Universidad Autónoma de Ciudad Juárez

Instituto de Ciencias Biomédicas – Microbiología I

Metabolismo bacteriano
Andrés Lechuga Medina –189880 – al189880@alumnos.uacj.mx
Viernes 18 de marzo del 2022
Resumen. Los microorganismos pueden presentar cierto metabolismo, que permiten su
crecimiento, reproducción y supervivencia ante ciertos medios, utilizando las enzimas que
producen. Para poder observar la acción enzimática bacteriana, se realizó su cultivo en
diversos medios, como lo fue en medios glucosa, maltosa, sacarosa, lactosa y manitol
para observar la fermentación por parte de E. coli, también en medio de MR-VP para
observar la fermentación ácido-mixta y del 2,3-butanediol con Enterobacter sp.,
obteniendo de esta resultados positivos, también la prueba de oxidasa cultivando en agar
nutritivo P. aeruginosa y utilizando también S. aureus en la prueba, siendo solo la primera
oxidasa positiva, en la prueba de catalasa se tomó también S. aureus y P. aeruginosa,
siendo ambas catalasa positivas, para observar la reducción de nitratos se utilizó la
bacteria B. subtilis, la cual presentó un resultado positivo al agregar el respectivo reactivo,
para almidón se sembró en un agar-almidón B. subtilis y E. coli, siendo solo la primera
una bacteria que produce amilasa, ya que hidrolizó el almidón, en la prueba de la caseína
se sembró en su respectivo agar y en la prueba de gelatina en un tubo con gelatina, en el
primero se sembró B. subtilis y E. coli, que ninguna hidrolizó a la caseína, mientras que se
sembró E. coli en gelatina, la cual tampoco hidrolizó esta. Estas pruebas permiten la
identificación de bacterias por medio de sus características metabólicas, siendo una
prueba de identificación adicional.

Palabras clave: Metabolismo, microorganismo, enzimas.

