mxima permeabilidad. Posibilidad de grandes longitudes. Llevan muy poca carga de fase estacionaria.
La ecuacin de Van Deempter aplicada a las columnas capilares carece del trmino A, quedando asi: B H = +C La representacin grfica de esta ecuacin es del tipo siguiente:
Cromatgrafo con columnas capilares.
Un cromatgrafo que monte columnas capilares tiene solo alguna pequea pero importante diferencia con un cromatgrafo dotado de columnas normales. Las dos diferencias, a parte de la columna, son el Splitter y el Make-up. 17
El Splitter o divisin de flujo es un artificio cuyo fin es dividir el caudal del gas portador contenido en la muestra para introducir en la columna solamente una parte del mismo. Esto es necesario, ya que debido a la estrechez de la columna capilar, no puede circular por ella la misma cantidad de gas que por una columna normal. Por ello, es preciso dividir dicho caudal en dos corrientes, una pequea que pase a la columna y otra mayor que salga al exterior. Estos Splitter son graduables y pueden seleccionar una divisin de flujo entre 1:10 y 1:1000. El Make-up o acelerador es un dispositivo por el cual, tras la salida de la columna se inyecta de nuevo en esa corriente una cantidad de gas portador que haga que el detector trabaje normalmente con un caudal de gas suficiente, ya que con el que sale de la columna, no funcionaria correctamente. El detector normal a usar en columnas capilares es el de ionizacin de llama, de alta sensibilidad, ya que un detector de conductividad, por su menor sensibilidad y debido a la pequea proporcin de componentesde la muestra que eluyen de la columna, no se detectarian gran parte de los mismos. Tanto el Splitter como el Make-up no debe provocar turbulencias en el flujo gaseoso. Las columnas capilares proporcionan una separacin extraordinaria con unos picos agudos y perfectos, obteniendose unos cromatogramas rpidos y limpios.
Preparacin de los rellenos.

Los rellenos constituidos por un soporte mas o menos inerte mojado con fase estacionaria requieren unos cuidados especiales para que la uniformidad en los mismos se obtenga al mximo. Los rellenos teidos llevan un contenido en fase estacionaria lquida entre el 3 y el 25% y es condicin indispensable que tras la adiccin de la fase lquida, el relleno quede suelto y seco y que no se apelmace. En un matraz, se pesa el soporte slido, previamente seco en la estufa. En otro pequeo matraz se pesa la cantidad necesaria de fase estacionaria lquida y una vez pesada se le aade una cantidad suficiente de disolvente adecuado para dicha fase y de suficiente volatilidad. Se le agrega la fase disuelta al soporte y se enjuaga el matraz con disolvente que se agrega al soporte, hasta que quede recubierto ligeramente por lquido.
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El matraz conteniendo la fase estacionaria lquida y el soporte se coloca en un aparato Rotavapor o similar. Se pone el bao a tempereatura suficiente para que el disolvente pueda ir destilando con un ligero vaco y se pone en marcha el motor que hace que el matraz gire dentro del bao. As se va evaporando el disolvente mantenindose el relleno en continuo movimiento de rotacin con lo que se logra una uniformidad de composicin perfecta. Se mantiene la agitacin hasta que el rellenose vea seco y suelto. Se saca el relleno del matraz y si huele a disolvente, se pone en una cpsula y se termina de secar en la estufa, pero teniendo en cuenta no sobrepasar jamas el lmite de temperatura que indique como mximo el fabricante de la fase estacionaria. A continuacin mantener el relleno preparado bien cerrado en un frasco o matraz.
Llenado de la columna.
Lo primero que hay que hacer es lavar bien la columna. Se lava bien interiormente con: - Detergente. - Sosa diluida. - HCl diluido. - Agua destilada. - Acetona. se secar bien con aire y se podr rellenar a continuacin.
El relleno se har conectandola columna a una bomba de vaco, poniendo en el extremo de la misma un tapn de lana de cuarzo o vidrio y una tela metlica muy fina para impedir que el relleno pueda llegar a la bomba. Mediante un embudo se comienza a agregar poco a poco el relleno mientras se hace el vaco y se vibra fuertemente. Poco a poco la columna se va rellenando hasta que no entre mas relleno. La columna debe empaquetarse teniendo especial cuidado de que no queden espacios vacios en la columna, pues un espacio hueco y sin relleno hace inutil la columna. El vibrado interesa que sea intenso para que en el relleno se adapten perfectamente unas partculas con otras y no haya posibilidad de formarse canalillos por los que el gas trate de pasar preferentemente. No obstante, con los tamices moleculares, el vibrado debe hacerse suave ya que los citados materiales son muy frgiles y blandos y con un vibrado excesivo se rompen formando polvo que termina por apelmazar y obstaculizar la columna. El polvo de los rellenos es muy perjudicial y en lo posible debe eliminarse.
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Para ello lo mejor es poner el relleno en un vidrio dotado de placa filtrante ancha en su fondo y pasarle una suave corriente de agua a su traves. El polvo se arrastrar por la corriente de agua y el soporte una vez seco a la estufa, habr mejorado enormemente sus caractersticas de permeabilidad, sin perder nada en cuanto a su superficie especfica.
Los soportes pueden ser mas finos o mas gruesos en cuanto a su tamao de partculas. Se les suele clasificar por mesh, es decir, nmero de mallas por centmetro cuadrado. As se dice que un relleno es 60/80 mesh, lo que quiere decir que pasa perfectamente por el tamiz de 60 mallas, pero no por el de 80. Los tamaos mas usuales son: - 40/60 mesh (grueso). - 60/80 mesh. - 80/100 mesh. - 100/120 mesh (fino). Una vez preparada y rellena la columna, se hace preciso, antes de utilizarla , efectuar su acondicionamiento. Esta operacin se realiza en el horno del cromatgrafo, para lo cual la entrada de la columna se conecta al punto correspondiente a la zona de inyeccin, dejando sin conectar el extremo correspondiente al detector. Se deja pasar gas portador por la columna durante varias horas a la temperatura del horno mas adecuada. Pasado este tiempo, se puede conectar la columna a la entrada del detector. Este acondicionamiento se realizar para eliminar de la columna los restos de disolventes y materiales volatiles no deseables. Si no se hace esto, se obtendr una lnea base con deriva, es decir, manteniendo una inclinacin continua no deseable y no tendr la horizontalidad deseada, la menos en un tiempo bastante largo.
