CULTIVO IN VITRO DE

VEGETALES

Dra María Alejandra Alvarez

 Cultivo de tejidos
 Presupone el cultivo de plantas o partes de
plantas (explantos
( ) en un medio de cultivo
apropiado
 El cultivo se desarrolla en condiciones de
temperatura, humedad, fotoperíodo e
irradiancia controlados.
 La manipulación se realiza en cabinas de flujo
laminar
 Esta técnica es importante en la propagación
de especies de interés agroforestal:
micropropagación
 Producen innumerables productos de
importancia en la industria farmacéutica,
cosmética y alimentaria, como alcaloides,
compuestos aromáticos o pigmentos.
 Los cultivos in vitro permiten obviar los
inconvenientes derivados de condiciones
geográficas, climáticas y de tiempo de
producción.
Cultivo in vitro
 Plasticidad

 Totipotencialidad
 Es la capacidad de una célula vegetal de dar
lugar al desarrollo de una planta completa Las
células totipotentes son células somáticas que
han retenido su capacidad de dividirse y
diferenciarse en una planta madura si se
coloca en el medio adecuado.
 Cultivo de células vegetales
Definición
 Cultivo aséptico in vitro de cualquier parte de una
planta en un medio nutritivo.
 Tipos de cultivos:

 cultivo de células
 cultivo de tejidos
 cultivos de órganos
 Cultivos vegetales
 Cultivos agronómicos

 Cultivos in vitro
1. Cultivos diferenciados ( raíces,
tallos, embriones, raíces y tallos
transformados)
2. Cultivos indiferenciados ( callos,
suspensiones)
 Cultivos indiferenciados
 Callos : en medio sólido,
crecimiento lento, gran
heterogeneidad celular,
 Cultivos en suspensión:
derivan de los anteriores, en
medio líquido de
composición adecuada,
crecimiento más rápido y
homogéneo.
 Composición del medio de
cultivo. Fuente de carbono,
minerales, vitaminas,
fitohormonas (auxinas,
citoquininas)
 Callos
 Tejidos no diferenciados ( a veces diferenciados), en
división activa.
 Frecuentemente se desarrollan a partir de heridas.
 Medio de cultivo
 Mezcla de sustancias en los que las células, tejidos y
órganos pueden.
 Sustancias inorgánicas: N, P, K, Ca, Mg, Cl, Na
 Cu, Zn, Mn, Fe, Bo, Mo, Co, I
 Suplementos orgánicos complejos: leche de coco,
extracto de levadura.
 Reguladores de crecimiento : hormonas.
 Fuente de carbono: sacarosa
 Con o sin agar: medio semi -sólido o líquido.
 Reguladores de crecimiento
Hormonas/ Fitohormonas:
 Auxinas: grupo de hormonas vegetales
(naturales o sintéticas) que inducen la
elongación, o en algunos casos la
división celular.
 Frecuentemente inducen
raíces adventicias e inhiben la
formación de tallos
adventicios.
 Cytokininas: grupo de hormonas
vegetales (naturales o sintéticas) que
inducen división celular y frecuentemente
tallos adventicios y en muchos casos
inhiben la formación de raíces adventicias.
 Reglas generales para la acción hormonal:
 • Auxina : Cytokinina = ~1 Callo
 • Auxina : Cytokinina < 1 Tallo
 • Auxina : Cytokinina > 1 Raíces
 Terminología y técnicas
 1. Explanto: porción de tejido u órgano que se separa
de la planta para iniciar el cultivo.

 2. Esterilización: procedimiento para la eliminación de

microorganismos.
 Autoclave: aparato en el que el medio, material d vidrio,
instrumental, etc., es esterilizado por vapor bajo presión
(121oC, 15 psi, 10-20 min.).
 Requerimientos de asepsia: desinfección de superficie del
explanto: generalmente usando lavandina comercial diluido
para evitar el desarrollo de microorganismos.
 Cabina de flujo laminar: área de trabajo, mantenida estéril por
el flujo continuo, no turbulento de aire estéril.
 Subcultivo: pasaje de
células, tejidos, órganos,
etc. Desde un medio de
cultivo agotado a otro
medio fresco.
 Micropropagación:
propagación vegetativa
in vitro de plantas.
 Diferenciación: desarrollo de células o tejidos con una función específica
y/o regeneración de órganos, estructuras tipo órganos (raíces, tallos) o
embriones.
 Adventicios: desarrollo de órganos (raíces, yemas, tallos, flores, etc.) o
embriones (embryo-like structures) desde puntos de origen no usuales,
incluyendo callos.
Organogénesis (formación de
órganos)
Formación de tallos, raíces, flores, etc.
¡¡Regeneración de una planta completa!!
Explanto

