Tinción de Ziehl Neelsen

La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, para la identificación de microorganismos patógenos, por ejemplo M. tuberculosis. Fue descrita por primera vez por dos médicos alemanes, Franz Ziehl (1859 a 1926), un bacteriólogo y Friedrich Neelsen (1854 to 1894), un patólogo. 1.- Fundamento Este método se basa en que las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias contienen ácido graso|ácidos grasos (por ejemplo, el ácido micólico) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan ácido-alcohol resistencia|bacilos ácido-alcohol resistentes o BAAR. Las Mycobacterium|micobacterias como Mycobacterium tuberculosis|M. tuberculosis y Mycobacterium marinum|M. marinum y los parásitos coco (bacteria)|coccídeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de ZiehlNeelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. 2.- Técnica Esta técnica puede realizarse tanto en muestras histológicas como citológicas. 2.1 - Variante histológica Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina. Los reactivos necesarios para su realización son los siguientes:  Ácido periódico 5%  Carbol fucsina de Ziehl (fucsina fenicada). Preparar mezclando en el orden dado: a) 0,5 g fucsina básica b) 50 cc agua destilada c) 5 cc etanol absoluto d) 2,5 g cristales de fenol derretidos  Hematoxilina  Alcohol ácido 1%: a) Alcohol de 70º b) Ácido clorhídrico El procedimiento es el siguiente: • Desparafinar e hidratar los cortes • Ácido periódico 5%, 10 min • Lavar con agua destilada • Fucsina fenicada, 15 min • Decolorar en alcohol ácido al 1% • Lavar con agua destilada • Hematoxilina, 10 min • Azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio • Deshidratar, aclarar y montar preparaciones

Si no se decolora suficientemente. Nunca tiña más de 12 portaobjetos a la vez. Aplique la solución de contraste. Finalmente. II. II. el contenido del esputo que no son bacilos TBC puede permanecer teñido. Retire el exceso de agua. 1) Hacer un frotis de la muestra de esputo. aplique una cantidad adicional de la solución decolorante de 1 a 3 minutos. Si los portaobjetos aún están rosa. 6) Aplicar azul de metileno (1 minuto). 3) Aplicar fucsina-fenicada. III. 4) Calentar con un mechero hasta la emisión de vapores (3-5 minutos). 2) Dejar el frotis sobre el puente de tinción. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5 minutos. Enjuague con agua una vez más los portaobjetos y quite el exceso de agua.3 . Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Mantenga el calor durante este período. coloque cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire. 7) Enjuagar con agua I. I. Utilizando pinzas. azul de metileno.Resultados BAAR: rojo. con el frotis hacia arriba. III. tal como alcohol ácido y manténgalo sobre el portaobjetos durante 3 minutos.2 . I.2. Un frotis muy delgado puede darle resultados falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse del portaobjetos durante la tinción.Variante clásica o "en caliente" Ésta y la siguiente variantes son para preparaciones citológicas. 5) Decolorar con alcohol-ácido. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada penetre y tiña la pared celular de la bacteria. Coloque todos los portaobjetos orientados uniformemente. I. Lave suavemente de manera que el extendido no se barra del portaobjetos. II. La fijación al calor asegurará de que el frotis quede adherido al portaobjetos. Ahora coloquele una pequeñita gota de aceite de inmersión y haga la observación al microscopio con 10 x 100 . 2. No deje que hierva o se seque el colorante. Núcleos: azul. durante 1 minuto. Cubra cada portaobjetos con la solución decolorante. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua corriente fría hasta que toda la tinción libre quede lavada. coloque los portaobjetos en una gradilla de tinción con los extendidos hacia arriba.

.2. o Aplicar fucsina-fenicada (solución con fenol y mayor concentración de fucsina).4 . Parásitos coccídeos (Cryptosporidium) de muestras [fecales]. o Lavar con agua del grifo. o Dejarlo en el puente de tinción. o Decolorar con alcohol acido.En "frío" o Hacer un frotis. o Dejar en vasos coplin durante 20 minutos.5 . Nocardia y Actinomices: débilmente ácido-alcohol resistente. o Contrastar con azul de metileno 2.Algunos microorganismos ácido-alcohol resistentes Mycobacterium: fuertemente ácido-alcohol resistente.

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