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TUBERCULOSIS NUEVOS METODOS DIAGNSTICOS

CLINICA DE TUBERCULOSIS HOSPITAL GENERAL DE MEXICO OD. DRA. MA. ERNESTINA RAMREZ CASANOVA DRA. LAURA ESCOBEDO J.

TUBERCULOSIS Tcnicas diagnsticas


Convencionales: Cuadro clnico Antecedente epidemiolgico Hallazgos radiolgicos PPD Ziehl Neelsen Cultivo d Lowestein Jensen Estudio histopatolgico Nuevas: BAAR auramina Cultivos lquido
Dubos, Middlebrook 7H9, Bactec 12B y Bactec 13A, MGIT, etc.

tuberculosis MT2

PCR(reaccin en cadena de la polimerasa) Tets directo de M Serolgicas , ADA

Mtodos diagnsticos en Tuberculosis


Mtodo Carga Bacilar Sensibilidad

BAAR

5,000-10,000

50-80 %

Cultivo L-J PCR

1-10 1-10

80-90 % 97 %

Nuevas Tcnicas en el Dx. de la TB en la baciloscopia


- TINCION CON FLUOROCROMOS /AURAMINA- Se basa en el mismo principio de la cido-alcohol resistencia

- VENTAJAS:
- Los BK se ven fluorescentes --> M. menos aumentos (200-400)
- Menor tiempo de observacin (2-3 minutos para BK-)

- INCONVENIENTES:
- Equipo tcnico y materiales ms costosos y complejos
- Necesidad de un aporte elctrico continuo. - La tincin Z-N debe confirmar. Observa mejor los BK

Aunque es igual de eficaz que Z-N, slo est indicada en laboratorios que procesan + de 25-30 BK por tcnico

BACTEC 460 TB

tuberculosa

1979 Meddlebrook y Siddiqi Mide el indice de crecimiento M

Lquidos Middlebrook Bactec 7H12B Ac. Palmitico marcado con C14 se capta y se transforma en una camara de iones leida por sensor Sensibilidad antimicrobiana(HRSE) Resultado a los 8-15 das

LIMITACIONES Costos elevados Utilizacin isotopos radiactivos Procesar un gran nmero de muestras Equipo semiautomatizado que requiere de personal especializado Debe ser utilizado en laboratorios de 3 nivel

Tubo indicador de crecimiento bacteriano MGIT


Tecnica Lquidos Middlebrook 7H9, Halo de fluorescencia sensible al oxigeno Lectura: Complejo metlico que en presencia O2 emite luz ultravioleta Resultado 2 a 3 horas Ventaja Ventajas
Reduce contaminacin cruzada 2. No emplea agujas para inoculacin 3. No Istopos radiactivos 4. Es mas econmico Desventajas 1. Altos rangos de contaminacin 2. Falsos positivos 3. Deteccin en 24 hs
1.

Tubo indicador de crecimiento bacteriano MGIT

Nuevas Tcnicas en el Dx de la TB Cultivos Lquidos Automatizados No Radiomtricos


MBBACT Organon Technica
BACTEC MGIT Becton - Dickinson
ESP II Difco

Caractersticas comunes:
No invasivos No radioistopos Totalmente automatizados. Lectura continua Identificacin y antibiograma de M. tuberculosis sin necesidad de hacer subcultivos. - Sensibles y rpidos. - Muy costoso

Indicaciones del cultivo para diagnstico


Sintomtico respiratorio (sospechoso de tuberculosis pulmonar) reiteradas baciloscopas negativas ( 2 series) Sospecha de TB extrapulmonar (paucibacilares) Sospecha de TB en nio Sospecha de TB-SIDA Sospecha de TB renal o genitourinaria

Otras
Tipificacin Confirmacin de fracaso Susceptibilidad a antuberculosos

Cuando Incorporar Nuevas Tcnicas Diagnsticas

Tb extrapulmonar Tb SIDA Pobre carga bacilar Priorizar el uso de acuerdo a los factores de riesgo

PCR (Reaccin en cadena de la


polimerasa)

Detecta y amplia una secuencia genmica DNA o RNA (Gen.probe MTD o AMPLICOR, otros) Permite identificar al Complejo M. tuberculosis en secuencia IS6110 de otras micobacterias ( MNT) Gran sensibilidad puede detectar muestras con carga bacilar baja (1-10 bacilos) Especfica ya que reconoce gnero y especie en unas cuantas horas En muestras de esputo y liq pleural sensibilidad del 90100%

Inconveniente problemas de contaminacin ambiental con fragmentos libres de DNA o RNA (falsos positivos)

Costos elevados Laboratorio especializado Personal capacitado

Pruebas diagnosticas rapidas en Tuberculosis. ?Cual es su uso apropiado? American Riv.