Organogénesis

Formación de tallos Formación de raíces

Enraizamiento Tallos
Planta completa
 Embriogénesis (formación de
embriones)
Proceso mediante el cual se desarrolla un embrión a partir de una célula
huevo fertilizada o asexualmente desde un grupo de células somáticas
(embriogénesis somática).
 Embriogénesis Somática
 Procedimiento para la regeneración vía embriogénesis
somática
 1. Iniciación: callos embriogénicos
 2. Proliferación: callos embriogénicos, masas
proembriogénicas (PEM)
 3. Desarrollo y maduración de embriones : embriones
 4. Germinación de embriones (Regeneración)
 Estadíos de desarrollo en dicotiledóneas:
 Masas proembriogénicas
 Estadío globular
 Torpedo
 Embrión somático
 Semillas artificiales

 Semillas sintéticas (artificiales)

 1. Producción en masa de semillas genéticamente mejoradas.
 2. Procedimientos:
 Encapsular en cápsulas de gel, recubrir con una cubierta
adecuada, almacenar
 3. Encapsulación de embriones somáticos: protección,
nutrición, permeable al agua, biodegradable.
 Polímeros: gel de alginato, gelatina, agar, goma, etc.
 Variación Somaclonal
 Variación fenotípica, genética o epigenética en su origen.
 Permite describir la variabilidad genética observada en tejidos
regenerados a partir de cultivos in vitro
 Es común cuando se regeneran plantas a partir de callos, o
cuando los cultivos se establecen a partir de explantos que no
contienen un meristema pre-organizado.
 En muchos casos, el grado de variación es proporcional a la
duración del cultivo in vitro.
 Se aplica para mejora de cultivos
 Aislamiento de protoplastos
 Protoplasto: célula vegetal sin pared celular
 Procedimiento:
 (1). Digestión de la pared celular: celulasa,
hemicelulasa, pectinasa
 (2). Regeneración de la pared celular: usualmente
dentro de las 24 hrs
 (3). División celular: la primera división ocurre
dentro de las 24-48 hrs
 (4). Proliferación y diferenciación
Protoplastos
 Aislamiento, cultivo y fusión de protoplastos

 Aplicaciones:
 1. Remoción de pared para captación de DNA :
Microinyección y electroporación
 2. estudios de síntesis de pared celular, transporte de
membrana, citoesqueleto.
 3. estudio de desarrollo de embriones somáticos.
 4. hibridización somática (cybridización) de especies
sexualmente compatibles o incompatibles, por fusión
de protoplastos se obtiene un nuevo germplasma.
 Aplicaciones