Soportes y fases estacionarias.

La separacin cromatogrfica, si se trara de compuestos de una serie homloga(por ejemplo, hidrocarburos saturados) se efectua siempre en orden de ebullicin de menor a mayor.
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Si la fase es totalmente apolar, esto se suele producir as, sea cual sea la naturaleza de los productos, pero rara es la fase que no posee algo de polaridad. Productos de naturaleza qumica diferente pero con el mismo punto de ebullicin, se podran separar a causa de su diferente solubilidad en la fase estacionaria. La propiedad de una fase para separar los productos se llama selectividad. Los criterios que deben seguirse para elegir una fase estacionaria adecuada son: 1- Limitaciones de temperatura. No se puede usar una fase utilizable solo a baja temperatura si se quieren separar productos que necesitan alta temperatura para su volatilizacin. La columna no ser estable y se producir la llamada emigracin o fase de sangrado. En los catlogos de fases estacionarias figura siempre su mxima temperatura de utilizacin. Si se emplean fases a temperatura inadecuada, se producira sangrado o descomposicin trmica de la fase. 2- Que exista posibilidad de reacciones de la fase con la muestra a analizar. Por ejemplo, gases con acetilenos con la fase cianuro de benzonitrato de plata, que formar acetiluro de plata, no sirviendo para determinar los acetilnicos. 3- Que puedan existir fuerzas de interaccin soluto-solvente, que intervendrn en los coeficientes de actividad de los componentes de la mezcla. En cuanto a la influencia de la temperatura, se puede decir que aumentando la temperatura, se logra aumentar la rapidez de la elucin de la muestra, pero la separacin es peor. En algunos casos, se precisa la tecnica de subambiente, es decir, disponer de algn medio con el que enfriar la columna por debajo de temperatura ambiente.. los dos procedimientos mas usuales son la utilizacin de CO2 lquido y el N2 lquido. La columna no deber nunca sobrepasar la temperatura mxima indicada por el fabricante. Las interacciones soluto-solventes, se pueden producir por: 1- Fuerzas de orientacin. Debidas a la presencia de dipolos permanentes en ambos lquidos. Este es el caso del agua, alcoholes, amidas, cidos, fenoles, aminas, aldehidos, teres, steres, etc. 2- Fuerzas de induccin. Debidas a la interaccin de un dipolo permanente y otro inducido. Es el caso de una fase polar y una olefina.
Polaridad de las fases.

Las fases estacionarias se distinguen por su polaridad. La presencia de dipolos permanentes hace que las fases tengan una polaridad caracterstica. Hay fases apolares y fases fuertemente polares. Pero existen multitud de fases con polaridad intermedia. Las fases polares retienen fuertemente los solutos polares. En el caso de los gases petroqumicos, una fase polar retiene dbilmente los hidrocarburos olefnicos y mas fuertemente los acetilnicos.
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Ciiendonos solo a los mas ligeros, en el esquema puede verse lo que ocurre con los hidrocarburos C1-C3. En una fase apolar el orden de elucin de los hidrocarburos C1-C3, ser el de sus puntos de ebullicin, mientras que en una fase polar se producen retrasos medios en los etilnicos y puertes en los acetilnicos. FASE APOLAR FASE POLAR 1 Metano Metano 2 Acetileno Etano 3 Etileno Etileno 4 Etano Propano 5 Propileno Propileno 6 Propano Acetileno Fases Estacionarias Escualano Silicona DC-200 Apiezn L Silicona OU-1 Silicona SE-30 Hexadecano Octoil S (Hexil-etil-sebacato) Ftalato de dibutilo Silicona SE-52 Ftalato de dioctilo Temperatura utilizacin. 130 C 200 C 250 C 300 C 300 C 50 C 130 C 100 C 300 C 70 C lmite de
Apolares
Polaridad media
Bentone 34 200 C Carbowax 1500 170 C Fuertemente Carbowax 20 M 200 C polares B-B-oxidipropionitrilo 60 C Tetraetilenglicol dimetileter (Bis-2-2-metoxi-etoxi-dietiletet) 50 C Rhschneider estableci una clasificacin de las fases en cuanto a polaridad, asignando el valor de polaridad 0 (mnimo) al Escualano y el valor 100 (mximo) al B-B-Oxidopropionitrilo. Segn esa clasificacin todas las fases tenian valores entre 0 y 100 por lo que esta clasificacin ayuda a escoger la fase mas apropiada para cada caso.
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Columnas con fases mixtas.

Ciiendonos al caso de las muestras de gases petroqumicos, podemos asegurar que utilizando una columna de fase a apolar no podremos jams lograr la perfecta separacin de todos ellos. Las fases apolares efectuan la separacin exactamente siguiendo el orden de los puntos de ebullicin y hay varios hidrocarburos ligeros con prcticamente el mismo punto de ebullicin por lo que su elucin se hara en un solo pico. Pero teniendo en cuenta que los hidrocarburos que eluyen juntos en esas columnas pertenecen a series homlogas distintas, variando la polaridad de la fase se podr variar el tiempo de retencin de los mas polares. As por ejemplo: El metil acetileno y le propadieno, eluyen juntos en una columna apolar. Agregando a la fase apolar una proporcin de una fase de alta polaridad, el metil acetileno retrasa su elucin permitiendo su separacin. Ahora bien, tengamos en cuenta que en las muestras de refinera y olefinas pueden existir todos o parte de estos gases. - Inorgnicos: H2-O2-N2-CO-CO2-SH2-SO2-COs. - Hidrocarburos: SATURADOS Metano Etano Propano Ciclopropano Iso butano Normal butano OLEFINICOS ------------------Etileno Propileno Buteno 1 Iso buteno Trans buteno-2 Cis buteno-2 ACETILENICOS --------------------Acetileno Metil acetileno Etil acetileno Vinil acetileno DIENOS -------------------propadieno Butadieno 1-2 Butadieno 1-3
C1 C2 C3 C5
C6
Neo pentano Iso pentano Normal pentano
Dada la gran variedad de gases con los que hemos de trabajar, la complejidad del anlisis es grande. Hay que estudiar la composicin de las columnas cromatogrficas con el fin de lograr que se separen adecuadamente el nmero mximo posible de componentes. En un trabajo de investigacin de Hildebrand y Riley, lograron un sistema de prediccin de fases mezcladas capaz de las mximas separaciones, basado en la determinacin de los factores de capacidad. Para ello, preparaban dos columnas de la misma longitud y con el mismo soporte pero una con fase apolar y otra con fase polar en las mismas proporciones. Montaban ambas columnas en el mismo cromatgrafo y las hacan trabajar una tras la otra en las mismas condiciones de caudal de gas portador y temperatura. En esas condiciones se introducian muestras con todos los componentes y determinaba los factores de capacidad para cada componente de la columna. Si dos o mas componentes tienen el mismo factor de capacidad, quiere significar que eluyen juntos.