Introducción. exoenzimas, permitiendo que por

ejemplo los carbohidratos se introduzcan
Los microorganismos necesitan ciertos
en forma de monómeros o dímeros. Al
nutrientes para crecer, ya que por medio
ser introducidas estos compuestos en el
de su metabolismo permiten la
microorganismo, se ver afectados por
incorporación y transformación de
enzimas en el interior, conocidas como
compuestos a su alrededor al introducir
endoenzimas (Madigan, et al., 2015;
estos al interior de cada bacteria
Schlegel & Zaborosch, 1997).
(Madigan, et al., 2015).
Por medio del metabolismo que presenta
Cuando se habla de degradación en
un microorganismo, se puede llevar a
compuestos más sencillos, se habla de
cabo su identificación, ya que cada una
catabolismo, mientras que si se realizan
presenta características diferentes
compuestos más grandes es un
debido al diferente genética de estas, por
metabolismo sintético o anabolismo
lo mismo existen diversos
(Madigan, et al., 2015).
microorganismos modificados
Las macromoléculas hidrolizadas en el genéticamente, para que su metabolismo
exterior de la célula son afectadas por pueda ser aprovechado en diversas
enzimas segregadas conocidas como áreas (Ahmad, et al., 2010).
Objetivos. por 48 h a 37°C, se colocaron 10 gotas
de KOH al 40% y 15 gotas de alfa-naftol
Desarrollar técnicas comunes para
dentro del campo estéril del mechero, se
observar la acción enzimática bacteriana
mezcló suavemente y se observó el
en diferentes sustratos, datos son
cambio en la coloración.
esenciales para la identificación.
Respiración de carbohidratos.
Metodología.
Prueba de la oxidasa.
Fermentación de carbohidratos.
En una placa de agar nutritivo se cultivó
En 5 tubos con tapón con caldo con
P. aeruginosa con la técnica de estría
carbohidratos (glucosa, maltosa,
cruzada con ayuda de un asa
sacarosa, lactosa y manitol) preparados
previamente esterilizada dentro del
con campana de Durham y rojo de fenol
campo estéril del mechero, se puso a
se sembró E. coli dentro del área estéril
incubar por 48 horas a 37°C, dentro del
del mechero, utilizando un asa
campo estéril del mechero se tomó un
previamente esterilizada en el mechero,
papel estéril y en este se colocó una gota
flameando cada tubo con caldo y el tubo
de oxalato de dimetil-p-fenilendiamino,
de E. coli al abrirlo y antes de cerrarlo.
sobre esta gota se frotó una colonia
Se colocaron los tubos a incubar por 24 h
aislada joven tomada con el asa estéril y
a 37°C para observar los cambios de
se observó el cambio en la coloración,
coloración en el medio y generación de
también se observó la reacción con S.
gas en forma de burbuja en la campana
aureus.
de Durham.
Prueba de la catalasa.
Fermentación ácido-mixta (prueba del
rojo de metilo). En una placa de agar nutritivo se cultivó
P. aeruginosa con la técnica de estría
Se tomó un tubo de medio rojo de metilo-
cruzada con ayuda de un asa
Voges Proskauer, se abrió dentro del
previamente esterilizada dentro del
campo estéril del mechero, se flameó, al
campo estéril del mechero, se puso a
igual que el tubo con Enterobacter sp., se
incubar por 48 horas a 37°C, se tomó un
tomó una asada de la bacteria con el asa
portaobjetos sobre se colocó una colonia
previamente esterilizada en el mechero y
aislada tomada el asa estéril y se agregó
se inoculó el tubo con el caldo, se incubó
una gota de H2O2 para observar la
por 48 h a 37°C, se colocaron 5 gotas de
reacción dentro del campo estéril del
rojo de metilo dentro del campo estéril
mechero, también se observó la reacción
del mechero y se observó el cambio en la
con S. aureus.
coloración.
Reducción de nitratos.
Fermentación 2,3-butanediol (prueba de
Voges Proskauer). Un tubo con caldo nitrato y campana de
Durham se inoculó con B. subtilis dentro
Se tomó un tubo de medio rojo de metilo-
del campo estéril del mechero y con un
Voges Proskauer, se abrió dentro del
asa esterilizada, flameando el tubo con la
campo estéril del mechero, se flameó, al
bacteria y del medio después de abrirlo,
igual que el tubo con Enterobacter sp., se
se incubó por 48 h a 37°C. Después, se
tomó una asada de la bacteria con el asa
observó el cambio en el medio, se
previamente esterilizada en el mechero y
agregaron 4 gotas de ácido sulfanílico y
se inoculó el tubo con el caldo, se incubó
4 gotas de alfa-naftil-amina dentro del
campo estéril del mechero y se observó
el cambio en la coloración.
Hidrólisis de grandes moléculas.
Hidrólisis de almidón.
Se tomó una placa de agar-almidón
dividida en 3, dentro del campo estéril del
mechero se tomó una asada de B.
subtilis y se inoculó 1/3 de la placa, se
esterilizó el asa y se tomó una asada de
E. coli para inocular otro tercio de la
placa, dejando 1/3 como control, se
incubó a 37°C por 48 h, se colocaron
unas gotas de almidón sobre cada tercio
de la placa y se observó si el lugol
cambió o no de coloración por la
presencia o ausencia del almidón en el
medio.
Hidrólisis de caseína.
Se tomó una placa de agar-leche
descremada dividida en, dentro del
campo estéril del mechero se tomó una
asada de B. subtilis y se inoculó 1/2 de la
placa, se esterilizó el asa y se tomó una
asada de E. coli para inocular la otra
mitad, se incubó a 37°C por 48 h, y se
observaron o no halos transparentes
formados por las bacterias.
Hidrólisis de gelatina.
Se tomó un tubo con agar gelatina, se
abrió dentro del campo estéril del
mechero, se flameó, se tomó con el asa
recta una asada de E. coli y se inoculó el
tubo con el agar con una punción, se
incubó por 48 h a 37°C y se observó el
cambio en el medio.
Resultados.
Fermentación de carbohidratos.
En los tubos se observó el cambio de
coloración de rojo-naranja a amarillo en
el caso de glucosa, sacarosa y lactosa y
de rojo-rosa a amarillo en el caso de
maltosa y manitol, este cambio indica un
vire de un pH de aproximadamente 8.5 a
