INSTITUTO TECNICO SUPERIOR “SAN FRANCISCO”

NOMBRE Y APELLIDO
DEL ALUMNO
CARRERA Laboratorio Clínico
CURSO Segundo
SEMESTRE Tercer
MATERIA Inmunología
FECHA 15/10/2021
DOCENTE Dra Lucía Ortega
COHORTE 2020 - 2022
1. CONTENIDO – PRUEBAS DIAGNÓSTICAS DE LABORATORIO DE
COVID-19
1.1- INTRODUCCIÓN
1.2- TRANSCRIPCIÓN INVERSA Y REACCIÓN EN CADENA DE LA
POLIMERASA (RT-PCR)
1.3- FLUJO LATERAL / INMUNOCROMATOGRAFÍA COLOIDAL
1.4- INMUNOENSAYOS TIPO ELISA
1.5- CONCLUSIONES

2. EJERCITARIO.
2.1- Explica
2.1.1- Que significa un resultado positivo y negativo de la prueba de RT-PCR
2.1.2- Interpretación de los resultados de los inmunoensayos de flujo lateral
2.1.3- Interpretación de los resultados del ELISA

2.2- Responde correctamente

2.2.1- ¿Que es la COVID-19?

2.2.2- ¿Cuánto tiempo transcurre entre la exposición a la COVID-19 y el desarrollo

de síntomas?

2.2.3- ¿Cuánto tiempo sobrevive el virus en las superficies?

2.2.4- ¿Qué detecta la RT-PCR y como lo hace?

2.2.5- ¿La prueba RT-PCR puede detectar si una persona ha tenido el virus y
superó la enfermedad COVID-19?
2.2.6- ¿A las pruebas de flujo lateral como también se lo llama y que detecta?
2.2.7- ¿ Cual es la diferencia entre los test rápidos y la técnica de RT-PCR?

2.2.8- ¿Cómo funcionan los inmunoensayos de flujo lateral?

2.2.9- ¿Qué detecta el ELISA?

2.3- Cita
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2.3.1- Pruebas diagnósticas de laboratorio para COVID-19

a-
b-
c-
2.3.2- Limitaciones de la prueba RT-PCR
a-
b-
c-

2.4- Completa el siguiente cuadro.

Tecnología Molécula Requisito Tiempo Tipo de Número Ventaja Desventajas

testada s necesario muestr de s
hasta a muestras
obtener analizadas
resultados por lote
RT-PCR

Flujo Lateral

ELISA

3. BIBLIOGRAFIA.
3.1- Manual de Procedimiento de COVID-19. MSP y BS

INTRODUCCIÓN
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¿Qué es un coronavirus?

Los coronavirus son una extensa familia de virus que pueden causar enfermedades tanto en
animales como en humanos. En los humanos, se sabe que varios coronavirus causan
infecciones respiratorias que pueden ir desde el resfriado común hasta enfermedades más
graves como el síndrome respiratorio de Oriente Medio (MERS) y el síndrome respiratorio
agudo severo (SRAS). El coronavirus que se ha descubierto más recientemente causa la
enfermedad por coronavirus COVID-19.

¿Qué es la COVID-19?

La COVID-19 es la enfermedad infecciosa causada por el coronavirus que se ha descubierto

más recientemente. Tanto este nuevo virus como la enfermedad que provoca eran
desconocidos antes de que estallara el brote en Wuhan (China) en diciembre de 2019.
Actualmente la COVID-19 es una pandemia que afecta a muchos países de todo el mundo

¿Cuánto tiempo transcurre entre la exposición a la COVID-19 y el

desarrollo de síntomas?

El tiempo que transcurre entre la exposición a la COVID-19 y el momento en que comienzan

los síntomas suele ser de alrededor de cinco o seis días, pero puede variar entre 1 y 14 días.

¿Cuánto tiempo sobrevive el virus en las superficies?