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Se disponen dos escalas separadas entre s por una perpendicular dividida en 100 partes. En la primera se sealan puntos correspondientes a los K de los componentes eluidos en la fase A y en la otra los K de los componentes eluidos en la fase B. Se comprueban los componentes eluidos en cada pico y luego se unen los correspondientes puntos de las escalas A y B, el punto A con el A, el B con el B, y sucesivamente. Estonces basta trazar una paralela a las escalas en una zona en la que las rectas de unin estn lo sufucientemente separadas. En el caso expuesto en la fgura anterior, el cromatograma obtenido con la fase A es el de la recta superior, donde los picos A-B, E-F y H-I, son dobles y eluyen en ellos dos componentes. El cromatograma de la recta inferior, es el obtenido con la fase B y tiene como picos dobles a B-C y D-E. A una altura correspondiente a aproximadamente el 35% de fase A y 65% de fase B, se obtiene una linea con todos los componentes separados, por lo que el cromatograma que se obtendr con una fase mixta de dicha composicin ser el de la recta del medio, con todos los componentes diferenciados. Este sistema ha resuelto multitud de problemas en todo tipo de separaciones y hay que emplear multitud de columnas con fase mixta o bien su equivalente:
Esta equivalencia son las columnas dobles que se construyen uniendo dos columnas con fases Ay B, de longitudes proporcionales a las obtenidas en el grfico y que proporcionan iguales o mejores resultados que las logradas con fases mezcladas.
Soportes slidos.
Un slido capaz de ser utilizado como soporte para ser impregnado con fase estacionaria lquida, ha de tener unas caractersticas generales lo mas de acuerdo con lo siguiente: 1- Elevada superficie por unidad de volumen. 2- Estabilidad a las altas temperaturas. 3- Resistencia mecnica a la rotura. 4- Mxima inactividad qumica. 5- Mxima inactividad de adsorcin.
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6- Baja resistencia al paso del gas portador. Los tipos de slidos mas comunmente usados son: 1- Ladrillo refractario molido. 2- Tierras de diatomeas (kieselgur). 3- Microesferas de vidrio. 4- Tefln finamente dividido. Las diatomeas son algas que tienen un pequesimo tamao y que tienen un caparazn poroso silceo. Hay yacimientos fsiles de estas algas que con los correspondientes tratamientos qumicos o trmicos, proporcionan unos excelentes soportes. Tratadas con fundentes alcalinos, proporcionan unos soportes blancos cuyas principales marcas son: - Celite - Celatom. Calcinadas directamente sin mas tratamiento, se obtienen los soportes de color rosado: - Sil-o-cel. - C-22. - Sterchamol. Los soportes ricos en hierro calcinados fuertemente, constituyen el grupo de los soportes mas o menos rojos: - Chromosorb P. - Gas Chrom R. Estos soportes tienen una gran superficie, gran resistencia mecnica pero presentan una ligera actividad residual de adsorcin. Los soportes lavados al cido y calcinados tienen su mejor ejemplo en el: - Chromosorb P-AW (P=pink, W=washed) Otros tipos de soportes con tratamientos alcalinos son: - Chromosorb W. - Gas Chrom P. - Gas Chrom S. - Gas Chrom AZ. Estos soportes tienen menor superficie especfica, pero tambin tienen menor actividad superficial de adsorcin. Un tipo de soporte al fundente de muy buena dureza y de muy poca actividad de adsorcin y que va muy bien con pequeos porcentajes de fase estacionaria, es el Chromosorb G.
Desactivacin de los soportes.

En general, la actividad residual de adsorcin no deseable que presentan los soportes, se debe generalmente a la presencia en ellos de iones metlicos o a grupos OH.
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La principal manifestacin de la actividad superficial residual de los soportes es pa produccin de colas (Tailing) en los picos. Estos, en lugar de ser simtricos (issceles), presentan como en los casos A y B un alargamiento mas o menos exagerado en la zona descendente. En casos raros se produce algunas veces un Tailing inverso, es decir, que se presenta en la zona ascendente del pico. El Tailing es perjudicial para el anlisis cuantitativo y si en algn tipo de columna se produce, hay que tratar de preparar adecuadamente la columna para evitarlo. Hay que proceder a la preparacin de la columna, a desactivar el soporte. Para desactivarlos, pueden utilizarse dos procedimientos: 1- Cubrirlo con una pequeisima cantidad (1-2%) de la fase pesada muy polar. Esto va bien cuando se va a utilizar luego una fase poco polar, o se va a utilizar con muestras poco polares. Las fases muy polares logran eliminar el Tailing por s mismas. 2- Bloquear los grupos OH mediante silanizacin. Para ello, se emplear perfectamente el Dimetilclorosilano.
Estos soportes silanizados se venden ya comercialmente. Sus tipos principales son: - Aeropak 30. - Gas Chrom Q. - Diatoport. El tefln y sus homlogos clorofluorados, se suelen usar bastante como soportes. Se recubren con pequeas proporciones de fase estacionaria. Los rellenos a base de tefn son dificiles de manejar, ya que se suelen cargar de electricidad esttica y se apelmazan y no pasan a traves de la columna. Para evitar esto, hay que enfriar fuertemente la columna y el relleno, y en estas condiciones se puede manejar mas facilmente. Los principales tipos de rellenos fluorados o clorofluorados son: - Haloport F. - Fluoport. - Tefln 6. - Chromosorb T. - Fluoropak 80. - Kel F. Los soportes teflonados soportan temperaturas hasta 275 C. Las bolas de vidrio, se suelen emplear en bioqumica como soporte. Como defectos: 1- Su poca superficie especfica. 2- Su baja capacidad de fase estacionaria (Mx. 3%) lo normal es cargarlas con 0.1-0.5 %. 3- Que la fase se acumula en los puntos de contacto entre esferas. Otros slidos activos adsorbentes se suelen usar teidos con fases estacionarias. Por ejemplo: almina alcoa teida teida con un 3% de escualano o silica gel, teida con un 0.5% de Carbowax 20 M.
