acta

científica
ASOCIACION
venezolana AVANCE DE LA CIENCIA
iN v tsriC íC fO N is c i£ i*tiM tís

V O L U M E N S n □ N U M E R O S □ 1970
COMUNICACIONES en que se halla la Hem oglobina tipo
met. en solución en presencia del
À cta d e n t . Venezolana 21: 48-53, 1970. ion Cu ( I I ) . Los protones de la H b
no pueden ser observados debido a
su enorm e núm ero y al consecuente
ensancham iento de la línea de ab­
Estudio de la Relajación Protónica sorción producido por las interaccio­
nes m agnéticas entre los mismos.
en el Sistema Acuoso: P ara este fin se ha utilizado el
espectróm etro de resonancia nuclear
Hemoglobina Cu (II) V A RIA N A-60 con el dispositivo d e _
tem peratura variable. Las m u e s t r a s |
exam inadas fueron de cuatro tip o s:
J. G a l l in a r y G. B e m s k y a ) Hb en solución en presencia d e .
Cu ( I I ) : b ) Hb en solución; c ) f
Cu ( I I ) en form a de C uCli acuoso;!
d ) agua bidestilada. Los dos ú ltim o s'
RESU M EN tipos operan a m anera de controles
Hemos estudiado los tiem pos de relajación protónicos de soluciones acuosas a los cuales referir las medidas ob -1
del complejo Hb m et-C u (II) con un ion C u (II) por molécula de H b en pH 7. Los tenidas en los dos prim eros casos.
tiem pos de relajación han sido determ inados en un ran g o de te m p eratu ra s en tre
280°K y 310°K, en el cual el proceso de intercam bio rápido se h alla dominado por La Hb utilizada es de procedencia'
el tiem po de relajación en la esfe ra de coordinación del ion. El tiempo de co rre­ hum ana, y luego de su separación
lación dipolar T c está determ inado por el tiempo de relajación ro ta c io n ^ t „ cuya del resto de las células rojas san­
energía de activación vale E ,~ 9 Kcal/m ol. La m ag n itu d del cociente Ei>1 parece guíneas ha sido convertida a la for­
indicativa de una lig ad u ra débil del C u (II) a la H b-m et, la cual desplaza no m ás
de dos moléculas de ag u a alrededor del mismo ion. ma m et., por medio de un proce­
dim iento en el que se expone la so­
lución de Hb extraída, a un exceso
P R O T O N R E L A X A T I O N OF W A T E R S O L U T I O N S OF T H E de K( CN )Fe^+, tal que la relación
M E T - H E MO GL OB IN - C t i ( II ) C O M P L E X
entre el cianuro y la proteína sea
A B ST R A C T de tres a uno respectivam ente. Esto
We have studied the proton relaxation tim es of aqueous solutions of the hace que el Fe de la H b se oxigene
(m e t-H b )-C u (II) complex w ith one C u (II) ion p er molecule a t pH7. The rela x ­ a la form a Fe ( I I I ) , pasándose en­
ation ra te s have been determ ined fo r tem p eratu res between 280°K and 310°K tonces la solución por una colum na
and a re indicative of a f a s t exchange process dom inated by the relaxation tim e de Sephadex-25 para separar al cia­
in th e coordination sphere of the ion. The dipolar correlation tim e Tc is de­
term ined by the rotatio n al relaxation Tr- whose activation energy is ^ o u n d to nuro de hierro de la proteína.
be E ,~ 9 K cal/m ol. The m agnitude of the longitudinal enchancem ent £,>1 points Se obtiene así una m uestra de Hb
to a w eak binding of C u (II) to m et-H b in which no m ore th an two hydration-w a- met. en solución acuosa, de concen­
te r molecules around C u (II) have been replaced by m et-H b ligands.
tración 86 mg m i en nuestro caso, a
la cual se puede posteriorm ente aña­
INTRODUCCION quím ica, hasta las técnicas físico-quí- dir el Cu ( I I ) mezclándola con una
micas de la resonancia m agnética. solución acuosa de CuCl 2 en tal pro­
El papel biológico que desem peñan E l presente estudio utiliza la téc­ porción que haya u n ion Cu ( I I )
los m etales ligados a m acrom oléculas nica de la resonancia m agnética n u ­ por m olécula de Hemoglobina.
no ha sido hasta ahora com pletam en­ clear R M N de los protones H ‘ de las La razón por la cual se utiliza Hb
te aclarado. Se sabe, por ejem plo, m oléculas de agua en que la H b se tipo m et. reside en el estado eléc­
que en el caso de los ácidos n u ­ halla en solución; tratándose de e lu ­ trico del hierro que la compone. Con
cleicos, cuya im portancia vital es de cidar la ligadura del ion param agnè­ o sin Cu ( I I ) , el hierro se halla en
todos conocida, se en cu en tran siem ­ tico Cu ( I I ) a la m olécula de Hb. el estado férrico Fe ( I I I ) en Hb met.,
pre presentes m vivo en cantidades E n este caso, el ion Cu ( I I ) no m ientras que en oxi o deoxi Hb, el
m uy bien delim itadas u n a variedad desem peña u n papel biológico, ya hierro que norm alm ente se encuen­
de m etales de transición; sospechán­ que es añadido artificialm ente a la tra como Fe ( I I ) se transform a en
dose, por tanto, que al m enos algunos Hb a m anera de m arcador, para pro­ Fe ( I I I ) al añ ad ir el Cu ( I I ) . Es,
de entre ellos han de desem peñar u n porcionar inform ación, por ejem plo, pues, aconsejable evitar este cambio
acerca de im portante problemas coo­ de carga del hierro, ya que de otro
im portante papel en problem as con-
perativos exhibidos por dicha mo­ modo no se podría correlacionar con­
form acionales y en la estabilidad de
lécula de proteína. Se trata tam bién venientem ente los resultados para la
ciertas form as de los mismos ácidos Hb con los del com plejo Hb-Cu ( I I ) -
aquí de obtener inform ación sobre la
nucleicos.
localización del Cu ( II ) en la m o­ Se sabe fin a lm e n te ' que la molé­
Se h a n originado así diversos es­ lécula y poder así com parar entre cula de Hb acepta un máximo de
tudios de la ligadura de dichos m e­ sí los resultados del presente estudio dos iones de Cu ( I I ) sin precipitar
tales ( en especial si form an iones RM N con los de la resonancia para­ y que el com plejo H b - f C u ( I I ) tar­
param agnéticos) a las m acrom olécu­ m agnètica R P E del Cu ( I I ) en H b. da sólo algunos segundos en f o r m a r s e
las biológicas usuales. P a ra realizar Parte Experimental a tem peratura am biente.
dichos estudios se utilizan técnicas El m étodo experim ental utilizado Los parám etros principales que se
que van desde las usuales en bio­ es el R M N de los protones del agua pueden así obtener de la señal d®

