Modificaciones 

post‐
transcripcionales

Biología Molecular

Dra. Elena G. Orellano

2019

Contacto: orellano@gmail.com
Clase de consulta: Martes 16.30 hs

mRNAs  en Eucariotas y Procariotas

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Elongación: CTD de la  Una cola de poli‐A es adicionada al
RNA Pol II recluta las  extremo 3’ del mRNA
enzimas del capping

CTD recluta las enzimas de la 
poliadenilación: CPSF y CStF
Enzima poliA polimerasa usa ATP (sin 
molde)

Procesamiento del RNA
• Maduración de las moléculas de pre‐RNA.
• Ocurre en el núcleo
• Los intrones son cortados por enzimas del 
splicing y  los exones son luego unidos
• El producto final es un RNA maduro (mRNA) que 
deja el núcleo y se dirige al citoplasma
• In (intrón): Inside en el núcleo
• Ex (exon): Exit fuera del núcleo

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Gen de la ‐globina
Proteína de 147 aa

Posee:
3 exones
2 intrones
5´ UTR
3´ UTR

En el extremo 5´ :
7‐metylguanilate cap 
(m7Gppp)

En el extremo 3´ la cola 
de poly(A)

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 Splicing del RNA remueve intrones
• Exones – secuencias encontradas en el gen (DNA) y en el mRNA maduro
(regiones expresadas). Tamaño en humanos: más o menos 150 nt

• Intrones – secuencias encontradas en el DNA pero no en el mRNA (regiones

intervinientes). En general los intrones son mayores que los exones (hasta
800.000 nt)

• Algunos genes de eucariotas tienen muchos intrones (son mosaicos).

En levaduras generalmente : 1 intrón/gen

• Cantidad de intrones varía en gran medida: Titina (proteína del músculo)

posee 363 intrones, ‐ pro‐colágeno de pollo 50 intrones

• El pre‐mRNA puede ser muy largo. Distrofina humana 2.400 kb el DNA se

transcribe a 40 nt/seg (velocidad de la transcripción ).
Se necesitan 17 hs para producir un transcripto de este gen

Splicing ocurre en secuencias cortas 
conservadas

Secuencias consensos alrededor de los sitios  5 y 3 permiten el splicing

del pre‐mRNA en vertebrados

Punto de ramificación A está cerca del extremo 3 ´

sitio de empalme 5´ sitio de empalme 3´

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 El mecanismo de splicing del RNA elimina los intrones 
y une los exones adyacentes

Splicing procede vía 2 reacciones de trans‐esterificación 
secuenciales 
El OH 2´ de la A conservada
Empalme 5´ nt de G  actúa como nucleófilo y ataca el
conservado
grupo fosfato de la G conservada
en el sito de empalme 5´ y
desencadena la 1era reacción de
trans‐esterificación

Se rompe el enlace fosfodiéster entre la pentosa 
y el fosfato

El OH 3´ de la G conservada ataca
el grupo fosfato de la G
conservada en el sito de
empalme 3´ y desencadena la 2da
reacción de trans‐esterificación

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Dos reacciones de trans‐
esterificación: no hay 
ganancia neta de E Nucleófilo que ataca el grupo Pi del empalme 3´

Segunda reacción de trans‐esterificación

Punto de ramificación del lazo

Unión triple

Empalme trans o trans‐splicing
Infrecuente en eucariotas superiores
En protozoarios:
T. cruzi en casi todos sus mRNAs
C. elegans todos los mRNAs

Eliminación del intrón en forma de Y no lazo

Se produce entre 2 moléculas de mRNAs 
separadas que forman un mRNA único 
final

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 El empalme del RNA: complejo del espleisosoma

•150 proteínas + 5 RNAs pequeños nucleares  (U1‐U2‐U4‐U5‐U6)  snRNA 100 a 300 nt
forman complejos: snRNP ribonucleoproteínas nucleares pequeñas
•snRNPs cumplen 3 funciones en el empalme
•Requiere gasto de ATP
•snRNAs: localizan secuencias límite Exón‐Intrón y producen la catálisis

RNAs (snRNAs) pequeños nucleares asisten en la 
reacción de splicing

Figure 11-17

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RNA Splicing: Rearreglo I

RNA Splicing: Rearreglo II

Regiones del U2 y U6 forman el sitio activo: 
1 era reacción de trans‐esterificación
U5 contribuye a la 2da reacción de trans‐
esterificación: acerca los exones

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 snRNPs cumplen 3 funciones

•Reconocimiento del sitio de empalme 5´ y el sitio de

ramificación, acercamiento y catálisis
•Importante: interacciones RNA‐RNA; RNA RNA‐proteína; y
proteína‐proteína

