DETERMINACIÓN DE UREA

La urea es un producto de desecho que se forma en el hígado cuando las proteínas se

metabolizan en sus componentes, los aminoácidos. Este proceso produce amoníaco, que

luego se convierte en urea, un producto de desecho menos tóxico.

Esta prueba mide la cantidad de urea en la sangre. En ocasiones, se calcula el cociente

nitrógeno ureico (BUN) - creatinina para ayudar a determinar la causa de valores elevados

de urea.

El nitrógeno es un componente tanto del amoníaco como de la urea. La urea y el nitrógeno

ureico se denominan de forma algo intercambiable porque la urea contiene nitrógeno y

porque el nitrógeno de urea es el "método de transporte" utilizado por el cuerpo para

deshacerse del exceso de nitrógeno. La urea se forma y es liberada por el hígado a la

circulación, a continuación, se transporta a los riñones, donde se filtra y se libera en la orina.

Dado que este es un proceso continuo, generalmente hay una cantidad pequeña pero estable

de nitrógeno ureico en la sangre. Sin embargo, cuando los riñones no pueden filtrar los

desechos de la sangre debido a una enfermedad o daño, entonces aumentará la concentración

de urea en la sangre.

Los riñones son dos órganos en forma de haba localizados en la parte superior y posterior del

abdomen, por debajo de la caja torácica. Contienen multitud (alrededor de un millón) de

unidades diminutas encargadas de filtrar la sangre conocidas como nefronas. En cada una de

las nefronas, la sangre se está filtrando continuamente a nivel de unas formaciones

microscópicas denominadas glomérulos. Los glomérulos permiten el paso de agua y de

moléculas pequeñas, pero retienen otras moléculas de mayor tamaño, así como las células

sanguíneas. Desde el glomérulo, el fluido y las moléculas así filtrados circulan hacia un

túbulo que tiene la capacidad de reabsorber lo que el organismo puede reutilizar. Todo el

resto se excreta en forma de orina.

La mayor parte de enfermedades o situaciones que afectan al hígado o los riñones pueden

potencialmente repercutir sobre la concentración de urea en sangre. Si la cantidad de urea

producida por el hígado aumenta o si se excreta menor cantidad de urea por los riñones,

entonces las concentraciones de urea en sangre aumentarán. Si una lesión o enfermedad

hepática inhibe la producción de urea, la concentración sanguínea de la misma puede

disminuir.

La enzima ureasa transforma la urea en

dióxido de carbono e ión amonio. En presencia

de este último y por acción del hipoclorito de

sodio en medio alcalino, se produce la

oxidación del fenol con formación de

indofenol (reacción de Berthelot) de intenso

color azul, cuya intensidad medida

fotométricamente es proporcional a la

concentración de amoníaco y por lo tanto a la

de urea presente en la muestra.

DETERMINACION DE UREA EN SANGRE

Muestra: Suero o plasma anticoagulado con heparina, oxalato, citrato. No usar

anticoagulantes que contengan fluoruro.

La urea es estable en el suero a temperatura ambiente por un mínimo de 24 horas. En

refrigerador puede llegar a 10 días.

DETERMINACION DE UREA EN ORINA

Muestra: Usar sobrenadantes de orinas centrifugadas. La urea en orina es estable varios días

si se conserva la muestra en refrigerador dependiendo del grado de contaminación. Las

muestras de pacientes deben manipularse considerándolas potencialmente infectivas, al igual

que el material descartable y los utilizados en el ensayo, que hayan estado en contacto con

las mismas.
 DETERMINACIÓN DE CREATININA

La creatinina se produce de forma endógena a partir de la creatina y el creatinfosfato como

resultado de los procesos metabólicos musculares. Se elimina por riñón mediante filtración

glomerular

Normalmente, los riñones filtran la creatinina de la sangre y la expulsan del cuerpo por la

orina. Cuando hay un problema con los riñones, la creatinina se puede acumular en la sangre

y sale menos por la orina. Los niveles anormales de creatinina en la sangre o en la orina

pueden ser signo de enfermedad renal.

TOMA DE MUESTRA

Las muestras de orina se recogen en frascos de polietileno y se mantienen a 4 °C hasta el

momento de su análisis, que debe tener lugar durante las dos semanas siguientes a la toma de

muestra.

PROCEDIMIENTO DE ANÁLISIS

Preparación de la muestra:

La muestra de orina se lleva a temperatura ambiente agitándola en un sistema mezclador

durante 30 minutos y posteriormente se centrifuga a 800 r.p.m. durante 5 minutos.

