Cromatografía de gases

multidimensional.

Seminario Cromatografía. 12 y13 Diciembre-2005

Frases

Comentario de Mr. O'toole sobre las leyes de

Murphy
“Murphy era un optimista”
Esquema

• ¿Qué es la cromatografía de gases multidimensional? :

• CG multidimensional convencional.
• Nueva “Comprehensive 2D GC”

• ¿En qué consisten ambas opciones?

• Aplicaciones
• Petroquímica
• Aromas & Fragancias
• Medio ambiente
CG multidimensional – ¿Qué es?

• Una porción de compuestos separados en la primera columna (primera

dimensión) es enviada a una segunda columna (segunda dimensión) para
una posterior separación de acuerdo con diferentes principios físicos.
• Características primera columna: Apolar. Separación mediante presión de
vapor o puntos de ebullición.
• Características segunda columna: Polar. Separación por polaridad, afinidad con
la fase estacionaria (coeficiente de reparto).

• Distinguir entre:

- Convencional CG Multidimensional
- “Comprehensive 2D GC”
CG convencional Multi-Dimensional

Cromatografía convencional Cromatograma de la primera columna. Primera dimensión

Fracción a la CG-2D Cromatograma de la primera columna. Primera dimensión

dimensión.
Crom, de la sgda columna. Sgda
CG convencional Multi-Dimensional (Ejemplo)

Separación en dos dimensiones mediante fraccionamiento (CG-CG)

CG convencional Multi-Dimensional

Convencional MDGC símbolo GC-GC

Técnica de fraccionamiento

Solo unas pocas fracciones de la muestra son separadas en la

segunda columna (segunda dimensión)
CG convencional Multi-Dimensional

En la CG
convencional solo
una parte de los
picos son
transferidos a la
segunda columna
para una posterior
sepración.

Habitualmente el sistema de fraccionamiento: Deans switching o válvulas de commutación por presión.

CG convencional Multi-Dimensional
vs. “Comprehensive 2DGC”
Cromatografía convencional

Cromatografía con fraccionamiento 2D

“Comprehensive 2D chromatography”
CG Convencional Multi-Dimensional vs.
“Comprehensive 2DGC”

Convencional MDGC
Técnica de fraccionamiento
símbolo GC-GC
Solo unas pocas fracciones de la muestra son separadas en la segunda
columna (segunda dimensión)

Comprehensive 2D-GC símbolo GCxGC

Técnica de fraccionamiento

La muestra entera es separada en ambas dimensiones

Convencional Multi-Dimensional GC
vs. Comprehensive 2DGC

En la CG
convencional solo
una parte de los
picos son
transferidos a la
segunda columna
para una posterior
sepración.

En la comprehensive
2DGC cada pico es
fraccionado y
totalmente
transferido a la
segunda columna
para una posterior
separación en
segunda dimensión.
Cromatografía GCxGC: Esquema
Enfoque de la muestra
eluida por la primera Fast Detector
Sistema de columna en pulsos de
Velocidad de
≤ 10 ms y
inyección capilar adquisición ≥
re-inyección en la 2da
convencional columna 100 Hz

Columna capilar 2da columna 50

convencional veces mas rápida
que la 1ª columna
CG Comprehensive 2D

Frecuencia de modulación requerida*:

Regla general: 4-5 modulaciones por pico

Tipica anchura de pico (peak widths): 16 seg. de línea base

Frecuencia de modulación: nueva 2nd dim. cada 4 seconds

Requerimientos:
Ultimo pico del n-1 cromatograma eluye antes que el primer pico del n
cromatograma.
De lo contrario tendremos solapación de picos.

* Número de reinyecciones en la segunda columna-dimensión por cada pico de la

primera columna-dimensión
Comprehensive GCxGC: Representación
CG Comprehensive 2D. Características

Ortogonalidad en GCxGC:

“Ausencia de una correlación entre el comportamiento de

retención en las dos dimensiones”.

Primera columna : non-polar,

Separación por puntos de ebullición.

Segunda columna: polar or con selectividad,

Separación por polaridad/selectividad
Ventajas de la técnica“Comprehensive 2D GC “

Enorme poder de separación: Aumento del factor de capacidad (número de

picos capaz de ser separados por el sistema)
Sgda dimension
(Factor de capacidad ~ n1 x n2)
Columna capilar “normal” n = 1100
Sgda columna capilar n = 35
Pra dimensión

CG Convencional Multidimensional
n = 1100 + 1100 = 2200

Comprehensive 2D GC
n GCxGC = 1100 x 35 = 38.000

Nº de platos equivalentes en UNA dimensión (N) =

5.000.000.000
Es decir, L = 12 km, t0 = 10 horas, tr = 1.5 año
Ventajas de la Comprehensive GCxGC vs.
Convencional CG capilar

¾ Gran poder de separación

• Reducida necesidad de
procedimientos de preparación
de muestras.
• Mejor identificación de picos

¾ Mejor sensibilidad
• Enfoque de fracciones en
pulsos muy estrechos.

