INTEGRANTES:

RAMOS MORALES, Sheira

LEON PRESENTACION, Marvin
POLINAR SUMARAN, Delia
FELICIANO ARRATEA, Omar
SIMEON ECHEVARRIA, Jiovana
MALPARTIDA RAMIREZ, Flor
GODOY PEREZ, Maria

GRUPO: 3

Ao de la Consolidacin del Mar de Grau

INFORMES DE MICROBIOLOGIA

INTRODUCCION

Los trabajos hechos en este informe, estn hechos a base de los conocimientos de
los estudiantes; en el cual se presenta la capacidad de retencin de cada uno de los
integrantes.
El curso de microbiologa abarca un amplio campo en el desarrollo de nuestra carrera,
por ende tenemos que conocer cmo hacer ms fcil las cosas; como ingeniero que
seremos tenemos que hacer las cosas bien no siempre estar dependiendo de los
materiales de laboratorio. Si se desea hacer un anlisis de suelo para ver la cantidad
de nematodos en l, tenemos varios mtodos; no solo en laboratorio sino tambin en
campo, lo cual al ser practico no quiere decir que se depender de solo eso; tambin
se ver los medios de cultivos ms comunes para sembrar o ver el desarrollo de los
microorganismos.
Pero para toda practica es importante saber el nombre de cada material o equipo
utilizado, su funcionamiento y cmo manejarlo, teniendo en cuenta que todo material
al usar debe estar esterilizado, libre de todo microorganismo para no contaminar
nuestras muestras; evitando errores.

PRACTICA N1

NORMAS GENERALES A SEGUIR A UNU LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA,

MATERIALES DE USO FRECUENTE, LIMPIESA Y ACONDICIONAMIENTO DEL
MATERIAL DEL VIDRIO PARA SU ESTERILIZACION
MATERIALES Y
MICROBIOLOGIA

METODOS

USADOS

EN

EL

LABORATORIO

DE

Importancia:
Un laboratorio es un lugar dotado de los medios necesarios para realizar
investigaciones, experimentos, prcticas y trabajos de carcter cientfico, tecnolgico
o tcnico. Los laboratorios estn equipados con instrumentos de medida o equipos
con los que se realizan experimentos, investigaciones o practicas diversas, segn la
rama de la ciencia a la que se dedique. Tambin puede ser un aula o dependencia de
cualquier centro docente acondicionada para el desarrollo de clases prcticas y otros
trabajos relacionados con la enseanza.
Objetivos:
Que el alumno conozca parte del material necesario en un laboratorio de
Microbiologa Y Nematologia Agrcola.
Que el alumno aprenda a manejar el material utilizado en un laboratorio de
Microbiologa Y Nematologia Agrcola.
Materiales:
Equipos

Incubadora
Auto Clave
Mufla
Agitadores
Estufa u Horno de Pasteur
Microondas
Incubadora moderna
Refrigeradora
Micro Boy

Instrumentos
Probeta
Erlenmeyer
Pinzas
Bistur
Esptulas
Balanza de brazo.
Procedimiento
Normas generales
Asistir con guardapolvo.
No ingerir alimentos.
Leer bien el manual antes de ejecutar la practica
Evitar de hacer ruido y movimiento.
Conocer los equipos y manejarlos acorde a la prctica.
Todo desecho se embolsa y se desecha.
Distribucin del laboratorio:
Sala de recepcin
Almacn y refrigerado
Biblioteca
Sala de procesamiento
Cmara elimatizada
Cocina
Cmara esterilizadora
Sala de estufas
Tcnicas especiales
Anlisis generales, visualizar
Cmara fra o multiplicador
Lavaderos
Contenedores
Autoclaves
Correccin
Solo para bacterias, cido casaminico
Equipos:
Incubadora
o Dos puertas
o Placa de asbesto

 Autoclave
o Nanmetro: libras de presin
o Termmetro: vapor en C
o Espita: cierra (no sale el vapor)
Abre (baja la T sin salir el vapor)
Mufla:
o Secar cualquier muestra: granos tubrculos
o Sistema de encendido
o Termostato, regula la T
Agitadores
Estufa u horno de Pasteur
Microondas
o Licuar los medios
o Calentar los slidos a lquidos
Incubadora moderna
o Multiplicar los hongos
Refrigeradora
Microboy 110- esteroscopio transformador.
Microscopio 220
Autoclave
o Solo agua destilada
o Esteriliza o pasteuriza medios de cultivo
Homogenizadora
o Balanza de vaso
o Taperes
o Probeta de medir agua (100, 150, 1000, 2000)
o Frasco de nctares
o Erlenmeyer
o Pinzas
o Bistur (con mango y para incorporar)
o Anza de pete
o Saca bocado
o Asa de siembra o calent
o Esptulas (metalicas, mangos de madera)
Reactivos
o Agar

o
o
o
o
o
o
o

Glucosa
Pectosa
Medios: sinteticos y artificiales
Mechero de bunsen
Equipo Fenwick
Tamiz de 175 mesh
Tamiz de 500 mesh

Equipos:

Incubadora

Microondas

Autoclave

Refrigeradora
Auto Clave

Auto Clave

Estabilizador

Refrigeradora

Microscopio

Mechero De Bunsen

Estufa

Resultados
El estudiante de E. A.P. de Agronoma esta siempre dispuesto a considerar
nuevos retos. y considerar, desde nuestra experiencia, todas las posibles alternativas
es por eso lo imprescindible de reconocer todos los materiales, su utilidad y su debida
limpieza para cumplir con nuestros propsitos.
Conclusiones

Es muy importante haber reconocido todos los materiales a utilizar en el

laboratorio y saber su utilidad para la prctica.

Tambin era necesario para prevenir cualquier accidente no provocado y no

lamentar consecuencias.

Una de las conclusiones es haber reconocido algunos reactivos que se debe

tener cuidado y cogerlo con los guantes para prevenir algn tipo de
contaminacin.

Haber reconocido los equipos a utilizar como la centrifuga, el potencimetro y

la estufa de aire caliente.

Conocer la calidad de las principales herramientas a utilizar como los tubos de

ensayo, las pipetas, las placas petri, los matraces, etc.

Saber desinfectar las placas cuando se encuentren con algunas bacterias u

hongos o cidos, tambin saber desinfectar las manos y los materiales a utilizar.

Bibliografa
[Link]
[Link]

PRACTICA N 2
METODOS DE ESTERILIZACION

I.

INTRODUCCION

Se trata de un trmino probabilstico, de modo que, tras un adecuado proceso de

esterilizacin, se debe llegar a una probabilidad de encontrar microorganismos igual
o menor que una unidad contaminada en un milln de unidades sometidas a un
proceso de esterilizacin. La esterilizacin es el proceso de eliminacin de toda forma
de vida, incluidas las esporas. Es un trmino absoluto que implica prdida de la
viabilidad o eliminacin de todos los microorganismos contenidos en un objeto o
sustancia, acondicionado de tal modo que impida su posterior contaminacin.

II.

OBJETIVOS
2.1.

OBJETIVOS GENERALES

Con esta prctica se pretende que el alumno aprenda a esterilizar

ciertos microorganismos.
2.2.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Esterilizar con fines comerciales.

Se pretende tener un cultivo puro.

III.

MATERIALES
No se tiene ningn material por que la prctica solo fue terica.

IV.

PROCEDIMIENTO
No hay procedimientos.

V.

MARCO TEORICO

METODOS DE ESTERILIZACION
Existen varios mtodos de esterilizacin, detallados a continuacin.