48
 absorción de los protones del agua
son :
1 ) el ancho de la línea de absor­
ción 5w.
2 ) el corrim iento Au> de la posición
de la línea de absorción, debido
a la influencia del ion param ag­
netico, con respecto a la posición
m edida en ausencia del mismo.
3 ) el tiem po de relajación lo n g itu ­
dinal Ti, cuya m edida se obtiene
a p a rtir de la saturación de la
absorción, en función del au m en ­
to del campo oscilante por enci­
m a de u n valor crítico. La pre­
cisión de esta m edida es inferior
a la de 5o) o de Au).
Se puede, asimismo, m edir los pa­
rám etros anteriores en función de la
tem peratu ra, aunque el rango de va­
riación de la m ism a en tre 4°C y
39°C (ap ro x im ad am en te) se halla
severam ente lim itado por depender
de la estabilidad biológica de Hb.
Parte Teórica
Se sabe que los protones H ‘ de
las m oléculas de agua, presentes en
una solución acuosa, experim entan
el fenóm eno de la resonancia m ag­
nética. Esta resonancia consiste en
la absorción de energía proveniente
de un cam po m agnético oscilante Hi,
cuya frecuencia se halla alrededor
de la frecuencia n atu ral ( frecuencia
de L arm o r) de precesión ioi = y i H o
de los protones ( y i es la constante
girom agnètica para los protones del
a g u a ); todo esto bajo la presencia de
u n fuerte campo m agnético H q ho­
mogéneo y constante.
Esta resonancia se exhibe como
un a curva de absorción; cuya form a,
saturación y corrim iento h an de ser
teóricam ente predecibles.
F IG U R A 1: D e p e n d e n c ia d e l In verso d e l tie m p o de r e la ja c ió n p r o tó n ic o T - ' 2 p en m e t-H e m o -
g lo b ln a en fu n c ió n de la c o n c e n tr a c ió n d e l C u (" ) . p h = 7 ,l, c o n c e n tr a c ió n de H e m o g lo b in a
S 6 /m l. T = 2 9 8 “K .
La presencia del campo Ho es esen­
cial. ya que, al levantar la degene­
ración de los niveles de energía con
respecto a la orientación espacial del
espín protónico, establece una des­
igual distribución de dichos niveles
—-de acuerdo a la estadística de Boltz-
m ann— , haciendo que los niveles
de m enor energía estén más poblados
que los niveles superiores. Al cum ­
plirse esta condición es posible una
absorción neta de energía; aun cuan­
do sean en realidad iguales entre sí
las probabilidades de em isión y de
absorción de la energía electrom ag­
nética incidente, por parte del sis­
tem a protónico.
Ahora bien, si el sistema protó­
nico sólo absorbiese energía su tem ­
peratu ra au m entaría con el tiem po
y la distribución dejaría en reali­
dad de ser boltzm anniana; al ocu­
rrir esto e igualarse las poblacio­
nes de los niveles consecutivos, ce-
sería necesariam ente la absorción y
desaparecería la curva de resonancia.
Entonces es claro que una absorción
continua es posible, ya que el siste­
ma de protones no se halla aislado
del resto de la solución, sino que
a través de interacciones principal­
m ente m agnéticas es establecido un
contacto térm ico entre ambos, que
constantem ente restituye la distribu­
ción boltzm anniana y por consiguien­
te la absorción neta de energía.
Esta vuelta constante al equilibrio
térm ico está caracterizada por u n
tiem po, llam ado “ Tiem po Ti de Re­
lajación Espín-R ed” , que se dem ues­
tra es el tiem po de relajación del
decaim iento de la magnetización pro­
tónica hacia su valor de equilibrio
térm ico en presencia de Ho.
P or otra parte, entre los mismos
protones existen interacciones que
provocan inhom ogeneidades locales
del campo m agnético, haciendo que
no se cum pla exactam ente la con­
dición de resonancia (»íi = Yi H o y que
exista una dispersión de frecuencias
Seo, o ancho de línea alrededor de oJi.
Asociado a esta dispersión se de­
fine el “ Tiem po T 2 de Relajación
Espín-Espín” T 2 = í(S w )“ ' o tiempo
en que, debido a las fluctuaciones
originadas entre sí por los espines
que preceden bajo Hq, las com ponen­
tes transversales de la magnetización
decaen hacia cero.
Por medio de los dos parám etros
T | y T 2 se pueden evidenciar las ca­
racterísticas del sistema Hb-Cu ( H ) ,
