PRÁCTICA NO.

6 ENZIMAS HEPÁTICAS SGPT (ALT), SGOT (AST),

ALP
Objetivo General.

Explicar la importancia y la características diagnosticas de las enzimas Hepáticas.

Objetivos Específicos.
Preparar los reactivos de trabajo
Cuantificar los niveles de fosfatasa alcalina en sangre.
Cuantificar los niveles de TGO (aspartato-aminotransferasa AST) en sangre.
Identificar los valores de TGP (alanin-aminotransferasa ALT) en sangre.
Comparar los valores obtenidos con los rangos de referencia establecidos
Relacionar los resultados con las patologías asociadas

6.1 Fundamentos Teóricos. Las Enzimas hepáticas

El hígado realiza muchas e importantes funciones metabólicas que se

interrelacionan y coordinan con las de otros órganos y tejidos, por lo que la evaluar sus
funciones es un poco complejo. El hígado realiza la transformación bioquímica y la
distribución molécula de los alimentos que proceden del tracto intestinal; esa función se
lleva a cabo mediante una serie de reacciones que son:
La conversión de sustancias nitrogenadas en urea.
La síntesis de proteínas y lípidos
La producción de bilis
La eliminación de compuestos potencialmente tóxicos
El metabolismo de los hidratos de carbono almacenado glucosa en forma de
glucógeno
Sintetiza ácidos grasos a partir de hidratos de carbono.

Las pruebas de laboratorio indicadas para la evaluación de la enfermedad hepática

puedan ser de utilidad en una o más de las siguientes aplicaciones clínicas.
Reconocer la presencia o ausencia de una enfermedad hepatocelular
Hacer el diagnóstico diferencial entre diversos padecimientos hepatobiliares
Efectuar el seguimiento de la evolución de la enfermedad y el establecimiento de
un diagnóstico.

La determinación de proteínas plasmáticas al ser sintetizadas en el hígado,

constituye un apoyo en el diagnóstico de enfermedades hepáticas.
 Entre las más sensibles de estas enzimas y entre las más representativas están las
transaminasas. Ellas comprenden la aminotransferase de aspartate (AST o SGOT o
TGO o GOT) y la aminotransferase de alanine (ALT o SGPT o TGP o GPT). Estas
enzimas normalmente se encuentran dentro de las células del hígado. La TGO es una
enzima con gran concentración en el corazón, en el hígado y los músculos. Cuando hay
una lesión de estos órganos la enzima es liberada a la sangre y aparece elevada en
los análisis. Las transaminasas son enzimas intracelulares que son liberadas cuando
hay necrosis celular y pasan al torrente sanguíneo.
La transaminasa glutámicopirúvica se encuentra esencialmente en el hígado y riñón. Su
valor se ve aumentado cuando hay daños hepáticos

6.2 Transaminasa Glutamico Oxalacética (TGO) (AST)

Las aminotrasnferasas desempeñan una importante función en el metabolismo de

aminoácidos, al transferir grupos amino al cetoglutarato para formar glutamato;en la
reacción inversa del glutamato a cetoacidos aceptores para formar los correspondientes
aminoácidos.
La AspartatoAminotrasferasa(ASAT-TGO)trasfiere el grupo amaino del
ácidoaspártico al acido alfa-cetoglutarico para formar ácidooxalacetico y glutámico;la
alanin-aminotrasnferasa, transfiere el grupo amino de la alanina con el resto del ácido
pirúvico. Estas enzimas tienen vidas media en sangre de 17 a 47 horas respectivamente
La AST se encuentra en otros órganos como son: el corazón y los músculos,
mientras que la ALT se encuentra principalmente en el hígado por lo que es útil su
determinación como indicador de lesión hepatocelular.
La elevación de la concentración catalítica de AST Y ALT en suero puede deberse
a un gran número de enfermedades incluso a diversas situaciones terapéuticas y
fisiológicas. Ambas se elevan en muchas hepatopatías y en algunas alteraciones del
sistema gastrointestinal.
La ALT es más específica en enfermedades hepáticas, la AST es más sensible, lo
que la hace útil en enfermedades crónicas o infiltrarías.
La AST se eleva en problemas musculares y esqueléticos, así también como en
infarto del miocardio y en la hemorragia cerebral.
 6.3 La Fosfatasa Alcalina.