Lo más importante que hay que saber sobre el contacto del coronavirus con superficies es que
estas se pueden limpiar fácilmente con desinfectantes domésticos comunes que matarán el
virus. Diversos estudios han demostrado que el virus de la COVID-19 puede sobrevivir hasta
72 horas en superficies de plástico y acero inoxidable, menos de 4 horas en superficies de
cobre y menos de 24 horas en superficies de cartón.
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Se está desarrollando una gama de técnicas moleculares que van desde pruebas de
laboratorio para el diagnóstico y el manejo de pacientes con COVID-19. Estas técnicas,
aunque son bien conocidas por investigadores y médicos, así como los ensayos de
anticuerpos y antígenos, pueden ser relativamente desconocidas para la comunidad en
general. Esta unidad tiene como objetivo describir y explicar los principios básicos de las
principales pruebas de diagnóstico de COVID-19 actualmente en uso.

1- TRANSCRIPCIÓN INVERSA Y REACCIÓN EN CADENA DE LA

POLIMERASA (RT-PCR)
La PCR es una técnica muy común que se ha sido (y es) utilizada en investigación y
diagnóstico durante los últimos 30 años para detectar información genética. La RT-PCR es
una versión de esta técnica para  detectar la presencia de ARN. Actualmente, esta técnica se
está utilizando como prueba para detectar  la presencia del virus SARS-CoV-2. Este tipo de
prueba se ha utilizado con frecuencia como prueba de primera línea para COVID-19, ya que
prueba directamente la presencia del ARN del virus.
Las pruebas de RT-PCR son bastante rápidas, sensibles y confiables, capaces de producir
resultados en 3-4 horas, aunque esto generalmente toma más tiempo si las muestras deben
enviarse primero a laboratorios externos especializados (6-8 horas en promedio).. Algunas
pruebas de RT-PCR se desarrollan como un kit “todo en uno”, lo que reduce la manipulación
en el laboratorio y el potencial de contaminación.

¿Cómo funciona?
Una vez que se recoge la muestra, se deben eliminar proteínas y otras moléculas, aislando
tan sólo el ARN. Esta será una mezcla del material genético de una persona, así como
cualquier ARN viral que pueda estar presente.

Las enzimas del kit transcriben el ARN en el ADN, que se amplifica para permitir la detección
de virus mediante el uso de un termociclador que genera un programa de temperaturas
para producir aproximadamente 35 mil millones de copias de ADN viral para cada cadena
de ARN viral que estuvo originalmente presente.

Se utilizan marcadores fluorescentes que son capaces de unirse al ADN amplificado y

producir luz, que la máquina puede leer para producir el resultado de la prueba. Si la
intensidad de la luz producida alcanza un cierto umbral, esta se clasifica con un
resultado positivo. Se registra el número de ciclos de temperatura de PCR que se requerían
antes de alcanzar el umbral de fluorescencia y proporciona una estimación de la cantidad
de virus presente en la muestra del paciente.
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En primer lugar, el ADN viral se calienta a 94ºC, separando las dos hebras del ADN. Acto
seguido, la reacción se enfría a 55ºC, Este hecho, permite que pequeñas porciones de ADN
complementario (primers o cebadores) se unan al ADN viral. Finalmente, se eleva la
temperatura a 72ºC para que la Taq polimerasa pueda elongar cada una de estas hebras de
ADN. Y de esta manera, se inicia un nuevo ciclo de PCR.

¿Qué detecta el test de RT-PCR?

La RT-PCR detecta si el ARN viral está presente o no en las muestras de un paciente. Lo hace
amplificando regiones del material genético del virus, generalmente la proteína Spike,
la proteína N o la envoltura del virus. El resultado de la RT-PCR indica el número de ciclos
necesario para detectar un umbral de detección del ADN, de tal forma que a más virus
presente en la muestra, menor número de ciclos necesarios para obtener la señal.
Comúnmente, estas muestras se toman de la nariz o la garganta usando hisopos
largos o cortos.

¿Qué significa el resultado obtenido?

Una prueba de RT-PCR es altamente sensible y su resultado aporta información sobre si el
virus está presente en el paciente.

