”Año de la lucha contra la corrupción y la impunidad”

Universidad Privada San Juan Bautista

Facultad de ciencias de la salud y Escuela de Medicina

Humana

Practica N° 11:

Tema: TRANSAMINACION
 Docentes:
 Yolanda Salinas Veliz
 Jack Slim García Calderón

 Alumno/a: Barrios Wong Fátima

Milagros
 Curso: Bioquímica y Nutrición

 Ciclo: III
 Sección: MB
Ica-Perú
 Turno: Mañana 2019
OBJETIVOS
 Determinar la cantidad de TGO de uno de nuestros compañeros.
 Determinar la cantidad de TGP en uno de nuestros compañeros.

INTRODUCCION

IMPORTANCIA CLINICA:
Las transaminasas son enzimas ampliamente difundidas en el organismo, que catalizan
la transferencia de un grupo amino de un aminoácido a un cetoácido, en una de las más
importantes reacciones del metabolismo proteico. El interés clínico está centrado
especialmente en dos de ellas: TGO (transaminasa glutámico oxalacética) y TGP
(transaminasa glutámico pirúvica).
Estas enzimas tienen acción eminentemente intracelular, por lo que la actividad sérica
en condiciones normales es baja o nula. Un aumento de la actividad será evidencia de
un deterioro de los tejidos en que se encuentran, de los cuales resultan particularmente
importantes corazón e hígado.
Se ha observado que luego de un infarto de miocardio se produce en suero un marcado
aumento de la actividad de la TGO, debido a la liberación al torrente sanguíneo de esta
enzima, tan abundante en músculo cardíaco.
En este caso no existirá aumento en la actividad sérica de TGP ò será mínimo.
En hepatitis virales y otras formas de enfermedad hepática que involucren necrosis de
tejido, habrá un incremento considerable de la actividad sérica de transaminasas,
incluso antes de la aparición de síntomas clínicos como ictericia.
En este caso, la TGP será la enzima predominante debida a su gran concentración en
el tejido hepático.
Una elevada actividad de transaminasas puede detectarse también en traumas
accidentales o quirúrgicos y en distrofias musculares y miosis.

FUNDAMENTOS DEL METODO:

Una reacción de transaminación consiste en la interconversión de un grupo amino (NH2-
CH-COOH) de un aminoácido, con un grupo cetónicos (O=C-COOH) de un cetoácido.
Este intercambio está catalizado por enzimas conocidas con el nombre de
transaminasas. En el suero humano, por lo general, se determinan dos tipos principales:
la Glutámico Oxalacética (TGO) y Glutámico Pirúvica (TGP).

Ellas catalizan las siguientes reacciones:

El Oxalacetato y el Piruvato así formados, reaccionan con el reactivo 2,4-

dinitrofenilhidrazina (2,4 – DNFH), generando fenilhidrazonas, las cuales en medio
alcalino (NaOH) producen un complejo coloreado cuya intensidad es proporcional a la
actividad enzimática de transaminasas en la muestra.
MARCO TEORICO
Se denominan genéricamente transaminasas (aminotransferasas) a un grupo de
enzimas capaces de catalizar la transferencia de grupos amino, entre una diversidad de
parejas aminoácidos-cetoácidos, pudiendo afirmarse que casi todos los aminoácidos
pueden intervenir en reacciones de transaminación. Sin embargo, si no todas, la
mayoría de las transaminasas tiene a alguno de los cetoácidos pirúvico, oxalacético o
alfacetoglutárico como un participante obligado de la reacción; de ahí que estos
cetoácidos y sus aminoácidos correspondientes, alanina, ácido aspártico y ácido
glutámico tengan un papel primordial en este tipo de reacciones.

Las reacciones de transaminación son libremente reversibles de modo que las

transaminasas catalizan con la misma facilidad la reacción en uno u otro sentido, por lo
que la dirección neta estará en dependencia de las concentraciones de los sustratos y
productos.

La transaminación catalizada por las enzimas llamadas transaminasas o

aminotransferasas, implica la interconversión de un par de aminoácidos y un par de
cetoácidos. Estos generalmente son a–amino y
b–cetoácidos.