ya que estos tiempos dependen de
las interacciones m agnéticas que exis­
ten entre los espines de los protones
y los espines de los iones param ag­
néticos que form an complejos con
las macrom oléculas. Estas interaccio­
nes dependen a su vez de la geome­
tría del complejo Hb-Cu ( H ) , pu­
diéndose así deducir varias inform a­
ciones de interés acerca de éste.
Es lógico pensar, por ejem plo, que
el protón se verá m ás o menos in ­
fluenciando por el ion, dependiendo
de su distancia recíproca, la cual a
su vez dependerá de la localización
del mismo en la m olécula de Hb.
Se im aginan así dos regiones rela­
tivam ente definidas en las que se
puede hallar el protón con respecto
al io n ; a ) cerca del m ism o, en una
esfera de coordinación centrada en
él y en la que efectivam ente ínter-
actúan; b ) fuera de dicha esfera, ac­
tuando el protón independientem ente
de la influencia del ion. A menos
de una concentración excesiva de
Cu ( I I ) , el núm ero de protones en
b ) será el predom inante.
Definiremos a continuación varios
parám etros que se presentan en el
estudio de la interacción protón-ion.
En prim er lugar, las frecuencias de
Larm or del protón serán diferentes
en a ) y en b ) ; designarem os por
AWai dicha diferencia. Asimismo,
debido a la agitación térm ica, el pro­
tón alterna su posición entre b ) y a ),
jerm aneciendo en este últim o am-
jíente un cierto tiem po promedio
que designamos porxa y que da una
idea de la rapidez del intercam bio.
Existirán asim ism o u n “ Tiem po
de Relajación Espín-E spín” en el me­
dio a ) , así como el correspondiente
tiem po T 2b en el m edio b ) , cuyo
conocimiento es equivalente al ancho
49
de la línea medido en ausencia del donde <p y 6 son los ángnlos azim utal
ion param agnetico. y polar, respectivam ente, entre el vec­
E n estas condiciones ha sido de­ tor ion-protón y el campo H q.
m ostrado que : ^ P ara calcular el tiem po Tía se u ti­
liza la expresión en prim er orden de
V ^2a('^o/í’2a+ 1 ) + AlO^ai Ta la probabilidad de transición por u n i­
r -2»s ( 1)
(T a /r2 a + l)H T -a A W ^ dad de tiem po entre estados de espín :
W ,„ .
donde / representa la concentración
de protones asociados al ion, y se
tiene / = p [ C u ’*] [H 2O] ; p es el n ú ­
m ero de moléculas de agua (n ú m e ­
ro de coordinación) que se ligan al
ion param agnético, form ando con el Se dem uestra, finalm ente, que no existe interferencia entre las dos in te r­
Cu ( I I ) u n com plejo octahédrico de acciones que form an la perturbación, pudiendo escribirse
seis aguas de hidratación. El térm i­
no y j* —TjjJ representa la contribu­
ción de los iones a la relajación pro­ s (s + i)/iV /V
r-^‘= ( r ¿ > ) „ , + ( T - > ) , , = X 5 [4 +
tónica, por ser esencialm ente la di­
ferencia de los anchos de línea me­
didos en presencia y en ausencia del
ion, respectivam ente. E l tiem po T 2a -+
se calcula de una m anera explícita l + (w /-w .,)^ T,,'
considerando el sistem a form ado por
los dos esp in es: nuclear y electró­
nico, en presencia de interacciones
m utuas y del campo m agnético ex­ + -]x . (2 )
terno. El H am iltoniano del sistema 1 + ( CO/ + U)j )^ t / 1 + ( (jJ/ — Oüs )^
protón-ion generalm ente se escribe
co m o ;
H = / / „ - /lY/Z/o/z - h y s H S z + H donde S es el espín del ion param agnético, valiendo S = V2 para el Cu ( I I ) ,
cos es la frecuencia de L arm or del ion y Te son los tiem pos de correlación
donde 11^ es el H am iltoniano espacial
de las interacciones dipolar y de intercam bio respectivam ente. Estos son los
y H ' representa la perturbación, o
tiempos de relajación de las funciones de correlación de cada una de las in te r­
sea la interacción entre los dos tipos
acciones, las cuales se supone que fluctúan al azar.
de espines; el resto del H am iltoniano
representa el efecto Z eem ann. Es de A nálogam ente, si denotamos por Tía, Tih los correspondientes tiempos
hacer notar que se desprecia la ac­ longitudinales en a ) y b ) , se tie n e :
ción del campo oscilante frente al
campo estático Hg. La perturbación
H ’ se escribe a s í : ^