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Ahora bien, mas que nada lo que en realidad se hace es envenenar al adsorbente, rebajando sus propiedades mediante el teido con la fase estacionaria.
Rellenos de slidos adsorbentes.

Hay productos slidos porosos con unas extraordinarias propiedades para su utilizacin como fases estacionarias slidas. En los rellenos con fases lquidas, los componentes de las muestras se separan por disolucin en la fase. En el caso de los slidos adsorbentes, los componentes de las muestras se adsorben en la superficie activa de estos. Los principales tipos utilizados son: - Silicagel. Separa H2, aire, CO, CH4, CO2, C2, C2=, etc. Puede utilizarse a altas temperaturas y mediante programacin de temperaturas da buenas separaciones. - tamices moleculares (molecular sieve). Por ejemplo, la 5A y 13X, separan H2, O2, N2, CO, CH4, retienen el CO2. Son rellenos muy frgiles y hay que tener el mximo cuidado al vibrar las columnas ya que se reducen a polvo muy fcilmente. Mediante el lavado con agua en contracorriente, se les elimina el polvo y se mejoran sus cualidades de rapidez sin perjudicarse sus propiedades de separacin. - Carbn activo(Active charcoal). Propiedades de separacin similares a las anteriores. - Carbosieve B. Relleno de muy dificil manejo y que se utiliza con gran facilidad. Hay qye cargar las columnas en atmsfera de N2. Separa bien: H2, O2, N2, CO, CO2, acetileno, CH4, CH3-CH3, CH2=CH2. - Almina activada. Similar a la gel de slice. Existen unos rellenos usados en la tcnica de Gelpermation, en la que se puede considerar tcnica intermedia entre la G.S.C. y la G.I.C. que son polmeros orgnicos porosos. Los usos son mas diversos y van desde la separacin de gases ligeros hasta las separaciones de compuestos muy complejos. Los tipos mas conocidos son: - Porapak (Tipos Q, S, R, T, etc.) - Chromosorb (Tipos 102, 104, 107, etc.). Otros materiales empleados en el relleno de columnas son las microesferas de vidrio poroso. Su uso es variado y los principales tipos son: - Porasil A, B, C, D. - Spherosil A, B, C, D. ltimamente, se esta empleando una variedad de esferas de vidrio poroso que por un especial procedimiento llevan soldadas fases estacionarias lquidas. Con ello participan de las caracteristicas de los slidos adsorbentes y de las fases lquidas. Por otra parte, gracias a la forma de unin de la fase lquida al material slido permite utilizar estos rellenos de temperaturas prohibitivas para la fase lquida en uso normal. As por ejemplo, el oxidipropionitrilo que solo puede usarse hasta 50 C, de esta forma puede usarse hasta 150 C sin que migrase la fase. Los principales tipos de estos rellenos son: Durapak.................Porasil C-OPN (oxidipropionitrilo). Durapak.................Porasil N-heptano. Durapak.................Porasil Carbowax 1500.
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Detectores.
Para poder detectar los gases separados por la columna cromatogrfica y que salen de ella mezclados con el gas portador mayoritario, se precisan medios que puedan dar no solo una indicacin cualitativa, sino que esta indicacin pueda utilizarse para su determinacin cuantitativa. Por tanto y debido a haberse ido complicando cada vez mas las tcnicas analticas y ser preciso detectar ppm y en ocasiones ppb, las tcnicas se han ido complicando, hacindose cada vez mas sensibles. Por ello, se ha llegado al detector Transductor. Transductor, es todo artificio capaz de convertir una propiedad fsica, no medible fcil ni directamente, en una seal elaborable y ofrecernos informacin sobre la naturaleza y magnitud de la propiedad fsica que incide en el transductor. Normalmente todos estos detectores precisan una etapa posterior de amplificacin de la seal para hacerla registrable. Los detectores mas convenientes son aquellos que proporcionan una seal elctrica. Un buen detector debe de tener las siguientes propiedades: - Sensibilidad alta. - Lineabilidad. - Estabilidad de la seal. - Carencia de ruidos de fondo. - Rapidez de la respuesta. Los detectores pueden ser en cuanto a su uso: - Universales...............Detectan todos los componentes. - EspecficosDetectan solo algunos. En cuanto al tratamiento de la muestra pueden ser: - Destructivos...Los de llama. FID. - No destructivos..Los de conductividad.
Detector de conductividad trmica (hilo caliente o termistores).
El detector de conductividad trmica o Katarmetro, es un detector con las siguientes caractersticas: - Universal. - No destructivo. - Lineabilidad excelente. 28
- Sensibilidad aceptable. - Manejo simple. Su principio de utilizacin se basa en el hecho de que el gas portador tiene una conductividad trmica fija y caracterstica, pero si a este gas se le contamina con otro, la conductividad trmica varia apreciablemente. Se utiliza de forma diferencial, como se ve en la figura anterior, es decir, que por una rama pasa gas portador puro y por la otra el gas que sale de la columna analtica. Por las resistencias de ambas ramas, pasa una corriente estable. Si el gas que pasa por ambas ramas es puro, la disipacin de calor en ambas ramas es igual y la resultante es una lnea base plana. Pero si algn gas se mezcla con el portador en una de las ramas, la disipacin de calor en esa rama vara y vara, por tanto, la resistencia por modificarse la temperatura en esa cmara. La variacin de resistencia se acusa teniendo ambos filamentos incluidos en un sistema de Puente de Wheastone como se indica en la figura anterior. La resistencia variable superior sirve para regular la corriente de puente y lograr el equilibrio, o sea, la lnea base estable. Por ello, mientras de la columna no eluye ningn componente, por ambas ramas pasar solo gas portador, en el momento que empieza a eluir algn componente, se desequilibrar el sistema y el registrador comienza a marcar un pico. La mxima seal coincidir con la mxima concentracin y a continuacin la seal ir descendiendo hasta que por la salida de la columna salga solo gas portador puro, momento en el cual, el registrador volver a marcar la lnea base. Los detectores de conductividad trmica pueden ser de dos tipos: - De Hilo caliente o resistencia. - De Termistores. El termistor es un pequeo glbulo de un material semicermico que hace el mismo servicio que las resistencias. El montaje de estos detectores puede hacerse por dos sistemas: - Flujo directoEl gas recorre la totalidad del hilo. - Difusin...El gas pasa parcialmente por el. La sensibilidad de este detector, no es muy alta y por ello es difcil detectar con el menos de 10 ppm. Para poder obviar este inconveniente, hay que utilizar a veces muestras muy grandes, hasta de 50 cc. No es un buen detector para su uso en programacin de temperatura.