Resultado positivo de la prueba: – Un resultado positivo de la PCR significa que la persona

de la que se tomó la muestra está actualmente infectada por el virus.

Resultado negativo de la prueba: – Un resultado negativo de PCR podría significar que: la

persona no está infectada actualmente por este virus, o que el virus no está presente en
el lugar donde se tomó la muestra, también un falso negativo podría ser fruto de
una muestra de baja calidad o que es demasiado pronto o demasiado tarde en la
infección para detectar la replicación del virus. Esta es la razón por la cual los resultados
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negativos de la prueba requieren que se tomen nuevas muestras de pacientes unos días
después para reducir la posibilidad de extrañar incorrectamente a una persona infectada.

La prueba RT-PCR no puede detectar si una persona ha tenido el virus y superó la

enfermedad COVID-19,  ya que solo detecta cuando hay virus activo.

Ventajas y Limitaciones
Ventajas:

 – RT-PCR es una técnica robusta.

 – Dado que la RT-PCR es tan común en los laboratorios, la tecnología ya está en
funcionamiento para detectar la presencia del virus.
 – RT-PCR puede detectar infecciones en curso, lo que permite al personal médico determinar
quién está infectado actualmente y quién no.

Limitaciones:

 – RT-PCR se basa en  la detección del virus, por lo que a efectos de recuento, es posible pasar
por alto aquellos pacientes que han eliminado el virus y se han recuperado de la enfermedad.
 – La distribución del virus a través del tracto respiratorio varía entre los pacientes, por lo que
incluso si una persona está infectada, el virus a veces es solo detectable en el esputo o en el
hisopo nasofaríngeo, pero no necesariamente en ambos lugares al mismo tiempo.
 – La RT-PCR para COVID-19 solo puede determinar si una persona está actualmente infectada
con este coronavirus en particular. No puede proporcionar información sobre otras
enfermedades o síntomas.

2- FLUJO LATERAL / INMUNOCROMATOGRAFÍA COLOIDAL

Los ensayos de flujo lateral inmunocromatográfico se han denominado comúnmente “Test

rápidos” en los medios de comunicación, ya que actualmente se utilizan para detectar
anticuerpos contra la enfermedad en la sangre de un paciente. Las pruebas de flujo lateral
pueden detectar anticuerpos contra el virus en la sangre del paciente, lo que indica que el
paciente tiene COVID-19 o se ha recuperado de COVID-19.
Las pruebas de flujo lateral de anticuerpos para SARS-CoV-2 deben ser prescritas y
utilizadas por un personal sanitario. Requieren una gota de sangre del paciente,
normalmente procedente de  un pinchazo en un dedo, similar a las pruebas para controlar
el azúcar en la sangre en ciertos tipos de diabetes. Estos tests funcionan de manera muy
diferente a la técnica de RT-PCR y se centran en detectar la respuesta inmunológica del
paciente al virus en lugar de detectar el virus en sí.
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¿Cómo funciona?
Los inmunoensayos de flujo lateral son dispositivos simples que pueden detectar
anticuerpos en la sangre. Personal sanitario toma una pequeña muestra de sangre del
paciente y la deja caer sobre una esponja dentro del dispositivo. A continuación, se agregan
unas gotas de  tampón que ayudan a que la muestra de sangre fluya a través del
dispositivo. A medida que la muestra se mueve a través del dispositivo, los anticuerpos
contra el SARS-CoV-2 que están presentes en la muestra se capturarán los anticuerpos en
las líneas de prueba y control. Este proceso de captura y unión produce un cambio de color
a lo largo de las líneas de prueba y control que puede verse a simple vista, produciendo una,
dos o tres líneas dependiendo del tipo de anticuerpos presentes (IgM o IgG).

¿Qué detecta el test de flujo lateral?