 1. Mantenimiento del background genético deseado:

micropropagación
 2. Producción en gran escala de cultivares
apropiados: embriogénesis somática
 3. Síntesis de productos usando técnicas de cultivo
continuo
 4. Eliminación de virus y otros patógenos
 5. Regeneración de plantas obtenidas por ingeniería
genética
 Cultivos diferenciados
 Raíces y tallos
transformados: obtenidas
por transformación genética
con la bacteria patógena del
suelo Agrobacterium sp.
 Se pueden usar para la
producción de metabolitos
derivados de raíces,
crecimiento rápido, mayor
estabilidad genética, mayor
productividad.
Tecnología del ADN recombinante
 El uso de la biotecnología moderna implica,
inicialmente, el conocimiento y aislamiento de
secuencias de ADN que corresponden a genes
responsables de conferir una característica
deseada (fenotipo)
 El aislamiento de los genes de interés es
realizado por medio de técnicas de clonado
molecular
 Clonado molecular
 Inducción de la amplificación de una secuencia de
ADN en un organismo vivo.
 Vectores de clonado (plásmidos o virus): vectores en
los que la secuencia de ADN es introducida usando
una DNA ligasa. Cuando es necesario el fragmento de
ADN de interés puede ser liberado del vector por
medio de enzimas de restricción.
 Una vez aislados los genes de interés son
incorporados al organismo blanco resultando en un
organismo genéticamente modificado (OGM) y esta
característica adquirida pasa a ser hereditaria
 Es posible transferir genes de animales,
bacterias o virus a las plantas.
 Se amplían los recursos para el
mejoramiento genético.
 Los genes de un organismo que son
insertados en otro se denominan
transgenes y tienen la capacidad de
conferirle a este último una determinada
característica.
 Organismos transgénicos
 Son excelentes modelos para el estudio de
procesos generales básicos como regulación de
la expresión génica y la genética molecular del
desarrollo y diferenciación celular
 Ofrecen la posibilidad de corrección de
numerosas enfermedades hereditarias: terapia
génica
 Organismos transgénicos
 Pueden funcionar como bioreactores para la
producción de proteínas valiosas o con propósitos
industriales
 Deben ser capaces de producir la proteína de interés
en niveles aceptables sin comprometer el normal
funcionamiento de sus células
 Deben tener la capacidad de transmitir esta
característica a las siguientes generaciones
 En el caso de ser un organismo multicelular deben ser
capaces de producir la proteína exógena en un órgano
definido
 Estrategia actual
 Acoplar a la secuencia de ADN que codifica para la
proteína de interés secuencias de ADN que contengan
señales responsables de dirigir altos niveles de
producción (promotor) de la proteína deseada en un
órgano específico.
 Las técnicas para la inserción de ADN en células
vegetales (transformación) usadas son:
 Infección con Agrobacterium tumefaciens
 Electroporación de protoplastos
 Método biolístico
 Avances
Los primeros experimentos a campo con plantas
transgénicas se realizaron en 1986 en Estados Unidos y
en Francia.
En 1996 y 1997 el número de países que ensayó
plantas transgénicas a campo aumentó a 45 habiéndose
realizado en 2 años mas de 10 mil experimentos.
Los cultivos más usados fueron: maíz, tomate, soja,
batata, algodón, canola.
Las características genéticas introducidas son
tolerancia a herbicidas, resistencia a insectos, calidad de
producto y resistencia a virus.
 Clonado de plantas
 La técnica del clonado in vitro es posible
mediante el cultivo de tejidos

 Esta técnica se basa en la totipotencialidad de

las células vegetales, por medio de la
regeneración in vitro, vía organogénesis o
embriogénesis somática
 Transformación

 Se producen cambios por inserción de un gen

proveniente de otro organismo
 La transferencia de DNA/genes de un organismo a
otro se realiza sin necesidad de reproducción sexual.
 La transformación exitosa depende de la
incorporación estable del gen nuevo en el genoma de
la planta receptora y su subsiguiente transmisión a
sucesivas generaciones.
 Transformación

Requerimientos
 Mecanismo de transferencia del gen
 Mecanismos de transferencia indirecta
 Mecanismos de transferencia directa

 Sistemas de regeneración
 Transformación indirecta

Mediada por Agrobacterium:

