PRACTICA N° 04

MICROSCOPÍA

COMPETENCIA

➢ Reconoce las partes del Microscopio

➢ Se familiariza con el uso del Microscopio
➢ Observa muestras a través de un Microscopio virtual
➢ Reconoce las Células procariotas y eucariotas

INTRODUCCION

El microscopio es un instrumento óptico, constituido por un sistema de lentes

que permite obtener una imagen aumentada de un objeto no visible al ojo
desnudo. La imagen puede ser fotografiada u observada directamente. Para
poder usarlo correctamente se necesitan algunos conocimientos básicos
relativos a sus partes, cierta habilidad y adiestramiento.

En microscopia se manejan tres parámetros importantes para entender la

teoría del microscopio.

PODER DE RESOLUCIÓN (PR): Es la capacidad que tiene el microscopio (o

el ojo humano) de percibir por separado dos puntos pequeños, adyacentes y
cercanos. Es la capacidad para revelar detalles bien definidos de unos puntos
situados muy cerca uno del otro en el objeto, y poder distinguir imágenes
puntuales y totales. Es una medida cualitativa, por lo que no podemos
expresarla como un número. El PR aumenta a medida que disminuye la
distancia. El PR es inversamente proporcional al límite resolutivo. El límite
resolutivo del ojo es 1/10 mm o 100 μm y del microscopio 0,2 μm o 200 nm.

LÍMITE RESOLUTIVO (LR): Es la distancia mínima que debe existir entre dos
puntos para que sean distinguidos por separado, comprenderemos la relación
inversa que se establece entre el poder y el límite resolutivos, depende de la
longitud de onda de la luz (λ) que se emplee, así como también de la apertura
numérica de las lentes. (AN), ósea cuanto menor sea la distancia que debe
separar dos puntos para que se distingan por separado, mayor será el poder
resolutivo necesario para observarlos.

• El límite de resolución depende de la AN y de la longitud de onda de la luz

empleada.

Límite de Resolución = λ (ANobj. + ANcond.) = λ / (2AN)

• El Límite de resolución máximo que se consigue en los microscopios de

campo luminoso se sitúa entre 0,22-0,25 μm.
 APERTURA NUMÉRICA (AN): Es una expresión matemática que describe la
forma en que la luz es concentrada por el condensador y captada por el
objetivo.

AN = nSen α
Donde:

n= Índice de refracción del medio entre las lentes y la muestra. (1,0 para el aire;
1,56 para el aceite)
Sen α = Ángulo formado por el eje óptico y los rayos de luz más externos que
son captados por el objetivo.
Teniendo en cuenta que el seno de α, no puede exceder de 1, y que el índice
de refracción de los mejores lentes no puede ser superior a 1,6, usando aceite
de inmersión, y usando luz monocromática violeta (400 nm), se tiene que el
menor límite resolutivo que se puede obtener es de 170 nm (0,17μm), si
usamos luz blanca de la mínima distancia que veríamos, sería de objetos
separados 250 nm.

Fundamento óptico del microscopio compuesto

Se basa en producir una imagen más grande, virtual e invertida. La imagen que
observamos es una composición de las imágenes proyectadas por dos lentes
principales el objetivo y el ocular.

FORMACIÓN DE LA IMAGEN EN EL MICROSCOPIO COMPUESTO

DETERMINACIÓN DEL AUMENTO DE OBSERVACIÓN

Cuando se indica el poder de amplificación tanto en el objetivo como en el ocular,

se multiplica el aumento del ocular por el aumento del lente objetivo, en posición
de observación y el producto es el aumento total. Eje.
Ocular = 10X
Objetivo = 40X
Aumento = 400X

PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

El microscopio óptico consta de 3 sistemas: Mecánico, óptico e iluminación

A) SISTEMA MECÁNICO

Constituida por los siguientes dispositivos:

1. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular,

binocular, dentro de él se encuentra el TUBO ÓPTICO, un cilindro de metal en
cuya parte superior se encuentra colocado el ocular y en la parte inferior el
revólver, al cual se atornillan los objetivos.

2. BRAZO: Es de metal macizo en forma de C. Por su parte anteroposterior se

une con el tubo óptico y por su extremo inferior se conecta con la base del
microscopio o pie. En su extremo inferior se encuentra el tornillo macrométrico
y micrométrico los cuales se utilizan para movilizar el cabezal rápidamente
(enfoque grosero) y para movimientos lentos (Enfoque fino), respectivamente.

3. PLATINA: Es una plataforma de forma cuadrada, rectangular o circular que se

encuentra fija en parte anterior e inferior del brazo. Se utiliza para colocar la
preparación a observarse. Presenta una abertura central denominada apertura
de la platina, cuyo fin es dejar pasar los rayos luminosos proyectados de la
fuente de luz, además posee presillas o pinzas que permite sujetar la lámina o
portaobjetos.

4. REVOLVER: Es un dispositivo giratorio que está unido a la parte inferior del

tubo óptico y posee dos, tres o más roscas donde se atornillan los objetivos.
Este revólver al hacerlo girar debe disponerse en el retén, los objetivos,
indicando que se encuentra en posición de observación.

5. SISTEMAS DE DESPLAZAMIENTO DE LA MUESTRA: Sistemas de

cremalleras que permite el desplazamiento de la muestra de atrás hacia
delante o viceversa y de derecha a izquierda o viceversa.

6. BASE, PIE O ESTATIVO: Tiene forma de herradura o circular, y sirve de apoyo

al microscopio, debiéndose colocar sobre una superficie plana y horizontal.

7. TORNILLOS DE ENFOQUE: El macrométrico y el micrométrico permiten el

enfoque primario con el objetivo de menor aumento de la imagen y la
focalización fina de ésta.

