MARCO TEÓRICO.

La fluoresceína es una sustancia colorante orgánica hidrosoluble utilizada en

el examen de los vasos sanguíneos del ojo y en ciertas técnicas
odontológicas. Es, así mismo, un colorante indicador ftálico que aparece de
color amarillo-verde de la película lagrimal normal, y de color verde brillante
en un medio más alcalino, tal como el humor acuoso, y se usa
terapéuticamente como una ayuda para el diagnóstico de las lesiones
corneales y trauma corneal. Fue descubierta por el químico profesor y premio
Nobel de Química (1905) Johann Friedrich Wilhelm Adolf von Baeyer. La
fluoresceína es una sustancia de color amarillo-rojizo perteneciente al grupo
de las xantinas que produce un color fluorescente verde intenso en
soluciones alcalinas (con pH mayor a 7). Es un compuesto orgánico cuyo
esqueleto principal se conforma de 3 anillos aromáticos consecutivos, sin
embargo, a diferencia de otros compuestos orgánicos tienen una muy
importante propiedad, la fluorescencia. Cuando se expone a la luz, la
fluorescencia absorbe ciertas longitudes de onda y emite luz fluorescente de
longitud de onda larga.

Gracias a sus dobles enlaces conjugados, es capaz de captar un fotón de

alta energía y devolverlo como fotón de baja energía. La fluoresceína al ser
excitada por una luz de longitud de onda de aproximadamente 495 nm (azul)
emite una luz de color verde, cuya longitud de onda está alrededor de 530
nm.

Ilustración 1: Estructura de la fluoresceína.

Los factores que afectan la fluoresceína incluyen:

 Concentración de la sustancia;
 pH de la solución;
 Presencia de otras sustancias;
 Longitud de onda de la luz excitante.
A un pH de 8 (mayor alcalinidad), la fluoresceína alcanza su máxima
intensidad. (Fluoresceína, s. f.)

El cambio de color de la fluoresceína varía en medio ácido, básico y neutro,

esto debido a que uno de los factores que afecta la fluorescencia en una
sustancia es el cambio de pH. La presencia de grupos donadores de
electrones como −𝑁𝐻2 y − OH favorecen la fluorescencia, puesto que
aumentan la probabilidad de transición entre el estado singlete de menor
energía vibracional y el estado fundamental. La introducción de un átomo de
número atómico elevado en un sistema de electrones π suele aumentar la
fosforescencia, en detrimento de la fluorescencia. Los grupos aceptores de
electrones como −𝐶𝑂𝑂𝐻, −𝑁𝑂2 , 𝑁 = 𝑁, disminuyen y, en ocasiones, inhiben
la fluorescencia.

El espectro de fluorescencia de muchos compuestos aromáticos

conteniendo grupos funcionales ácidos o básicos, es sensible al pH. Los
cambios en la emisión de compuestos de este tipo provienen del número de
especies resonantes diferentes que están asociadas con las formas ácidas
o básicas de las moléculas. Así, por ejemplo, la anilina en medio neutro y
alcalino presenta fluorescencia en la región visible, pero dicha fluorescencia
desaparece en medio ácido. Otro cambio se da al reaccionar la fluoresceína
con 𝑁𝑎𝑂𝐻, produciendo un nuevo compuesto llamado uranina,
intensificando la fluorescencia de color amarillo-verdoso. ([PDF] Obtención
de Fluoresceína (1) -, s. f.)

La fluorescencia es un tipo particular de luminiscencia, que caracteriza a

algunos átomos o moléculas capaces de absorber energía (luz), en forma de
radiaciones electromagnéticas y luego emitir parte de esa energía en forma
de radiación electromagnética de longitud de onda diferente.

En general, las sustancias fluorescentes absorben

energía en forma de radiación electromagnética de
onda corta (radiación gamma, rayos X, U.V) y luego
la emiten nuevamente a una longitud de onda más
larga, por ejemplo, dentro del espectro visible. La
Ilustración 2: Diagrama del proceso
de la fluorescencia. fluorescencia tiene dos pasos, el primero la
excitación (Ex), el cual es la absorción de energía (luz) a una longitud de
onda determinada, seguido por la emisión (Em) de luz de corta duración a
una longitud de onda más larga.

La distancia entre los picos de excitación y de emisión se conoce como

desplazamiento de Stokes y depende del fluoróforo. La fluorescencia implica
una fuente de luz externa para excitar la muestra a una longitud de onda en
particular. Cuando se excita a la longitud de onda adecuada, la molécula
pasa de un estado basal o básico a otro excitado. A medida que la molécula
vuelve al estado fundamental se libera energía en forma de calor (pérdida de
energía) y luz a una longitud de onda diferente de menor energía.

Las sustancias que son capaces de emitir luz al ser excitadas por diferentes
tipos de radiación se denominan fluoróforos. Es posible obtener una amplia
variedad de colores por fluorescencia dependiendo de la longitud de onda
que emita el compuesto fluorescente. El fenómeno de la fluorescencia posee
numerosas aplicaciones prácticas, entre las que se encuentran, análisis en
mineralogía, gemología, sensores químicos (espectroscopía fluorescente)
 pigmentos y tintas, detectores biológicos y lámparas fluorescentes.
(Fluorescencia, s. f.)

