Kenya Yamileth Gil Santacruz B3B

BIOQUÍMICA ESTRUCTURAL Y METABÓLICA

EJERCICIOS TEMA I. Proteínas - 1

1) ¿Cuál es la masa molecular aproximada de una proteína de

682
aminoácidos en una única cadena polipeptídica?
R: El peso de un aminoácido es de 110 Daltons, entonces
110x682 = 75020
Daltons.

2) El análisis de dos muestras de proteína, una procedente de

corazón de cabra y otra de corazón de oveja, dio como
resultado que tenían la misma composición de aminoácidos.
¿Es esto suficiente para afirmar que las dos muestras son
idénticas?
R: No. A pesar de que la composición de aminoácidos sea igual
no es condición necesaria para que la secuencia de aminoácidos
sea también la misma.

3) La hidrólisis de 100 g de citocromo C humano da como

resultado 18,.7g de lisina. Sabiendo que el peso molecular de
un residuo de lisina es 128D y que cada molécula de
citocromo C contiene 18 residuos de lisina, calcular el peso
molecular de este citocromo.
R: 267024.5547 Daltons

4) Completa los siguientes incisos

A) El peso molecular medio de los residuos aminoacídicos de
las proteínas es 110 Daltons
B) Las proteínas pueden separarse en base a su peso
molecular por medio de la técnica conocida como
Cromatografía de exclusión molecular
 C) La separación de las proteínas por electroforesis se basa en
el Campo eléctricos y el desplazamiento de las proteínas de
sus cargas eléctricas.
D) El pH al cual las proteínas no se desplazan en los campos
eléctricos se conoce por el nombre de Punto isoeléctrico

5) Las proteínas se pueden separar en función de su tamaño

por:
a) Enfoque isoeléctrico.
b) Electroforesis en gel de poliacrilamida.
c) Cromatografía de intercambio iónico.
d) Cromatografía de exclusión molecular.
e) Espectrofotometría.
Justificar
a) La gradiente en el gel se crea sometiendo a electroforesis
una mezcla de poli anfolitos (pequeños polímeros con cargas
múltiples) que contienen varios valores de pI. La técnica de
enfoque isoeléctrico puede separar de forma muy efectiva,
proteínas que difieren tan solo 0.01 en sus valores de pI. Esto
significa que proteínas que difieren entre sí por una sola
carga neta, pueden ser separadas
b) La electroforesis se define como la migración de partículas
cargadas en un campo eléctrico. Cualquier ion o grupo
cargado migrará cuando sometido a un campo eléctrico. Las
proteínas llevan una carga neta a cualquier pH que sea
diferente al de su punto isoeléctrico, por lo tanto, estas
migrarán y su tasa de migración dependerá de la densidad
de carga (la razón de carga a masa). Mientras más alta sea
la razón de carga a masa, más rápida será la migración de
la molécula. La aplicación de un campo eléctrico a una
mezcla de proteínas en solución resultará en diferentes
migraciones para diferentes proteínas hacia uno de los
electrodos.
c) La cromatografía de intercambio iónico separa las proteínas
según su carga. Las resinas de intercambio aniónico, que
 están formadas por materiales con carga positiva, se unen
de forma reversible con los grupos con carga negativa de una
proteína. De igual forma, las resinas de intercambio catiónico
se unen a los grupos con carga positiva. Tras eliminar las
proteínas que no se han unido a la resina, se recupera la
proteína de interés por medio de un cambio adecuado del pH
del solvente y de la concentración salina, o de ambos.
d) La cromatografía de exclusión por tamaño o de gel es un tipo
de cromatografía de líquidos en la que la fase estacionaria
es un material poroso que permite la elución diferencial de
los solutos en función de sus tamaños moleculares. A
diferencia de otros métodos cromatográficos, en la
cromatografía de exclusión por tamaño no hay interacción
química o física entre los analitos y la fase estacionaria. Los
rellenos empleados en cromatografía de exclusión por
tamaño deben ser inertes, estables, resistentes y con un
tamaño de partícula y de poro uniformes. Están compuestos
por pequeñas partículas de sílice o de polímeros, con un
diámetro entre 5 y 10 μm, que tienen una red de poros donde
se quedan atrapadas las moléculas de soluto. Los analitos
de mayor tamaño no son retenidos por lo que son excluidos
y se eluden con rapidez. Los que tienen tamaños menores
que los de los poros pueden penetrar en ellos y son retenidos
por más tiempo.
e) La turbidimetría mide la disminución de la luz transmitida a
través de una suspensión de partículas utilizando para ello
un espectrofotómetro (detector en la misma dirección del haz
de luz, se mide A o T). Se suele utilizar para soluciones
concentradas (para que haya una buena disminución de la
luz transmitida) ej. determinación de proteínas totales en
suero, LCR u orina (haciendo que las proteínas precipiten
con TCA o ácido sulfosalicílico).
6) Dada la siguiente estructura proteica:

a) ¿De qué tipo de proteína se trata?

R: Lisozima
b) Identificar los principales motivos de estructura secundaria.
R: En proteínas con estructura terciaria globular es frecuente
encontrar combinaciones de estructuras al azar (A y B) con
una disposición característica que se repite en distintos de
proteínas.
c) ¿Posee estructura cuaternaria?
R: Tiene una estructura terciaria compuesta por hélices alfa,
una lámina beta, tres hebras beta y zonas sin estructura
secundaria regular
d) ¿Qué se puede decir sobre su solubilidad en agua?
R: Es muy soluble en H2O
e) Hacer un cálculo estimativo de su peso molecular, sabiendo
que tiene 129 aminoácidos.
R: La HEWL es una cadena polipeptídica simple con un peso
molecular de 14.3 kDa, comprendida por 129 aminoácidos con
cuatro puentes de disulfuro intramoleculares y un punto
isoeléctrico cerca de 11.3 que es fácilmente soluble en medio
acuoso.