Semana 13,2

CATÁLISIS ENZIMÁTICA

Las enzimas son moléculas de proteínas, que catalizan a la mayoría de las reacciones
químicas que ocurren en los seres vivos. La característica más importante de la catálisis
enzimática es la especificidad de la enzima con respecto a una reacción particular. Por
ejemplo, la ureasa cataliza la hidrólisis de la urea y de ninguna otra reacción.

(NH2)2 CO + H2O CO2 + 2NH3

Ureasa

Por otro lado, la concentración de la enzima en el sistema reactante es muy baja (10-9 moles)
y la velocidad de la reacción se incrementa de 106 a 1018 veces. Una enzima posee uno o más
centros activos, donde se realiza las reacciones con los sustratos. Un centro activo puede
abarcar sólo unos pocos residuos de aminoácido, mientras que el resto de la proteína sirve
para mantener la estructura tridimensional de la red. Muchas enzimas tienen especificidad
estereoquímica, ya que catalizan las reacciones de una configuración, pero no de otra. Por
ejemplo, las enzimas proteolíticas catalizan sólo la hidrólisis de los péptidos formados por
L-aminoácidos. Las enzimas son moléculas muy sensibles a las variaciones del pH de la
solución, en función del pH pueden presentar las siguientes estructuras:

a) Estructura desenrollada, en este caso no presentan propiedades catalíticas porque los

centros activos están muy separados

b) Estructura enrollada. Cuando la molécula esta enrollada, los centros catalíticos están
juntos, la enzima presenta propiedades catalíticas.

De acuerdo a la Unión Bioquímica Internacional las enzimas se clasifican de acuerdo al tipo

de reacción que catalizan.
- Óxido reductasas. Enzimas que catalizan las reacciones de óxido – reducción, o sea,
transferencia de electrones o de átomos de hidrógeno de un sustrato a otro. Por ejemplo
la enzima deshidrogenasa.
- Transferasas. Catalizan la transferencia de un grupo químico específico diferente del
hidrógeno, de un sustrato a otro.
- Liasas. Catalizan las reacciones en las que grupos se unen a los enlaces doble, o también
desprendimiento de grupos que dan origen al enlace doble.
- Hidrolasas. Catalizan las reacciones de hidrólisis.
- Isomerasas. Hacen variar la estructura geométrica de una molécula.
- Ligasas. Catalizan la unión de sustratos mediante la hidrólisis simultánea de nucleótidos
de trifosfatos análogos, tales como el ATP (adenosina trifosfato) o el GTP (guanosin
trifosfato)
Velocidad inicial con respecto al tiempo

En la cinética enzimática se acostumbra medir la velocidad inicial W0 de una reacción

para minimizar las reacciones reversibles y la inhibición de las enzimas por los
productos. Además, la velocidad inicial corresponde a una concentración fija y conocida del
sustrato. Al avanzar el tiempo, la concentración del sustrato siempre disminuye. La gráfica
de la velocidad inicial W0 en función de la concentración inicial del sustrato S 0 se muestra
en la figura adjunta.

W0
Saturación  centros activos ocupados

Wlim.

Wlim./ 2

Km S0
Figura 1. Velocidad inicial W0 versus concentración inicial [S]0

Deducción de la Ecuación de Michaelis-Menten

Para explicar la dependencia entre la velocidad inicial y la concentración inicial del sustrato,
el bioquímico alemán Leonor Michaelis y el bioquímico canadiense Maud Leonora Menten,
en 1913, propusieron el siguiente mecanismo
K1
E+S ES (rápido)
K2
K3
ES E+P (lenta)
Donde ES representa el complejo enzima-sustrato, E es la enzima y S es el sustrato. De
acuerdo al mecanismo propuesto la velocidad de la reacción se define por la etapa lenta, o
sea la descomposición del complejo enzima substrato [ES]
d ES 
W=  = K3 ES  (13,1)
dt
Utilizando el método de las concentraciones estacionarias de Bodenstein para el compuesto
intermedio enzima-sustrato, se tiene
d ES 
= K1 S E - K2 ES - K3 ES = 0 (13,2)
dt
La concentración inicial de la enzima será igual a la concentración E en el tiempo t de la
reacción más la concentración ES, es decir
E0 = E + ES (13,3)
De esta ecuación para la concentración de la enzima E en el tiempo t de la reacción se tiene
E = E0 - ES (13,4)
Sustituyendo esta expresión en (13,2), se obtiene:
K1 S (E0 - ES) – K2 ES - K3 ES = 0
K1 S E0 – K1 S ES - K2 ES - K3 ES = 0 (13,5)
Despejando de esta ecuación la concentración del complejo enzima-sustrato ES, se obtiene:
K 1 S E 0
ES = (13,6)
K 2  K 3  K 1 S 