h^yiys
H' = [ 3 ( / . r ) ( S . r ) - I ■S ] + A I ■S T-i. y - l_J«-!_ f
'' ip- i ^ í b —~ (3 )
T u + Xa
el p rim er térm ino es la interacción
dipolar protón-ion y el segundo la
interacción de intercam bio; el factor
A es proporcional a la probabilidad
de encontrar el electrón param agné­ y Tf* — representa de nuevo la
tico en el protón y recibe el nom bre contribución del ion a la relajación
de constante de intercam bio. del protón.*
La perturbación H ' se descompone
La ecuación ( 2 ) , así como la
por com odidad en arm ónicos esféri­
cos con elementos de m atriz fácilm en­ correspondiente expresión'* para
te calculables, resultando : ^ (q u e no hemos escrito) pueden ser
sim plificadas en nuestro caso, ya que
a tem peratura am biente nos hallam os
H' = - [ /zS z- V4 ( /+ S _ -f / . S J ] ( 3 cos^ I ' - 1 ) + en la aproxim ación de altas frecuen­
cias en que
^[J"+Sz + /zS+] sen 0 eos 0 c''¡’+ ^ [ /_ S z + /zS _] sen 0 eos 0 e-''?

+ % /+S+ sen^ 0 sen' 0

+ ^ [ / z S z + V 2 ( / .S _ + /_ S ^ ) ]

