EVALUACIÒN DE EFECTIVIDAD

BIOLÒGICA DE MICROORGANISMOS
BENÈFICOS VS. RALSTONIA
SOLANACEARUM

EVALUACIÒN DE EFECTIVIDAD BIOLÒGICA DE MICROORGANISMOS

BENÈFICOS VS. RALSTONIA SOLANACEARUM

Responsable de Estudio: Laboratorio de Microbiología, Innovak Global.

Fecha de Reporte: 15 de noviembre del 2018

CONTENIDO

• Datos de la muestra
• Objetivos
• Resultados
• Referencias
• Anexos

DATOS DE LA MUESTRA

Identificación de Muestras: Muestra de tejido de banano infectado con Ralstonia solanacearum agente causal
del Moko bacteriano.

OBJETIVOS

• Aislar e identificar cepas de Ralstonia solanacearum de muestras de tejido de banano provenientes de

las regiones productoras en México.
• Evaluar la efectividad antagónica in vitro de las cepas Innovak contra Ralstonia solanacearum.

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RESULTADOS

Aislamiento y Caracterización de Ralstonia solanacearum

A partir de las muestras de tejido infectado se logró el aislamiento de una cepa. Una vez realizada la prueba de
identificación inmunológica y las pruebas bioquímicas, así como la caracterización macro y microscópica de la
cepa aislada fue posible deducir que el tejido de cormo se encontraba infectado con R. solanacearum. La
marchitez bacteriana/moko bacteriano causado por Ralstonia solanacearum es una patología en plantas
responsable de importantes afectaciones en diversos cultivos de interés económico (Naranjo, 2013).

Los síntomas incluyen el amarillamiento, flacidez, marchitez y adhesión foliar, el fruto presenta pudrición seca de
la pulpa, los tejidos vasculares se tornan necróticos y se observa puntos oscuros a causa de la infección sistémica
(Obrador, 2017). De acuerdo con la literatura reportada para R. solanacearum es un cocobacilo Gram negativo.
Las dimensiones de la bacteria van de 0.5 a 0.7 micras por 1.5 a 2.5 micras, con presencia de uno o cuatro
flagelos móviles, de acuerdo con la cepa y edad del cultivo infectado (Martínez, 2016).

Tabla 1. Descripción de cepa aislada a partir de muestras de tejido infectado.

Id Grupo Funcional Morfología Macroscópica

Bacteria aerobia estricta Formación de colonias con coloraciones blanco-marfil, de

1
Gram-negativo aspecto mucoide, de forma irregular y lisas.

Pruebas Antagónicas contra Ralstonia Solanacearum

Las cepas con posibles propiedades antagónicas fueron evaluadas mediante ensayos para determinar el
potencial antagónico y/o control contra el fitopatógeno.

Variables:

Diámetro de crecimiento (cm)

Porcentaje de inhibición de desarrollo (%)

Metodología:
Se realizaron enfrentamientos directos entre los microorganismos con potencial antagónico y la bacteria
fitopatógena.

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1. Se sembró el hongo benéfico (Trichoderma viride) en un extremo de la caja Petri con un disco de 5 mm
de diámetro, después de 72 horas de incubación se colocó un estriado correspondiente a la bacteria
fitopatógena. Transcurridos 8 días se incubación se llevó a cabo la evaluación de los resultados.
2. Para los enfrentamientos entre las bacterias benéficas y R. solanacearum se utilizó la técnica de siembra
por estriado. Bacillus subtilis y la bacteria fitopatógena se sembraron al mismo tiempo y se incubaron por
3 días; en el caso de Streptomyces lydicus se sembró primeramente la bacteria benéfica y después de 5
días de incubación se realizó el estriado de R. solanacearum; posteriormente las cajas fueron incubadas
por 7 días.
3. Para los tres microorganismos benéficos se realizó la técnica de enfrentamiento por herradura; para ello
se sembró la bacteria fitopatógena en el centro de la caja Petri con un disco de 5 mm de diámetro y se
sembró el microorganismo benéfico alrededor del disco en forma de herradura. Se respetaron los tiempos
de incubación para cada microorganismo antes de realizar la evaluación de los resultados.