Esta enzima realiza la transferencia de un grupo fosfato donador a otro aceptor, que
puedes ser el agua, caracterizado porque es un pH óptimo es fuertemente alcalino.
De esta se presentan cinco formas moleculares distintas que son: hepáticas, ósea, renal,
intestinal, y placentaria.
La forma intestinal aparece en sangre solo después de la comida y tiene una vida media
muy corta.
Las isoenzimas óseas y hepáticas presentan mayor interés diagnóstico, debido a la
elevada actividad osteoblastica, los valores de referencia son muchos más altos en
neonatos y durante la pubertad que n los adultos. Su determinación en suero es un
indicador de enfermedad hepática de gran sensibilidad, aunque de escasas
especificidad., esta elevación en suero puede ser de origen hepático o extra hepático,
para su distinción es importante determinar otras enzimas como es la GGPT y la
5 nucleotidasa.

6.4. Aspartato Aminotransferasa (AST O GOT)

Características diagnósticas

Las aminotransferasas catalizan la formación de ácido glutámico a partir de 2-

oxoglutarato mediante la transferencia de grupos amino. Las concentraciones más
elevadas de AST se encuentran en el hígado y el músculo cardíaco aunque también es
abundante en el músculo esquelético, riñones y páncreas. Se encuentran
concentraciones séricas elevadas de AST en hepatitis y otras enfermedades hepáticas
asociadas con necrosis: mononucleosis infecciosa, cirrosis, colestasis, carcinoma
metastásico del hígado, delirium tremens, así como después de la administración de
algunos medicamentos.

También se encuentran concentraciones séricas elevadas de AST después de un

infarto de miocardio, en enfermedades del músculo esquelético (como la distrofia
muscular progresiva), en pancreatitis aguda, enfermedades hemolíticas y otras.

Disminución del nivel de transaminasas en la sangre

El cociente AST/ALT nos podrá orientar sobre una patología determinada según
el siguiente
Esquema:

AST/ALT > 2: Cirrosis (de cualquier etiología).

AST/ALT > 4: Sugiere fallo hepático agudo.
Utilidad clínica
Evaluar magnitud del daño celular en hígado y músculo.
Monitoreo de la evolución del daño de los tejidos que la contienen hepatopatía,
cardiopatías.

6.5. Proceso para la Cuantificación de TGO/AST ASPARTATO

AMINOTRANSFERASA (AST/GOT) IFCC

Fundamento del método

La aspartatoaminotransferasa (AST o TGO) cataliza la transferencia del grupo amino
del aspartato al 2-oxoglutarato, formando oxalacetato y glutamato. La concentración
catalítica se determina, empleando la reacción acoplada del malato deshidrogenasa
(MDH), a partir de la velocidad de desaparición del NADH, medido a 340 nm.

Preparación de los Reactivos

Reactivo de Trabajo: Vaciar el contenido del frasco B en el frasco A. Agitar

suavemente. Si se desea preparar otros volúmenes, mezclar en la proporción: 4 mL de
Reactivo A + 1 mL de Reactivo B.

Estable 2 meses a 2-8ºC

Muestras
Suero recogido mediante procedimientos estándar.
La aspartato amino transferasa en suero es estable 7 días a 2-8ºC.

Procedimiento TGO.
Pipetear en los respectivos tubos de ensayos de cristal o polipropileno. Sueros y
reactivos según el orden establecido

1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a la temperatura de reacción.

2. Pipetear en una cubeta:
(Nota) depositar la muestra en el reactivo justo al momento de llevar al
espectrofotómetro.
Temperatura de reacción 37 °C Mezclar e insertar la cubeta
Muestra inmediatamente en el
Reactivo de trabajo 1.0 ml espectrofotómetro. Luego registrar
Muestra 50 ul las lecturas de los tres tiempos y la
concentración final.
 6.6. Proceso para la Determinación TGP.

ALANINA AMINOTRANSFERASA (ALT/GPT) IFCC

Características Diagnósticas
Las aminotransferasas catalizan la formación de ácido glutámico a partir de 2-
oxoglutarato mediante la transferencia de grupos amino. Es una enzima unilocular
(citoplasmática) La ALT se encuentra en diferentes tejidos, músculo esquelético,
corazón, riñón, páncreas y aunque sus mayores concentraciones se hallan en hígado y
riñón. La actividad de ALT en eritrocitos es 6 veces superior a la del suero. La
destrucción o cambio de permeabilidad de las membranas celulares en los tejidos antes
mencionados, provoca la liberación de ALT a la circulación sanguínea Se observan
concentraciones séricas elevadas de ALT en hepatitis y otras enfermedades hepáticas
asociadas con necrosis: mononucleosis infecciosa, colestasis, cirrosis, carcinoma
metastásico del hígado, delirium tremens, así como después de la administración de
algunos medicamentos como opiáceos, salicilatos o ampicilina. También pueden
encontrarse concentraciones séricas elevadas de ALT en enfermedades del músculo
esquelético o cardiaco.