( R e f .3 )

50
 (WjTc)^»l, (w,Te)'»l, (C0/Tc)k<l, W,«W. Tj, Tr, son ios tiem pos de correla­
ción del espín electrónico del Cu ( I I )
Con estas condiciones, las ecuaciones para T^a-, Tía se reducen a la form a
sig u ie n te : ■* y de la esfera de hidratación alre­
dedor del ion respectivam ente, que
T-' = 'S ('S + l)fe^ ju n to con Ta representan posibles me­
(4) canismos de interrupción de la corre­
r“
lación; de aquí que el m ás corto de
S{S+ l)h^y,^y/ entre los tres sea el que controle el
^6 ■Tc (5) mecanismo de relajación.
La expresión para Te no contiene
Asimismo, para el corrim iento Aw se encuentra la expresión' *
el tiempo ir, ya que la interacción
^lOah AI.S, a la que Te se halla asociado,
Aoj = /- (6) es esféricam ente invariante.
( Tfl/ T2a + 1 ) ' + t / a w'ai
A hora bien, como Tj <K Ta para
S (S + 1 ) Cu ( I I ) a tem peratura am biente, ten­
AWai = ^ / / l ( -) to. (7)
3 kT dremos Tc= Tj = 4 . 10"'® sec.’
Se tienen, pues, expresadas las can­ Veamos ahora que podemos calcu­
tidades m edibles T¡, Ti , Aw en fu n ­ lar Te*- Si dividim os ( 1 ) por ( 6 )
ción de parám etros microscópicos T\ai utilizam os ( 7 ) y ponemos ^ / h = xlO*
Tía, Ta, Tc, T„ AWafc, e tc . . ., que cps, reordenando resulta :
pueden así ser deducidos a p a rtir de
m edidas experim entales. S (S + I) S{S+1)
{ [- 4 ti' 10" T e * ] .t '- [( T - V A u )* 2ti /«o. -]x +
Si designam os c o n /sin asterisco las 3 kT
m agnitudes m edidas en presencia de s ( s + i ) f e 'r ; 'Y , '
H b /c n ausencia de Hb, y form am os + ^5- =} <0
r'
el cociente
de aquí se deduce que
e¡=-
ri-;* Aw,
tendrem os utilizando ( 3 ) que
2 t z Aw* Te* k T
/ * ( r ,„ + T .) Reordenando ( 6 ) se tiene
ei = -
( l/r^2 a + A w 'ai) x / + { 2 / T 2 a ) Ta + ( 1 —/ AWafc/AW ) = O
y ya que como veremos Xi <T ia , po­
dremos escribir con ( 1 —/ A 0Ja6/A w )< 0.

P*/Tia^ U tilizando ( 7 ) de aquí resulta análogam ente

ei =
P/Tu Au 3 kT
-)*
U tilizando ( 5 ), y si ponemos que / 21^/1(05 5 ( 5 + 1 )
r = r* (lo cual no está del todo ju s ­
Si hacemos el producto, resulta u n valor prom edio para ( A / h ) * ,
tificado; aunque si esta distancia va­
riase apreciablem ente, los tiem pos ob­ -1
servados cam biarían por órdenes de 1 T2.
m agnitud en el estado ligado, en con­ ( A / h ) * ^ prom— i A / h ) ^ m ¿ x i , A / h ) ' m t „ — -Y (9)
/■Te
tra de lo observado experim entalm en­
te ), resulta T endrem os así q u e :
p* Tc*
e i= - ( 8) A*^ Te* p*
PTc f-l -=62
con lo que se conoce el tiem po de co­
rrelación Tc* en el estado ligado, a y si suponem os que el campo hiperfino de Cu ( I I ) en los protones vecinos
p a rtir del valor experim ental de £ ¡, ya no cam bia al ligarse el ion, o sea A ~ A * , tendrem os:
que Tc= 2.2 • 1 0 '" sec. para Cu (IT )
a tem peratura am biente ( Ref. 7 ) , y T
€2 = - ( 10)
suponemos adem ás que las variacio­ PTe
nes de los núm eros de coordinación
han de ser pequeñas frente a las que es u n a relación form alm ente idéntica a la ( 8 ) que obtuvim os para
posibles variaciones de los tiempos de calcular Tc*.
correlación.
Resultados
Pero así como se tiene para Tc que
1 / T c= 1 /T a + 1 /T s + 1 /T r para Te se La relación ( A / h ) * „ u u ' ^ { A / h ) * „ i „ im plica, sustituyendo ambos térm inos
cum ple que 1/T e = 1 / t„ + 1 / T í - por sus expresiones y poniendo :