Un fluoróforo, es un componente de una molécula que hace que esta sea

fluorescente. Es un grupo funcional de la molécula que absorberá energía
de una onda de longitud específica y la volverá a emitir en otra determinada
de mayor longitud de onda (es decir, con menor energía). La cantidad de
energía emitida y su longitud de onda dependen tanto del propio fluoróforo
como de su ambiente químico.

Cuando el fluoróforo vuelve a su estado inicial o basal se libera energía en

forma de fotón. Se pierde energía durante el proceso, siendo el fotón
eliminado por el fluoróforo de menor intensidad de la que es absorbida. Esta
propiedad es particularmente importante en el campo de la bioquímica y de
los estudios sobre proteínas, por ejemplo, en inmunofluorescencia e
inmunohistoquímica; o en el análisis de ADN, mediante la técnica de PCR
en tiempo real. («FLUORÓFOROS Y SUS APLICACIONES», 2017)

El xanteno es un compuesto orgánico

heterocíclico de color amarillo. Es
soluble en disolventes orgánicos
comunes, como el éter dietílico. El
Ilustración 3: Estructura del xanteno.
xanteno se utiliza como fungicida y
también es un intermedio útil en la síntesis orgánica.

Los derivados del xanteno son comúnmente referidos como xatenos, y entre
otros usos son la base de una clase de colorantes que incluye la
fluoresceína, eosinas y rodaminas. Los colorantes del xanteno tienden a ser
de amarillos fluorescentes, hasta rosa o azul. Muchos colorantes del xanteno
se pueden preparar por condensación de anhídrido ftálico con derivados de
resorcinol o 3-aminofenol. (hmong. wiki, s. f.)

¿Cuál es la diferencia entre la fluorescencia y la fosforescencia?

En la fosforescencia, la energía absorbida por la sustancia es liberada en forma de luminiscencia durante

un intervalo de tiempo mayor, que va desde los 0.000001 (10 E-6) segundos, hasta alguna horas. Es decir
que la diferencia entre la fluorescencia y la fosforescencia, es simplemente el tiempo que transcurre entre
la absorción y la emisión de la energía.

Algunas aplicaciones para las sustancias fosforescentes:

Viejas manecillas de relojes que quedan iluminadas en la oscuridad. Identificación de tumores para su
posterior extracción. Monitores de fósforo. Sistemas de iluminación de seguridad (salidas de emergencia).
Pulseras fosforescentes en conciertos.
Algunas aplicaciones para sustancias fluorescentes:

La aplicación más común de la fluorescencia es la del tubo fluorescente: una descarga eléctrica ioniza al
gas del interior del tubo (que generalmente contiene Argón o Neón, y Mercurio). El Mercurio se volatiliza,
y el gas del interior del tubo se convierte en conductor, lo que produce una circulación de corriente eléctrica
en su interior. Los electrones que circulan por el tubo, producen una luz ultravioleta al chocar con los
átomos de Mercurio. El tubo está revestido internamente por una capa fosforada, y al recibir la luz
ultravioleta producida por los átomos de Mercurio, produce la luminiscencia de longitud de onda visible.

Otras aplicaciones de la fluorescencia: en Química Analítica, se pueden detectar sustancias fluorescentes

que eluyen de un Cromatógrafo Líquido (HPLC): detectores de fluorescencia. En Medicina y Bioquímica,
se pueden "marcar" sustancias biológicas con un grupo químico fluorescente (un fluorocromo), mediante
una reacción química simple. De esa manera, por ejemplo, se los puede observar con un microscopio de
fluorescencia. También se puede detectar el ADN, y estudiarlo. Existen aplicaciones de la fluorescencia
para la detección del petróleo, ya que emite fluorescencia en el rango del marrón hasta el azulado, según
su composición. También hay aplicaciones para el estudio de solventes orgánicos que fluorescen.

MATERIALES Y REACTIVOS
Material Reactivos
Equipo en Micro escala. Resorcinol.

Vasos de precipitado de 100 Anhídrido ftálico.

ml

Pipetas de 1mL y de 10 mL Ácido Sulfúrico.

Parrilla de agitación y Hidróxido de sodio.

calentamiento

Termómetro. Ácido clorhídrico.

Vidrio de reloj Agua destilada

Embudo Buchner.

Matraz Kitasato.
 REFERENCIAS.

o Fluoresceína. (s. f.). Recuperado 28 de agosto de 2022, de

https://www.quimica.es/enciclopedia/Fluoresce%C3%ADna.html
o Fluorescencia. (s. f.). Molecular Devices. Recuperado 28 de agosto de 2022, de
https://www.moleculardevices.com/technology/fluorescence
o FLUORÓFOROS Y SUS APLICACIONES. (2017, abril 6). IBIAN Technologies.
https://www.ibiantech.com/fluoroforos-y-sus-aplicaciones/
o hmong.wiki. (s. f.). Xanteno Tintes de xantenoyOtras lecturas. Recuperado 28 de agosto de 2022,
de https://hmong.es/wiki/Xanthene
o [PDF] obtención de fluoresceína (1)—Free Download PDF. (s. f.). Recuperado 28 de agosto de
2022, de https://nanopdf.com/download/obtencion-de-fluoresceina-1_pdf