Mtodos fsicos
-

Calor hmedo (en autoclave de vapor).

Calor seco (en horno de esterilizacin).

Radiacin gamma.

Mtodos qumicos
-

xido de etileno.

Perxido de hidrgeno.

A.- METODOS FISICOS

Los mtodos fsicos son aquellos que no involucran el empleo de sustancias letales
para los microorganismos, sino procedimientos fsicos como la radiacin ionizante, el
calor o la filtracin de soluciones con membranas que impiden el paso de
microorganismos, incluyendo virus.
1. CALOR
Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor.
El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las
membranas y/o procesos oxidativos irreversibles en los microorganismos. La
efectividad del calor como mtodo de esterilizacin depende de la temperatura y el
tiempo de exposicin.
1.1.

CALOR SECO

Se puede esterilizar por calor seco en estufas a ms de 160 C durante media hora.
El calor seco produce desecacin de la clula, efectos txicos por niveles elevados
de electrolitos, procesos oxidativos y fusin de membranas. Estos efectos se deben
a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en
contacto con stos. El aire es mal conductor del calor, y el aire caliente penetra ms
lentamente que el vapor de agua en materiales porosos. La accin destructiva del
calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el material est
seco o la actividad de agua del medio es baja. Esto se debe a que las protenas se
estabilizan mediante uniones puente de hidrgeno intra moleculares que son ms
difciles de romper por el calor seco.
La estufa de esterilizacin es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar
por calor seco. Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposicin que la
autoclave. La temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos

de exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, mientras

que a 160C se requieren al menos 2 horas de exposicin.
Sirve para esterilizar material de vidrio. El papel y el algodn no pueden ser
esterilizados a ms de 160C.
1.2.

LLAMA DIRECTA O FLAMEO

Se hace con la punta de una aguja.

1.3.

AIRE CALIENTE

Horno Pasteur.- Es un horno electrnico donde se alcanzan temperaturas de 200

C. Garantiza la esterilidad de cualquier objeto que permanezca de 2 a 3 horas a 160
C.
Se esterilizan as aquellos objetos que se deterioran si son humedecidos, u objetos
que no se mezclan con el agua, como esptulas, tubos de vidrio.
Ventajas

No es corrosivo para metales e instrumentos.

Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias

viscosas no voltiles.

Desventajas

Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a

la baja penetracin del calor.

Existen otras formas de eliminar microorganismos por calor seco. La incineracin se

utiliza para destruir material descartable contaminado.
La accin directa de la llama elimina a los microorganismos cuando se lleva al rojo el
material de metal como ansas, lancetas, agujas de diseccin.
2.- CALOR HUMEDO
El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos
se deben principalmente a dos razones:

El agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas

(DNA, RNA, protenas, etc.) son producidas por reacciones que eliminan agua.
Por lo tanto, reacciones inversas podran daar a la clula a causa de la
produccin de productos txicos. Adems, las estructuras secundarias y
terciarias de las protenas se estabilizan mediante uniones puente de
hidrgeno intramoleculares que pueden ser reemplazadas y rotos por el agua
a altas temperaturas.

El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms

elevado que el aire. Por lo que, los materiales hmedos conducen el calor

mucho ms rpidamente que los materiales secos debido a la energa liberada

durante la condensacin.
La autoclave. - Es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para
esterilizar cultivos y soluciones que no formen emulsiones con el agua y que no
se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100 C.
Una temperatura de 121 C (una atmsfera de sobrepresin) con un tiempo de
exposicin mayor a 15 minutos sirve para destruir organismos formadores de
esporas.
2.1. VAPOR
2.1.1 VAPOR A PRESIN.
Utiliza el calor del vapor de agua sometido a presin. Es uno de los mtodos ms
eficaces de esterilizacin. Se realiza en unos aparatos especiales denominados
autoclaves, parecidos a una olla a presin. Es a 121 C.
2.1.2 VAPOR SIN PRESION
Se hace con la espita abierto a 100 C
a.- PASTEURIZACION
Es un tratamiento trmico que elimina los microorganismos patgenos de alimentos
como la leche, el zumo y derivados.
No es un mtodo de esterilizacin, ya que garantiza la destruccin de los
microorganismos patgenos, pero no de los microorganismos que no son patgenos;
estn presentes en los alimentos pasteurizados.
Se hace en productos alimenticios. Es a 60 C durante 10 min.
b.- TINDALIZACION
Tindalizacin. Mtodo propuesto por Tyndall, que consiste en el tratamiento de un
objeto a 100C durante 30 minutos 3 das. Es un mtodo de esterilizacin. Se utiliza
para la esterilizacin de azcares que caramelizan por encima de 100. Se lleva a
cabo en la autoclave. La diferencia es que la espita se mantiene abierta, por lo que
no se genera presin en el interior, y por eso slo se consiguen 100; no ms.
- Es a 70 C por 1 a 5 min
- Se hace en prcticas lbiles.
Ventajas

Rpido calentamiento y penetracin

Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo

No deja residuos txicos

Hay un bajo deterioro del material expuesto

Econmico

Desventajas

No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua

Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos

3.- FILTRACION
Hay determinados agentes que son termolbiles; para esterilizar estos agentes se
emplea la filtracin. Suelen ser soluciones de enzimas, antibiticos.
Se eliminan los microorganismos presentes en un fluido.
Aquellos que no pueden ser esterilizados
Se hacen en sustancias termolbiles
Propiedades enzimticas
Es en exterior de tejidos, vitaminas, suero, etc.
3.1 FILTROS DE MEMBRANA
Son esteres de celulosa constituidos por una matriz, acetato de celulosa, por ejemplo,
con poros de un determinado dimetro.
Eligiendo un poro de 0.45 - 0.22, eliminamos las bacterias que pueda haber en estas
soluciones. Los virus no los podemos eliminar por este mtodo, pero eso no es un
problema, ya que siempre van unidos a clulas.
Para filtrar el lquido, lo sometemos a presin, con una jeringa si se trata de un
volumen pequeo, o con un quitasato si el volumen es mayor.
3.2 FILTROS HEPA
HEPA: Aire articulado de alta eficacia. Son filtros de vidrio empleados para esterilizar
el aire que penetra en habitaciones especiales como quirfanos, etc.
Tambin se emplean en cmaras de flujo laminar aparatos con forma cbica (urna).
Tienen una superficie donde se hacen las operaciones microbiolgicas. El aire que
penetra en la cmara pasa por los filtros HEPA, de manera que la superficie queda
estril
B.- METODOS QUIMICOS
Los mtodos qumicos de esterilizacin son aquellos que involucran el empleo de
sustancias letales para los microorganismos, tales como el xido de etileno y el
perxido de hidrgeno.
El uso de este mtodo es muy limitado para la Industria Alimentaria pero muy utilizado
en otras industrias como la farmacutica por ejemplo.

1.- GASES TOXICOS

Inactivan protenas y enzimas.
2.- GASES INFLAMBLES
Inactivan protenas y enzimas.
OXIDO ETILENO
Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los
que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc.
Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica.
Sirve para esterilizar material termo sensibles como el descartable y plstico, equipos
electrnicos, bombas cardiorrespiratorias, etc.
Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y adems cancergeno.
Se da a 4 C
OXIDO PROPILENO
El agua oxigenada oxida las clulas y las destruye. Se emplea como antisptico de la
piel.
Se da a 4 C
3.- NO IONIZANTE
Inactivan pero no matan.
Es en bolsas.
ULTRAVIOLETA
El mximo de absorcin de los cidos nucleicos es a 265 nm. La luz UV provoca
dmeros de pirimidina en el DNA y si no se reparan, la clula muere. La luz UV tiene
poca energa y bajo poder de penetracin; no se considera un esterilizante. Se emplea
para disminuir la poblacin microbiana en superficies de quirfanos, produccin de
frmacos, campanas de flujo laminar. Afectan a las molculas de DNA de los
microorganismos debido a que forman dmeros de pirimidinas adyacentes que
inducen errores en la duplicacin y por lo tanto la prdida de la viabilidad de las
clulas. Son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies.
15 - 300 nm.
LABORATORIO
15 - 17 nm.