51
 X * = p / p * Te 6 2 ,
que :
2 k T Aco*
( p *V p ) ^ ( -
h (jìs
Los valores experim entales obtenidos a la tem peratura T = 297°K , concen­
tración de 1,5 • 10'® Cu ( I I ) / m l y pH = 7 ,l (F ig . 1 ) dan para el valor
de : ( u Tip* ) “ ' = 2,75 - 1 , 8 = 0,95 seg -'.
P ara Aw se obtuvo
( Aco/2i: )* — 0,4 seg“'.
La cantidad { r ^ T * 2 p)~^ representa
el ancho de la línea de absorción
m edido entre los puntos de altura
sem im áxim a.
P ara nuestro caso, O), = 2 , 5 x l 0 "
seg "', ya que H q= I í 000 G y en la
expresión It = P. donde 3 es el
m agnetón de B ohr, suponem os u n
factor espectroscópico gs = 2 caracte­
rístico del electrón libre.
Asimismo, el valor experim ental de
62 es ligeram ente superior a la u n i­
dad y vale (F ig s. 1 v 2 ) e 2 ~ l - l
para / = 1 , 5 • 10'« Cu ( I I ) / m l , au n ­
que su valor exacto es ligeram ente
función en cada paso de la concen­
tración de Cu ( I I ) . P o r lim itaciones
experim entales sólo pudo m edirse im
valor del corrim iento quím ico Aco y
uno de T¡p* con relativa exactitud;
esta últim a m edida parece indicar que
6 i es tam bién ligeram ente superior a
uno, com parándola con los datos de
(F ig . 2 ) para el ion Cu ( I I ) , ’ re­
producidos en los gráficos.
La sustitución de valores en (1 1 )
da u n resultado equivalente a p * ’>
> 2 p, y si p = 6 como se tiene co­
nocim iento debido a la sim etría octa-
hédrica de la coordinación del C u ( I I )
en solución, tendrem os que p * > 3 , o
sea p* = 4 ó 5.
Conociendo p* aproxim adam ente,
podemos calcular ahora los diferentes
[ ( 3 , 2 ) H ( 1 , 3 ) '] 10*Ta*' + 6,4 . 10^ T a * - 0 ,0 2 3 s
~ 6 ,4 . 10^ T a * - 0,023 = O
de donde T a * ~ 4 • 1 0 "’ seg<K ( Tía)* ~ 7 • 10"^seg
como se supuso en el principio.
La ecuación ( 1 ) se transform a con u n a pequeña m anipulación, e n :
( T ¡ ' ) * = f* + +
Ta*^ + T*^ + Ta* T *{2 + Ta* T * A < )
ya que Ta* T * A w * ;~ 1 0 - ’ 1 0 - 5 1 0 « « 1
y T a * « 7 ’2a*-
52
f * ^ p * [ C u '+ ] /[H 2 0 ]
T l p * Te 6 2
-Yi- -)
[C u '- ] / [ H 2 0 ]
parám etros característicos del sistema.
U tilizando la relación ( 10 ) obtenemos
Te*, lo que sustituido en ( 9 ) nos da
( ^ / / i ) * ~ 1 ,4 x 1 0 ^ cps.
U tilizando las dos expresiones aná­
logas anteriores a ( 9 ), resulta :
( A / h )*„,dx= 1,5 X 10* cps
( A / h )*„,,„ s 1,3 X 1 O* cps
La relación ( 8 ) proporciona Tc* y
r = r* = 2,8 Á ;’ sustituyendo enton­
ces ( A / h ) * en ( 4 ) obtenemos para
( T j J ) * - 3 ,2 x 1 0 * se g -' con ( 5 )
obtenemos ( Tí ^ )* ~ 1,3 X 10^ seg*'
Como es fácil ver de ( 4 ) y ( 5 ) ,
T~¡^ y T '^ difieren esencialm ente en
el térm ino de intercam bio proporcio­
nado por la interacción A I.S, y ya
que sus valores son com parables en­
tre sí, tam bién lo son por tanto la
interacción dipolar y la de intercam ­
bio; lo cual es quizás debido a una
sobreestimación del tiempo de rela­
jación de espín Tj y por consiguiente
de Te ^ T^.
A p artir de ( 6 ) se obtiene
Aíú*ah = 1,3 X 10^* seg -',
que es insignificante com parado con