B) SISTEMA ÓPTICO:

1. OCULARES: Son cilindros cortos y huecos que se colocan en la parte superior

del tubo óptico. Interiormente poseen dos o tres lentes, uno a cado extremo. La
lente superior se denomina lente ocular y la inferior lente de campo. En la parte
externa de estos lentes se indica el poder de amplificación 4X, 10X, 15X, etc.
Son llamados oculares porque el ojo del observador se coloca en este lugar.

2. OBJETIVOS: Son tubos cortos atornillados al revolver. El objetivo es un

sistema de lentes de los cuales el que está más cerca al objetivo se encuentra
en la parte externa del mismo: 4X, 10X, 20X, 40X 100X, etc. Este último es el
 objetivo de inmersión que se usa con aceite de cedro. A este dispositivo se le
denomina lente objetivo porque está ubicado cerca del objeto y forma una
imagen real, invertida y más grande.

C) SISTEMA DE ILUMINACIÓN:

1. CONDENSADOR: Se encuentra debajo de la platina y tiene como función

concentrar los rayos luminosos sobre la preparación y puede moverse
acercándose o alejándose de ésta por medio de un tornillo.

2. DIAFRAGMA: Ubicado en la parte inferior del condensador. Es un disco

circular que permite regular la cantidad de luz proyectada a la apertura de la
platina

3. LUZ: La fuente de luz se encuentra instalada en el pie.

PARTES DEL MICROSCOPIO

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1. Para su transporte se levanta siempre con una mano por el brazo y con la otra
se coge por la base.

2. Limpie previamente los objetivos con papel lente. Estando el instrumento en

posición vertical, oriéntelo hacia la fuente luminosa y regule la entrada de luz
con el diafragma.
PARA REALIZAR EL ENFOQUE:

1. La lámina con la muestra a observar es ubicada sobre la platina sujetándola

con las pinzas. Las láminas deben estar completamente secas para no mojar
las piezas del microscopio.

2. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (panoramico) y luego colocar el

de 10 aumentos (10x)

3. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo

macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del
ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose
dañar alguno de ellos o ambos.

4. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo

de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítido la
muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele

ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si
al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a
enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3.
El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es
fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se
descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si
se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.

EMPLEO DEL OBJETIVO DE INMERSIÓN:

1. Bajar totalmente la platina.

2. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos
indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.

3. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre

éste y el de 40X.

4. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.

5. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de

inmersión.

6. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente

toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y
se adosara a la lente.

7. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el

objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40X
por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
8. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se
puede volver a usar el objetivo 40X sobre esa zona, pues se mancharía de
aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir
la operación.

9. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se

coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya
se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el
objetivo de inmersión en posición de observación.

10. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial

para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en

posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no
sobresale del borde de esta y dejarlo cubierto con su funda.

2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con

su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de
forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para
protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.

4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el

microscopio.

5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que

queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro
(menos recomendable). En cualquier caso, se pasará el papel por la lente en
un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en
el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol.

6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico,

micrométrico, platina, revólver y condensador).

7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada

a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar
nunca de objetivo agarrándolo por el tubo de este ni hacerlo mientras se está
observando a través del ocular.

8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella

algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un
paño humedecido en xilol.

9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión

práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general
de los mismos.
I. MATERIALES

• Guía de prácticas
• Simulador
• Fotografías de celular eucariotas y procariotas

II.PROCEDIMIENTO

Uso del Simulador del Microscopio:

• Acceder al simulador del microscopio en el siguiente enlace:

http://www1.udel.edu/biology/ketcham/microscope/scope.html

1. Observación de la letra “e”

• Luego seguir los procedimientos indicados en la casilla “getting started”

• realizar las observaciones y dibujar los elementos observados
• Una vez concluido el tour de inicio elegir la lamina de la letra “e”
• Ubicar la muestra usando adecuadamente la platina y cambiar el modo de
visión a través del botón “Switch Views,” ajustar los oculares.
• Elegir el objetivo de menor aumento 4X y enfocar usando los tornillos
macrométrico y micrométrico.
• Regule el condensador para cambiar la cantidad de luz que pasa a la muestra
• Anotar las observaciones en los recuadros para rellenar de esta práctica.
• Cambiar de aumento al objetivo 10X. Anotar las observaciones.
• Cambiar el modo de vista con “switch view”, regresar la lámina.

2. Observación de la punta de raíz de cebolla

• Colocar la lámina de raíz de cebolla, centrar en la platina.

• Enfocar la muestra con el objetivo 4X. Anotar las observaciones.
• Cambiar de aumento a 10X. Anotar las observaciones.
• Luego cambiar a 40X. Anotar las observaciones.
• Cambiar el modo de vista con (switch view) devolver la lámina.

3. Observación de bacterias

• Colocar la lámina de bacterias y siguiendo el procedimiento anterior, observar

con los aumentos 4X, 10X, 40X y 100X, Anotar las observaciones.
• Devolver la lámina

4. Observación de células epiteliales de raspado de la mejilla

• Siguiendo el paso anterior colocar la lámina de células epiteliales, observar con

los objetivos de 4X, 10X, 40 X y anotar las observaciones.
ELEMENTO IMAGEN O DIBUJO DESCRIBIR SUS CARACTERISTICAS
OBSERVADO

Observación de Células procariota y eucariota

Acceder al siguiente enlace, observar las imágenes y anotar las observaciones:

https://microscope-microscope.org/microscope-resources/microscope-links/
IMAGEN O DIBUJO DESCRIBIR SUS CARACTERISTICAS
II. CUESTIONARIO.

1. Identifique todas las partes del microscopio

LECTURA COMPLEMENTARIA:

https://www.elsevier.com/es-es/connect/medicina/celulas-eucariotas-y-procariotas-
sabrias-distinguirlas-te-damos-las-claves