4.- IONIZANTE
Son los rayos X que tienen mucha energa y poder de penetracin. Ionizan molculas.
Aplicados a clulas, ionizan molculas de las clulas, y stas mueren. Forman
radicales alcohol, hidroxilo, perxidos que oxidan cualquier material y daan el ADN.
Los rayos X no se suelen utilizar porque son caros, pero s los gamma, y se obtienen
fcilmente a partir del cobalto (60 Co). Se emplean en procesos de enlatado y
esterilizacin de material quirrgico (bistur, gasas, etc) Estos mtodos deben
practicarse en zonas especiales y las personas que los realicen deben ir protegidas y
pasar ciertos controles.
Genoma penetrante lo mata al microorganismo.
C.- METODOS TRMICOS
Los mtodos trmicos suelen englobar todos los procedimientos que tienen entre sus
fines la destruccin de los microorganismos por el calor.
Nos estamos refiriendo tanto a la Pasteurizacin y a la Esterilizacin, cuya finalidad
principal es la destruccin microbiana, como al escaldado y a la coccin, procesos en
los que tambin se consigue una cierta reduccin de la flora microbiana, pero que sus
objetivos principales son la variacin de las propiedades fsicas.
VI.

RESULTADOS

La prctica terica fue muy buena.

Se pudo haber logrado una esterilizacin muy buena.
VII.

LITERATURA CITADA

[Link]. 2011. (En lnea). Hunuco, PE. Consultado 11 de Mayo 2011.

Disponible en [Link]

PRACTICA N 3

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

Los medios de cultivos son un conjunto de nutrientes slidos o lquidos (artificiales o
naturales), que crean factores de crecimiento, desarrollo y multiplicacin con
condiciones adecuadas de temperatura, grado de humedad, presin de oxgeno y un
grado correcto de alcalinidad o acidez; para desarrollar y multiplicar uno o ms
organismos; el metabolismo de ellos es tan grande que hasta ahora se logr preparar
ms de 10.000 medios de cultivos diferentes.
Un medio de cultivo tambin debe estar exento de microorganismos contaminantes;
por eso todo medio de cultivo se trabaja con materiales esterilizados y en la cmara
de microboy.
TIPOS DE MEDIO DE CULTIVO:
Pueden ser:
Segn su consistencia:
o Solidos
o Lquidos
Segn sus propiedades nutritivas:
o Carentes de nutricin
A. Nutritivas
Segn el papel que desempean:
o Diferenciales
o Bacteriostticos
CULTIVOS MS COMUNES:

PDA (papa, dextrosa, agar)

OMA (out, meal, agar)
AHM (agar, harina de maz)
SINTETICO

OBJETIVO DE LA PRACTICA: Para captar, multiplicar, ver la fisiologa, morfologa

de un microorganismo para fines industriales o agrcolas.
MATERIALES:
-

Probeta
Matraz
Erlenmeyer
Trpode

de

Mechero de bunsen
Rejilla de asbestos
Embudo
Envases de vidrio

Algodn
Papel metlico
Balanza

EQUIPOS:
-

Horno microondas
Cmara microboy

PDA

200 gr de papa
10 gr de dextrosa
15 18 gr de agar
5 gr de carne (opcional)

1000 ml de agua destilada

PROCEDIMIENTO:

1. PROPORCIONAR: Una vez dado los datos para hacer un medio de

cultivo PDA, sacamos las proporciones a la cantidad que nos piden en
laboratorio: es decir a 120 ml; as tenemos:
o Para papa:
200 gr de papa ---- 1000ml
X gr
---- 120 ml
=

200 120
1000 ml

= 24

o Para dextrosa:
10 gr dextrosa ---- 1000 ml
X
---- 120 ml
=

10 120
1000 ml

= 1.2

o Para Agar:
15 gr de agar ---- 1000ml
X
---- 120 ml
=

15 120
1000 ml

= 1.8

2. ACONDICIONAMIENTO DE LA PAPA: Aqu se pela la papa, se lava con

abundante agua y se corta en cuadraditos.

3. PESAR SUSTANCIAS: Una vez teniendo las proporciones; pesamos

cada una de las sustancias con la ayuda de la balanza.

4. PREPARAR LA PAPA: En un matraz de Erlenmeyer echar la papa en

cuadraditos y pesada, agregando el agua destilada (120 ml):
homogenizando. Una vez hecho eso poner sobre fuego y hacerlo hervir.
No olvidar mover o mezclar.

Colar la papa en un nuevo Erlenmeyer.

5. DISOLVER U HOMOGENIZAR: En el nuevo envase verificar que el

nuevo lquido este en 120 ml, de lo contrario agregar agua destilada;
tambin adicionar la dextrosa y el agar. Siempre moviendo hasta disolver
todas las partculas, si no se puede calentarlo de nuevo hasta que quede
completamente disuelto.
6. TRASVASAR: Despus de disolver trasvasar en una botella con la ayuda
de un embudo.
7. ACONDICIONAR: Hacer una torunda de algodn para que se use como
tapn para el envase, seguido de papel metlico.

8. ROTULAR: Es el acto de poner el nombre, la fecha y el material de que

este hecho; todo eso sobre el envase y con tinta indeleble.

9. ESTERILIZAR: Se hace a 120C/15 libras de presin por 20 minutos en

autoclave.

OMA
20 - 60 gr de Quaker.
10gr de dextrosa.
15 18 gr de agar.

1000 ml de agua destilada

PROCEDIMIENTO:

PROPORCIONAR: Se tomara proporciones para 120 ml, asi tendremos:

o Para quaker:
20 gr de quaker ---- 1000ml
X gr
---- 120 ml
=

20 120
1000 ml

= 2.4

o Para dextrosa:
10 gr dextrosa ---- 1000 ml
X
---- 120 ml
=

10 120
1000 ml

= 1.2

o Para Agar:
15 gr de agar ---- 1000ml
X
---- 120 ml
=

15 120
1000 ml

= 1.8

PESAR Y MEDIR: Se pesara el quaker, el agar y la dextrosa y mediremos

120 ml de agua destilada.

HOMOGENIZAR

COCER

TRASVASAR

ACONDICIONAR: Hacer una torunda de algodn para que se use como

tapn para el envase, seguido de papel metlico.
ROTULAR: Es el acto de poner el nombre, la fecha y el material de que
este hecho; todo eso sobre el envase y con tinta indeleble.

ESTERILIZAR: Se hace a 120C/15 libras de presin por 20 minutos en

autoclave.
AHM
20 60 gr de harina de maz
10 gr de dextrosa
15 gr de agar

1000 ml de agua destilada

PROCEDIMIENTO:

PROPORCIONAR: Se tomara proporciones para 125 ml, asi tendremos:

o Para harina de maiz:
20 gr de harina de maiz ---- 1000ml
X gr
---- 125 ml
=

20 125
1000 ml

= 2.5

o Para dextrosa:
10 gr dextrosa ---- 1000 ml
X
---- 125 ml
=

10 125
1000 ml

= 1.25

o Para Agar:
15 gr de agar ---- 1000ml
X
---- 125 ml
=

15 125
1000 ml

= 1.87

PESAR Y MEDIR: Se pesara el quaker, el agar y la dextrosa y mediremos

120 ml de agua destilada.