el valor de la precesión m ism a
tO/~ 10* seg -'.
Sustituyendo en la ecuación del co­
rrim iento quím ico ( 6 ) AWab por su
valor, resulta luego de ordenar en Ta :
.. f*
Ta* + T *
Podemos decir así que el in te r­
cambio es rápido, ya que T a * « 7 ’2a*,
T,a*; en cuyo caso, la relajación total
(T jp )* se presenta bajo la form a
( 11) f * ( l / T 2a)* como sum a global de tér­
minos microscópicos 1 /T ' 2a* en un
núm ero /* proporcional a la concen­
tración de iones.
Por otra parte, la m edición de
( T j J ) * en función de la tem peratu­
ra (F ig . 3 ) , en u n rango com pren­
dido entre 4°C y 39°C proporciona
resultados lineales, que indican que
si partim os en tem peratura am biente
en las condiciones anteriores de in ­
tercam bio rápido ( T j ; )*==/* r ¿ '* , al
variar la tem peratura seguiremos es­
tando en dicho caso.
Pero según ( 4 ) podemos escribir
( 1 2 ) (7 ’¿ ') * = C,Tc* + C 2 Te* con C„
C 2 constantes con tem peratura. U ti­
lizando la relación
1 /T c= 1 /T r+ l / T a + l . T ,
anteriorm ente m encionada, y ya que
Ts«:Ta' queda 1 / t c ~ l/T r + l T ,/ ; V'-
ro hemos visto anteriorm ente que los
valores de Tc, t« son diferentes; por
tanto, Tc~Tr. Podrem os así escribir
Tc* ~ Tr* = Tro* exp ( E r / R T ) , donde
Er representa una “ energía de acti­
vación” del proceso determ inado por
la rotación al azar de la esfera de
hidratación, que dentro del contexto
de la estadística de B oltzm ann, se
hallará n atu ralm ente regido por una
dependencia exponencial respecto a
la tem peratura del sistema.
Tenem os tam bién utilizando ( 1 0 )
y Te==Ts, que Te*—Te=Ts; C O m O Ti
varía lentam ente con la tem peratura.
Te* se m antendrá esencialm ente cons­
tante al variar la m ism a. La ecuación
( 1 2 ) se puede escribir :
tc* = ^ (T 2 -;* + btc* )=
= Tro* exp ( E r / R T )
con A~' = f * C \ y B = —f *C 2
de donde se puede calcular la cons­
tante Er, ya que
( T- , l) i* + B x *
= E r/R (l/T 2-l/T i)
y resulta E r = 9 K caí/mol.
Discusión
f* De los resultados anteriores se de­
duce que el proceso microscópico de
relajación determ inado por Tia es el
que regula las características globales
de la relajación total; siendo despre­
ciable la influencia del corrim iento
 concentraciones utilizadas, entre las
moléculas de Hb con una coordina­
ción p* = 4 (dos m oléculas de agua
sustituidas por la H b ), dism inuyén­
dose así el valor de e i por hallarse
el ion efectivam ente más encerrado.
P or otra parte, los resultados de reso­
nancia param agnètica de Hb-Cu ( I I )
indican que éste está ligado a cua­
tro nitrógenos en el plano ecuatorial.
Existe así cierta contradicción entre
las dos experiencias ( R M N y R P E ),
ya que la ligadura con cuatro nitró­
genos requiere que p* = 2. La posi­
ción relativa del Cu ( I I ) puede quizás
m odificarse en cierto grado según la
concentración del m ism o presente en
solución. En el fu tu ro , el form alism o
teórico utilizado en este trabajo ten­
dría que elaborarse quizás u n poco
más para resolver esta discrepancia.

