PROCESAMIENTO HISTOLÓGICO DE MUESTRAS BIOLÓGICAS

Es un proceso biológico para extraer un tejido de un órgano y podamos teñir

para ser observado al microscopio.

Para poder observar el tejido de una muestra biológica se necesita seguir un

procedimiento de cuatro pasos:

1.- Fijación

2.- Inclusión

3.- Corte

4.- Tinción

5.- Montaje

Fijación

Cuando un tejido se extrae del organismo de un animal o persona hay que

fijarlo para conservarlo en su estado natural para que no se produzca el
fenómeno de autolisis por lo cual hay que colocar al tejido extraído en unas
soluciones químicas que lo fijen manteniéndole con su estructura estable
por periodos de tiempo largos es decir por años, los fijadores más comunes
tenemos:

 El formol
 El líquido de Bouin
 Alcohol

Estos fijadores se utilizan de acuerdo al tejido del organismo que queramos

conservar porque no todos los organismos necesitan el mismo fijador.

Esperamos 24 horas para que la muestra del tejido se fije a su fijador sean
estos el formol, el líquido de Bouin, alcohol, etc.
Luego observamos cómo está la contextura del tejido al ser manteniendo en
estado natural por su fijador para poder ver este tejido posteriormente al
microscopio para esto tendremos que cortar el tejido a una medida de 4 micras
por lo cual debemos colocar este tejido en una estructura que le de
consistencia y que nos permita cortar con este espesor tan fino de 4 um y este
estructura es la parafina.

Inclusión

En esta etapa debemos colocar el tejido en un cassette, en este proceso

damos homogeneidad al tejido por medio de una sustancia la llamada
parafina pero el problema que tienen está sustancia es que es hidrófoba no
se mezcla con el agua por lo cual debemos quitar el agua que contiene el tejido
para esto realizamos los siguientes pasos:

1.- Deshidratación.- Es decir, que pasamos la muestra por alcoholes de

degradación crecientes eliminando el agua.

Colocamos el cassette que tiene la muestra de tejido que se encuentra en la

sustancia acuosa formol al Aparato de Deshidratación e Inclusión
2.- Luego esperamos 16 horas en el cual se elimina la cantidad de agua que ha
vía en el tejido

3.- Después colocamos el cassette que

contiene el tejido para que reciba un baño de parafina líquida a una
temperatura de 60°C.

4.- Esperamos una media hora y cogemos el cassette con

el tejido del Aparato de Baño de Parafina
5.- Luego sacamos el tejido fuera del cassette y cogemos un molde de metal y
lo llenamos con parafina liquida donde vamos a poner el tejido.

6.- Después ponemos una parte del cassette encima del molde

7.- Luego rellenamos todo con más parafina liquida y le colocamos en una
superficie fría a 4°C para obtener el molde de parafina que contiene el tejido
sujetado por el cassette.

8.- Entonces retiramos el molde de metal

en donde estaba el tejido con la parafina
9.- Finalmente observamos que tenemos un bloque de parafina con el tejido en
el medio y sostenido por el cassette.

Corte

En Este paso empezamos a realizar los cortes en bloque de parafina y para

eso utilizaremos dos aparatos El Baño de agua o de flotación y El
mircrotomo tipo minot.

1.- Colocamos el bloque de parafina en el porta bloque junto con la cuchilla en

el porta cuchillas del micrótomo

2.- Empezamos a realizar los

cortes del bloque de parafina en
donde se encuentra

impregnado nuestro tejido con el micrótomo.

3.- El tejido ya cortado por el micrótomo lo colocamos en el aparato de baño de
agua o flotación a una temperatura de 37°C

4.- Tomamos la muestra del tejido que quedó flotando en la superficie con el
portaobjetos y observamos como el corte del tejido esta transparente sobre el
portaobjetos y estos sobre el aparato de baño de agua o flotación.

5.-

Desparafinización.- Es eliminar la parafina de los tejidos para realizar el

proceso de tinción, para eliminar la parafina ingresamos los tejidos junto con
sus respectivos portaobjetos a una estufa con una temperatura de 60°C en
donde se derretirá la parafina para luego realizar el siguiente proceso que es la
tinción.
Tinción

En este proceso como su nombre lo dice tenemos que dar coloración a nuestro
tejido como lo hacemos de la siguiente manera:

1.- Sabemos que los colorantes son sustancias acuosas, pero habiendo
presencia aun de parafina en el tejido no se podrá teñir la muestra por esa
razón debemos eliminar este restante de parafina que se encuentra en nuestro
tejido para que pueda ser teñido en forma correcta.

2.- Eliminamos la parafina restante que se encuentra en nuestro tejido

realizando la Hidratación de los tejidos insertando los tejidos en cubetas de
alcoholes.

Los alcoholes en las cubetas deben estar en formas decrecientes es decir

colocadas de manera que la cubeta que tiene la mayor concentración de
alcohol este primero hasta llegar al de menor concentración es decir 70% al
10% de concentración de alcohol esto es para rehidratar el tejido para luego
ser teñido por los colorantes acuosos la hematoxilina y eosina.

3.- Obtenido la eliminación de la parafina por los alcoholes decrecientes

colocamos los tejidos con los respectivos portaobjetos para que se han
hidratados colocando las muestras de los tejidos en una cubeta de agua

4.- Luego nos dirigimos a colocar los tejidos con sus respectivos portasobjetos
a la cubeta en donde está la sustancia acuosa la hematoxilina dejándolos a
reposar por 5 minutos en la cubeta de hematoxilina para que se tiña de color
azul el núcleo de la célula del tejido.

5.- Luego pasamos a teñir los orgánulos o orgánelos citoplasmáticos (Las

mitocondrias, Los Ribosomas, Aparato de Golgi, Retículo Endoplasmático
Rugoso, Retículo Endoplasmático Liso, Los Lisosomas, etc.) de la célula
del tejido con la eosina durante 10 segundos tiñéndoles de color rojo.

6.- Luego los tejidos con sus respectivos portasobjetos teñidos pasamos a
colocarlos en una cubeta con agua para quitarles el restante de color rojo o
azul que esta alrededor de la placa portaobjetos.

7.- Pero para poder sellar la muestra con un cubreobjetos debemos llevar los
tejidos con sus respectivos portaobjetos otra vez al paso de deshidratación.

Montaje

Este paso consiste en

colocar o montar o
sellarle al tejido ya teñido con
un cubreobjetos previamente
esterilizado que es un pequeño cristal que cubrirá el tejido para esto debemos
usar un pegamento especial por ejemplo: Eukitt, Bálsamo de Canadá,
Permount, Entellán, etc. Y estará listo para ver al microscopio.
Nota: SE UTILLIZO UN ORGANO DEL APARATO O SISTEMA DIGESTIVO
PARA OBSERVAR SU TEJIDO INTESTINAL JUNTO CON SUS CELULAS
INTESTINALES.