FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGÍA MÉDICA

ÁREA DE LABORATORIO CLÍNICO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA
MICROBIOLOGÍA CLÍNICA Y SANITARIA

COLORACIONES EN
MICROBIOLOGÍA
Lic. T.M. César Ramirez Fontela

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 Coloración de Gram
• Paso I: Preparar el FROTIS, dejar secar

• Paso II: Aplicar la coloración primaria (cristal violeta) por un minuto.

• Paso III: luego lavar para eliminar el exceso de colorante

• Paso IV: Aplicar el agente fijante (solución yodada) por un minuto

• Paso V: lavado

• Paso VI: decoloración (alcohol acetona) durante 10 segundos, repetir

procedimiento si fuera necesario

• Paso VII: Lavar con agua para remover el exceso de alcohol-acetona

• Paso VIII: Cubrir el portaobjeto con la sustancia de contraste (safranina) por

30 segundos

• Paso IX: Lavar, secar y observar

Coloración Gram-Kopelov
• Es morfológica y
taxonómica.

• Colorantes:
 Violeta de Genciana.
 Solución de yodo.
 Bicarbonato de sodio.
 Alcohol acetona.
 Fucsina básica.

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 Coloración Gram-Kopelov
Procedimiento:

• Se realiza un frotis y se fija al calor.

• Se colorea con Violeta de Genciana
con 2 ó 3 gotas de bicarbonato de
sodio x 10’’.
• Se lava con agua de caño.
• Se coloca son solución de yodo x
10’’.
• Se lava.
• Se decolora con alcohol acetona x
Cocos Gram positivos en cadena 30’’.
• Se lava con agua de caño.
• Se colorea con fucsina básica x 10’’.
• Se lava y se seca.
• Se observa a 100x.

Coloración de Ziehl Neelsen (en caliente)

• Paso I: Preparar el FROTIS, dejar secar.

• Paso II: Se aplica el colorante primario ( Fucsina fenicada) sobre la muestra.

• Paso III: Se emplea la llama de un mechero para calentar la muestra hasta la

aparición de vapores blancos, se deja enfriar y repetir 2 veces más.

• Paso IV: Se lava con agua corriente.

• Paso V: decoloración (alcohol ácido) durante 10 segundos, repetir procedimiento

si fuera necesario.

• Paso VI: Se lava con agua corriente para remover el exceso de alcohol-ácido.

• Paso VII: Se aplica el colorante secundario ( azul de metileno) por 30 segundos.

• Paso VIII: Lavar, secar y observar.

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 Coloración Kinyoun (en frío)
• Se utiliza para:
Buscar bacterias y parásitos
ácido alcohol resistente.
• También se denomina:
Coloración de Ziehl Neelsen
modificado.
• Reactivos que utiliza:
Fucsina fenicada.
Alcohol ácido.
Azul de metileno.

Coloración Kinyoun (en frío)

Ooquiste Isospora belli.
Procedimiento en heces:
• Frotis de heces.
• Fijar con metanol o calor.
• Fucsina fenicada 10-15’.
• Lavar con agua.
• Decolorar con alcohol
ácido.
• Lavar con agua
• Azul de metileno 1’.
• Lavar, secar.
• Buscar parásitos
redondeados u ovalados de
color rojo.

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Ooquiste Criptosporidium sp. Ooquiste Cyclospora
cayetanensis.

Coloración Kinyoun (en frío)

Procedimiento en esputo:

• Frotis de esputo.
• Fijar con metanol o calor.
• Fucsina fenicada 10-15’.
• Lavar con agua.
• Decolorar con alcohol
ácido.
• Lavar con agua.
• Azul de metileno 1’.
• Buscar bacilos de color rojo.

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Cuantificación de Bk en esputo
• (1+): < 1 BAAR promedio por campo en
100 campos observados.

• (2+): 1-10 BAAR promedio por campo en

50 campos observados.

• (3+): >10 BAAR promedio por campo en

20 campos observados.

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Coloración de Esporas (endosporas)
• Preparar el FROTIS, dejar secar.
• Cubrir con solución de verde de malaquita.
• Se emplea la llama de un mechero para calentar
la muestra hasta la aparición de vapores
blancos, se deja enfriar y repetir 2 veces más.
• Se lava con agua corriente.
• Se aplica el colorante secundario (safranina )
por 30 segundos.
• Lavar, secar y observar.