HOMOGENIZAR

COCER

TRASVASAR

ACONDICIONAR: Hacer una torunda de algodn para que se use como

tapn para el envase, seguido de papel metlico.

ROTULAR: Es el acto de poner el nombre, la fecha y el material de que

este hecho; todo eso sobre el envase y con tinta indeleble.
ESTERILIZAR: Se hace a 120C/15 libras de presin por 20 minutos en
autoclave.
CONCLUSIONES:
Al terminar la prctica se logr conocer los diferentes medios de cultivo para
sembrar microorganismos, teniendo en cuento las cantidades, proporciones y
proceso de preparacin.
Se demostr la importancia de los medios ya que con estos ms adelante nos
ayudaran a hacer aislamientos de microorganismos tanto patgenos como
benficos.

PRACTICA N4
CAPTACIN DE BACTERIAS AIRE, AGUA, MANOS, SUELO.
OBJETIVOS
Es obtener la captacin de microorganismos de la superficie y del medio
ambiente y analizarlos.
OBSERVACIN
Anlisis de la superficie (laboratorio)
PROCEDIMIENTO
Anlisis superficies
Anlisis ambientales
1. Preparacin de un medio de cultivo

2. Flaqueado

3. Capturar las bacterias

Captacin de bacteria en el
suelo

4. Colocar las placas boca abajo

5. Captacin de bacterias en agua

Uso:
Dentro del laboratorio
Agar nutritivo hongo bacteriano
Fuera del laboratorio
Agar levadura
Tipos de bacterias

BIBLIOGRAFA
[Link]. 2011. (En lnea). Hunuco, PE. Consultado 19 de Mayo
2011.
Disponible
en
[Link]
1/word/Guia_Lab_05_y_06.doc
La Merchant; Packer, PA.1920. Bacteriologa y virologa veterinaria. 3 era ed. Es.
Edit. Acribia Zaragosa. 768 p.

PRACTICA N 5
CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS Y CRECIMIENTO DE BACTERIAS

OBJETIVOS
Aprender a inocular distintos medios de cultivo contenidos en medios de
cultivo como agar.
Observar el crecimiento bacteriano en los distintos medios de cultivo.
Comprobar la movilidad de determinados microorganismos.

I.

MARCO TEORICO

1.1 MORFOLOGA DE UNA BACTERIA

Una bacteria est constituida por:
Una pared, de constitucin mal conocida, pero que presenta fuertes afinidades
tintoriales.
Citoplasma basfilo, en ocasiones vacuolizado, en el seno del cual se pueden
distinguir grnulos de lpidos, glucgeno, azufre, corpsculos metacromaticos. El
citoplasma, de naturaleza coloidal est integrado especialmente por protenas y
de cido ribonucleico, de un ncleo puesto en evidencia n estos ltimos aos y
que puede exhibir un aspecto muy variable. Ciertas bacterias son mviles por la
presencia de unos cilios vibrtiles.
Estos cilios, visibles al microscopio electrnico o mediante coloraciones
especiales, permiten, segn su disposicin clasificar las bacterias en:
a) Montricas (un cilio polar)
b) Anftricas (un cilio en cada extremidad)
c) Loftricas (un haz de cilios terminales)
d) Pertricas (cilios perifricos)

1.2.

Crecimiento bacteriano

Las clulas crecen por absorcin de materiales nutrientes que utilizan como
elementos de construccin para producir nuevos protoplasma.
Cuando las clulas bacterianas alcanzan la madurez, su tamao mximo, se
dividen en dos, y cada clula hija iniciara la vida independiente y nueva.

1.3.

Ciclo de crecimiento bacteriano

El periodo entre la formacin inicial de una bacteria y su divisin final en dos

clulas hijas recibe el nombre de tiempo de generacin.
Este tiempo de generacin varia para las diferentes tipos de bacterias. Tambin
vara para un tipo determinado de bacterias, cuando el periodo de incubacin,
las condiciones atmosfricas, o cualquier otro requisito de crecimiento sufren
alteracin. Los tiempos de generacin de bacterias van desde 20 minutos hasta
varias horas. Si inoculamos un cierto nmero de determinado tipo de organismo
en un medio adecuado. Si incubamos este medio de cultivo a una temperatura y
en una atmsfera adecuadas para este organismo notaremos que durante las
primeras horas no hay divisin celular, y que subsecuentemente tampoco ocurre
incremento en el nmero de organismos viables.
Durante las primeras horas las clulas se ajustan a un nuevo medio, aumentan
su ndicemetablico y entonces firman nuevo protoplasma, todo ello
preparndose para una fase reproductiva.
El primer periodo de ajuste y reconstitucin recibe el nombre de fase de
retardacin, ya que parece retardarse el aumento esperado en el nmero delos
organismos.
Suponiendo que permanezcan en condiciones hmedas, los organismos se
multiplicaran en la siguiente fase, la fase logartmica, a una velocidad gobernada
por su tiempo mnimo de generacin.
Para casi todos los tipos de bacterias significa una duplicacin del nmero de
microorganismos viables cada 20 minutos. En este ritmo o velocidad de
crecimiento se mantendr en cuanto se disponga de nutrientes abundante, y se
conserve la acumulacin de productos txicos de desecho bajo el nivel crtico.
Puede extenderse esta fase por alteracin del cambiante ambiente, el que se
puede ver afectado por la aireacin del medio de cultivo, por ajustes de pH, por
la aspiracin y substitucin del medio, o por una combinacin de tales
procedimientos. Cuando no se verifica tal regulacin o intervencin, el ambiente
alterado ara que entre el cultivo a la siguiente fase, la fase estacionaria.
Durante el curso de esta tercera fase el cambiante ambiente llegara a un
punto en el cual el nmero de organismos igualara al nmero de los que se pre

producenesta fase se conoce como la fase estacionaria ya que naturalmente el

nmero de microorganismos viables mantendr un equilibrio.
La duracin de esta fase la determinaran la velocidad o ndice del agotamiento
de nutrientes, y la de acumulacin de desechos. Pronto provocar la fase fina,la
fase de declinacin. Durante esta cuarta y ltima fase, de nmero de organismos
que mueren exceder del nmero de los que se estn reproduciendo. Esta fase
continuara hasta que todos los organismos del cultivo hayan expirado.

1.4.

DESARROLLO BACTERIANO:

En el interior de cada clula bacteriana ocurren numerosas actividades qumicas.

Bsicamente estas reacciones qumicas son de dos tipos:
Catabolismo: la desintegracin de los productos presentados a la clula, en
sustancias ms simples.
Anabolismo: la formacin de nuevos productos, partiendo de aquellos
productos desintegrados. Es natural que tanto el catabolismo como el
anabolismo ocurran simultneamente. El proceso combinado se denomina
metabolismo.
1.5.

MTODOS UNIVERSALES DE MEDICIN

Estimacin visual. Este mtodo es solamente subjetivo dicho de otra manera a

simple vista. Nos da clculos aproximados; la ventaja es que se tiene
microorganismos vivos y la desventaja es inexacta.
Nitrgeno celular (micro kjeldahl). Es un mtodo efectivo la desventaja que es
costoso.