Fundamento del método

La alaninaaminotransferasa (ALT o GPT) cataliza la transferencia del grupo amino de la

alanina al 2-oxoglutarato, formando piruvato y glutamato. La concentración catalítica se
determina, empleando la reacción acoplada del lactato deshidrogenasa (LDH), a partir
de la velocidad de desaparición del NADH, medido a 340 nm1

CONSERVACIÓN
Conservar a 2-8ºC. Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en
la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminación durante
su uso.
Indicaciones de deterioro:
Reactivos: Presencia de partículas, turbidez, absorbancia del blanco inferior a 1,200 a
340 nm (cubeta de 1 cm).
Reactivos.
Nocivo por ingestión. En contacto con ácidos libera gases tóxicos. En caso de contacto
con la piel, lávese inmediata y abundantemente con agua. En caso de accidente o
malestar, acuda inmediatamente al médico
Preparación de los Reactivos

Reactivo de Trabajo: Vaciar el contenido del frasco B en el frasco A. Agitar suavemente.

Si se desea preparar otros volúmenes, mezclar en la proporción: 4 mL de Reactivo A + 1
mL de Reactivo B. Estable 2 meses a 2-8ºC. Estable 6 días a 2-8ºC.

Muestras
Suero recogido mediante procedimientos estándar.
La alaninaaminotransferasa en suero es estable 7 días a 2-8ºC.

Procedimiento ALT O TGP

Pipetear en los respectivos tubos de ensayos de cristal o polipropileno. Sueros y

reactivos según el orden establecido
1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a la temperatura de reacción.
2. Pipetear en una cubeta:
Temperatura de reacción 37 °C
Muestra
Reactivo de trabajo 1.0 ml
Muestra 50 ul

(Nota) depositar las muestras justo al momento de llevar al espectrofotómetro. Sirviendo

y leyendo los tubos primero uno y luego el otro, ect., y después que el equipo del reporte
el siguiente tubo)

3. Mezclar e insertar la cubeta en el espectrofotómetro.

Temperatura de reacción 37ºC 30ºC

 PRACTICA No.7. FOSFATASA ALCALINA-ALP.

7.1 La fosfatasa Alcalina, Características Diagnostica.

La fosfatasa alcalina cataliza la hidrólisis de mono esteres de fosfato orgánicos a

pH alcalino. La enzima se encuentra presente en casi todos los tejidos del organismo,
ubicado en las membranas celulares, y se halla a concentraciones especialmente
elevadas en placenta, epitelio intestinal, túbulos renales, osteoblastos y en el hígado.

La forma presente en suero de adulto normal procede principalmente de hígado y

hueso. Se encuentran concentraciones séricas elevadas de ALP en pacientes con
enfermedades del hueso asociadas a actividad osteoblástica incrementada (enfermedad
de Paget, hiperparatiroidismo primario y secundario, tumores óseos, raquitismo,
osteomalacia, fracturas) y también en pacientes con alteraciones hepatobiliares (ictericia
obstructiva, hepatitis, hepatotoxicidad causada por medicamentos, cáncer de hígado).

7.2 Proceso para la Cuantificación de Fosfatasa Alcalina (ALP)

FOSFATASA ALCALINA (FAL) AMP TAMPÓN 2-AMINO-2-METIL-1-PROPANOL
(IFCC)

Fundamento del método

La fosfatasa alcalina (FAL) cataliza en medio alcalino la transferencia del grupo
fosfato del 4-nitrofenilfosfato al 2-amino-2-metil-1-propanol (AMP), liberando 4-nitrofenol.
La concentración catalítica se determina a partir de la velocidad de formación del 4-
nitrofenol, medido a 405 nm1. 4 Nitrofenil fosfato + AMP AMP fosfato + 4 - Nitrofenol
.

Conservación
Conservar a 2-8ºC.
Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre
que se
Conserven bien cerrados y se evite la contaminación durante su uso.
Indicaciones de deterioro:
Reactivos: Presencia de partículas, turbidez.

Preparación de los reactivos

Muestras

Suero o plasma recogido mediante procedimientos estándar.

La fosfatasa alcalina en suero o plasma es estable 7 días a 2-8ºC. Puede utilizarse
heparina como anticoagulante.

Procedimiento
Pipetear en los respectivos tubos de ensayos de cristal o polipropileno. Sueros y
reactivos según el orden establecido
1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a la temperatura de reacción.
2. Pipetear en una cubeta:

Muestra
Reactivo de trabajo 1.0 ml
Muestra 20 ul

3. Mezclar e insertar la cubeta en el fotómetro. Poner el cronómetro en marcha.

4. Anotar la absorbancia inicial y efectuar nuevas lecturas cada minuto durante 3
minutos.