 Agrobacterium es una bacteria patógena del suelo
para dicotiledóneas y algunas coníferas.
 • Agrobacterium tumefaciens – crown gall disease
(tumors)
 • Agrobacterium rhizogenes – hairy root disease
(hairy roots)
 Las Monocotiledóneas presentan resistencia natural a
Agrobacterium.
 Transformación
 Agrobacterium tumefaciens & crown gall disease
 Crown gall disease produce nódulos anormales en
raíces. Los árboles jóvenes no crecen, en los árboles
adultos la corteza se pudre.
 Esta bacteria entra al árbol a través de heridas.
 Transformación
Agrobacterium tumefaciens
 La enfermedad crown gall resulta de la
expresión de genes codificados por un
segmento de DNA de la bacteria que se
transfiere e integra en forma estable al
genoma vegetal
 El fragmento de DNA bacteriano contiene
genes que producen hormonas cuando se
expresan en las células vegetales
ocasionando divisiones y crecimiento
anormales (tumores).
 Agrobacterium es un “ingeniero genético
natural”(1983).
 Es un mecanismo de transferencia entre
reinos
 Transformación
Transformación mediada por Agrobacterium
 Plásmido Ti: plásmido inductor de tumores (A. tumefaciens)
 Plásmido Ri: plásmido inductor de hairy roots (A.
rhizogenes)
 T-DNA: DNA que se transfiere
1. genes para síntesis de hormonas: codifican para enzimas
involucradas en la biosíntesis de auxinas y citoquinias. La expresión
de estos genes en la célula vegetal causa la enfermedad de agalla de
corona o la formación de hairy roots
2. Secuencias en los bordes: 25 bp direct repeats, borde derecho (RB) y
borde izquierdo (LB),a ambos lados del T-DNA. Son los elementos
necesarios (en la región del T-DNA ) para dirigir la transferencia del
T-DNA.
 Transformación mediada por Agrobacterium

PlásmidoTi o plásmido Ri:

 Genes de síntesis de opinas: responsables de la síntesis de nuevas opinas.
 Opinas: derivados de aminoácidos o azúcares producidos por tejidos vegetales infectados que
son por Agrobacterium como única fuente de carbono/nitrógeno.

Clasificación de los plásmidos Ti y Ri:

Plásmidos Ti: plásmidos Nopalina
• Octopine plasmid
• Agropine plasmid
• Succimanopine plasmid
Plásmidos Ri: plásmidos Manopina
• Agropine plasmid
• Cucumopine plasmid
Genes involucrados en la transferencia del T-DNA

Localizados en la región T-DNA:

1.Genes de síntesis de hormonas
2. Secuencias de los bordes: LB y RB

Localizados en cualquier región del plásmido Ti:

3.Genes de síntesis de opinas
4. Genes de virulencia

Localizados en el cromosoma de Agrobacterium (4 loci)

Síntesis de fibrillas de celulosa por Agrobacterium para cubrir la superficie de la célua vegetal(irreversible).
Clusters de Agro son entrampadas en la red de fibrillas de celulosa.
• chvA ychvB (linked): síntesis y excreción de 1,2-glucan
• cel locus: síntesis de fibrillas de celulosa
• pscA locus: afectan la síntesis de cicloglicanos y ácido succinilglicano
• att locus: afecta proteínas de la superficie celular
Algunos de estos loci se encuentran conservados en otras bacterias del suelo que se interasocian con plantas
 Genes Vir y transferencia de genes T-DNA

Las células vegetales se vuelven sensibles a Agrobacterium

cuando son heridas.
El proceso de transferencia se puede dividir en:
 En la bacteria: proceso de conjugación bacteriana
 En la célula vegetal: las células heridas producen compuestos
fenólicos de bajo PM que actúan como inductores específicos
de los genes de expresión vir.
Acetosyringona (AS), hirdroxi-acetosyringona (OH-AS)
Estos compuestos fenólicos actúan a través de dos sistemas para Regular la
expresión de los genes vir
 Transformación mediada por Agrobacterium
 Uso del plásmido Ti de Agrobacterium como
vector de transformación
 Se remueven los genes para hormonas
(desarmado)
 Para la transformación de introducen genes en el
plásmido Ti
 Clonado de DNA
 Genes marcadores para selección: de
resistencia a antibióticos
 Cassetes:
Promotor + gen + terminador
 Transformación mediada por Agrobacterium