Detectores de alta sensibilidad.

Estos detectores se dividen en dos grupos: 1- De ionizacin no radiactivos: Llama de Hidrgeno (FID) y Termoinico. 2- De ionizacin con fuente radiactiva: Captura electrnica, Ionizacin de rgon y Cross-Section.
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Detector de ionizacin de llama (FID).
El detector de ionizacin de llama (FID), es simplemente un mechero en el que se quema hidrgeno con aire sinttico pursimo y en el que se introduce el gas que eluye de la columna cromatogrfica como se muestra en el grfico anterior. Una llama de Hidrgeno y aire, da lugar a la formacin de algunos iones caractersticos + (H3O , NO+, NH4+). Esto da lugar a que entre los electrodos situados rodeando la llama, se produzca una corriente de iones muy dbil, pero detectable y fija, llamada corriente de fondo. Al entrar en el gas a quemar en el mechero algn compuesto combustible, en la zona de reaccin se producen iones en abundancia que incrementan de forma extraordinaria la corriente de ionizacin. Esto hace que sea un detector de gran sensibilidad. Como desventajas de este detector tenemos que no vale para los productos que no son combustibles (halgenos, SO2, derivados nitrogenados, inorgnicos en general, etc.).
Detector termoinico de sodio. Es un detector de llama, pero al que se le dispone de un electrodo circular recubierto de sales de sodio. Como ventajas de este detector, se puede citar su enorme sensibilidad para los compuestos de fsforo y halgenos. En presencia de fsforo, es 600 veces mas sensible que el normal de llama.
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Detector de captura electrnica.
Este detector presenta frente al ctodo una placa de fuente radiactiva (Ni63 o Tritio). En este detector no se produce ionizacin sino que lo que realiza es la captura de electrones libres. Como gas portador, emplea en nitrgeno o argn- metano al 5%. Cuando arrastrados por el gas portador entran en la cmara productos distintos al gas portador y que pueden ionizarse, se produce una cada en la corriente del detector por captura de electrones. Este detector es excelente para derivados de los halogenados. Es el detector ideal para el anlisis de plaguicidas. Puede trabajar hasta los 200 C y se inutiliza por encima de esta temperatura por deterioro de la fuente radiactiva.
Detector Cross-Section.
Este detector produce ionizacin. Tiene un margen de linealidad amplio. Es similar al anterior. (1) Sr90, Pm147, Tritio.
Detector de ionizacin de Argn.

Este detector tambin produce ionizacin. Su linealidad es muy crtica y depende de la tensin aplicada en los electrodos. El argn supletorio que se debe introducir ha de estar perfectamente exento de humedad. (1) Ni63, Sr90.
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Como detectores a la salida de la columna se pueden aplicar aparatos que se pueden utilizar en otras tcnicas. Tales como: - Espectros UV. - Espectros de infrarrojos. - Espectros de masas.Muy importante esta combinacin. - Detectores microculomtricos. - Detectores biolgicos. (animales muy pequeos = moscas, mosquitos).
Anlisis cualitativo.
El cromatograma nos proporciona una triple informacin. 1- Tiempo de retencin del componente. 2- Altura del pico. 3- Base del tringulo del pico. El sentido cualitativo del cromatograma se obtiene a partir de los tiempos de retencin. En condiciones de estabilidad de la columna en cuanto a temperatura, caudal de gas portador, etc. Cada componente eluye siempre a tiempo de retencin fijo. Por ello, el tiempo de retencin es clave para la identificacin cualitativa del producto. El sentido cuantitativo del cromatograma se obtiene a partir de la altura y la base de casa pico. Con ambas medidas se puede obtener el rea de cada pico (h b/2). Estas son, como luego se explicar relativamente proporcionales al porcentaje de la muestra. Para la identificacin de los componentes de una muestra, se apela a la siembra de gases patrn. Varias compaas (Phillips, Matheson, Bayer, Baker, etc.), venden los diferentes gases petroqumicos, con grados de pureza superiores al 99% en envases manejables de pequeo volumen.
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1- Para ello se introduce la muestra desconocida en el cromatgrafo y supongamos que se obtiene el cromatograma n1. 2- A continuacin se le introduce al baln o pepino de vidrio en el que se tiene la muestra, una cantidad de gas patrn cuya existencia en la muestra se supone. Se mezcla bien y se vuelve a introducir muestra en el cromatgrafo. Se obtiene el cromatograma n2. vemos que el pico A ha crecido siendo mayor que el del cromatograma n 1. ya podemos afirmar que el pico A puede corresponder al gas patrn incluido. 3- Hacemos lo mismo con otro gas patrn y obtenemos el cromatograma n 3. podemos asegurar que el pico B puede corresponder al patrn introducido. 4- Si se introduce otro gas patrn y se obtiene el cromatograma n 4 y vemos que el pico aparece en la zona en la que no exista ningn pico de la muestra, se puede asegurar que el gas X no exista en la muestra. As actuaremos sucesivamente con todos los componentes. Se observar que decimos que los picos A y B pueden corresponder a los patrones introducidos, pero no decimos corresponden. Esto es porque pueden existir dos o mas productos con el mismo tiempo de retencin. Ahora bien, tratndose de gases petroqumicos para los que hay estudiadas columnas en las que todos los picos se separan unos de otros, ya podemos decir que los picos corresponden a los patrones y no que pueden corresponder. Con este sistema se logra la plena identificacin de los distintos picos, por lo que en lo sucesivo, bastar ver el tiempo de retencin, sobre todo si se emplean tiempos de retencin relativos, para saber que componentes tiene la muestra. En los casos mas complejos que los que se presentan con los gases del petrleo, para la identificacin de los componentes lo mejor es apelar a utilizar conjuntamente las tcnicas cromatografa-espectro de masas. Esta tcnica proporciona para cada pico del cromatograma un espectro de masas caracterstico que puede identificarse plenamente sobre todo si el masas lleva acoplado un procesador de datos con biblioteca de espectros almacenada en memoria.
ndice de Kowats.