El fosfato de piridoxal, la vitamina B6 en forma de

coenzima, forma una parte esencial del sitio
activo de las transaminasas y de muchas otras
enzimas con aminoácidos como sustratos. En
todas las reacciones de los aminoácidos,
dependientes del fosfato de piridoxal, el paso
inicial es la formación de una base de Shiff
intermediaria unida a la enzima.

Este intermediario estabilizado por la reacción

recíproca con una región catiónica del sitio activo,
se puede estructurar de maneras que incluyen la
liberación de un cetoácido con formación de
fosfato de piridoxamina unido a la enzima. La
forma unida, aminada de la coenzima puede formar entonces una base análoga
intermediaria de Shiff con un cetoácido. Durante la transaminación, la coenzima unida
sirve, así como un transportador intermediario de grupos amígenos. Puesto que la
constante de equilibrio para la mayor parte de las reacciones de transaminasas es
cercana a la unidad, la transaminación es un proceso libremente reversible. Esta
reversibilidad permite a las transaminasas funcionar tanto en el catabolismo de los
aminoácidos como en su biosíntesis.

Este intermediario estabilizado por la reacción recíproca con una región catiónica del
sitio activo, se puede estructurar de maneras que incluyen la liberación de un cetoácido
con formación de fosfato de piridoxamina unido a la enzima. La forma unida, aminada
de la coenzima puede formar entonces una base análoga intermediaria de Shiff con un
cetoácido. Durante la transaminación, la coenzima unida sirve, así como un
transportador intermediario de grupos amígenos. Puesto que la constante de equilibrio
para la mayor parte de las reacciones de transaminasas es cercana a la unidad, la
transaminación es un proceso libremente reversible. Esta reversibilidad permite a las
transaminasas funcionar tanto en el catabolismo de los aminoácidos como en su
biosíntesis.

La alanina–pirúvico transaminasa (alanintransaminasa) y la glutámico–a–cetoglutárico

transaminasa (glutámico–transaminasa), presentes en la mayor parte de los tejidos
animales, catalizan la transferencia de grupos amígenos de la mayor parte de los
aminoácidos para formar alanina (a partir del piruvato) o del glutamato (a partir del a–
cetoglutarato).

Cada transaminasa es específica para el par especificado de aminoácido y cetoácido

como un par de sustratos, pero inespecífica para el otro par, el cual puede ser cualquiera
de una amplia variedad de aminoácidos y sus correspondientes cetoácidos. Puesto que
la alanina es también un sustrato para la reacción de la glutámico transaminasa, todo el
nitrógeno amínico proveniente de los aminoácidos que pueden experimentar la
transaminación se puede concentrar en el glutamato. Esto es importante porque el L–
glutamato es el único aminoácido de los tejidos de mamífero que experimenta
desaminación oxidativa a una tasa apreciable. La formación de amoniaco de los grupos
amígenos a se realiza, así, principalmente mediante la conversión del nitrógeno amínico
a del L–glutamato.

La mayor parte de los aminoácidos (pero no todos) son sustratos de la transaminación.

Las excepciones incluyen a la lisina, la treonina y a los iminoácidos cíclicos prolina e
hidroxiprolina. La transaminación no está restringida a los grupos amígenos a. El grupo
amígeno d de la ornitina es, por ejemplo, fácilmente transaminado formando g–
semialdehído del glutamato

INTERÉS MÉDICO DE LAS TRANSAMINASAS

Las transaminasas, además de su importancia metabólica, tienen interés clínico pues,
siendo las mismas intracelulares, sus concentraciones en el plasma son muy bajas en
condiciones normales. Sin embargo, cuando se produce la muerte con lisis celular por
cualquier causa, su concentración en el plasma aumenta, detectándose una actividad
considerable en dependencia de la intensidad y duración del agente que provoca el daño
celular.
La cuantificación de la actividad plasmática de algunas transaminasas posibilita realizar
el diagnóstico, emitir un pronóstico y seguir la evolución de ciertas afecciones que
transcurren con daño a las células.

