INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Tipificación de cepas de Acinetobacter

baumannii aisladas a partir de hemocultivos

Presenta:
eQBP Juana Maria Ortega Madrigal
Asesor de Tesis:
Dra. en C. Graciela castro Escarpulli
Coasesor:

CDMX M. en C. Ledda Ivonne Pelcastre Rodríguez Febrero 2020

 LUGAR DE REALIZACION

El presente trabajo se realizará en el Laboratorio de Investigación Clínica y Ambiental del

Departamento de Microbiología, el cual pertenece a la Escuela Nacional de Ciencias
Biológicas del Instituto Politécnico Nacional, bajo la dirección de la Dra. en C. Graciela Castro
Escarpulli y de la M. en C. Leda Ivonne Pelcastre Rodríguez

Forma parte del proyecto:

Métodos de tipificación clásica y molecular de agentes causantes de infección.

Clave SIP: 2020 0675.
Dra en C. Graciela Castro Escarpulli
 IAAS
Las IAAS son infecciones contraídas por

un paciente durante su tratamiento en un

hospital u otro centro sanitario y que dicho

paciente no tenía ni estaba incubando en

el momento de su ingreso. 

(OMS )
 Patógenos ESKAPE
ESKAPE
Enterococcus faecium
La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha
Staphylococcus aureus incluido recientemente los patógenos ESKAPE
en la lista de 12 bacterias contra las cuales se
Klebsiella pneumoniae necesitan urgentemente nuevos antibióticos.
Acinetobacter baumannii Describen tres categorías de patógenos, a
Pseudomonas aeruginosa saber, prioridad crítica, alta y media.

Enterobacter spp

(Rice, 2008; Navidinia, 2016; Tacconelli et al., 2018).

 TAXONOMÍA Metabolismo microbiano

PHYLUM Proteobacteria

CLASE Gamma Bacilo corto Gram negativo, estrictamente

Proteobacteria aerobio, inmóvil y no fermentador.

ORDEN Pseudomonadales
Catalasa (+ ) Oxidasa ( - )

A B
Familia Moraxellaceae B

Género Acinetobacter

(Jung & Park, 2015)

Fig 1 . A) Morfología microscópica de Acinetobacter

baumannii, se obserban bacilos cortos Gram negativos, en
medio como TSA (B) presenta colonias redondas color crema
 Aspectos clínicos
Acientobacter baumannii causa principalmente 2 tipos de cuadros clínicos en el hombre

Neumonía
Produce el 3 a 7% de las
neumonías hospitalarias

Bacteriemia
1 a 2% de las bacteriemias asociadas a catéteres intravasculares,
sitios de infección quirúrgica e infecciones del tracto urinario.

(Rada, 2016)
 Epidemiología

Fig 2. Distribución de los aislamientos de Fig 3. Distribución de los aislamientos de

Acinetobacter spp. según las salas de procedencia. Acinetobacter spp. según factores predictivos.

(Aguilera et al., 2019)

 Mecanismos de
patogenicidad

 
Fig 4. Factores que contribuyen a la permanencia de Acinetobacter baumannii en el ambiente, Tomado de (Dijkshoorn et al., 2007)
infección y colonización.
 Factores de virulencia de Acinetobacter
baumannii
Lipopolisacáridos: que permiten la adhesión a las células epiteliales humanas

Proteínas de membrana externa (OmpA)

Vesículas de membra externa

Fosfolipasas: favorecen la lisis de las céulas del huésped.

Proteínas de unión a penicilina: estabilidad de la célula

(Rodriguez et al.,
2015)
 Mecanismos de resistencia
de Acinetobacter

Tomado y modificado de
(Price & Robert A., 2008)

Fig 5. Mecanismos de resistencia de Acinetobacter baumannii

Sistema CRISPR-Cas

(Lammoglia et al., 2016) Fig 6. Incorporación de secuencia espaciadora al genoma bacteriano.