Ventajas:
 Transformación estable

Desventajas:
 No para monocotiledóneas
 Aplicaciones de las
técnicas de cultivo in
vitro
 Micropropagación
 Mantiene la identidad genética del material
propagado sin introducir ninguna variabilidad
genética
 Propagación clonal rápida (floricultura,
fruticultura, plantas medicinales, silvicultura)
 Eliminación de virus (cultivo
( de meristemas)
hibridación o fusión somática (fusión de
protoplastos)
 Bancos de germplasma
 Semillas sintéticas (embriones somáticos
recubiertos de gel de alginato que también
encapsula nutrientes para el desarrollo del
embrión)
 Resistencia a insectos
 Puede ser obtenida mediante la
utilización de inhibidores de proteasas
vegetales o a partir de toxinas bacterianas
(Bacillus thuringiensis), o gen Bt
 Como ejemplos de plantas resistentes a
insectos están el maíz, batata y soja
transgénicos
 Tolerancia a herbicidas
 Esta modalidad engloba a la mayor parte
de las plantas transgénicas actuales
 Ejemplos: maíz, eucalipto, soja, caña de
azúcar
 Un ejemplo cotidiano es la Soja Roundup
Ready
 Resistencia a virus
 Las perspectivas son cada vez mayores a medida que
aumentan los conocimientos acerca de fitovirus
 Silenciamiento génico o protección mediada por
ARN
 Por medio de la tecnología del Agrobacterium
tumefaciens o de la biolística y el cultivo de tejidos,
es posible introducir en la planta genes de la cápside
viral posibilitándose así la adquisición de resistencia
por parte de la planta.
 Alteración del color floral
 Dentro del mercado de la floricultura se
abren nuevas perspectivas con el clonado
de genes asociados con la coloración de
las flores.
 También se abre la posibilidad de
modificar la arquitectura de la planta y de
las flores, las fragancias y la mayor
durabilidad de las flores.
 Obtención de nuevos productos y
alteración de la calidad nutricional
 La empresa Calgene produjo aceites ricos en
ácido esteárico.
 Se alteró la composición en hidratos de
carbono con vistas a la producción de
tubérculos de papa, aumento del contenido de
almidón y reducción de amilosa
 En el año 2000 se informó la obtención de
arroz genéticamente modificado que produce
beta- carotenos, precursor de la vitamina A
 Ingeniería metabólica
 Es posible alterar rutas metabólicas para permitir que
las plantas, o sus células, funcionen como
bioreactores (reactores biológicos).
 Es posible, de esta manera, la producción de
sustancias de valor farmacológico, como por ejemplo,
vacunas y biofármacos.
 La manipulación del metabolismo secundario de
vegetales, por medio de la transformación genética,
promete ser una de las contribuciones más
importantes de la ingeniería genética aplicada a la
industria.
 La sobre expresión constitutiva de
genes involucrados en la ruta
biosintética de metabolitos
secundarios podrá aumentar
significativamente la cantidad de
compuestos útiles producidos en
plantas.
 Los avances en esta área
permitirán aumentar las
productividad de metabolitos
secundarios obtenidos en cultivos
in vitro con la consiguiente
reducción de costos de producción
o logrando la producción de
nuevos compuestos.
Ejemplos de metabolitos secundarios producidos
por cultivos in vitro de células vegetales
Metabolito secundario Cultivo productor
Acido rosmarínico Anchusa officinalis
Ajmalicina Catharanthus roseus
Berberina Coptis japonica
Digoxina Digitlis lanata
Ginsenósidos Panax ginseng
Hiosciamina Hyoscyamus niger
Nicotina Nicotiana tabacum
Piretroides Pyrethrum cinerea
Shikonina Lithospermum erytrorhizon
Taxol Taxus cuspidata
Vinblastina Catharanthus roseus
 Biotransformación
 Se usan para realizar reacciones
bioquímicas sencillas en las que no se
necesita diferenciación ni crecimiento
celular
 Hidroxilación estereoespecífica en
posición 12- de la - metil digoxina,
glicósido cardiotónico, por células de
Digitalis lanata.
 Diferencias más importantes en el cultivo de células
microbianas, animales y vegetales

Característica Células microbianas Células animales Células vegetales

Tamaño 1-5 μm3 105-106 μm3 105-106 μm3

Forma de crecimiento Células individuales Individuales o En grupos
adheridas a
superficies
Tiempo de generación 1 hora 20horas >24 horas
Sensibilidad al esfuerzo baja alta Alta
cortante
Requerimiento de oxígeno Hasta 180 mmol l-1h-1 0.7-1.0 mmol l-1 h-1 0.5-1.8 mmol l-1h-1

Requerimientos nutritivos simples complejos Simples

Población celular 1010 células ml-1 106 células .ml-1 106 células .ml-1
alcanzada en cultivo
líquido
Molecular farming
 Qué es?
El Molecular farming es
la producción de proteínas
de alto valor agregado en
plantas.
Cómo se hace?
Se usa el mejoramiento genético
para introducir y expresar genes
que codifican para proteínas de
alto
Por qué en plantas?
En las plantas las proteínas se pueden producir
a muy bajos costos y en grandes cantidades.
También son flexibles y pueden producir una
gran variedad de proteínas.