Una de las formas de poder identificar, o al menos, localizar a los componentes de una muestra fue la idea de Kowats de asignar a cada producto una especie de apellido que lo identificase y que ese apellido fuese un nmero relacionado con una serie homloga fcil de disponer. Para ello, tom la serie de los n-alcanos (C1-Metano, C2-Etano, C3-Propano,etc.). A cada alcano le dio un ndice de Kowats de = N100; siendo N = n de tomos de carbono. As quedo: - Metano.ndice de Kowats 100. - Etanondice de Kowats 200. - Propano... ndice de Kowats 300. - N-butano. ndice de Kowats 400. - N-pentano.. .ndice de Kowats 500. Un producto inyectado en una columna eluir de ella en un tiempo de retencin comprendido entre dos alcanos consecutivos. Ejemplo: un producto eluye entre el octano y el nonato. Por tanto dicho producto tendr un ndice de Kowats de ochocientos y algo mas, por ejemplo, 835. 33
Anlisis cuantitativo.
Se dijo anteriormente que el pico obtenido en un cromatograma (rea) era relativamente proporcional a su porcentaje en la muestra. Quiere decir esto que si preparamos una muestra de 50% de Propano y 50% de pentano y lo inyectamos en el cromatgrafo se obtendr un cromatograma en el que habr dos picos, pero las reas de los picos no sern forzosamente iguales. Sern parecidos, pero no iguales. Pero, si esa muestra se inyecta varias veces en el aparato y se obtienen los cromatogramas, lo que si ser siempre igual es la relacin del rea del pico de uno a la del otro. Es decir: rea componente A = constante = K rea componente B Otro hecho que hay que considerar es que si inyectamos una mezcla compleja de componentes variados con porcentajes muy diversos, el cromatograma sera tal que algunos picos seran tan grandes que se saldran de la escala del registrador, si se registrase a mxima sensibilidad.
Los cromatgrafos tienen un dispositivo llamado atenuador, por el que es posible disminuir a voluntad la seal del registrador de forma que los picos entren dentro del registrador. Sea por ejemplo (A) el cromatograma obtenido a mxima sensibilidad del aparato. Parte de los picos sern recogidos por el registrador como tringulos perfectos, pero los dems llegarn al tope en el. Con esto se podr ya afirmar que los picos que quedan como tringulos sern componentes en proporcin muy pequea y que los dems estarn en proporciones mas o mmenos considerables. Entonces, con el mando del atenuador se puede hacer que los picos queden todos dentro de la escala. Los factores de atenuacin de que disponen los cromatgrafos son segn las potencias de 2, es decir: 1, 2, 4, 8, 16, 32, 64, 128, 256, 512, 1024 Quiere decir esto, que un pico obtenido con atenuacin 256, tendr en realidad una superficie 256 veces mayor. Por ello, el cromatograma (B) se tendr que, para poderlo interpretar cuantitatvamente, una vez logradas las reas de los picos, multiplicar por el nmero de la atenuacin que figura en azul (en el caso del quinto pico por 256 y en el caso del ltimo pico por 8). Suponemos que ya se han obtenido (multiplicando las reas reducidas por sus factores de atenuacin) las reas sin corregir referidas a mxima sensibilidad del aparato. Entonces habra que dar a cada componente un factor de respuesta caracterstico, para obtener el rea corregida, ya verdaderamente proporcional a su concentracin. Ya dijimos que las reas de los picos son relativamente proporcionales a las concentraciones. Pero la respuesta de los detectores a los distintos componentes no es la misma para todos.
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Se elige un componente como patrn, como por ejemplo el benceno y se relacionan con el las respuestas para los dems componentes, obteniendose unos factores de respuesta relativos al benceno. Rosie, Messner y otros colaboradores han publicado un trabajo completsimo en el que han reflejado todo su esfuerzo para lograr determinar los factores de respuesta para todo tipo de productos usualmente determinados cromatogrficamente: - Gases inorgnicos. - Hidrocarburos saturados. - Hidrocarburos aromticos. - Hidrocarburos naftnicos. - Hidrocarburos olefnicos. - Hidrocarburos acetilnicos. - Hidrocarburos dinicos. - Alcoholes. - Cetonas. - Aldehidos. - cidos grasos. - Etc. De estas listas podemos obtener los factores de respuesta necesarios para poder corregir las reas de los picos de un cromatograma. Con la utilizacin de los factores de respuesta, las reas de los picos y las atenuaciones, ya tenemos datos suficientes para poder cuantificar el anlisis.
Es una prctica normal en cromatografa no utilizar la base del tringulo para los clculos de rea, y s en cambio la anchura del pico a la mitad de la altura (base media), ya que: bh = bm h 2
El hecho de utilizar la base a la mitad de la altura, se debe a que en ese punto no hay prcticamente error en la medida de la distancia bm sobre todo con la utilizacin de una lupa especial con escala milimtrica con subdivisiones de 0.1 mm. Sin embargo, la medida de la base puede hacer que unos analistas, desde la medida a como base, mientras otros dan como base la medida b o bien medidas intermedias. Con ello se introduce una variada fuente de error, apreciable en el resultado final.
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Pico A B C D E
Volviendo al ejemplo: bm x h 2.5 x 14 3.7 x 28 4.5 x 46 2.1 x 11 4 x 17
X X X X X X
Aten. 1 128 128 1024 16
x x x x x x
Fact.resp. 0.82 0.91 0.78 0.90 0.75 rea total
= = = = = = =
rea corregida 28.7 12067.3 20666.8 21288.9 816 54867.7
Clculo: Si 54867.7 corresponde a 100%, entonces 28.7 ser un 0.05 %. Si 54867.7 corresponde a 100%, entonces 12067.3 ser un 21.99 %. Si 54867.7 corresponde a 100%, entonces 20666.8 ser un 37.66 %. Si 54867.7 corresponde a 100%, entonces 21288.9 ser un 38.80 %. Si 54867.7 corresponde a 100%, entonces 816 ser un 1.48 %. Total 99.96 %.
Curvas de calibrado.