Sustituyendo esta ecuación en (13,1), para la velocidad de la reacción, se obtiene:

K1 K 3 E 0 S 
W (13,7)
K 2  K 3  K1 S 

Esta es la ecuación de Michaelis. Si se divide el numerador y el denominador de esta ecuación

por la constante de velocidad K1, se obtiene:
K 3 E 0 S 
W (13,8)
K2  K3
 S 
K1

Introduciendo la constante K m  ( K 2  K 3 ) K1 en la ecuación (13,8) se obtiene

 K 3 E 0 S 
W= (13,9)
K m  S 
Donde Km es la constante de Michaelis. Del análisis de esta ecuación se puede deducir los
siguientes casos particulares.
a) Si la concentración del sustrato es menor que la constante de Michaelis, S < Km, se
obtiene:

W
K3
E 0 S  (13,10)
Km
De esta ecuación se deduce que velocidad del proceso catalítico depende linealmente de la
concentración del sustrato. La reacción es de primer orden con respecto a la concentración
del substrato y a la concentración del catalizador.
b) Si la concentración del sustrato es mayor que la concentración del catalizador, S >> Km,
se obtiene:
Wlim  K 3 E 0 (13,11)

Entonces la velocidad de la reacción es de orden cero con respecto al substrato y de

primer orden con respecto al catalizador.
La velocidad de las diferentes reacciones enzimáticas se pueden comparar cuando se alcanza
una concentración saturada del sustrato, es decir, cuando la velocidad de la reacción deja de
ser función de la concentración, o sea cuando S >> Km. Despejando K3 de la ecuación
(13,11) se tiene
Wlim
K3  (13,12)
E 0
La constante K3 recibe la denominación de “número de retorno” o “número de
vueltas”. Esta constante determina el número de moléculas del substrato transformadas en
un centro activo del catalizador.

Ecuación de Michaelis para la velocidad inicial W0

Si consideramos que la concentración del sustrato en la ecuación (13,9) es igual a la
concentración inicial, S = S0, se tiene:
K 3 E 0 S 0
W0 
K m  S 0
Dividiendo el numerador y denominador de esta igualdad por S 0 , se obtiene:
K 3 E 0
W0  (13,13)
Km
1
S 0
Introduciendo la velocidad límite en el numerador Wlim  K 3 E 0 , se tiene:

Wlim
W0  (13,14)
Km
1
S 0
En esta ecuación, cuando S0 = Km se obtiene el siguiente caso particular
K 3 E 0 W
W0 =  lim (13,15)
2 2
De esta ecuación se deduce que cuando la constante de Michaelis, Km, es igual a la
concentración inicial del sustrato, la velocidad inicial es igual a la mitad de la velocidad
límite, lo cual concuerda con los datos experimentales (ver la gráfica de W0 versus [S]0).

Forma lineal de la ecuación de michaelis

Para obtener la forma lineal de la ecuación (13,14) es necesario invertir la ecuación, es decir.
1 K S 0  1 1 1 K 1
 m    m . (13,16)
W0 Wlim W0 Wlim Wlim S 0
Esta es la ecuación de Linewer-Bark, la gráfica de esta se muestra en la figura adjunta.

1/W0


tg =

Wlim

-1/Km
1/S0

Figura 2. Gráfica de la ecuación lineal de Michaelis - Menten

Del intercepto con el eje de la abscisa 1/W0 = 0, se tiene:

1 1 K 1 1 1
0  m    (13,17)
W0 Wlim Wlim S 0 K m S 0

Ejemplo 1. La hidratación de CO2 catalizada por la enzima carbónico-anhidrasa ocurre de acuerdo

a la reacción:

CO2 + H2O HCO 3 + H+

El bicarbonato es transportado por el flujo sanguíneo y se vuelve a convertir en CO2 en los pulmones,
catalizada por la misma enzima. Para la concentración inicial de la enzima [E]0=2,3x10-9 M a la
temperatura de 0,5 0C se han obtenido los siguientes datos experimentales:

W0 x10 5 (mol / s) 2.78 5.00 8.33 16.7

CO2 0 x103 mM 1.25 2.5 5.0 20.0

Utilizando la ecuación de Lineweaver- Burk, calcular Wlim y Km.

1 1 K 1
Solución:   m y  a  bx
W0 Wlim Wlim S 0

1
800 400 200 50
S 0
1
35871,22 20000 12004.8 5988.02
W0

a  4027.07 b  39.83 r  0.999

1
 4027.07  Wlim  2.48 x10 4 mol / s
Wlim

Km
Wlim
 
 39.83  K m  39.83 2.48 x10 4  98.79 x10 4 s 1