REFERENCIAS B IB L IO G R A FIC A S

1. G. B em sk l, T. A ren ds, G. B la n c : B loch.

B lo p h . R es. C om m ., 35, 599 (1969).

C u^V m ! 2. T. J. S w lt a n d R . E. C o n n lck : J. C hem .

P h ys., 37, 307 (1962).

FIG U R A 2: D e p e n d e n c ia l de T 'ip y T >2p e n s o lu c ió n a c u o sa del C u (" ) en f u n c ió n de la 3. I. S o lo m o n : P h y s. R ev., 99, 559 (1955).

c o n c e n tr a c ió n . T=298<>K, p H = 7 ,l. L os d a to s d e T -'ip so n de R e f. 7.
4 . R . A. B er n h elm e t a l.: 3. C hem P h y s., 30,
950 (1959).
5. I. S o lo m o n an d N . B lle m b e r g en : 3 . C hem .
P h y s., 25 , 261 (1956).
6. N . B loem b erg a n d L. O. M organ : J. C hem .
P h y s., 34, 842 (1961).
Z. L u z an d S . M elb oom : J. C hem . P h ys.,
Ì 40. 2686 (1964).

O .5 - 7. J..E lsln ger, R . S h u lm a n a n d B . S z y m a n s-

cu k l: J. C hem . P h y s., 36: 1721 (1962).
V) L. O. M organ, A. W . N o lle : J. C hem . P h ys.,
y 31, 365 (1959).
-
8. N. B lo e m b e r g e n : J. C hem . P h y s., 27.
595 (1957).
.2 9. H. M, M e. C o n n e ll: J . C hem . P h y s., 27.
230 (1957).

18
2X10 18
10. E. M. P u rc e ll a n d N . F . R a m sey : P h ys.
2x10 17 10 R ev., 78: 807 (1950).

C u^V m ! 11. N . B lo e m b e r g en : J. C hem . P h y s., 27,

572 (1957).

FIG U R A 3; V a ria ció n de T-> 2p c o n la te m p er a tu ra en a n á lo g a s c o n d ic io n e s q u e la F ig . 1 y 12. E. M. P u rc e ll a n d R . V. Pound: P h ys.

c o n í = l , 5 .1 0 « C u ( " ) /m l.
AWafc sobre el proceso de relajación
dentro de la esfera de coordinación.
La variación lineal del tiem po T~~2 *
aun dentro del lim itado rango de tem ­
p eraturas, dem uestra que se conserva
básicam ente el m ecanism o de rela­
jación antes m encionado.
Si utilizam os la ecuación
€ l = p * T c * / p X c
y reem plazam os p* > 3, poniendo
6 | ~ 1 , llegam os a la conclusión que
Tc* < 2 Tc. Como para el Cu ( I I ) , Tc
R ev., 73 : 679 (194&).
13. R, G. S h u lm a n . H. S t e r n llc h t a n d B .J .
W ylu d a: 3. C hem . P h y s., 43, 3116 (1965).
R . G. S h u lm a n , H . S t e r n llc h t a n d E. W.
se halla determ inado por el tiempo A n d erson : J. C hem . P h y s., 43, 3133 (1965).
de correlación de rotación -Tc~Tr co­
mo hemos visto, esto significa que R e cib id o : U -I-7 0 .
este tiempo no cam bia m ucho en pre­ A cep tad o : 24-11-70.
sencia del Cobre, y que éste está dé­
bilm ente ligado a la proteína.
Otra posible explicación del valor
e 1 ~ 1 consistiría en suponer, que si
bien el Cu ( I I ) se halla débilm ente
ligado a la m olécula en un sitio exte­
rior de la m ism a ( con lo que e i > 1 ) ,
se halla, sin em bargo, en las altas

53