Transformación              

1 El disco de la hoja es sumergida en una suspensión bacteriana.    
LA bacteria "Trojan Horse" infecta los bordes de la hoja y en este    
proceso integra los genes que codifican para la proteína de interés    
en el genoma vegetal.    
   
2 & 3 Después de la infección los discos se ubican en medio de
selección para las células que portan el gen de la proteína y
regeneran en plántulas. Luego de aproximadamente seis semanas
en medio de selección, un gran número de plántulas que portan el
gen de interés son visibles en los bordes.

4    se remueven las plántulas de los bordes de hojas y se colocan

en cajas plásticas transparentes con medio de enraizamiento.

5   Las plántulas se colocan en macetas y crecen hasta producir

semillas. Estas semillas pueden ser usadas para la producción en
gran escala de proteínas de interés farmacéutico..

Tráfico Proteico        

6   Luego de la traducción, la proteína se moverá a través del
retículo endoplásmico y el aparato de Golgi para su
procesamiento, plegado y glicosilación..

Producción en campo             

7  Luego de la cosecha el tejido que acumula la proteína puede ser
directamente consumido o la proteína puede ser extraída para un
uso posterior.
 Proteínas obtenidas por
Molecular Farming

 Reactivos de diagnóstico
 Vacunas animales
 Alimentos animales
 Enzimas industriales
 Pharmaceuticals para el hombre
 Ventajas del Molecular Farming para la producción de
proteínas de uso farmacéutico y enzimas industriales

1. Riesgos sanitarios reducidos de contaminación por patógenos

2. Pueden ser escalados a costos relativamente bajos

3. Son capaces de modificaciones postraslacionales proteicas

4. Requieren de infraestructuras limitadas (para cultivo, cosecha,

almacenamiento y procesamiento del material vegetal)
5. No se requiere, en muchos casos, la purificación de la proteína (por
ej. Procesamiento de alimentos, aditivos alimenticios, fermentaciones
y vacunas orales)
Valor de mercado de los productos proteicos del
molecular farming
1. La demanda del mercado de proteínas para la
industria farmacéutica se incrementa
2. Las proteínas expresadas en plantas resultan al
menos 10 veces más baratas que las expresadas
en otros sistemas (por ej, microorganismos)
3. El costo de vacunas expresadas en plantas ,
anticuerpos o proteínas puede ser 100- 1000
veces menor
 Ventajas de los vegetales como bioreactores

 Las plantas son los productores más eficientes de

proteínas
 son bioreactores escalables
 presentas ventajas en cuanto a costos
 Las células vegetales son similares a las humanas en
cuanto a:
 Maquinaria para síntesis proteica
 Pauta de lectura del código genético
 Ensamble, plegamiento y secreción de proteínas
complejas
 Anticuerpos
recombinantes en
vegetales
Plantibodies
Los Anticuerpos producidos en plantas pueden ser
utilizados en especialidades medicinales?

 Los anticuerpos producidos en plantas son

seguros y efectivos?
 Los glicanos vegetales pueden ser inyectados?
 Son para administración oral, inhalatoria o
tópica?
 Las regulaciones de FDA y USDA están
evolucionando?
 Etapas del proceso
1. Clonado y expresión de los genes de
interés
2. Regeneración y selección de las plantas
3. Recuperación y purificación de la
proteína
4. Caracterización del producto final
 Introducción de genes de anticuerpos
en plantas
1. Transformación con Agrobacterium.
2. Microinyección de cDNA en núcleo antes de
reimplantarlo en una célula anucleada
(Stieger et al. 1991)
3. Expresión transiente en hojas (Schouten et
al, 1996)
4. Métodos biolísticos
 Comparación de Anticuerpos derivados de
Plantas y Cultivos Animales
 Secuencia Peptídica: idéntica
 Afinidad: idéntica
 Tipos de Anticuerpos: El sistema vegetal es más versátil
 Pueden producir isotipos incluyendo IgA secretoras
 Procesamiento Post-transduccional: diferente
 núcleo de glicano idéntico, azúcar terminal diferente
 Antigenicidad & clearance: aparentemente idénticos
 Anticuerpos efectivos producidos en vegetales

