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PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE

BIOLOGÍA
PRÁCTICA No. 2 MANEJO DEL MICROSCOPIO, TÉCNICAS PARA HACER PREPARACIONES
MICROSCOPICAS Y DETERMINACIÓN DE MEDIDAS

I. OBJETIVOS
• Familiarizar al estudiante con el uso, funcionamiento, cuidado del microscopio.
• Identificar algunas propiedades del microscopio que ayudan al conocimiento de las ciencias
biológicas.
• Definir y comprobar las propiedades básicas del microscopio: poder de aumento, poder de
resolución, poder de penetración y poder de definición.
• Analizar el sentido o posición de la imagen dada por el microscopio con relación a la posición
del objeto que se observa.

II. INTRODUCCIÓN Y MARCO CONCEPTUAL


El microscopio es un instrumento óptico diseñado aumentar considerablemente la imagen de objetos
muy pequeños permitiendo así la observación de objetos pequeños y microorganismos que no son
visibles al ojo humano. Tanto en las células y sus estructuras como los organismos que dominan el
mundo microscópico, es difícil determinar un tamaño exacto debido a las dimensiones tan pequeñas
que los caracterizan; lo que hizo del microscopio uno de los inventos más revolucionarios en el estudio
de los organismos vivos y su constitución. En el estudio de la biología celular la unidad de medida más
frecuente es la micra representada con la letra griega µ y equivale a 0,001 mm.

Dado que la imagen observada de la muestra está ampliada muchas veces e invertida, es difícil
moverla de forma manual durante el proceso de observación; por ello los soportes de los microscopios
científicos de alta potencia están montados en una plataforma que se puede mover con tornillos
micrométricos. Algunos Todos los microscopios de investigación cuentan con tres o más objetivos
montados en un cabezal móvil que permite variar la potencia de aumento.

El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas:

a. El sistema mecánico: está constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las
lentes que permiten el movimiento para el enfoque.
b. El sistema óptico: comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el
aumento de las imágenes que se observan a través de ellas.
c. El sistema de iluminación: comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y
regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a través del microscopio.

PARTES MECÁNICAS
• Soporte: sostiene la parte óptica, está formado por dos partes: el pie o base y el brazo.
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• El pié o base: en forma de herradura es el apoyo de las demás piezas del microscopio.
• EL brazo: sirve de soporte a las otras piezas, de ella se agarrará el microscopio cuando se
transporte de un lugar a otro del laboratorio. En algunos está articulado a la parte superior del
pié mediante un tornillo que permite la inclinación de la columna para comodidad en el
momento de la observación.
• Platina: es el lugar donde se deposita la preparación. Puede ser cuadrada, circular o
rectangular con un orificio central a través del cual pasa la luz a través de ella.
• Carro: posee dos tornillos que permiten movimientos horizontales (derecha, izquierda,
adelante, hacia atrás).
• Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular o triocular.
• Tubo del ocular: se encuentra en la parte superior del microscopio, sobre él se encuentran
acoplados los oculares.
• Revólver: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite cambiar los objetivos al girarlos.
• Tornillos de enfoque: Macrométrico y micrométrico o El tornillo macrométrico permite
desplazamientos amplios, para subir o bajar la platina de forma visible.
o El tornillo micrométrico permite desplazamientos muy finos de la platina, permite el
enfoque correcto de la imagen.