Peso seco. Este mtodo consiste en la multiplicacin de microorganismos se

seca y luego se pesa la ventaja es que el peso es exacto cuantitativamente la
desventaja es que no se tiene microorganismos vivos.

a) Cultivo liquido
Afrecho
Agar alcohol polibinilico al 1/1000
Filtrado pasado al centrifugado y pasar al secado al 45 a 80c,
obteniendo microorganismos luego al pesado.
b) solido
Gelatina
Agar
Peso papel
Peso micelio
Lecturado en 5 placas

Medicin lineal. Presenta una frmula: ncm/ da

N das
II.

MATERIALES Y METODOS

METDOLOGIA
EQUIPOS
Microscopio
Estereoscopio
MATERIALES
Placas de Petri
Ansa de siembra
Mechero de bunsen
Placa Petri con muestra.
Bolsa de polipropileno
Regla
Plumn indeleble

EQUIPOS
Microboy
Cmara incubadora
INSUMOS
Medios de cultivo.- OMA- PDA.
PROCEDIMIENTO
1.- Se preparan medios de cultivo como agar nutritivo y OMA

para luego

esterilizarlos en la autoclave por 20 minutos.

2.- Se utiliza placas Petri previa esterilizacin en el horno para la cual

necesitamos dos, luego son llevados a la cmara del Micro boyt donde se
proceder a la inoculacin de los organismos a estudio.

Fig. 4 cmara de Micro boyt

3.- Se procede a acondicionar la cmara Micro boyt utilizando alcohol y se

desinfectan las paredes para evitar el riesgo de contaminacin del trabajo.
Los materiales son trasladados a la cmara previamente desinfectada la cual se
ubican los medios preparados (agar nutritivo y OMA) que fueron esterilizados en
la autoclave, las placas, mechero y el asa de inoculacin.

Fig. 5 Acondicionamiento de la cmara

4.- Los medios de cultivo son vaciados a las placas

cada medio en sus

respectivas placas y se descartan las botellas contenedoras de los preparados.

Fig. 6 Vaciado del preparado en las placas

5.- Se procede a la extraccin de las placas de la cmara de incubacin y se

ubica los hongos y las bacterias que sern inoculados y son trasladados a la
cmara de Microboy.

Fig. 7 cmara de incubacin conteniendo las muestras

6.- Una vez ya ubicados las bacterias se utiliza una saca bocado para su corte
en forma redonda de la bacteria y el hongo, utilizando el asa de inoculacin de
proceder al traslado de los objetos a los medios de cultivo ubicndolo en el
medio.

Fig. 8 Inoculaciones de las muestras a los medios de cultivo

Fig. 9 Inoculacin completada en los 3 medios

a) Utilizando el lapicero de tinta se procede a la rotulacin:
Nombre del medio

Placa 1

OMA

hongo

Agar nutritivo

Placa 2

bacteria

Fig. 10 Cuadro datos del rotulado.

b) Se marca unas lneas en forma de cruz en la parte de la base de la placa
ubicando las ejes X, Y.
Y

Fig. 11 Diseo lineal del rotulado en la parte baja de la placa

Fig. 12 Acondicionamientos de las palcas

7.- Para finalizar la prctica las placas son trasladadas a la cmara de

incubacin, en dos das se harn las mediciones respectivas.

Fig. 13 Las placas acondicionadas en la cmara de incubacin

I.

RESULTADOS

Estos resultados de crecimiento se obtuvieron con la frmula de medicin

lineal.
Cm /da
N de das
En: Bacteria

Para x =

6.3 cm

= 1.26 cm / da.

5 das

Para y =

5.1 cm

= 0.85 cm / da.

5 das

Para x, y =

11.4 cm = 2.28 cm /da.

5 das

En: Hongos

Para x =

3.0 cm
5 das

= 0.6 cm / da.

Para y =

3.9 cm

= 0.78 cm / da.

5 das

Para x, y =

6.9 cm

= 1.38 cm / da.

5 das

Con los resultados obtenidos el crecimiento de las bacterias fueron ms rpido

que de los hongos.

DIAS

PLACA 1

PLACA 2

(agar nutritivo)

(OMA)

Bacteria

Hongos

PRACTICA N 6
TECNICAS DE AISLAMIENTO, AISLAMIENTO DIRECTO, AISLAMIENTO
POR SERIES DE DILUCION, DILUCIONES SUCESIVAS, RECUENTO DE
BACTERIAS.

INTRODUCCION
En la naturaleza encontramos todo tipo de microorganismos, las cuales estn
asociados o viven conjuntamente entre ellos; en la prctica realizada
separaremos o aislaremos los hongos a estudiar, para poner ver su mayor
crecimiento y desarrollo como tambin su fisiologa y morfologa.

AISLAMIENTO DIRECTO
OBJETIVO GENERAL: Purificar hongos y bacterias
OBJETIVOS ESPECIFICOS
-

Aprender la tcnica general para separar los hongos de los

dems organismos.
Obtener y comprobar la purexa de los microorganismos
aislados.

EQUIPOS:
Camara de microboy

Matraz de Erlenmeyer

Camara de incubacin

Alcohol de 96

Microondas

Bistur

MATERIALES:

Pinza

Muestra: hoja

Algodn

Medio de cultivo: PDA

Papel toalla

Mechero de alcohol

Papel aluminio

Placa Petri

Parafilm

Vaso precipitado

Lapicero de tinta indeleble

PROCEDIMIENTO:
1.- licuar el medio de cultivo (PDA) en el horno microondas hasta que se disuelva,
posteriormente se hace el proceso de paqueado.
- Para plaquear se procede de la siguiente manera: el envase con contenido de
PDA se destapa cerca del mechero, se flamea el extremo del envase y se vierte

e medio en la placa estril; se vuelve a flamear y tapar e envase, tambin la placa

Petri (todo en la cmara de microboy).
2.- se desinfecta la cmara microboy, tanto interna y externa, usando alcohol;
para evitar alguna contaminacin de los medios de cultivo y la muestra durante
el proceso de aislamiento.
3.- Lavar la muestra: hoja con agua.
4.- colocamos todos los materiales dentro de la cmara microboy y empezamos:
Se corta la muestra en pequeos cuadraditos y se lo sumerge en un vaso
Erlenmeyer con alcohol durante 2 segundos.
5.- En otro Erlenmeyer con contenido de leja, se le pasa la muestra otros dos
minutos.
6.- Pasarlos sobre la flama y ponerlos en papel secante.
7.- colocarlos en la placa Petri con medio de cultivo en forma de cuadrado o
triangulo.
8.- Acondicionarlo y usando un lapicero indeleble proceder a rotular; para
concluir la prctica incubarlo la placa a 25 C, aproximadamente de 4 a 5 das.
RESULTADOS:
A la semana siguiente de incubarlo se notara el crecimiento del micelio del
hongo; en funcin de los tipos de micelio desarrollados ser el nmero de
repiques a realizar para obtener un cultivo puro.
ANEXOS

La muestra cortada en
pedacitos pequeos.

AISLAMIENTO POR ESTRIAS

Se practica para obtener cultivos puros de muestras que contienen flora
polimicrobiana; es tambin til para estudiar la morfologa y propiedades
hemolticas de las colonias asociadas (Garca y Paredes 1994:78).
PROCEDIMIENTO:
1.- Preparar el medio de cultivo ya sea OMA o PDA.
2.- Esterilizar el anza de Pt.
3.- Inocular Bauveria al medio de cultivo en forma de estras (zig- zag).
4.- Esterilizar nuevamente el anza de Pt.
5.- Rotular, sellar e incubar.