GENMA DE LATUBERCULOSIS

LECTURA DE PCR

PCR para diagnstico


Complejo M. tb. secuencia de insercin IS6110. Los fragmentos de 123pb Especie M. tuberculosis iniciadores para la secuencia mtp40. Los fragmentos de 358pb

123pb

358pb

Tcnicas de Amplificacin Gentica


Resultados

- TB Pulmonar BK+:
Sensibilidad y Especificidad > 98%, tanto ADN como ARN

- TB Pulmonar BK-:
ARN: ADN: Sensibilidad: 83-85% (aumentan 2-3.000 la diana de amplif. Respecto a ADN) Sensibilidad: 50-60% (Su diana est presente en pocas copias en el genoma Micobacteria.

- TB Extra-Pulmonar:
ARN: ADN: Sensibilidad: 65-77% (aumentan 2-3.000 la diana de amplif. Respecto a ADN) Sensibilidad:
PCR: <30-40% (no son eficazmente eliminadas subst. Inhibidoras de l muestra) LCR: 71-78% (S consigue eliminar eficazmente las subst. inhibidoras)

Nuevas Tcnicas en el Dx. de la TB

Nuevas Tcnicas de Identificacin de Micobacterias


1.- Cromatografa 2.- Identificacin por Sondas Genticas 3.-Otras Tcnicas Moleculares

Identificacin por PCR-RFLP

Digestiones con BstEII y HaeIII de productos de PCR del gene de la protena hsp65 de aislados de M. tuberculosis y M. intracellulare.

TETS DIRECTO DE M. tuberculosis

MT2

El bcilo es identificado por hibridacin molecular en sondas de DNA marcadas con ester acrinidina y RNA ribosomal Resultado 2 a 3 hrs. En muestras repiratorias:

Sensibilidad 94.7% Especificidad 100%

Journal of. Clinical Microbiology 1996 Pag.834-841 JAMA feb2 20 02 VOL283pag 639-645

LUMINOMETRO

PRUEBA DE MT2

Identificacin por HPLC

M. terrae

M intracellulare

M. tuberculosis

CONCLUSIONES

Las pruebas moleculares pueden ser un apoyo importante en el diagnstico de la tuberculosis. En la clnica, la PCR es una herramienta, valiosa pero no definitiva para el diagnstico. Desde el punto de vista epidemiolgico, la informacin que las pruebas moleculares aportan es nica e invaluable. En otros aspectos identificacin de aislados y deteccin de resistencia, se requieren mas estudios. Todava existen problemas para que las pruebas moleculares puedan usarse a nivel general.

Nuevas tcnicas en el Dx deTb Pruebas serologicas


Mtodo

1889 primer intento Deben detectar el 90 % de los casoc Z-N +


ELISA : estracto soluble de cepa danesa Absorcin en placa de microtitulaciones y se adiciona el suero problema Sensibilidad depende de la tecnica ELISA Especificidad depende de la naturaleza protica o lipidica

Utilidad diagnstica
Sensibilidad 1. TBP+ 2. TBP 3. EXTRAPULMONAR 4. TB SEROSA 5. TB INFANTIL Especificidad 1. TB Residual 2. Micobacteriosis 3. Infectados TB 4. Sanos % 65-85 <50 <25-40 <20 <20 >50 >30 >10 >10

Muevas tcnicas en el Dx. TB Pruebas Qumica ADA (adenosin deaminasa)


Enzima que proviene del catabolismo de las purinas del tejido linfoide Metodo colorimtrico de determinacin indirecta por formacin de indofenol (azul intenso) LIQUIDOS SEROSOS Pleural >70 U/L sensiibilidad y especificidad del 95% Peritoneal rango de 72 a 128 U/L sensibilidad y especificidad del 99% LCR > 1 U/L sensibilidad y especificidad 99.5% Pericardico ? Costo bajo

Enf.Infec.Microbiol.Clin.Vol.7 N1 p. 50-56 1989

Nuevas tcnicas en el Dx de TB en la actualidad


Son pruebas para pases ricos La Tuberculosis aun es una patologa de la pobreza El Z/N y el Cultivo L-J siguen siendo las estandares de oro en Mxico Los nuevos mtodos deben considerarse como accesorios y no sustituir a los convencionales

DIAGNSTICO TUBERCULOSIS Prueba ideal rpida en el futuro

Con Sensibilidad y espeficidad altas con referencia al cultivo estandar de oro 98% Costo de la prueba debe ser barata y fcil de llevar al cabo Que permita la deteccin de Complejo M Tuberculosis en esputo La diferenciacin entre bacterias vivas o muertas Pruebas de deteccin/identificacin de M tuberculosis

Susceptibilidad del aislado a los agentes antituberculosos (HR)

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