un pH de 6.5 indicado por el rojo de fenol
en el medio, el cambio a amarillo indica
que E. coli dio positivo a fermentación de
carbohidratos, al observar la campana de
Durham se observó la formación de una
burbuja por la formación de gas,
observándose una mayor formación en el
caso de la sacarosa y el manitol y una
menor formación en el tubo de lactosa.
Fermentación ácido-mixta (prueba del
rojo de metilo).
Al agregar el rojo de metilo hubo un
cambio en la coloración de blanco turbio
a rojo, indicando que hay un pH ácido y
que hubo una fermentación ácido-mixta
por parte de la Enterobacter sp.
Fermentación 2,3-butanediol (prueba de
Voges Proskauer).
Al agregar los respectivos reactivos se
produjo una coloración negra, la cual
debió ser roja para indicar un positivo, sin
embargo, posiblemente los reactivos
estaban caducos, por lo que se toma el
color negro como un positivo.
Respiración de carbohidratos.
Prueba de la oxidasa.
Después de agregar el reactivo oxidasa
en el papel y sobre este la colonia, se
observó un cambio de coloración a azul
por parte de las P. aeruginosa, indicando
un resultado positivo, al realizar la
prueba en S. aureus no se produjo
cambio en la coloración, indicando que
es una bacteria oxidasa-negativa.
Prueba de la catalasa.
Al realizar la prueba en S. aureus y P.
aeruginosa se observó efervescencia por
la liberación de O2 del H2O2 indicando
que son bacterias catalasa positivas.
Reducción de nitratos.
La bacteria B. subtilis redujo los nitratos
a nitritos ya que, al agregar los reactivos,
se produjo un cambio de coloración del
medio a rosa en unos segundos, pero se
llegó al color rojo después de unos
minutos, siendo cada vez más intensa la
coloración.
Hidrólisis de grandes moléculas.
Hidrólisis de almidón.
Al agregar el lugol este reaccionó con el
almidón del medio en el tercio del control,
produciendo un color morado, al
colocarlo en el tercio con E. coli, se
observa la misma coloración, indicando
que no hidroliza el almidón, al agregarlo
en el tercio con B. subtilis el lugol
mantuvo su coloración amarillenta,
indicando que se hidrolizó el almidón.
Hidrólisis de caseína.
En este caso la placa se deshidrató, sin
embargo, la B. subtilis y la E. coli no
presentaron un halo transparente, o sea,
no hubo cambio en el medio, indicando
que no hidrolizaron la caseína.
Hidrólisis de gelatina.
El medio con E. coli no presentó una
licuefacción de la gelatina, por lo que
esta bacteria no la hidroliza.
Discusión.
E. coli fermenta glucosa y lactosa
produciendo gas (Reyes, 2011), tanto
esta bacteria como las que pertenecen al
grupo de las enterobacterias
(Enterobacter sp.) fermentan las
hexosas, razón por la cual la E. coli fue
positiva en la fermentación de los
carbohidratos, así como la Enterobacter
sp. fue positiva en la fermentación ácido-
mixta y en la fermentación del 2,3-
butanediol, ya que la Enterobacter sp.
fermentan la glucosa para producir el
2,3-butanediol (Varela, 2002).
La S. aureus se presenta como oxidasa-
negativa, por lo que da negativo a esta
prueba, mientras que la P. aeruginosa es
oxidasa-positiva, ya que da un cambio en
la coloración al entrar en contacto con el
reactivo oxidasa en la prueba (Shields &
Cathcart, 2010).
La S. aureus produce enzima catalasa,
por ello permite la rápida degradación de
H2O2 en H2O y una rápida liberación de
O2, ocurriendo lo mismo con P.
aeruginosa, por lo que ambas bacterias
son catalasa-positivas (Ibrahim, 2014;
Aryal, 2018).
La mayoría de las bacterias pueden
utilizar los nitratos como fuente de
nitrógeno, en el caso de la vía del nitrito
es debido a la reducción asimiladora,
como se observa en la B. subtilis, a
pesar de que no se observó gas en la
campana, el vire a color rojo indica esta
reducción (Varela, 2002).
Los B. subtilis cuentan con la enzima
amilasa, ya que esta hidroliza el almidón,
por lo que no se observa el cambio de
coloración a morado al agregar el lugol,
lo cual no se observa con el E. coli, que
no hidrolizó el almidón, ya que no
produce la enzima amilasa (Los
endoesporas, 2013).
La hidrólisis de la gelatina y la caseína
son observadas por su licuefacción y la
generación de un halo transparente en el
medio, respectivamente, lo cual no fue
observado con E. coli en la gelatina ni
con P. aeruginosa y E. coli en la placa de
caseína (Salgado, et al., 2010).
Conclusión.
Las bacterias pueden presentar
características en su metabolismo que
pueden ser similares en algunos casos,
sin embargo, pueden también presentar Aryal, S. (2018). Biochemical Test of
diferentes enzimas que pueden permitir Pseudomonas aeruginosa. Microbiology
su diferenciación con diferentes pruebas. Info.com. Recuperado de:
Esto también puede permitir el https://microbiologyinfo.com/biochemical-
aprovechamiento de cierta acción test-and-identification-of-pseudomonas-
enzimática para dar su aplicación en aeruginosa/
diferentes aspectos donde se requiera la
Los endoesporas. (2013). Morfología del
obtención o uso de cierta esta enzima.
Bacillus Subtilis en Crecimiento Fractal
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Schlegel, H. & Zaborosch, C. (1997).
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Ahmad, N., Lawrence, W. & Plorde, J.
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Quinta edición. Mc Graw-Hill educación.
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Varela, G. (2002). FISIOLOGIA Y
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PARA ELIMINAR MATERIA ORGÁNICA
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Shields, P. & Cathcart, L. (2010).
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Ibrahim, H. (2014). Staphylococcus
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When Adding to Human WBCs as a
Source of H2O2 Productions in Human
Plasma or Serum in the Laboratory.
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