PARTES ÓPTICAS
Son las más importantes del microscopio, puesto que son las que permiten la iluminación, la
ampliación y visión aumentada del objeto en la platina.
• Oculares: están situados en la parte superior del tubo ocular, cerca del ojo del observador; y
consiste en una lente que se acopla a un pequeño tubo. Amplía la imagen proveniente del
objetivo.
• Objetivos: son los lentes acoplados al revolver, cerca de la preparación y pueden ser
cambiados de posición según la necesidad con solo rotarlos. El número del objetivo varía
según la capacidad de aumento.
o Objetivos ordinarios o secos: son los de menor aumento y se usan en las
observaciones corrientes, donde hay una capa de aire entre el objeto que se examina y
la lente frontal.
o Objetivos de inmersión homogénea o de aceite: presenta la lente frontal más
pequeña y curvada, lleva impresa las letras OIL, UOEL, o INM o un circulo acanalado
negro, rojo o blanco. Con estas lentes se utiliza aceite de inmersión generalmente de
cedro, cuyo índice de refracción que es de 1,515 recoge los rayos luminosos y los
concentra para dirigirlos al objetivo.
• Condensador: es una lente convergente que concentra los rayos luminosos para enviarlos al
objetivo a través de la platina.se compone de dos o tres lentes y un diafragma que regula la
cantidad de luz que debe llegar al objeto. En ocasiones se presentan algunos anillos por debajo
del diafragma, que se utilizan para colocar filtros cuando se requiere alguna modificación
especial de luz.
• Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
• Foco o fuente de luz: dirige los rayos luminosos hacia el condensador. Puede ser un espejo
que recoge los rayos de luz de una fuente cercana al microscopio o una lámpara incorporada al
pie del microscopio que envía la luz directamente al condensador.

Nohemí Ruth Genes Díaz, Bióloga


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PROPIEDADES BÁSICAS DEL MICROSCOPIO


• Poder separador o poder de resolución: es una cualidad del microscopio, y se define como
la distancia mínima entre dos puntos próximos que pueden verse separados. El ojo normal no
puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una décima de milímetro.
Entre mayor sea el poder del microscopio, más pequeña es la distancia que puede medir entre
dos puntos.
El poder de resolución del ojo humano es de 100 micras; en el microscopio óptico, el poder
separador máximo conseguido es de 0,2 décimas de micra, y en el microscopio electrónico, el
poder separador llega hasta 10 angstrom.
• Poder de definición: se refiere a la nitidez de las imágenes obtenidas tanto en la periferia
como en el centro del campo visual, se refiere sobre todo a la definición de los contornos. Esta
propiedad depende de la calidad y de la corrección de las aberraciones de las lentes utilizadas.
• Poder de Aumento: se define como la relación entre el diámetro aparente de la imagen y el
diámetro o longitud del objeto, o sea:
Aumento (A) = Diámetro / Objeto

Tanto el ocular como el objetivo poseen un poder de aumento determinado, así que para
calcular el aumento de un microscopio, basta multiplicar el aumento del ocular por el aumento
del objetivo. Por ejemplo, si estamos utilizando un ocular de 10X y un objetivo de 40X, el
aumento a que estamos viendo la preparación será: 1OX x 40X = 400X, lo cual quiere decir
que la imagen del objeto está ampliada 40 veces.
• Poder de penetración: es la propiedad que permite observar varios planos del preparado con
una misma posición de enfoque. Generalmente el microscopio enfoca un solo plano del
preparado.

ENFOQUE DE UNA MUESTRA EN EL MICROSCOPIO


1. Bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior,
ya debería estar en esas condiciones.
2. Haciendo uso del revolver colocar el objetivo de menor aumento (seco débil 4x) en posición de
empleo.
3. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas y centre la
preparación haciendo uso de los tornillos del carro.
4. Regule la luz mediante el uso del diafragma. Los objetivos necesitaran másluz cuanto mayor
poder de aumento posean.
5. Haciendo uso del tornillo macrométrico suba al máximo la preparación hasta que encuentre
tope sin observar con los oculares. Esto se debe hacer usando el objetivo de menor aumento
del microscopio.
6. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10
aumentos (10x). Accione el macrométrico hasta que visualice la imagen en el campo visual.
7. Una vez enfocada afine la imagen con el tornillo micrométrico.
8. Si desea mayor detalle cambie de aumento rotando el revólver hacia el objetivo que
proporcione el aumento deseado.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de
observación, bajar por completo la platina y asegurarse de que la parte mecánica de la platina
no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.