También participan del empalme proteínas libres de RNA

•U2AF factor auxiliar del U2 que reconoce el segmento rico en
pirimidinas
•BBP proteína de unión al punto de ramificación
•Factores de apareamiento del RNA y helicasas

MECANISMO DE EMPALME

Complejo E

Complejo A

Partícula tri‐snRNP
Complejo B

reordenamiento
snRNP U1 reconoce el sitio de empalme 5´
Apareamientos U6‐U4, U5 laxo
Reordenamiento 
produce la  catálisis

Regiones del U2 y U6 forman el sitio activo: 
1 era reacción de trans‐esterificación Complejo C

U5 contribuye a la 2da reacción de trans‐ Produce el SA

esterificación: acerca los exones Sitio activo

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El ciclo del splicing del espleisosoma

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El espleisosoma es un complejo ribonucleoproteico 
compuesto de múltiples snRNPs

Figure 11-18

Tipos de intrones 

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 Cinco clases de intrones‐splicing: 
Trans splicing y splicing de los tRNAs

Intrones auto empalmables (autosplicing) en los grupos I y II
El intrón se pliega (conformación específica dentro del RNA precursor) y 
cataliza la química de su propia liberación‐ ribozimas
Intrones del grupo I (400‐1000nt) son más pequeños que los del grupo II
Exón promedio: 150nt   Intrón espleisosoma 3000nt

Receso de 
unión y seq. 
guía interna

Intrones del grupo I 
liberan un intrón lineal
Se requiere nucleósido de 
G libre

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El empalme es propenso a sufrir errores:
1) Sitios de empalme pueden saltearse
2) Reconocimiento por error de otros sitios
Exactitud de la selección se produce por:
1) Transporte del CTD de la RNA pol II de los factores de procesamiento (carga co‐
transcripcional disminuye mucho la probabilidad de que se salteen exones)
2) Proteínas SR (ricas en serina S y arginina R) se unen a potenciadores exónicos del empalme
(ESE) dentro de los exones y reclutan hacia los sitios de empalme cercanos a los factores de
empalme.
3) SRs reclutan a la proteína U2AF hacia el empalme 3´ y a la snRNP U1 hacia el sitio 5´.
Regulan también el empalme alternativo

RNA Splicing: Errores

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 Empalme alternativo

Genes de eucariotas superiores codifican RNA que pueden empalmarse de

modos diferentes, alternativos, para generar mRNAs diferentes y en
consecuencia polipéptidos diferentes.
Empalme alternativo puede ser constitutivo (siempre se genera más de un
producto a partir del gen transcripto) o regulado (se producen formas diferentes
en momentos diferentes o en células diferentes)

Empalme alternativo
Empalme alternativo es regulado por proteínas activadores y represores: SR y hnRNP
Éstas se unen a sitios específicos:
•Potenciadores exónicos (ESE) o intrónicos (ISE)
•Silenciadores exónicos (ESS) o intrónicos (ISS)
Los miembros de la familia hnRNP (ribo‐nucleoproteínas nucleares heterogéneas) 
reconocen silenciadores, pero no pueden reclutar la maquinaria de empalme

RNA Splicing: modelo 
tentativo del control del 
Splicing  

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 RNA Splicing: Isoformas

Un gen puede dar entonces por el proceso de splicing distintos

mRNA y cada mRNA dará lugar a una proteína
El 60% de los genes en el genoma humano se empalma de modo
alternativo

Mecanismos moleculares involucrados en el splicing alternativo de los pre‐mRNA.

Interplay entre proteínas ricas en serinas y argininas (SR) y los ESE (exonic splicing
enhancer) o los ISE (intronic splicing enhancer) fortalecen principalmente los sitios de
splicing.
En contraste, la unión de las proteínas hnRNPs a los ESS (exonic splicing silencer) o a los
ISS (intronic splicing silencer) ejerce un efecto diferencial sobre la utilización de los sitios
de splicing
ijms‐17‐02097‐Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 2097; doi:10.3390/ijms17122097

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Inhibición del empalme por hnRNP1. Dos modelos probables:
a) La proteína se une a cada extremo del exón y lo oculta dentro de un asa o bucle
b) La proteína cubre todo el exón

Bibliografía sugerida

‐ H. F. Lodish et al. Molecular Cell Biology 5th, 6th and 7th Ed., 

Freeman W.H. & Co, 2004, 2013. 7ma edición en castellano

‐ J.D. Watson, T.A. Baker, S.P. Bell, A. Gann, M. Levine, R. Losick. 
Molecular Biology of the Gene (5th; 7th Editions), Pearson 
Education Inc. as Benjamin Cummings, 2004. 

‐ Biología Molecular del Gen, 5ta edición y 7ma edición, en 
castellano.

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