FUNDAMENTO

El corte histolgico es la realizacin de delgadas secciones al tejido en bloque de parafina a

travs de un aparato conocido como micrtomo, las secciones son de espesor micromtrico
que hacen al tejido translucido y mejor observable al microscopio. Una delgada tira de parafina
que contiene la seccin del tejido debe ser colocada en un portaobjetos con una gota de agua
y calentado el portaobjetos, esto con el fin de que la parafina no se pliegue sino que se
extienda y adhiera al portaobjetos. La calidad de imagen en la observacin de un tejido al
microscopio no slo puede deberse a la fijacin o al mismo microscopio, sino tambin a la
calidad de corte realizado en el tejido, por eso es tan importante. Por lo general el siguiente
paso despus del corte en la tcnica histolgica es la tincin.
MATERIAL
Cassette con el bloque de parafina
Cubreobjetos
Portaobjetos
Micrtomo
Cuchillas
Bao de flotacin
Pincel del nmero 0
Papel peridico
Alcohol etlico
Sobre de papel
Plancha de enfriamiento
Plancha de calentamiento con termostato para fijar las preparaciones histolgicas
Horno o estufa para desparafinado
METODOLOGA
Un da antes colocar los cassettes encima de llelos y a su vez llelos encima del cassette, esto en
un recipiente, a su vez dentro de un congelador. El da de la prctica llevar los cassettes aun
dentro de los recipientes con los llelos, sacar los cassettes y ponerlos encima de la plancha de
enfriamiento, mientras esperamos que el agua del bao de flotacin caliente lo suficiente. Una
vez el bao de flotacin est listo, procedemos a realizar el corte en micrtomo
En el micrtomo retiramos el seguro de la manivela y tambin retiramos el seguro de donde
debe ir la cuchilla, para colocar la cuchilla y una vez hecho esto, volver a colocar el seguro.
Seleccionamos el grueso del corte a 5 micrmetros. Colocamos el cassette con bloque de
parafina en el portabloques, para esto antes quitamos el seguro correspondiente y despus
volvemos a poner. Adecuamos que tan hacia delante debe estar el portabloques para que est
cerca de 1 milimetro de la cuchilla. Despus empezamos a mover la manivela para desplazar
lentamente el portabloques, y al mismo tiempo hacemos presin sobre una pequea palanca
en el micrtomo que aumenta a 10 micrmetros el desplazamiento del portabloques por cada
giro de la manivela, diseado para aumentar el grosor del corte 10 micrmetros ms. Una vez
llega el punto donde empieza a cortar el bloque de parafina, dejamos de presionar la palanca
mencionada, pero seguimos moviendo la manivela. Esperamos hasta ver que las tiras de
parafina generadas se vuelvan bien rectangulares y contengan tejido histolgico en ellas, en

ese momento tomamos una muestra del corte ayudado de un pincel y de la punta de un dedo
en el otro extremo y colocamos en el bao de flotacin.
Una vez est el corte de parafina en el bao de flotacin, atrapamos el corte con un
portaobjetos, sumergindolo y sacndolo junto con este. El bao de flotacin tiene la funcin
de alisar el corte de parafina para quitarle la mayor parte de pliegues que presente y dejarlo
pegado al portaobjetos, otra opcin para esto es colocarlo inmediatamente en el portaobjetos
y hacer pasar un poco de alcohol etlico por entre el corte de parafina y el portaobjetos. El
papel peridico sirve para limpiar del bao de flotacin las muestras sin utilidad que quedaron
flotando. Luego le ponemos nuestras iniciales al portaobjetos con un lpiz punta de diamante y
lo dejamos en un lugar adecuado para que escurra el agua y/o el alcohol. Una vez tengamos el
corte de parafina en el portaobjetos casi seco, pero no completamente para que no se
despegue, lo pasamos a una plancha de calentamiento con termostato para fijar aun mejor el
corte, a 56-58 C. Luego pasamos el corte histolgico a un horno o estufa para desparafinarlo a
60C durante 30 minutos. Al final guardamos el portaobjetos con el corte histolgico presente
y su cubreobjetos en un sobre de papel.
PREGUNTAS DE EXAMEN
Qu funcin tiene la parafina?
La funcin de la parafina es ser un medio, que introducido en el tejido histolgico, se vuelva
suficientemente rgido como para permita hacer secciones muy finas
Qu tipo de cuchillas se utilizan para hacer cortes semifijos y ultrafinos?
Cuchillas de vidrio o cuchillas de diamante
Cmo se adhieren los cortes al portaobjetos?
Con una plancha de calentamiento a temperatura entre 56C y 58C
Cul es la importancia de realizar cortes histolgicos, en que lo aplicaras?
La importancia de realizar el corte histolgico es tener capas del tejido histolgico tan delgadas
que sean translcidas y adecuadas para ser observadas en un microscopio, entre ms delgadas
menor es la superposicin de clulas que se puedan observar en la muestra. Se puede aplicar
para el estudio de casi cualquier tejido animal o humano.
En qu situaciones est aconsejada la utilizacin del criostato o del micrtomo de
congelacin?
Cuando se requieran resultados inmediatos, pues est tcnica es mucho ms veloz, tambin
para inmunolocalizacin y ensayos enzimticos
Cmo se realiza la crioproteccin de la muestra? Qu estudios realizaras con cortes por
criostato?
Si el tejido muestra dao severo por congelacin, se incluye el crioprotector como el DMSO,
glicerol, PVP soluble, o hidroxietil almidn (HES). Los estudios que se pueden realizar con este

tipo de corte, son principalmente los de inmunolocalizacin, localizacin enzimtica y ensayos

enzimticos, como ya habamos mencionado.
Qu estudios realizaras con cortes por ultramicrtomo?
Todos los destinados a ser analizados por microscopio electrnico, es decir que necesitan de
una resolucin muchsimo mayor como para observar virus, organelos celulares, protenas,
macromolculas, incluso estructuras no biolgicas como las de nuevos materiales.
Que problemas tuvieron en realizar los cortes histolgicos en el laboratorio?
Observamos problemas en que el cassette fuese botado del portabloque, tambin observamos
plegamiento de las tiras de corte de la parafina que en algunos casos se pudo resolver en el
bao de flotacin o aplicando alcohol, en otros casos no se solucion y se tuvo que desechar,
tambin se observaron cortes que tenan rasguos, fracturas o agujeros. Tambin se observ
que la capa era tan delgada que muchas ocasiones se rompa generando pedazos flotando en
el bao de flotacin
En cuales de las siguientes tinciones o procesos deben de efectuarse cortes por congelacin
sin previa fijacin?
e) Todas menos C: Tincin rojo oleoso si, receptores tumorales si, preparaciones para
inmunofluorescencia si.
Si un bloque viene mal deshidratado Cul sera su conducta a seguir?
d) Solicitar la inclusin de ms tejido
Si un da X los tejidos salen mal procesados qu hara usted?
d) Revisa las soluciones del procesador y las reprocesa
Si a usted un da le dicen que sus cortes estn mal desparafinados, su conducta a seguir sera
la siguiente

Si un tejido le sale muy consistente Usted considera que se debe a?

a) Fue fijado con formol sin la dilucin adecuada
RESULTADOS
Obtuvimos el corte del tejido en su correspondiente portaobjetos. No tuvimos muchos
problemas, excepto que se tuvo que sacar varias muestras del corte de parafina antes de tener
la definitiva, porque tuvieron algn desperfecto, ya sea porque aun no contenan suficiente
tejido histolgico o porque aun presentaban pliegues, roturas o algn otro problema.