Los inmunoensayos de flujo lateral para SARS-CoV-2 detectan dos tipos de anticuerpos
protectores que son producidos por el cuerpo cuando el sistema inmunitario. Estos
anticuerpos ayudan a combatir la enfermedad y permanecen en la sangre durante meses
después de que el virus y la enfermedad se eliminan. La presencia de anticuerpos en el
cuerpo a menudo se denomina inmunidad o que una persona es inmune a un virus, ya que
estos anticuerpos protegen contra la reinfección y el retorno de la misma enfermedad.

Cuando estamos infectados por un virus, nuestro sistema inmunitario produce anticuerpos
tempranos del tipo IgM con una unión de fuerza intermedia al virus, que pueden comenzar
a trabajar para eliminar el virus aproximadamente 5 días después de una nueva infección.
Por lo general, de 8 a 10 días después de la infección, los anticuerpos IgG con alta fuerza de
unión pueden ayudar a eliminar el virus más rápidamente. Los inmunoensayos de flujo
lateral de anticuerpos pueden diseñarse para detectar IgM o IgG solos o ambos juntos.

¿Qué significa el resultado obtenido?

Los inmunoensayos de flujo lateral de anticuerpos detectan anticuerpos contra el virus en la
sangre. No detectan el virus en sí. Las pruebas de anticuerpos proporcionan una
capacidad enormemente importante para detectar infecciones pasadas con virus para
identificar a las personas que fueron asintomáticas, las personas que eliminaron el virus y,
por lo tanto, que ya no corren el riesgo de infectarse o transmitir el virus a otras personas.
Además, las pruebas de anticuerpos son críticas para evaluar la propagación del virus a la
población y el nivel de inmunidad del “rebaño” en la población. Esto es importante para
comprender las posibles consecuencias de levantar o aplicar medidas para controlar el
virus, como la cuarentena, el distanciamiento social, el cierre de escuelas y los lugares de
trabajo.
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Las pruebas de inmunoensayo de flujo lateral para evaluar la presencia de anticuerpos IgG
e IgM son muy simples de interpretar: Debe aparecer una línea de control para mostrar que
el ensayo ha funcionado correctamente. Otros resultados que pueden aparecer son alguno
de los tipos de anticuerpos se encuentra en la muestra. La aparición de líneas para IgG o
IgM, o ambas, indica una muestra positiva y por lo tanto, que el paciente ha sido infectado
con el coronavirus COVID-19.

Ventajas y Limitaciones
Ventajas:

 – Los ensayos de flujo lateral son extremadamente rápidos, aportan resultados en solo 15

minutos.
 – Permiten el muestreo no invasivo para detectar la presencia del virus.

Limitaciones:

 – La precisión en el diagnóstico de coronavirus es limitada.

 – Hasta ahora, los kits de flujo lateral disponibles solo pueden determinar si un paciente ha
sido infectado en algún momento con COVID-19. Se necesitarían más pruebas para verificar si
un paciente está actualmente infectado.

3- INMUNOENSAYOS TIPO ELISA

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Un ELISA es una técnica común que se puede utilizar para detectar antígenos o anticuerpos.
Los ensayos ELISA utilizan enzimas unidas a anticuerpos que causan un cambio de color que
puede ser cuantificado. La fuerza del cambio de color es proporcional al número de
anticuerpos presentes en la muestra. Los ELISA permiten realizar hasta 96 ensayos
completados al mismo tiempo, lo que permite disponer de un método económico y efectivo
para analizar lotes de con muchas muestras al mismo tiempo. Esta tecnología podría ayudar
a acelerar el número de pacientes que se pueden analizar para el SARS-CoV-2.