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2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para
evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe
guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con
un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo
con pañuelos especiales para óptica empapado de xilol o tolueno. En cualquier caso se pasará
el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina,
revólver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo
agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido,
secarlo con un paño.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y al
acabar el curso encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

III. PROCEDIMIENTO

PRIMERA PARTE: MONTAJE Y OBSERVACIÓN DE MUESTRAS

A. Nombra las partes señaladas en el microscopio e indica la función de cada una de ellas.

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B. MONTAJE Y OBSERVACIÓN DE MUESTRAS.


Debes tener en cuenta que a través del microscopio solo se pueden observar objetos que dejan pasar
rayos de luz, razón por la cual el preparado debe ser lo más delgado y transparente posible.
Generalmente las preparaciones son húmedas, pues el agua además de evitar que la muestra se
deshidrate actúa como refractor de la luz, concentrándola y enviándola hacia el objetivo. Así que al
colocar la preparación sobre el portaobjeto, debe agregarle una pequeña gota de agua y sobre esta
colocar el cubreobjetos; cuidando que el agua no rebose los bordes, en caso de que esto suceda retire
el exceso con papel toalla o servilletas.

FIBRA DE ALGODÓN O LANA


Tome una muestra muy pequeña de lana o algodón de diferentes colores, colóquela sobre el
portaobjetos agregue una gota de agua destilada y cúbrala con el cubreobjetos. Lleve al microscopio y
observe con objetivos de 4x y 10x.

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Fibra de lana a simple vista Fibra de lana 4x

Fibra de lana 10x

RESPONDE:
• ¿Qué propiedad(es) del microscopio pueden comprobar en estas observaciones?
• Describe que diferencias encuentras entre la observación a simple vista y las observaciones a
través el microscopio.
• ¿Cuántas veces está ampliada la imagen en cada observación?

CORCHO
Agrega una gota de agua destilada sobre el portaobjetos, realiza un corte fino de corcho colócalo
sobre el agua y tapa con el cubre objetos. Lleve al microscopio, observe con 4x, 10x y 40x.

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 ¿Cuántas veces esta aumentada la imagen en las tres observaciones?


 ¿Qué tipo de estructuras se observan?

POLEN DE FLOR
Sacuda el androceo de la flor en el portaobjetos hasta obtener la muestra de polen, agrega una gota
de agua destilada, coloca el cubreobjetos y observa al microscopio 40x.

 Cuántas veces esta aumentada la imagen observaciones?


 ¿Qué tipo de estructuras se observan?

POLVILLO DE ALA DE MARIPOSA


Toma un trozo pequeño del ala de una mariposa o sacúdela sobre el portaobjetos hasta obtener la
muestra de polvillo de las alas, agrega una gota de agua destilada y coloca el cubreobjetos.. Observa
al microscopio 40x.

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 ¿Cuántas veces esta aumentada la imagen?


 ¿Qué tipo de estructuras se observan?

EPIDERMIS DE CEBOLLA
Corta un bulbo de cebolla y levanta la epidermis de la cara interna de uno de sus catáfilos (hojas) corta
un trozo pequeño de 1 cm2 y colócalo sobre un portaobjetos con una gota de agua y cúbrelo con un
cubreobjetos. Lleve al microscopio 4x 10x.

4x 10x

• Cuántas veces esta aumentada la imagen en las dos observaciones?


• ¿Qué tipo de estructuras se observan?
• ¿Cómo se aprecia la morfología de las células y sus paredes?

OBSERVACION DE LETRA IMPRESA


Seleccione y recorte en el periódico una letra minúscula “e” muy pequeña, móntela en un portaobjetos
de tal forma que quede derecha en posición de lectura y agregue una gota de agua destilada, cubra
con el cubreobjetos y obsérvela en el microscopio con los objetivos 4x y 10x.
Dibuje la letra observada a simple vista, observada al microscopio con menor aumento (4x) y con
mayor aumento (10x).

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A simple
vista ↓

• ¿Qué diferencias encuentra entre las cuatro observaciones de la letra?


• ¿Cuál es la posición de la letra observada a simple vista?


R// esta en posición de lectura

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• ¿Cuál es la posición de la letra observada al microscopio?


