Tinción de Ziehl Neelsen

La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, para la identificación de microorganismos patógenos, por ejemplo M. tuberculosis. Fue descrita por primera vez por dos médicos alemanes, Franz Ziehl (1859 a 1926), un bacteriólogo y Friedrich Neelsen (1854 to 1894), un patólogo. 1.- Fundamento Este método se basa en que las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácido graso|ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan ácido-alcohol resistencia|bacilos ácido-alcohol resistentes o BAAR. Las Mycobacterium|micobacterias como Mycobacterium tuberculosis|M. tuberculosis y Mycobacterium marinum|M. marinum y los parásitos coco (bacteria)|coccídeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de ZiehlNeelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. 2.- Técnica Esta técnica puede realizarse tanto en muestras histológicas como citológicas. 2.1 - Variante histológica Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina. Los reactivos necesarios para su realización son los siguientes:  Ácido periódico 5%  Carbol fucsina de Ziehl (fucsina fenicada). Preparar mezclando en el orden dado: a) 0,5 g fucsina básica b) 50 cc agua destilada c) 5 cc etanol absoluto d) 2,5 g cristales de fenol derretidos  Hematoxilina  Alcohol ácido 1%: a) Alcohol de 70º b) Ácido clorhídrico El procedimiento es el siguiente: • Desparafinar e hidratar los cortes • Ácido periódico 5%, 10 min • Lavar con agua destilada • Fucsina fenicada, 15 min • Decolorar en alcohol ácido al 1% • Lavar con agua destilada • Hematoxilina, 10 min • Azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio • Deshidratar, aclarar y montar preparaciones

Lave suavemente de manera que el extendido no se barra del portaobjetos. II. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5 minutos. 5) Decolorar con alcohol-ácido. I. tal como alcohol ácido y manténgalo sobre el portaobjetos durante 3 minutos. Mantenga el calor durante este período. Coloque todos los portaobjetos orientados uniformemente. coloque cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire. con el frotis hacia arriba. 1) Hacer un frotis de la muestra de esputo. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua corriente fría hasta que toda la tinción libre quede lavada. 4) Calentar con un mechero hasta la emisión de vapores (3-5 minutos). II.2 . La fijación al calor asegurará de que el frotis quede adherido al portaobjetos. Núcleos: azul. 6) Aplicar azul de metileno (1 minuto). Nunca tiña más de 12 portaobjetos a la vez.3 . 2. II. el contenido del esputo que no son bacilos TBC puede permanecer teñido. durante 1 minuto. 2) Dejar el frotis sobre el puente de tinción. Ahora coloquele una pequeñita gota de aceite de inmersión y haga la observación al microscopio con 10 x 100 . 3) Aplicar fucsina-fenicada. No deje que hierva o se seque el colorante. 7) Enjuagar con agua I. Retire el exceso de agua. aplique una cantidad adicional de la solución decolorante de 1 a 3 minutos. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y tiña la pared celular de la bacteria. Aplique la solución de contraste.Variante clásica o "en caliente" Ésta y la siguiente variantes son para preparaciones citológicas. I. Cubra cada portaobjetos con la solución decolorante. Si no se decolora suficientemente. Finalmente. Un frotis muy delgado puede darle resultados falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del portaobjetos durante la tinción. coloque los portaobjetos en una gradilla de tinción con los extendidos hacia arriba. Si los portaobjetos aún están rosa.Resultados BAAR: rojo. I. III. Utilizando pinzas.2. Enjuague con agua una vez más los portaobjetos y quite el exceso de agua. azul de metileno. III.

Nocardia y Actinomices: débilmente ácido-alcohol resistente.2. o Lavar con agua del grifo.5 . o Aplicar fucsina-fenicada (solución con fenol y mayor concentración de fucsina).4 . . o Decolorar con alcohol acido. Parásitos coccídeos (Cryptosporidium) de muestras [fecales]. o Dejarlo en el puente de tinción.En "frío" o Hacer un frotis.Algunos microorganismos ácido-alcohol resistentes Mycobacterium: fuertemente ácido-alcohol resistente. o Dejar en vasos coplin durante 20 minutos. o Contrastar con azul de metileno 2.

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