¾ Cromatogramas estructurados
• Facilidad de análisis por
grupos.
• Utilidad para screening de
muestras.

¾ Compatible con todo tipo de

sistemas de inyección y
manipulación y tratamiento de
muestras.
Comprehensive 2D GC

Selección de columnas
La ortogonalidad demanda columnas con diferentes fases

Columnas No-polares: 100% methyl-siloxane (OV-1; SE30)

5% phenyl methyl siloxane (OV-5; SE54)

Columnas Polares: 50% phenyl methyl siloxane

14% cyanopropyl-phenyl methyl siloxane
polyethylene glycol (carbowax)
Columnas especiales con selectividad deseada

Ejemplos: BPX5/BPX50 de próposito general; Buen comportamiento a

alta temperatura.
Buena para aplicaciones en petroquímica
Comprehensive 2D GC Technique

Cromatogramas estructurados
retention time 2nd column

alkanes cyclo alkanes retention index 1st column

alkenes aromatics
(filled: normal alkyl chain)
CG comprehensive 2D

Cromatogramas estructurados
Sgda dimension Tº retención relativos (s)

Primera dimension tpo retencion (minutes)

TRACE 2DGC Dual Jet Modulador

CO2 jet CO2 jet

Stretched second
dimension column

J.Beens et al., Journal of Chromatography A, 919 (2002) 121-132

Dual jet modulator: CO2 spray
Principios del Modulador Dual de CO2

License from Zoex Corporation on patents related with thermal modulation

Identificación por GCxGC

Identificación
por pico o
grupo
Comprehensive 2D GC: campos posibles de
aplicación.
Petroleum & Food & Flavour &
Environmental
Petrochemistry Food Control Fragrances
• Crude Oil • Fatty Acids in fish • Fresh ginger essential oil • PCBs analysis
• Kerosene • Fatty Acids in vegetable • Ginger sweet essential • PCDDs analysis
• Diesel oils oil • PCDFs analysis
• Jet Fuels • FAMEs in blue mussel • Oregano oil • VOC in air
• Gasoil • FAMEs in green-lip • Peppermint/spearmint oil • Fly ash in air
mussel • Tuna oil
• Heavy Gasoil • Pesticides
• Pesticides in fuit and • Vetiver oil
• Non-aromatic solvent vegetables • Herbicides
• Feed for non-aromatic • Tea tree enantiomers • Oxygenates and
• PCBs in food
solvent • Garlic flavour Aromatics in water
• PCDDs in food
• BTEX • Brunch extract • Pollutants in water
• PCDFs in food
• Olefins
• Oxygenates in Biomedical
Gasoline
Forensic Geochemistry
• Breath analysis • POPs in soil extract
• Oil Spill
• Faecal sterols • Arson accelerants in fire • PAHs in soil extract
• Sulfur Compounds
debris • River sediment
• Biomarkers • Serum analysis
analysis
• Urine analysis
• Cigarette smokes
Petroquímica

• Determinación de compuestos y clases de compuestos en

matrices complejas.
• I.e. Light Cycle Oil
• GC convencional
• Los análisis son diferenciados con respecto a la clase de compuestos (Oxigenados,
Aromáticos,etc..).
• El análisis detallado de hidrocarburos requiere aparatos complejos (Reformulyzer-
PIONA).
• Tiempo de análisis largo (>2h)
• CG Comprehensive 2DGC
• Alta resolución genera alto grado de información.
• Separación dada por clases de compuestos proporciona gran valor añadido.
• Uso de nuevos detectores , por ejemplo FPD, permite mejorar y complementar la
información.
Petroquímica: LCO con CGxCG-FID (1)
Petroquímica: LCO con CGxCG-FID (2)

Cromatograma
original
2D Plot

3D
Cromatograma
Petroquímica: LCO, Compuestos azufrados
con FPD
Petroquímica: Queroseno con FID
Petroquímica:Mezcla de estándares de PAHs
(Splitless gran volumen– GCxGC - FID)
PAH std mix (20 ppb each) in
LVSL: 30µl 1 Naphthalene
2 1-methylnaphthalene
Hexane 19 3 2-methylnaphthalene
17 4 Acenaphthylene
Precolumn: 5 m x 0.32 mm id 15 5 Acenaphthene
18
1D Column: RTX5 30 m x 0.32 mm id 6 Fluorene
2D Column: BPX-50 0.8m x 0.1 mm id 12
13
16
7 Phenanthrene
14 8 Anthracene
Modulation time 4s 11
10 9 Fluoranthene
9 10 Pyrene
7
8 11 Benzo(a)anthracene
4 5 6
12 Chrysene
13 Benzo(b)fluoranthene
1 2 3
14 Benzo(k)fluoranthene
15 Benzo(a)pyrene
16 3-methylcholanthrene
17 Indeno(1,2,3-c,d)pyrene
18 Dibenzo(a,h)anthracene
19 Benzo(g,h,i)perylene