AISLAMIENTO POR SERIES DE DILUCION O DILUCIONES SUCECIVAS

Consiste en realizar diluciones sucesivas de la muestra con el objeto de smbrar
despus cantidades conocidas de estas dilciones en caja Petri.
Con este mtodo conocemos el nmero de microorganismos viable, es decir la
capacidad de multiplicacin de los mismos.
OBJETIVO:
-

Que se conozca otra forma de aislar un tejido vegetal

enfermo.

MATERIALES:
Matraz

Muestra del vegetal enfermo

Erlenmeyer

Cmara de aislamiento

Tubos de ensayo

Gradilla

Mechero de bunsen

Cinta

Placa Petri

Tubos con caldo y agar nutritivo

Pipeta
PROCEDIMIENTO
Limpieza y desinfeccin del material a usar.

FACTORES DE INOCULACION
Temperatura
Densidad de siembra
Luz nutricin
Uniformizacin de inocuo (cantidad calidad)
Por diluciones sucesivas consiste en hacer diluciones serias de la muestra, esta
se utiliza cuando se tienen muestras liquidas.
Luego se siembra cada dilucin en placas Petri con medios de cultivo.

Una vez obtenidos los cultivos, se procede al examen microscpico: morfologa

de colonias, actividades bioqumicas o caractersticas.

ANEXOS

PREPARACION DEL CALDO

PEPTONADO

PRACTICA N 7
OBSERVACIN DE ESTRUCTURAS VEGETATIVA, PROPAGATIVA, DE
REPRODUCCION SEXUAL Y ASEXUAL Y ESTRUCTURA DE
CONSERVACION
OBJETIVOS:
a.

Conocer las principales estructuras morfoanatomica de los hongos.

1. MARCO TEORICO
1.1. Estructura de los hongos patgenos: Las diversas formas y
estructuras que presentan los hongos se deben a la adaptacin al
modo de nutricin como parsitos o saprobios, adems a su forma
de diseminacin y sobrevivencia en el medio. La gran diversidad
morfolgica sirve de base para la identificacin tradicional de estos
microorganismos, y estos pueden ser:
1.1.1. Estructuras vegetativas: Micelio Cenoctico, Micelio
Septado.
1.1.2. Estructuras propagativas: Esporas: Conidias, Odias, Mildius.
1.1.3. Estructuras reproductivas: Conidiforos, Esparangiforo,
Ascas y ascosporas.
1.1.4. Estructura de Conservacin: Esclerotes
2. MATERIALES:
Microscopio

Guantes

Guardapolvo

3. METODOLOGIA:
Se observ las preparaciones microscpicas de las estructuras
somticas y esporas de los principales hongos Fitopatgenos
archivados en el laboratorio de Microbiologa de la facultad de
Agronoma. Esto se hizo con la ayuda de los microscopios.

4. RESULTADOS:
4.1. Estructuras Vegetativas:

Micelio cenoctico, estas hifas

pertenecientes
a
hongos
inferiores
no
presentan
tabiques.

Micelio tabicado. Los tabiques se

observan con claridad sobre la
hifa que cruza en diagonal la
imagen.

4.2. Estructuras Propagativas:

Conidias

Oidias

Conidias
septadas
Alternaria sp.

de

Oidias de Eryslphepolygonii
Oidiosis del frijol.

Mildius

Mildiu de las crucferas.

4.3. Estructuras reproductivas:

4.3.1. Reproduccin Asexual:
[Link]. Formacin de esporas:
Las Hifas Cenocticas poseen estructuras integradas
por esporangio y esporangiforo o tambin
esporangiforso u esporangio.
Las Hifas Tabicadas estan integradas por conidio o
espora y el conidiforo. Adems los conidiforos se
agrupan en 2 tipos: Sinema (Estn unidos en los
conidiforos en la parte superior e inferior),
esporodoquio (unidos los conidiforos en la parte
inferior y separados en la parte superior).
1) Conidiforo:

Estructura reproductiva
Tabicadas
2) Esporangio:

Estructura
Cenocticas

de

reproductiva

de

Hifas

Hifas

4.3.2. Reproduccin Sexual:

Las estructuras de reproduccin sexual se generan cuando le
hongo no encuentra las condiciones adecuadas para su
sobrevivencia en este caso estn Peritecio es igual al picnidio
estructuralmente pero con la diferencia que este libera ascas, el
apotecio es igual en su estructura al acrvalo pero con la
diferencia que libera ascas y el cleistotecio son estructuras
totalmente cerradas que la funcin principal es en formar ascas.
Las ascas y ascosporas son liberadas cuando el cleistoceo
absorbe agua y se abre al romperse como en el caso de Uncnula
sp. Los gneros Podosphaera, Microsphaera, Sphaeroteca y
Erysiphe, tienen forma redondeada y estn provistas
de filamentos que rodean su cuerpo ascal. Los gneros
Ceratosistis, Diaporthe, Endothia, Rosellinia y Glomerella tienen
ascas de forma esferoidal Cuando las ascas son ms o menos
cerradas y poseen orificio mediante el cual escapan las
ascosporas, se le denomina peritecio y tiene ascas
unitunicadas, ocurre con Uncinula sp en donde las ascas se
forman en un cuerpo fructfero con abertura u ostiolo, el asca es
un peritecio tiene forma de botella. En otros casos el ascocarpo
es abierto y en forma de plato y se le denomina apotecio.
1) Ascos y ascosporas:
Ascos

4.4. Estructura de Conservacin:

Son estructuras capaces de soportar condiciones adversas del medio
ambiente, y se forman cuando el micelio ha envejecido. Las principales
estructuras de conservacin son:
a) Esclerotes: son cuerpos duros formados por clulas isodiamtricas
fuertemente soldadas y recubiertas por una capa gruesa de
melanina, pueden permanecer en estado latente por mucho tiempo.

PRACTICA N 8
OBSERVACINES DE ESTRUCTURAS, MORFOLOGIA Y CLASIFICACION
DE HONGOS

2.

OBJETIVOS:
a. Determinar la morfologa de la bacteria, levaduras y hongos.

3.

MATERIALES:

Microscopio

Porta objetos

Cinta
transparente

Muestra: Hoja

Guantes

adhesiva

Mascarilla

Guardapolvo

4.

PROCEDIMIENTO:
Se procedi a recoger la muestra de hoja de Hojas de rboles
contaminadas o daadas.
Se coloc la cinta adhesiva en la muestra, para que se pueda adherir
la sustancia contaminante.
Se coloc la cinta adhesiva en el porta objeto, con una gota de agua.
Se llev la muestra del porta objeto al microscopio.

a. Observaciones Microscpicas:

1.

Observar las siguientes caractersticas de las bacterias:

Si la forma de una bacteria aislada depende de la rigidez de su
pared celular, la agrupacin depende de cmo se lleva a cabo
la fisin binaria de la clula y que las clulas descendientes
queden unidas o no. Son visualizables por microscopa y
corresponde a lo que realmente se entiende por agrupacin
bacteriana, es decir, la tendencia que presentan los distintos
tipos bacterianos para asociar las clulas del mismo tipo entres
formando grupos de 2 o ms bacterias. La agrupacin
microscpica es frecuentemente caracterstica de un mismo
grupo taxonmico, por ejemplo, de un gnero.
Es importante destacar que no todas las formas bacterianas
forman agrupaciones microscpicas. Por ejemplo, los espirilos
nunca se asocian mientras existen otras especies bacterianas
en las que su agrupacin es muy caracterstica y til a la hora
de establecer clasificaciones taxonmicas, siendo las formas
cocoideas las ms frecuentes en este sentido, y en menor
proporcin las formas bacilares.
Las formas cocoideas se pueden agrupar de la siguiente
forma:
Diplococos: cuando se divide la bacteria en un nico plano
permaneciendo las dos clulas hijas formando parejas.

