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I. METODOLOGIA
MICROSCOPIA
JUSTIFICACION
El conocimiento de las estructuras del ser vivo está basado casi totalmente en el estudio con el
microscopio. El microscopio óptico es un instrumento que permite la observación de objetos y
detalles de estructuras tan pequeñas que no podrían ser observadas a simple vista. Con él,
nuestro grado de visibilidad se amplía en cientos o miles de veces, gracias a un conjunto de
lentes, dispuestos convenientemente. Las principales dificultades en la observación y estudio
de estructuras biológicas son su REDUCIDO TAMAÑO Y SU TRANSPARENCIA a la luz visible.
Dado que el microscopio permite superar estas dos dificultades, su uso y el conocimiento de
los principios y técnicas en microscopía, resultan fundamentales para el desarrollo de la
investigación en ciencias biológicas.
OBJETIVOS.
1. Identificar las partes del microscopio y comprender sus características y la visión con él.
2. El microscopio compuesto, que puede ser monocular o biocular, permite obtener aumentos
de 100 a 1500 veces. Los objetos a observar deben ser muy pequeños o cortados en láminas
tan delgadas que la luz pueda atravezarlos.Estos se colocan en láminas de vidrio especiales
denominadas porta-objetos y cubre-objetos. Las imágenes que se obtienen son
bidimensionales e invertidas.
1.2 Columna. Estructura que une el pie con la platina y el tubo. Sostiene además el
condensador y el diafragma.
1.3 Platina. Superficie plana para sostener el porta objetos y el cubre-objetos que contienen a
las preparaciones.
1.5 Cremallera. Asociada a dos tornillos, permite el movimiento vertical del tubo o de laplatina
para obtener la distancia a la cual el objeto puede ser observado nítidamente; es decir, el
enfoque preciso para el observador.
1.6 Tornillo macrométrico. Permite movimientos muy cortos en un ajuste fino del enfoque
para lograr una observación precisa.
1.7 Revólver. Sistema giratorio relacionado con el tubo, que porta los lentes objetivos para
diversos aumentos, pudiendo utilizarlos alternativamente.
1.8 Pinzas. Par de láminas rectangulares, situadas sobre la platina, para mantener al porta-
objetos.
2. PARTE OPTICA: Comprende los lentes oculares, los lentes objetivos y los dispositivos de
iluminación.
2.1 Oculares. Lentes dispuestos en la parte superior del tubo cercano al ojo del observavador.
Su aumento puede ser de 6X, 10X y 15X.
2.2 Objetivos. Son lentes de diferentes aumentos situados en el otro extremo del tubo, en el
revólver. El de menor aumento es más corto (3.2X,4X, 8X y 10X) y el de mayor aumento es más
largo (40X y 44X). Puede existir además un objetivo de inmersión de 100 a 150 aumentos.
2.4 Diafragma. Abertura que regula la cantidad de luz que ingresa hacia la preparación.
2.5 Espejo o luz incorporada. Proporciona la luz que llega hasta el objeto a estudiar y el sistema
óptico del microscopio. Existe un espejo plano por un lado y cóncavo por el otro, para ser
usados cuando se disponga de abundante o escasa luz, respectivamente. La luz incorporada
corresponde a un foco de luz eléctrica adaptado en el lugar que ocupa el espejo.
1. Grado de Aumento: Es la magnificación total que sufre la imagen del objeto debido al efecto
de los lentes oculares y objetivos. Se obtiene multiplicando el número de veces que aumenta
el lente ocular por el número de veces que aumenta el lente objetivo. Si el objetivo aumenta la
imagen de un objeto 40 veces, ésta al pasar por la lente ocular será nuevamente aumentada.
Este resultado permite saber cuantas veces más grande estamos viendo la imagen de un
objeto.
2. Poder de Resolución. Es la posibilidad de distinguir separados dos puntos muy cercanos
entre sí. Cuanto mmayor sea el poder de resolución, menor será la distancia entre dos puntos
a la cual pueden distinguirse como tales. La distancia límite en la cual dos puntos pueden ser
todavía distinguibles se denomina Límite de Resolución. El poder de resolución de un
microscopio compuesto depende de la longitud de onda de la fuente luminosa y de la apertura
numérica (propiedad óptica de la lente). Puede ser calculado mediante la siguiente fórmula:
LAMBDA
P.R. = -------
2 A.N.
Donde:
b. Frotar sin presionar, con papel de lente, usando este solo una vez.
2. Comprobar si el lente objetivo de menor aumento está a continuación del tubo; si no es así,
debe colocarse en dicha posición haciendo girar el revolver hasta alcanzar un "tope" que lo
indique.
5. Mover el tornillo macrométrico para acercar el lente objetivo de menor aumento hacia la
preparación, hasta llegar a un tope.
7. Una vez enfocada la imagen girar el tornillo hasta que sea nítida. Nunca se debe usar el
tornillo micrométrico para grandes desplazamientos, para ello está el tornillo macrométrico.
10. Para observar una muestra con el objetivo de inmersión, se coloca una gota de aceite de
cedro encima de la lámina de la preparación antes de girar el revolver. Esto pemite que la
imagen se vea con nitidez para realizar la observación ya que este tipo de lentes requiere que
el índice de refracción sea similar al del vidrio.
11. Terminada la observación, girar el revólver para colocar el objetivo de menor aumento en
la primera posición de trabajo.
12. Retirar la preparación y dejar limpio el microscopio, secando la platina con cuidado.
13. Si usó el objetivo de inmersión, debe limpiarse inmediatamente después de su uso con
ayuda del papel de lente. Quitar el grueso del aceite con una hoja, luego limpiar con una
segunda impregnada en xylol y finalmente con una tercera, secar el lente. No usar cantidades
excesivas de solvente pues pueden disolver el cemento de los componentes de los lentes.
15. En sitios con excesiva humedad ambiental deberá guardarse el microscopio en una
campana de vidrio con un desecante como carbonato de calcio.
MATERIALES
De Laboratorio:
- Microscopio Compuesto.
- Microscopio Estereoscópico.
- Goteros.
Del alumno:
- Guía de Estudio.
- Láminas porta-objetos.
- Láminas cubre-objetos.
MEDICIONES AL MICROSCOPIO
Para determinar la distancia lineal que representa cada unidad (el valor micrométrico), se debe
hacer calibraciones para cada aumento de un microscopio (o sea los productos de los
aumentos de cada combinación ocular-objetivo) utilizando un micrómetro de platina (un
micrómetro objetivo). Los micrómetros de platina son similares a una lámina portaobjetos y
tienen grabadas escalas que representan medidas exactas y convencionales. Comúnmente se
utiliza un micrómetro de platina cuya escala métrica es de un milímetro (1000 micras), dividida
en 10 unidades con 10 subdivisiones de 10 micras cada una (la unidad más pequeña
representada).
3. Girar el ocular micrométrico hasta que las dos escalas estén paralelas.
5. Ubicar la línea del micrómetro ocular más distante del comienzo de la escala que coincida
con una línea de la escala del micrómetro de platina o calcular el largo en micras de la distancia
representada en el micrómetro de platina, que corresponde al largo total del micrómetro
ocular o de contar con un tambor micrométrico desplazar el trazo perpendicular hasta que
coincida con una línea distante del comienzo de la escala de la platina.
Determinar las unidades que éstas representan en ambas escalas.
7. Repetir el cálculo para cada objetivo, usando aceite para el objetivo de inmersión.
9. Para medir objetos en el campo del microscopio, hacer coincidir un extremo o división
mayor de la escala del micrómetro ocular con un extremo del objeto a medir. Contar el
número de unidades que representa.