Solvent Peak 3.4 min

Petroquímica: PAHs en gasóleo (LVSL-GCxGC-FID)

Naftaleno Acenafteno
9 ppb 2 ppb
S/N = 140 S/N = 27

Fluoreno
3.2 ppb
S/N = 55

PAHs in Composite Diesel Fuel

Injected 30µL
Petroquímica: PAHs en gasóleo

Repetibilidad del área total

Peak areas (103counts)
Compound
Mean RSD%
1 Naphthalene 976 1.10

6 Fluorene 752 1.40

9 Fluoranthene 739 0.44

10 Pyrene 753 0.49

12 Chrysene 728 0.91

15 Benzo(a)pyrene 661 1.40

19 Benzo(g,h,I)perylene 626 1.59

5 rodajas para Fluoreno
5 inyecciones consecutivas average
RSD% = 1.05
PAH en Composite Diesel Fuel

Cromatograma
reconstruido 1D
 ASTM D2887 Gasóleo de referencia
Condiciones analíticas
Injection mode: 0.4µl Split ratio 400:1
1D cromatograma Column set:
reconstruido 1D: RTX-1 30m x 0.32mm i.d., 0.25µm df
2D: DB-17 0.8m x 0.1mm i.d., 0.2µm df
Oven: 60°C (1 min isotherm) to 310°C
@ 3°C/min
Fast FID Sampling Rate: 200Hz
Modulation Cycle Time: 7s

Separación
de grupos en
la segunda
dimensión de
acuerdo con
la polaridad
Medio ambiente

• Determinacion de contaminantes (baja conc.) en suelos/agua

(matrices complejas) según normas internacionales
• I.e. Análisis de PAH en extracto de suelos y VOCs
• CG capilar convencional
• Normalmente se realiza por CG-EM que no permite una separación completa (la
identificación puede ser ambigua).
• CG Comprehensive 2DGC
• Alto grado de separación también para este tipo de compuestos.
• Mejora de la sensibilidad que puede permitir la detectión de bajas concentraciones.
Medio ambiente: PAHs en extracto de suelos
Medio ambiente: Análisis de VOCs

EPA 502-524 17+18

1 Dim
12+13+14
19+20
4 +21
16 22
5+6+7 11
15 23 24
3 9+10
1+2
1 chlorobenzene 8
2 1,1,1,2-tetrachloroetane
3 ethylbenzene
4 p/m-xylene
5 bromoform
6 styrene
7 o-xylene
8 1,1,2,2-tetrachloroethane
9 1,2,3-tricholoropropane
10 isopropylbenzene
11 bromobenzene
12 2-chlorotoluene
13 n-propylbenzene
14 4-chlorotoluene
15 impurity
16 1,3,5-trimethylbenzene
17 tert-butylbenzene
18 1,2,4-trimethylbenzene
19 1,3-dichlorobenzene
20 sec-butylbenzene
21 1,4-dichlorobenzene
22 p-isopropyltoluene
23 1,2-dichlorobenzene
24 n-butylbenzene
Conclusiones: Ventajas teóricas de la técnica
Comprehensive 2D GC.
• El poder de separación de Comprehensive 2D GC es considerablemente mayor
que la CG capilar convencional.
• La Comprehensive 2D GC ofrece mayor sensibilidad que la CG capilar
convencional debido a la disminución de la anchura de pico.
• La Comprehensive 2D GC separation permite mejor identificación de picos
comparado con la CG capilar convencional dado que la elución del pico está
caracterizado por una pareja de tiempos de retención.
• La Comprehensive 2D GC posee mayor utilidad para screening de muestras que
la CG capilar convencional dado que genera considerablemente mas
información sobre la muestra en un tiempo de análisis similar.
• La Comprehensive 2D GC es compatible con todo tipo de sistema de inyección,
manipulación y tratamiento de muestras disponibles como los usados en la CG
capilar unidimensional.
• La Comprehensive 2D GC reduce la necesidad de procedimientos complejos de
preparación de muestras dado que el poder de separación de la técnica es
considerablemente mayor y permite eliminar interferencias criticas que se
plantean en la CG capilar convencional.