Vamos a suponer que para el anlisis de un gas de alta puerza obtendremos un cromatograma como el de la figura en el que se ven unos pequeos picos correspondientes a las trazas de las impurezas (A y B) y un enorme pico correspondiente al gas mayoritario (C). Si se aplica el sistema de triangulacin a este ejemplo, es muy facil que un pequeisimo error en la triangulacin del pico mayoritario suponga unos grandes errores relativos en el resultado de las trazas. Pueden tener los gases A y B valores reales, por ejemplo, de 5 y 9 ppm. Y fcilmente se pueden dar datos de 50 y 90 ppm. Para ello, en estos casos se abandona el uso de las medidas de reas y en la cuantificacin se emplea el calibrado por altura de los picos. Para ello, se preparan muestras que contengan cantidades conocidas del producto a calibrar en el margen que se quiera.
Las alturas de los picos de las distintas muestras patrones se pasan al grfico frente a las cantidades puestas del componente en las muestras patrones. Se logra as una lnea de calibrado y para muestras con contenido desconocido basta medir la altura del pico encontrado y hallar su correspondiente cantidad en la recta de calibrado. Por ejemplo, la altura H corresponde a 8 ppm.
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Medida de las reas de los picos.

1- Ya se ha descrito el mtodo usado normalmente en el clculo manual de la triangulacin. 2- En los primeros tiempos se uso el procedimiento de recortar los picos del cromatograma y pesarlos. 3- A los registradores se les incorporan unos integradores mecnicos que sealan proporcionalmente las reas por medio de un nmero de rayas.
En el ejemplo se ve que las seales del integrador mecnico son 6 para el pico A, 13 para el pico B y 21 para el pico C. Las reas de los picos son proporcionales a 6, 13 y 21. Basta por ello, tomar esos nmeros como representantes de las reas para efectos de clculo. 4- Otro procedimiento de medida del rea de los picos es el uso de planmetros. Estos planmetros son unos instrumentos que llevan un punzn con el que se sigue a mano la lnea marcada por el registrador mientras una pequea rueda combinada con un sistema de conteo va marcando el rea de cada pico. 5- Lo mas avanzado, antes de la utilizacin de los Data System u ordenadores fu la ultizacin de integradores electrnicos. Estos aparatos se conectan al cromatgrafo y reciben dirctamente la seal del detector. Para estos aparatos no se hace preciso el uso de registrador, ya que ellos recogen todos los datos de los picos que aparecen en el cromatograma, sealan en la tira de papel el tiempo de retencin de cada componente y un nmero de cuentas proporcional al rea del pico. Al terminar, proporcionan el rea total, suma de todos los picos. Estos integradores tienen una versatilidad enorme en su uso. Regulan el poder integrar picos muy agudos o picos muy aplanados con la simple eleccin de un mando de los mV/min. Como sensibilidad pendiente (slope sensitivity) tanto a la subida del pico como a la bajada.
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Con picos agudos como el A la subida de la plumilla del registrador es muy fuerte y como el campo del registrador puede regularse en mV/min. con los mandos del slope sensitivity puede hacerse que se integren picos agudos y picos aplanados. Tienen la posibilidad de eliminacin de ruidos de fondo (mando Noise).
Caso de darse varios picos que no estn separados perfectamente, como los indicados en la figura anterior, el integrador puede a voluntad o integrarlos todos en conjunto, o uno a uno por separado. El registro en la tira de papel marca el tiempo de retencin, el nmero de cuentas y un nmero que expresa la potencia de 10 por la que hay que multiplicar el nmero de cuentas. En el ejemplo de a continuacin se ve lo que marca el integrador y a la derecha el significado de lo expresado en el registro del aparato. 1.59 3943 3 -------- 3943000 2.48 123 2 -------- 12300 7.35 175 0 -------- 175 10.48 3145 1 -------- 31450 +R cuentas 10x
Medios auxiliares para el anlisis cromatogrfico.
En los cromatgrafos normales, la forma habitual de inyectar las muestras es mediante el septum de goma a travs del cual y con el auxilio de las jeringas y microjeringas se introducen las cantidades de muestras, tanto gaseosas como lquidas. Pero sobre todo en la industria petroqumica en la que muchas muestras se toman en estado licuado y se contienen en cilindros metlicos resistentes a la presin, se ha previsto un sistema por el cual, la muestra contenida en tales recipientes se pase directamente al cromatgrafo sin tener que expansionar a fase gaseosa y proseguir con la inyeccin con jeringa. Por ello se desarrollo la vlvula de gases que se describe grficamente en el esquema anterior. Es una vlvula con mando giratorio que dispone de un capilar con volumen conocido para tomar la muestra necesaria para el anlisis.
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En una primera etapa (fig. a), el cilindro conectado a la vlvula de gases hace pasar muestra por el capilar y saliendo a la atmsfera purgando perfectamente este. Mientras, el gas portador pasa a la columna normalmente. En la segunda etapa (fig. b) se gira el mando de la vlvula y el contenido del capilar se intercala en la columna y es arrastrado hacia ella por el gas portador. Los capilares, que son intercambiables, pueden ser desde 0.1 a 50 ml.
Back-flush.
En ciertas muestras se contienen fracciones pesadas que si se dejan fluir a traves de las columnas tardaran a veces horas antes de que eluyeran de la columna al detector o no saldran, perjudicando as la misma. Mientras tanto, el aparato quedara inutil para poder introducir otra muestra. Por tanto, interesa un artificio para poder desalojar de las columnas esas fracciones pesadas con una mayor rapidez.
Este artificio es el Back-flush (flujo inverso) que consiste en invertir el flujo del gas portador en la columna con lo que se desalojan los pesados, saliendo en el sentido inverso. El esquema nos da un ejemplo de back-flush. Supongamos que la vlvula de back-flush est en la posicin de la lnea continua. El gas portador que arrastra la muestra pasa a la columna y los ligeros, tras pasar por la columna pasan a travs de la vlcula al detector. Mientras, los pesados han avanzado poco por la columna. Se gira la vlvula a la posicin marcada con trazos y entonces el gas pa por la direccin de las flechas de trazos recorriendo la columna en sentido inverso por lo que los pesados son desalojados de la columna con mayor rapidez.
Precolumnas.
Hay casos en que las muestras contienen componentes que no interesa que pasen a la columna analtica o que por su carcter qumico pueden daar a los detectores. Ejemplo de ellos pueden ser los gases que contienen sulfhidrco y los que contienen HCl o los petrleos que solo interesa ver los ligeros.