Coloración de Esporas (endosporas)

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 Coloración de Gránulos
metacromáticos

• Preparar el FROTIS,
dejar secar.
• Cubrir con solución de
azul de metileno alcalina
de loeffer, dejar actuar de
3 a 5 minutos.
• Lavar, secar y observar.

Coloración de Vagó
• Se utiliza para:
Buscar espirilos o bacilos
curvados, como
Campylobacter en un frotis
de heces.
• Reactivos que Utiliza:
Mercuriocromo al 2%
(merthiolate coloreado) y
violeta de genciana.

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Coloración de Vagó
Procedimiento:

• Frotis de heces.
• Merthiolate coloreado x 3’.
• Se lava con agua.
• Violeta de Genciana la misma
del Gram x 3’.
• Se lava con agua y se seca.
• Se observa al microscopio a
100x.
• Se busca bacterias en forma de
C, S o gaviotas de color violeta.

Azul de Lactofenol

• Se utiliza para:
visualizar los hongos
provenientes de cultivos
para observar sus
estructuras.

• Es un solo colorante.
• Se realiza en un solo
paso.

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 Azul de Lactofenol
Procedimiento:

• 2 gotas de azul de
lactofenol.
Microconidias
• Agregar muestra,
mezclar y homogenizr
• Reposar 3 minutos.
• Se observa a 10x y 40x.

Tinta China (tinción negativa)

• Se utiliza para buscar:
Bacterias u hongos capsulados.

• De preferencia se utiliza para

buscar:
Criptococcus neoformans en
LCR.

• Tinta china da contraste a la

observación.

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 Tinta China (tinción negativa)
Procedimiento:
Levaduras capsuladas Criptococcus
• 2 gotas de tinta china neoformans.

• Agregar 1 gota de LCR,

mezclar y homogenizr
• Reposar 3 minutos.
• Se observa a 10x y 40x.

Coloración Giemsa
• Se utiliza para:
Buscar hongos en la
muestra.
• Se utiliza en muestras:
Respiratorias, tejidos,
médula ósea.
• Se puede utilizar:
Giemsa, Wright o Hifas de Aspergillus sp.
Leishman.

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 Coloración Giemsa
Procedimiento:

• Se hace un frotis.
• Se fija al calor.
• Se colorea con Giemsa x 5-10’
Levaduras Histoplasma capsulatum dependiendo de la antigüedad
del colorante.
• Se lava y se deja secar.
• Se observa a 100x.
• Se busca hifas, dicotomía de
hifas o levaduras.

Hifas de Rhizopus sp.

Test de Tzanck
• En pacientes que presentan lesiones por
Herpes virus, el tipo I, el tipo II, Varicela y
el Herpes Zoster.
• La lesión que presenta es una vesícula, con
contenido de liquido transparente.
• Cuando la vesícula se ha sobre infectado
está con pus y se denomina pustula.

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 Test de Tzanck
Lesiones Virus Herpes tipo I

Test de Tzanck
• Lesiones vesiculosas en genitales.
• Infección por Virus Herpes tipo 2.

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 Resumen de Lesiones Herpéticas

Test de Tzanck
• Hacer un raspado del fondo de
vesícula con hoja de bisturí.
• Depositar la muestra en láminas
portaobjetos.
• Fijar y colorear con Giemsa o
Wright o Leishman.
• Se observa al Microscopio 10x y
40x
• Se busca células epiteliales que
se agrupan formando una célula
gigante multinucleada.
• Se reporta Test de Tzanck
positivo.

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 Test de Tzanck Positivos.

Ulceras Genitales

• Las ulceras genitales son producidas por

enfermedades de transmisión sexual como
la Sífilis y el Chancroide.

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Lesiones Genitales en Sífilis.

Diagnóstico de Sífilis
• Se hace un raspado del
chancro duro.
• Se debe observar la muestra
en una lámina portaobjetos y
en microscopio de campo
oscuro.
• Dxco indirecto VDRL o RPR
si son reactivas confirmar con
FTA-abs o
Microhemaglutinación con
Treponema pallidum
(MHTP).

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 Lesiones en Chancroide

Diagnóstico de Chancroide

• Hacer un frotis de la
lesión y colorear con
Gram y observar bacilos
Gram negativos en forma
de cadenas.
• Cultivo en agar
chocolate, con los
requerimientos de
exigencia para el
crecimiento bacteriano.

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Terminamos por hoy……..

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