¿Como funciona?
Un ELISA detecta anticuerpos producidos en la sangre del paciente debido a la infección con
SARS-CoV-2. Todo el experimento se puede realizar en un pocillo e implica mezclar
muestras de pacientes, anticuerpos, antígenos y enzimas junto con un sustrato que al ser
metabolizado se convierte en un producto que cambia de color. Veamos el siguiente
diagrama:

1. Una muestra de plasma del paciente se añade al pocillo que contiene el antígeno específico de
SARS-CoV-2.
2. Los anticuerpos presentes (o no)  contra el SARS-CoV-2 en el plasma del paciente se unen a los
antígenos dispuestos en la base del pocillo, el resto de los elementos presenten en la muestra
del plasma son eliminados mediante lavados.
3. Se añaden anticuerpos secundarios unidos con enzimas se unen a los anticuerpos del
paciente. El exceso de anticuerpo no unido al anticuerpo del paciente es eliminado mediante
lavados.
4. Se añade el sustrato que es reconocido por las enzimas que están unidas al anticuerpo
secundario.
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5. En los pocillos que se encuentran los anticuerpos contra SARS-CoV-2 empiezan a cambiar de
color.
6. El producto formado es capaz de ser determinado objetivamente con un lector de placas.
7. Si el paciente no fue infectado con COVID-19, todo el proceso no puede ser llevado a cabo, de
tal forma que no se forma un cambio de color en el pocillo.

¿Qué detecta el test de ELISA?

Los kits de ELISA para detectar anticuerpos están detectando la respuesta de los
anticuerpos a la infección por COVID-19. La detección de anticuerpos contra el SARS-CoV-2
podría decirle a un especialista clínico si un paciente ha sido infectado con COVID-19, ya sea
actualmente o en el pasado. Sin embargo, los pacientes infectados no serán detectados
inmediatamente después de la infección, sino solo cuando el sistema inmune al virus pueda
detectarse en la sangre, aproximadamente 5 días después de la infección. El conocimiento
actual sugiere que una vez que una persona ha sido infectada con el virus, su sistema
inmunológico evitará una futura infección con el mismo virus.
El kit de ELISA para la presencia de anticuerpos proporciona información muy importante
para el diagnóstico, el manejo y la recuperación de COVID-19 y también ayuda a los
investigadores a evaluar cuántas personas de la población han sido infectadas, lo cual es
importante para planificar el control de infecciones.

¿Qué significa el resultado obtenido?

Un kit de ELISA muestra un resultado positivo (cambio de color del pocillo) si el paciente
tiene anticuerpos contra SARS-CoV-2. Esto podría no significar que actualmente tienen el
virus, solo que lo han tenido en algún momento. Esto se debe a que los anticuerpos
permanecen en la sangre incluso después de que la infección desaparezca. Un resultado
negativo significaría que el paciente no ha sido infectado con COVID-19 y puede no tener
inmunidad contra él.

Ventajas y Limitaciones
Ventajas:

 – Los ELISA es una técnica de laboratorio simple y barata.

 – Los ELISA son ensayos bien establecidos y documentados dentro de la comunidad científica
y médica.
 – Los resultados generalmente pueden ser generados de 1 a 3 horas de la recogida de la
muestra del paciente.
 – Los kits de ELISA permiten evaluar a muchos pacientes a la vez.

Limitaciones:

 – No pueden ser realizados in situ, las muestras deben recogerse, ser procesadas y analizadas
en un laboratorio.
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CONCLUSIONES
 – Se están utilizando o desarrollando tres tipos principales de pruebas para detectar el SARS-CoV-2.
 – Estas pruebas diagnósticas se encuentran en diferentes etapas de desarrollo, validación y producción.
 – Cada tipo de ensayo tiene sus propias ventajas y desventajas inherentes a la tecnología subyacente.
 – Una combinación de tipos de prueba utilizados en diferentes momentos puede ser útil para el manejo del paciente y el control de la pandemia de la
población.

Tecnología Molécula testada Requisitos Tiempo necesario Tipo de muestra Número de

hasta obtener muestras
resultados analizadas por
lote

RT-PCR ARN viral Laboratorio 3-4 horas hisopo Hasta 96 muestras

nasofaríngeo o
esputo

Flujo Lateral Anticuerpos IgG y Punto de asistencia 15-20 minutos Sangre 1 muestra por
IgM contra SARS- ensayo
CoV-2

ELISA Anticuerpos IgG y Laboratorio 1-3 horas Sangre Hasta 96 ensayos

IgM contra SARS-
CoV-2