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En estos casos conviene la utilizacin de un sistema de precolumna. Tras el bloque de inyeccin se pone una pequea columna pero de gran poder de retencin, o rellena con algn reactivo que reaccione con el producto que se desea eliminar. Por ejemplo: si el gas contiene SH2 y se quiere eliminar antes de que el resto de la muestra entre a la columna analtica, se pone un pequeo trozo de columna relleno de piedra pomez impregnada en KOH que retenga el sulfhdrico. Si se trata de un petrleo del que solo interesa ver C3, C4, y C5, se pone una precolumna con carbn ligeramente activado, u otro relleno similar en el que quedan retenidos todos los componentes pesados y solo logran pasar la precolumna los ligeros. Cuando la precolumna est ya casi , basta sustituirla por otra nueva sin tener que cambiar la columna analtica.
Hay muestras en las que por poseer componentes de muy variada volatilidad si se trabaja con el cromatgrafo a temperatura isoterma se pueden dar los siguientes casos: 1- Si se trabaja a baja temperatura isoterma, los componentes ligeros eluiran bien del cromatgrafo, quedando picos netos y bien separados, pero los pesados eluiran muy despacio y los picos a medida que transcurre el cromatograma irn siendo cada vez mas aplanados y mas difciles de cuantificar. 2- Si por el contrario la temperatura de la columna es alta, e isoterma, los ligeros eluirn tan rpidamente que se unirn los picos y en muchos casos ser imposible identificarlos. Por el contrario, los picos de los pesados eluirn claros y netos. Por ello, se ide el trabajar con una combinacin de ambos sistemas de programando la temperatura. Para ello, los cromatgrafos pueden estar dotados de sistemas de programacin por el cual se puede comenzar a trabajar a baja temperatura y en cierto momento empezar a elevar la temperatura a velocidad de calentamiento perfectamente determinado. Para ello, el aparato dispone de mandos que pueden fijar el periodo que se desea trabajar en isoterma y la temperatura que se quiere se mantenga durante ese periodo de tiempo. Se dispone as mismo de mandos que regulan la velocidad de calentamiento en el periodo de programacin, velocidad de calentamiento que se regula en C/min.
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Tambin le es posible al cromatgrafo una vez terminado el periodo de tiempo de programacin, mantener la temperatura final alcanzada. Incluso, hay aparatos que pueden utilizar en el inicio de la operacin temperaturas subambiente ( -30 a 20 C) utilizando para ello a la entrada en el horno de columnas de nitrgeno lquido o CO2 lquido, con lo que se puede trabajar con temperaturas inferiores a la ambiente. Trabajar a estas temperaturas favorece la perfecta separacin de los ligeros. Este proceso es muy empleado en la mayoria de los laboratorios. En el nuestro se emplea en dos casos: - Destilacin simulada de muestras lquidas. - Anlisis de etileno. En el caso de la destilacin simulada de petrleos y derivados, se emplean muestras que contienen productos que estn en fase vapor y a temperatura ambiente (C3 y C4) mientras que otros precisan los 300-400 C para vaporizarse. En este caso se usa una programacin de temperatura que se inicia a -30C y se termina a mas de 300 C. En el caos del anlisis de etileno en columnas de gel de slice, los componentes mas ligeros (hidrgeno, metano, CO, etano) eluiran bastante rpido, pero el etileno y sobre todo el propano, propileno y mas pesados tardarn tiempos prohibitivos en eluir y los picos sern mas bien ondulaciones de la lnea base.
Por ello, se establece un programa de elevacin de la temperatura y los picos se podrn lograr limpios, agudos y bien diferenciados, al tiempo que se logra un ahorro considerable de tiempo.
Posibilidad de uso de columnas combinadas.

Supongamos un gas petrolfero que contenga los siguientes gases: H2-O2-N2-CO-CO2 C1) Metano. C2) Etano-Etileno-Acetileno. C3) Propano-Propileno-Metil acetileno-Propadieno. C4) N-butano-I butano-Buteno 1-I buteno-Transbuteno-Cisbuteno-Etil acetileno-Vinil acetileno-Butadieno 1,3-Butadieno 1,2. C5) I pentano-N pentano-etc.
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Y superiores. En una columna clsica para hidrocarburos se podra obtener el siguiente cromatograma:
1- (H2 + O2 + N2 + CH4). 2- (Etano, Etileno). 3- (Propano, CO2) 4- Propileno 5- I-butano. 6- N-butano. 7- Propadieno. 8- Buteno 1 + Isobuteno. 9- Transbuteno. 10- Cisbuteno. 11- Metil Acetileno. 12- Butadieno 1-3. 13- Butadieno 1-2. 14- Iso pentano. 15- Normal pentano. 16- C5 y superiores. Se puede ver que el anlisis quedara incompleto ya que quedara sin conocerse la composicin de los 3 picos inicialesy por tanto no se sabria el porcentaje de: H2, O2, N2, CO, CH4, Etano, Etileno, CO2, Propano. Esto obligara a introducir nueva cantidad de muestra en otros cromatgrafos para separar los picos correspondientes a estos componentes y a recomponer los clculos. Sera necesario inyectar muestra en un cromatgrafo con columna de gel de slice para ver la siguiente separacin: H2. Aire. CO. CH4. Etano. Etileno. Propano. CO2. Y a inyectar otra muestra en un cromatgrafo con columna de tamiz molecular para poder ver oxgeno y nitrgeno. Esto obligara a disponer de curvas de calibrado para cada uno de los componentes. Con ello, la complicacin del anlisis sera grande. No obstante, se puede lograr este anlisis con una sola inyeccin de muestra mediante el uso de un cromatgrafo solo dotado con tres columnas y vlvulas automticas.
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En este aparato, la muestra pasa por la columna clsica y tras eluir los picos mezclados, los pasa a columnas especficas y los retiene en ellas hasta que eluyen de la columna normal los componentes hidrocarbonados. En ese momento, la vlvula automtica hace pasar gas portador a la columna especfica donde se efectua la separacin casi completa de los picos iniciales salvo el constituido por hidrgeno, oxgeno, nitrgeno y metano, que es pasado a la tercera columna de tamiz molecular y una vez salidos los picos normalmente separados en la segunda columna, pone en separacin la tercera columna que logra la separacin total del pico restante.
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