 Estafilococos: la divisin tiene lugar en tres planos

diferentes sin tener necesariamente ninguna relacin
geomtrica entre ellos. Se forman racimos de cocos.

Ttradas: la bacteria se divide en dos planos

perpendiculares entre s formando grupos caractersticos
de 4 clulas situadas en un mismo plano.

Sarcinas: esta agrupacin se forma como consecuencia

de la divisin de la bacteria en tres planos perpendiculares
originando agrupaciones cuboidales en torno a 8 cocos o
ms.

Las agrupaciones bacilares son menos frecuentes pero en

ocasiones pueden aparecer como:

Diplobacilos: corresponde a dos bacilos unidos como
pareja y originado por la divisin en un nico plano
perpendicular al eje longitudinal del bacilo.

Estreptobacilos: agrupaciones de bacilos a modo de

cadena.

Formas irregulares: en ocasiones los bacilos pueden

agruparse en formas muy irregulares parecidas a letras
chinas.

2.

Observar las siguientes caractersticas de los hongos:

Forma, tamao y tipo de colonia:

b. Descripcin Macroscpicas:
Observar las siguientes caractersticas de los hongos:
o
Observar las siguientes caractersticas de las bacterias:
Estas agrupaciones son visualizadas a simple vista y
corresponden al crecimiento en un punto de una nica lnea
celular hasta formar una colonia (todas las clulas que
componen la colonia provienen de una nica clula). El cultivo
se realiza en un medio de cultivo slido para formar colonias
que sern distintas y caractersticas para cada tipo bacteriano;
el medio slido impide el posible movimiento de los individuos
de la colonia y favorece su agrupamiento. Para obtener

colonias bacterianas nunca se emplear directamente un

medio de cultivo lquido.
Estas colonias presentan una morfologa macroscpica
fcilmente reconocible y variable en funcin de:
Las caractersticas del medio de cultivo slido donde se
ha desarrollado la bacteria constituyen un criterio de gran
importancia a la hora de hacer una valoracin taxonmica
de la misma.
El tipo de bacteria problema: Las bacterias de mayor
movilidad presentan mayor tendencia a dar colonias
extendidas y planas frente a las que no presentan esta
caracterstica es importante considerar que un mismo tipo
de bacteria puede dar lugar a distintos tipos de colonias
dependiendo del medio de cultivo slido empleado, e
igualmente, distintos tipos bacterianos pueden crecer
formando colonias similares.
De cualquier forma la verificacin de las diferentes formas,
tamaos y aspectos de las colonias va a servir como: Un dato
ms en la tipificacin de la bacteria problema. Una medida de
control para una siembra correcta. Lo ideal es que las colonias
se encuentren ms separadas que juntas y que en el proceso
de la siembra no haya habido contaminacin. Y verificacin de
que el medio de cultivo no est contaminado.
Los medios slidos en los que se verifican las colonias pueden
ser en placa o en tubo con agar inclinado, y siempre,
sembrndolo por el sistema de estras.
o En placa, sembrndolo por estras: El tamao, forma y
aspecto de las colonias obtenidas por esta tcnica suele ser
bastante constante para cada gnero y especie bacteriana,
hecho que se puede utilizar como caracterstica diferencial.
Para ello debemos considerar los siguientes aspectos de las
colonias: tamao, forma, superficie, consistencia,
transparencia y coloracin y presencia o no de halos de
transparencia.
o Tamao de las colonias.
Tamao
pequeo:
colonias
puntiformes
con
aproximadamente 0,5 mm de dimetro o inferiores.
Tamao mediano: de 1 a 2 mm de dimetro.
Tamao grande: de 4 a 6 mm de dimetro.
Tamao muy grande: colonias extendidas en forma de velo
invadiendo toda la superficie del medio de cultivo.
o Forma de la colonia. Atiende a la forma, elevacin y borde
de la colonia. Segn la forma se dividen en puntiforme,
circular, rizoide, filamentosa, irregular y fusiforme.

Segn la elevacin: plana, convexa (semiconvexa),

cncava (semicncava), umbiculada, acuminada,
planoconvexa, papilada, en meseta, semiesfrica,
umbeliforme, elevada, etc

Segn los bordes: entero, lobulado, rizoide,

filamentoso, ondulado, aserrado, espiculado,
redondeado, etc
Superficie de la colonia. Corresponde al aspecto de
la
colonia.
Pueden
ser
lisas,
rugosas,
planas,acuminadas, umbilicadas, mucosas, secas,
etc. Es muy importante la diferenciacin entre
colonias lisas y rugosas, donde las segundas suelen
presentar
cpsulas
u
otros
componentes
superficiales que proporcionan un aspecto ms
compacto o rugoso, relacionando este tipo de
bacterias con una mayor virulencia, la cual se pierde
cuando la bacteria sufre un cambio de rugosa a lisa
(no obstante existen bastante excepciones en este
hecho).

PRACTICA N 9
REPIQUE DE COLONIAS Y CONSERVACION DE HONGOS
INTRODUCCION
El presente informe contiene toda la informacin concerniente a la prctica
realizada en el laboratorio de fitopatologa, poniendo como principal tema al
repique de colonias y purificacin de especies en hongos tales como; bauberia
vaciana, lecanicillum(verticillum lecani) y metarrizium. Con la nica finalidad de
obtener una especie pura para poder estudiarlo sin ningn tipo de
inconvenientes, estos repiques se realizan en medios de cultivos como; PDA,
OMA y AN (agar nutritivo) que sern explicados a continuacin.

OBJETIVOS
Objetivo general
Aprender el proceso adecuado para el repique de colonias y purificacin
de especies.
Objetivo especifico

Obtener especies pura de bauberia vaciana, lecaniillum (verticillum lecani)

y metarrizium.
REPIQUE DE COLONIAS Y PURIFICACION DE HONGOS
El repique de colonias es una tcnica que se viene utilizando desde hace
bastante tiempo dado que nos es de mucha utilidad en la obtencin de especies
puras de microorganismos y por ello en esta prctica se realiz lo siguiente.
RELACION DE MATERIALES
Equipos

Materiales

Cmara microboy

Placa Petri

Incubadora

Sacabocado
Mechero de alcohol
Asa de siembra
Para film
plumn

PROCEDIMIENTO
Pasos generales
Medio de cultivo: el medio de cultivo debe estar preparado para realizar el
repique.
Plaqueado:
Seleccin de muestra: se selecciona una muestra de un hongo del cual se va
a trabajar.
Repique: con ayuda del sacabocado y el aza de siembra de toma una colonia y
se traslada a un medio de cultivo estril.
Rotulado: se le cubre bien con l para film y luego se pone el nombre de la
especie fecha.
Incubado: se le coloca a la incubadora y se esperan determinado nmero de
das para que el hongo se desarrolle.

Para AN Metarrizium
a) El trabajo necesariamente tiene que realizarse en la cmara microboy con
un mechero encendido.
b) Se flamea el sacabocado cerca del fuego del mechero.

c) Se coloca el medio de cultivo estril donde se colocara la pequea

muestra.

d) Se introduce el sacabocado.

e) Se flamea el aza de siembra y se toma la muestra sealada.

f) Se coloca en el medio estril y se procede a rotularlo para ponerlo a la
incubadora.