 Anti-Streptococcus mutans (Guy’s 13)

 Previene caries dental en humanos
 Las sIgA 10X de plantas son más estables que IgG
 Nature Medicine 1998

 Anti-Herpes simplex virus (HSV8)

 Previene la transmisión del herpes vaginal
 Probado en ratones con PAb’s de arroz y soja
 Nature Biotechnology 1998
Aplicaciones de la Inmunomodulación

 Estudiar la función de un antígeno o incluso de

un epitope en las plantas
 Modificar caracteres agronómicos
 “Inmunizar” a la planta contra un determinado
agente.
 Inmunomodulación de blancos
endógenos
 Actividad de fitohormonas
 ABA (scFv en ER de tabaco)
 Giberellina (A 19/24 scFv en tabaco)

 Inactivación de producto final en la ruta biosintética de

una hormona (ABA)
 Modulación de la actividad del receptor hormonal (scFv
contra fitocromo)
 Inhibición enzimática (DFR en Petunia hybrida)
 Inmunización intra y extracelular
 Tabaco que expresa anticuerpos contra la
cubierta viral proteica de TMV
 Nicotiana benthamiana que expresa
anticuerpos contra el virus BNYVV
 Tabaco que expresa scFv contra factores de
infectividad de fitoplasmas y espiroplasmas
 Tabaco resistente a nematodes (IgM contra
Meloidogyne incognita)
 Anticuerpos contra nematodes
 Genes que codifican para enzimas blanco: p.ej celulasas las cuales
han sido clonadas de M. incognita así como de otros nematodes
de este tipo. Estas enzimas desempeñan un papel fundamental en
la migración hacia raíz y son un excelente punto de partida para la
selección de anticuerpos .Se han generado también anticuerpos
que bloquean el inicio del ciclo celular para evitar la inducción de
las células de alimentación por el nematode.
 Se han obtenido y caracterizado por su capacidad para inhibir sus
blancos anticuerpos contra las proteínas de TSWV :N (importante
para la replicación viral), G1/G2 (captación por thrips) y NSm
(distribución en la planta).
 Se han hallado motivos estabilizadores que aseguran un nivel de
expresión significativo de los anticuerpos y sus fragmentos en el
citosol de la célula vegetal.
 Perspectivas
1. Regulación metabólica.
2. Plantas con resistencia a virus mediada por plantibodies
3. Reducción del uso de pesticidas: resistencia a pestes e insectos
4. Modulación de antígenos (DH4R)
5. Estudio del rol fisiológico de hormonas.
6. Remoción de polutantes de suelos (Ac contra tóxicos
orgánicos, compuestos potencialmente carcinogénicos,
herbicidas)
7. Remoción de polutantes de aguas ( inmovilización el Ac en
soporte sólido)
8. “Biofarming”: producción de moléculas industriales o
farmacéuticas basada en cultivos vegetales. (1% TSP:
expresión costo-efectiva). Análisis de especie, órgano.
9. diagnóstico
 Downstream processing
 Importante para utilización ex planta
 Alcaloides y otras sustancias tóxicas encarecen
y dificultan la purificación (tabaco)
 Ausencia de virus patógenos, priones y otras
sustancias típicas de sistemas de producción
animales.
 Posibilidad de usar un tejido vegetal
comestible para inmunidad a nivel de mucosas
(purificación)
 Cuál es el desafío?

 Desarrollo de drogas para el tratamiento de ciertas

enfermedades; las proteínas son la clase en más
franco desarrollo para la prevención y tratamiento de
enfermedades.
 Desarrollo de resistencia contra patógenos
(microorganismos y patógenos más complejos como
nematodes)
 Análisis y manipulación de rutas biosintéticas.
 Seguridad y Eficiencia
 Ética