El tipo específico de transaminasa que se encuentra elevada puede sugerir incluso el

órgano que se encuentra afectado debido a su relativa abundancia en este. La actividad
de la transaminasa glutámico pirúvico (TGP) en el plasma se eleva de forma
considerable en enfermedades del hígado, como la hepatitis y la cirrosis; en cambio, es
la transaminasa glutámico oxalacético (TGO) la que muestra una mayor elevación en el
caso del infarto del miocardio. Sin embargo, no se deben considerar estos patrones
como invariables, pues en ciertos casos se presentan variaciones de estos.

Las principales enfermedades que causan elevación de las transaminasas son:

- Hepatitis virales
- Cirrosis.
 - Esteatosis hepática
- Abuso de alcohol.
- Lesión del hígado por drogas y medicamentos (hepatitis medicamentosa).
- Insuficiencia cardíaca.
- Isquemia del hígado (hepatitis isquémica).
- Cáncer del hígado.
- Enfermedades musculares.

Enfermedades más raras que frecuentemente cursan con lesión hepática:

- Hepatitis autoinmune.
- Enfermedad de Wilson.
- Deficiencia de alfa-1-antitripsina.
- Hemocromatosis.

Los valores normales varían de laboratorio para laboratorio, quedando, sin embargo, el
límite superior siempre alrededor de 40 y 50 U/L.

REACTIVOS

1. Sustrato TGO:
Solución conteniendo 100 mmol/l de l-aspartato y 2 mmol-l de alfa-
cetoglutarato en buffer fosfatos 100 mmol/l, pH 7,4.

2. Sustrato TGP:
Solución conteniendo 200 mmol/l de l-alanina y 2 mmol/l de alfa- Cetoglutarato
en buffer fosfatos 100 mmol/l, pH 7,4.
 3. Reactivo 2,4-DNFH:
Solución conteniendo 1 mmol/l de 2,4-dinitrofenilhidrazina en ácido clorhídrico
1 mmol/l.
Esta solución es corrosiva y debe guardarse en frasco oscuro.

4. Standard de Calibración:
Solución de Piruvato de sodio 2 mmol/l. Para efectuar la curva de calibración.
Listo para usar en la curva de TGP. Diluir 1:2 con sustrato par la curva de TGO.

5. Hidróxido de Sodio Diluyente para Enzima

Antes de usarse, se deberá diluir el contenido de este frasco a 1 litro de agua destilada
para así alcanzar la concentración requerida de NaOH 0.4mol/l.
Es importante notar que el hidróxido de sodio debe conservarse en frasco de plástico y
no de vidrio. Conservar el frasco lejos del reactivo de color pues los vapores pueden
contaminar ambos reactivos.

PROCEDIMIENTO

EXPERIMENTO A
DETERMINACION DE TRANSAMINASAS (TGO Y TGP) EN SUERO

PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR TGO O TGP EN SUERO:

EXPERIMENTO B
PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRACION

Antes de utilizar por primera vez el juego de reactivos, preparar una curva de calibración
para TGO y otra para TGP, de acuerdo a las siguientes indicaciones:
Pipetear en dos series de tubos:

Nota: Utilizar sustrato TGO para la curva de calibración de TGO y sustrato TGP para la
curva de calibración de TGP, respectivamente.

Mezclar y agregar a cada tubo, 1 ml de reactivo 2,4-DNFH.

Mezclar. Incubar 10 minutos a 37ºC.
Agregar 10 ml de hidróxido de sodio 0.4 mol/l a cada tubo.
Mezclar y esperar 10 minutos a temperatura ambiente antes de leer.
Leer la Transmitancia a 505 nm usando agua destilada como blanco de lectura. El color
es estable durante solo 30 minutos.
Restar a cada lectura la obtenida con el tubo Nº1, obteniéndose las Absorbancias Netas.
Graficar en papel milimetrado los valores de absorbancias netas en el eje vertical, y en
el eje horizontal las U/l de TGO ó TGP según sea el caso, que se indica en la tabla
superior.
Determinar en el gráfico los puntos correspondientes a cada tubo. Uniéndolos se
obtienen las curvas respectivas para TGO y TGP.
Tener en cuenta que para cada técnica debe utilizarse el gráfico correspondiente.