R// al momento de aplicar el zoom la letra se invierte tanto en el plano vertical y horizontal
• Si el carro se mueve hacia delante ¿En qué dirección se mueve la letra?
R// se mueve hacia abajo
• Si el carro se mueve hacia atrás ¿hacia dónde se mueve la imagen?
R// se mueve hacia arriba

SEGUNDA PARTE: DETERMINACIÓN DE MEDIDAS AL MICROSCOPIO

Corte un cuadrado de papel milimetrado de 1cm2 y móntelo al portaobjetos, agregue una gota de
agua, tenga cuidado para que los lados del papel milimetrado queden paralelos a los lados del
portaobjeto. Con cuidado coloque sobre este el cubreobjetos, evitando la formación de burbujas.
Coloque la preparación sobre la platina del microscopio y observe con objetivos 4x, 10x y 40x.
4x 10x 40x

REALIZA LAS CONVERSIONES


A. ¿Cuánto mide el campo visual del objetivo de menor aumento (4x) en las
unidades siguientes?
En centímetros _____37,5__________
En milímetros ____3,75 mm______
En micras 375000
En nanómetros __¿8¿
En Angstrom ¿¿ 3,75 x 10 7¿
Calcula en milímetros cuadrados el área del campo visual de este objetivo (Área= πr2)

B. ¿Cuánto mide el campo visual del objetivo de 10x?


En centímetros ____18.5____________
En milímetros ____1,85 mm ______
En micras _________185000___________
En nanómetros ¿¿ 1,85 X 108¿
En Angstrom ¿¿ 1,85 X 109¿
Calcula en milímetros cuadrados el área del campo visual de este objetivo (Área= πr2)

Para determinar el diámetro correspondiente a los objetivos 40x y 100x de debe aplicar una formula ya
que no se puede medir con el papel milimetrado.

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Para ello divide el diámetro encontrado del campo visual del objetivo de menor aumento por la razón
resultante entre el número del objetivo de mayor aumento y el número del objetivo de menor aumento.
Puesto que el diámetro del campo visual es inversamente proporcional al poder de aumento de los
objetivos, se puede determinar mediante la siguiente fórmula:
𝒅𝟏 𝒐𝒃𝒋𝟐
= ; Donde d1 es el diámetro del objetivo de menor aumento y d2 es el diámetro del objetivo de
𝒅𝟐 𝒐𝒃𝒋𝟏
mayor aumento.

REALIZA LAS CONVERSIONES


C. ¿Cuánto mide el campo visual del objetivo de 40x?
En centímetros ________4,8 cm________
En milímetros ____0,48 mm_______
En micras _____________48000_______
En nanómetros ¿¿
En Angstrom ¿¿ 4,8e+8¿
Calcula en milímetros cuadrados el área del campo visual de este objetivo (Área= πr2)

D. ¿Cuánto mide el campo visual del objetivo de 100x?


En centímetros ________1,8 cm________
En milímetros _____0,18 mm_____
En micras _______18000_____________
En nanómetros ¿¿
En Angstrom _________1,8e+8¿
Calcula en milímetros cuadrados el área del campo visual de este objetivo (Área= πr2)

IV. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS


1. ¿Por qué la imagen aparece invertida en el microscopio compuesto?
2. ¿Cuál es la razón por la cual se utilizan cortes de tejidos muy delgados para observar al
microscopio?
3. ¿Cuáles son las ventajas y cuales las limitaciones que presenta el microscopio óptico con
respecto al microscopio electrónico?
4. Consulte y enumere algunos tipos de microscopio utilizados para realizar observaciones
biológicas compara las técnicas que utilizan y en qué casos se recomienda el uso de cada uno.
5. ¿El diámetro del campo visual es directa o inversamente proporcional al poder de aumento del
objetivo? Explique.
6. ¿Por qué es importante conocer el tamaño de un organismo microscópico?
7. ¿Cuáles son las ventajas de conocer previamente el diámetro del campo visual de un objetivo
determinado?
8. Investiga que tipo de técnicas de fijación y/o coloración se utilizan para observar células o
tejidos al microscopio.

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