 JUSTIFICACIÓN
Las infecciones Asociadas a la Atención de Salud (IAAS) constituyen hoy en día un importante problema de salud
pública, estas son asociadas con altas tasas de morbilidad y mortalidad. En México se estima una tasa de IAAS que
oscila entre 3.8 y 26 %.

A. baumannii es un enorme problema y un desafío mundial debido a su frecuencia, mortalidad asociada y MDR
afectando especialmente, a pacientes inmunocomprometidos que han sido sometidos a cirugía mayor o traumatismo,
o aquellos con enfermedades subyacentes graves causando infecciones como neumonía asociada a ventilación
mecánica o bacteriemia.

Es por esto que la presente investigación se centra principalmente en la tipificación molecular, la cual nos permitirá
comparar la composición de los ácidos nucleicos entre cepas, reconociendo de este modo la relación entre
aislamientos vinculados epidemiológicamente e información del origen clonal. Con los resultados se pueden identificar
reservorios, determinar vías de transmisión y tomar así conductas terapéuticas, o de intervención sólidamente
fundamentadas en el resultado de estos estudios.

,
 Hipótesis
Sí, se analizan diferentes métodos de tipificación, en conjunto con la
presencia del sistema CRISPR-Cas en cepas de Acinetobacter
baumannii, entonces se proporcionará mayor discriminación entre
estas y podrá ser utilizado como un método de tipificación.
Objetivo general: Determinar la presencia del sistema CRISPR-Cas en Acinetobacter
baumannii como método de tipificación.

Objetivos específicos:
• Diferenciar los complejos de las cepas de Acinetobacter baumannii por metabolismo
microbiano.
• Tipificar las cepas en estudio por métodos moleculares
• Detectar la presencia del sistema CRISPR-Cas en el genoma de Acinetobacter baumannii
por PCR.
• Determinar el perfil de resistencia de las cepas de Acinetobacter baumannii.
• Detectar genes que codifiquen para genes de resistencia antimicrobiana.
DIAGRAMA GENERAL DE TRABAJO
Diferenciar los complejos de las cepas de Acinetobacter baumannii por metabolismo microbiano.

Búsqueda bibliográfica
de carbohidratos que
Lectura
puedan ser utilizados
para distinguir los
complejos.
 Tipificar las cepas en estudio por métodos moleculares

ERIC-PCR

ERIC-1 5’ATGTAAGCTCCTGGGGATTCAC-3’

ERIC-2 5’AAGTAAGTGACTGGGGGT-3’

Extracción de 90 ng/µL
DNA
Etapa T ºC Tiempo Ciclos
min
Desnaturalización 94 1 30
Alineación 52 1
Demostración de productos
Extención 65 8
amplificados
electroforesis Extención final 65 16 1
Detectar la presencia del sistema CRISPR-Cas en el genoma de
Acinetobacter baumannii por PCR.

Búsqueda de Fabricación de
Revisión bibliográfica Iniciadores iniciadores

Montar PCR
 Determinar el perfil de resistencia de las cepas de Acinetobacter
baumannii.

Resistencia
antimicrobiana

Clasificación
Identificación de
cepas en MicroScan
Detectar genes que codifiquen para genes de resistencia
antimicrobiana.
ALGUNOS RESULTADOS
Resultados Cuadro 1. Perfil de Resistencia a antimicrobianos de las diferentes cepas de
Acinetobacter baumannii
 M 14 14 23 16 12 11 3 1 19 10 M

Figura 7 . Ejemplo de un electroferograma de la amplificación por PCR de las secuencias ERIC en cepas de
Acinetobacter baumannii. Electroforesis en gel de poliacrilamida al 10%. En el primer y último carril se encuentra el marcador
de talla molecular (Marker VI Roche). Los carriles 1 al 10 contienen los amplicones obtenidos de las cepas de trabajo .
Figura 8. Dendograma construido a partir de la matriz de ausencias y presencias obtenida de los
electroferogramas de los ERIC-PCR. El dendograma se realizó por el programa past3.
GRACIAS POR SU ATENCIÓN