Para NA Bauberia baciana

a) Se coloca los materiales dentro de la cmara de microboy.
b) Flamear el sacabocado en el fuego y dejar enfriar por un momento.

c) Luego se seala con el sacabocado la muestra.

d)
e) Con un aza de siembra se coloca la muestra en la placa de NA.

f) Rotular y colocarlo en la incubadora.

Para OMA Verticillum lecani

a) Los materiales deben estar libre de microbios o cualquier organismo.

b) Se flamea el sacabocado y se deja enfriar un poco.

c) Luego se pone el sacabocado sobre la muestra.

d) Se flamea el aza de siembra y se saca la pequea muestra para colocarlo
al medio de cultivo estril.

e) Se procede a rotularlo y colocarlo a la incubadora.

Habiendo realizado la practica con total cautela y siguiendo los pasos se

obtuvo una muy buena muestra pura de bauberia vaciana, verticillum
lecani y metarrizium.
Habiendo tenido la catedra de la docente ms la realizacin de la practica
en el laboratorio fue de mucho para que los estudiantes aprendan como
realizar un repique y purificacin de hongos.

PRACTICA N 11
METODO DE TAMIZADO Y DECANTACION DE COBB

OBJETIVO: Saber mtodos para observar nematodos

MATERIALES:
Dos ollas y dos baldes
Suelo
PROCEDIMENTO:
Tamiz
500 34

mermetidae longidoridae

350 45

longiduras xiphinema

175 80

Helycotylenchus

100 150

protylenchus

50 280

juveniles

Metodologa
El principio de este mtodo es hacer salir los juveniles (J2) que se encuentran
en estado dormante en los huevos dentro del quiste, mediante el estmulo del
exudado radicular que producen las plantas hospedantes. Los J2 al tener
contacto con el exudado radicular rompen la pared del huevo y salen del quiste.
La finalidad del mtodo es determinar el nmero de J2 viables por quiste o
extraer juveniles y usarlos en inoculaciones u otros estudios. Un mtodo prctico
de lograr la eclosin es el siguiente:
1. Coger un recipiente

2. mover con una esptula y dejar sedimentar

3. luego colocar el tamiz de 500 y debajo debe de haber un recipiente R2

4. luego de haber pesado todo descartar todo lo que queda en el tamiz y

trasferir de R2 al tamiz de 350 micras

5. colocar un recipiente de bajo y pasar todo lo que queda a una placa Petri.

6. luego observar con el estereoscopio.

7. y del R1 transvasar por el tamiz de 175 y observar y los que queda en el

tamiz de 100.

8. en el tamiz de 50 se observan juveniles.

BIBLIOGRAFIA

[Link]. 2011. (En lnea). Hunuco, PE. Consultado 14 de Mayo

2011. Disponible en [Link]
[Link]. 2011. (En lnea). Hunuco, PE. Consultado 11 de
Mayo
2011.
Disponible
en
[Link]

PRACTICA N 12
EL MTODO DE LA BANDEJA DE EXTRACCIN Y OXULADO.
Mtodo:
El Mtodo es muy importante asegurarse de que durante todo el proceso, todos
los recipientes utilizados para cada muestra estn etiquetados de forma correcta
y consistente durante todo el proceso ya que es muy fcil cometer
equivocaciones.
Las extracciones de suelo y races se deben etiquetar por separado.

Equipo o materiales
Una bandeja
Silicona o goma
Tubo de PVC
poyata de laboratorio amplia.

Procedimiento.
Para muestras de suelo:

Separar las races de las muestras y colocarlas aparte en otro plato.

Utilizar un tamiz de malla gruesa para eliminar las piedras y residuos
vegetales del suelo y deshacer los grumos o terrones de suelo.
En un recipiente de plstico mezclar muy bien la muestra de suelo.
Tomar una medida de suelo (p.e. 100 ml)
Poner la medida de suelo sobre el papel colocado sobre el tamiz. Es
importante que el suelo quede sobre el papel las salpicaduras de suelo
da lugar a extracciones sucias difciles de contar.
Aadir agua a las bandejas de extraccin despacio y con cuidado (entre
el borde de la malla y el lateral de la bandeja) y no al papel o suelo. Aadir
un volumen determinado de agua a cada bandeja para humedecer
el suelo o las races pero sin cubrirlo asegurndose de que hay suficiente
agua como para que no se seque la muestra.
Las muestras de suelo requieran mayor cantidad de agua que las de
races. Posteriormente, aadir ms agua si fuera necesario.
Dejar las bandejas de extraccin en reposo (preferentemente en la
oscuridad) por un periodo de tiempo determinado (48 horas si es posible)
y reponer el agua de las bandejas si hay posibilidad de que se sequen.
Los nematodos en el suelo o en el tejido vegetal se movern a travs del
suelo o tejido vegetal y pasarn al agua colocada en la bandeja/placa y
all se quedarn.
Despus del periodo de extraccin, levantar el tamiz que contiene el suelo
y dejar que el agua escurra sobre la bandeja de extraccin
Poner el tamiz aparte y tirar el tejido vegetal/suelo a la basura.
Verter el agua de la bandeja/plato en un vaso previamente etiquetado con
la ayuda de un frasco lavador para lavar la bandeja o plato.
Dejar que las muestras sedimenten).

Para contar los nematodos extrados, concentrar el volumen de la

suspensin vertiendo el agua cuidadosamente o sifonar el exceso de
agua (teniendo cuidado de no perder los nematodos depositados en el
sedimento), o bien, pasar la extraccin por un tamiz con luz de malla muy
pequea (p.e. 2030 m)
Lavar los nematodos retenidos en este tamiz y recogerlos en un vaso (o
tubo) para su recuento o conservacin si se van a enviar fuera o contar
ms tarde

Para muestras de races:

En ocasiones, las races se pueden separar en diferentes categoras,

como por ejemplo trozos de races gruesas y duras y races alimenticias
finas.
Es til extraer por separado los nematodos de cada categora de races
dado que la textura del tejido radical y el tipo de nematodos que las invade
puede variar, al igual que las densidades del nematodo en una y otra
categora. La eficiencia de la extraccin tambin puede variar puesto que
los nematodos que salen de las races ms gruesas tardarn ms tiempo
en hacerlo.
Golpear suavemente las races/tubrculos para eliminar el suelo adherido
a las mismas o enjuagarlas bajo el grifo de agua y despus eliminar el
exceso de agua colocndolas sobre papel absorbente. Pelar con cuidado
los tubrculos con un cuchillo o pelador de cocina quitando la piel o
cscara superficial. Cortar las races (o las cscaras de los tubrculos) en
trozos muy pequeos con la ayuda de un cuchillo o tijeras y colocarlas en
un cuenco o plato previamente etiquetado (Fig. 27, paso 1). Mezclar muy
bien todo el material cortado. Tomar y pesar una sub-muestra (p. e. 5 g)
del material cortado en una balanza.
Colocar la sub-muestra de races pesada sobre un papel absorbente
colocado sobre el tamiz situado sobre la bandeja previamente etiquetada
Continuar el procedimiento siguiendo los pasos indicados para la
extraccin de nematodos del suelo detallado anteriormente
Alternativamente, utilizar el mtodo de maceracin de las races para las
races ms gruesas y luego completar el procedimiento siguiendo los
pasos descritos para las bandejas de extraccin).
Si los nematodos se van a enviar fuera para su identificacin o recuento,
stos deben conservarse.

ANEXOS.
MUESTRAS DE SUELO