VALORES DE REFERENCIA:

Se consideran valores normales de transaminasas (TGO y TGP) hasta 12 U/l. Si bien

se han hallado individuos normales con valores hasta 18 U/l, los niveles de
transaminasas que se encuentren entre 12 y 18 U/l deben considerarse sospechosos.
CUESTIONARIO:

1.- Explique en qué consiste el fenómeno de transaminación y donde se realiza en

el organismo

Reacción química consistente en el intercambio de la función aminada de un α-

aminoácido, por la función cetona de un α-cetoácido; conduce a la formación de un
nuevo α-aminoácido, derivado del α-cetoácido primitivo y de un nuevo α-cetoácido
procedente del α-aminoácido primitivo. Desempeña un papel importante en
el metabolismo de las proteínas.
las transaminasas están presentes en el hígado, riñones, corazón, páncreas, músculo
esquelético, y en los glóbulos rojos de la sangre.

La transaminacion dependera de la ubicacion de la transaminas.generalmente este

proceso se da en la miticondria pero hay enzimas que llevan a cabo el proceso en el
citosol.

2.- ¿Qué relación existe entre las transaminasas y las enfermedades hepáticas?

TGO ( AST o SGOT o GOT) normalmente es encontrado en una diversidad de tejidos

inclusive el hígado, corazón, músculos, riñones, y cerebro. Es liberado en la sangre
cuando cualquiera de estos tejidos se encuentra con algún problema.
TGP (ALT o SGPT o GPT) es encontrado en su mayor parte en el hígado. Este no es
producido exclusivamente por el hígado, pero es donde se encuentra mas concentrado.
Es liberado en la circulación sanguínea como resultado de daño hepático. Sirve
entonces como un indicador bastante específico del estado del hígado.

3.- ¿Cómo se encuentran las transaminasas en el infarto agudo de miocardio?

Es muy frecuente la elevación de las transaminasas en el infarto agudo de miocardio y

en la insuficiencia cardíaca aguda.

4.- ¿Cuáles son los métodos de análisis conocidos para dosaje de transaminasas?

Pruebas de laboratorio:
Hemograma, bioquímica, estudio de coagulación, proteinograma y serología hepatitis B
y C.

5.- ¿Existe variación de transaminasas con la edad?

Existen variaciones de la normalidad: el límite superior de normalidad es más alto en

personas de raza negra, hispanos y varones; además este límite se eleva con la edad y
el peso corporal.
CONCLUSIONES

Es importante reconocer el valor diagnóstico que tienen estas pruebas de laboratorio ya

que con este se pueden realizar, descartar o corregir presuntos problemas de salud que
se expresen en algunas enfermedades, dependiendo de los resultados obtenidos en
cada paciente.

BIBLIOGRAFÍA

 Metabolismo de aminoácidos [fecha de acceso 12 de Junio del 2016]. URL

disponible en: http://hepato.com/p_transaminases/002_transamin_esp.php

 Transaminación [en línea], 2016 [fecha de acceso 12 de Junio del 2016]. URL
disponible en:
http://mazinger.sisib.uchile.cl/repositorio/lb/ciencias_quimicas_y_farmaceuticas/
arancibiaa01/articulo12/a2.html

 Transaminación [en línea], 2016 [fecha de acceso 12 de Junio del 2016]. URL
disponible en: http://gsdl.bvs.sld.cu/cgi-bin/library?e=d-00000-00---off-0prelicin--
00-0----0-10-0---0---0direct-10---4-------0-1l--11-es-50---20-about---00-0-1-00-0-
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 Transaminación [en línea], 2016 [fecha de acceso 12 de Junio del 2016]. URL
disponible en:
http://www.portalesmedicos.com/diccionario_medico/index.php/Transaminacion