Simultáneamente se corrieron controles de los microorganismos implicados. El porcentaje de inhibición del

desarrollo se determinó a partir del diámetro de la colonia control y de la colonia incubada junto con el benéfico.
Se calculó el % Inhibición con la fórmula que se indica a continuación:

𝐷𝑖á𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜 𝑃𝑙𝑎𝑐𝑎 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 − 𝐷𝑖á𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜 𝑇𝑟𝑎𝑡𝑎𝑑𝑜

% 𝑰𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒄𝒊ó𝒏: ∗ 100
𝐷𝑖á𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜 𝑃𝑙𝑎𝑐𝑎 𝐶𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙

Tabla 2. Inhibición de crecimiento de Ralstonia solanacearum (cm) por el efecto antagónico de distintos
microorganismos después del periodo de incubación a 28°C en la técnica de enfrentamiento por herradura (ver
anexo 2).

Tratamiento Descripción Porcentaje de

Inhibición (%)
Control Bacteria Fitopatógena Ralstonia 0
solanacearum
Streptomyces lydicus (Innovak) Antagónico vs. Ralstonia 82.5
solanacearum
Bacillus subtilis (Innovak) Antagónico vs. Ralstonia 83.75
solanacearum
Trichoderma viride (Innovak) Antagónico vs. Ralstonia 86.25
solanacearum

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REFERENCIAS

Martínez, B. L. (2016). MOKO DEL PLÁTANO. SERVICIO NACIONAL DE SANIDAD, CALIDAD E INOCUIDAD
AGROALIMENTARIA, Disponible en:

http://www.cesaveson.com/files/docs/campanas/vigilancia/fichas2016/mokoplatano.pdf.

Naranjo, F. E. (2013). Advances in the diagnosis of bacteriol wilt (Ralstonia solanacearum): current situation in
Cuba and perspectives. Revista de Protección Vegetal, Vol. 28 No. 3 Disponible en:

http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1010-27522013000300001.

Obrador, S. J. (2017). Techniques for isolation, identification and molecular characterization of Moko disease-
related Ralstonia solanacearum strains. Revista Mexicana de FITOPATOLOGÍ, pp. 509 -533 Disponible
en:

http://www.scielo.org.mx/pdf/rmfi/v35n3/2007-8080-rmfi-35-03-00509.pdf.

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ANEXOS

Figura 1. Resultado de la prueba de identificación Figura 3. Resultados de las pruebas bioquímicas

inmunológica. para la identificación de la cepa aislada.

No. Cepa /
Ralstonia 1
Prueba
solanacearum
bioquímica

Citrato de sodio Positivo Positivo

Ureasa Positivo Positivo

Producción indol Negativo -

Gelatinasa Negativo Negativo

Glucosa Positivo Positivo

Manitol Variable1 Negativo

Sorbitol Variable1 Negativo

Figura 2. Morfología macroscópica de la cepa Ramnosa Negativo Negativo

aislada en agar nutritivo.
Sacarosa Positivo Positivo

Arabinosa Negativo Negativo

Tabla 3. Comparación del resultado de pruebas

bioquímicas realizadas a la cepa aislada con R.
solanacearum.
1 La hidrólisis de estos azúcares depende de la
variedad de Ralstonia solanacearum.

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Figura 4. Enfrentamientos duales efectivos entre Trichoderma viride y Ralstonia solanacearum. 1 y 2. Control
Ralstonia solanacearum, 2. Técnica de enfrentamiento por herradura, 3. Siembra estriada.

Figura 5. Enfrentamientos duales efectivos entre Streptomyces lydicus y Ralstonia solanacearum. 1 y 2. Control
Ralstonia solanacearum, 2. Técnica de enfrentamiento por herradura, 3. Siembra estriada.

Figura 6. Enfrentamientos duales efectivos entre Bacillus subtilis y Ralstonia solanacearum. 1 y 2. Control Ralstonia
solanacearum, 2. Técnica de enfrentamiento por herradura, 3. Siembra estriada.

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