Se introducen 10 µl de orina centrifugada en viales para inyector automático, se pesa, se

añade 990 µl de la disolución de fase móvil y se pesa el vial de nuevo.

Se encapsula el vial y se determina la concentración de creatinina mediante HPLC-UV.

Preparación de patrones y curva de calibrado:

Se preparan los patrones de la recta de calibración a partir de la disolución patrón de

creatinina en agua de 1 g/l preparada según el apartado, tomando 1; 5; 10; 20 y 40 microlitros

de dicha disolución y completando el volumen hasta 1 ml con la disolución de fase móvil.

Los patrones así preparados corresponden a 1; 5; 10; 20 y 40 mg/l de fase móvil, que son

finalmente equivalentes a 0,1; 0,5; 1,0; 2,0 y 4,0 gramos de creatinina por litro de orina.

NOTA: Todas las disoluciones se preparan llevando a cabo un control gravimétrico (con

balanza de precisión) de las mediciones volumétricas. Este control gravimétrico mejora la

calibración y por ende la calidad de los resultados analíticos. Alternativamente las

disoluciones pueden ser preparadas utilizando únicamente microjeringas y material

volumétrico calibrado.

Curva de calibración:

Se representa la altura absoluta de pico obtenida en el análisis de los patrones de calibración

frente a sus respectivas concentraciones, obteniéndose así la curva de calibración.

Condiciones cromatográficas

Para el desarrollo del método se ha utilizado un sistema cromatográfico HPLC Agilent serie

1100 con detector ultravioleta y estación de tratamiento de datos.

Las condiciones cromatográficas utilizadas para la determinación de la creatinina en orina

son:

Columna cromatográfica: Agilent Zorbax SB-Aq 4,6x150 mm 3,5 micras

Temperatura: 22 °C

Fase móvil: disolución tampón 3,2: acetonitrilo

Longitud de onda: 236 nm

Volumen de inyección: 10 µl

Flujo: 1 ml/min

Tiempo de retención: 11,3 min

Tiempo de análisis: 13 min

CÁLCULOS

La concentración de creatinina expresada en miligramos por litro de fase móvil se determina

por interpolación de la altura de pico absoluta del compuesto, obtenida en el análisis de las

muestras, en la curva de calibrado.

Los resultados pueden expresarse en gramos de creatinina por litro de orina mediante la

siguiente expresión:

Ccreatinina (g/l) = ccreatinina(mg/l fm) x 100(FD) x 10-3 (g/mg)

siendo:

Ccreatinina (g/l) es: la concentración de creatinina en gramos por litro de orina

ccreatinina (mg/l fm) es: la concentración de creatinina en miligramos por litro de fase móvil

(fm)

100(FD) es: el factor de dilución (la creatinina contenida en la orina se diluye 100 veces en

la fase móvil)

Los resultados pueden expresarse en milimoles de creatinina por litro de orina mediante la

siguiente expresión:
Ccreatinina (mmol/l) = Ccreatinina (g/l) x 1000 (mmol/mol)

113,2 (g/mol)

siendo:

Ccreatinina (mmol/l) es: la concentración de creatinina en milimoles por litro de orina

Ccreatinina (g/l) es: la concentración de creatinina en gramos por litro de orina

113,2 (g/mol) es: el peso molecular de la creatinina.

NIVEL DE CREATININA SÉRICA

La creatinina normalmente entra en el torrente sanguíneo y se filtra a través de este a un

ritmo, por lo general, constante. La cantidad de creatinina en sangre debe ser relativamente

estable. Un nivel elevado de creatinina puede ser un signo de función renal deficiente.

La creatinina sérica se expresa en miligramos de creatinina por decilitro de sangre (mg/dL)

o en micromoles de creatinina por litro de sangre (micromoles/L). El rango normal de

creatinina sérica es el siguiente:

Para hombres adultos, de 0,74 a 1,35 mg/dL (65,4 a 119,3 micromoles/L)

Para mujeres adultas, de 0,59 a 1,04 mg/dL (52,2 a 91,9 micromoles/L)

TASA DE FILTRACIÓN GLOMERULAR

La medición de la creatinina sérica también puede utilizarse para evaluar la rapidez con que

los riñones filtran la sangre (tasa de filtración glomerular). Debido a la variabilidad de la

creatinina sérica de una persona a otra, la tasa de filtración glomerular puede proporcionar

una lectura más precisa de la función renal.

La fórmula para calcular la tasa de filtración glomerular tiene en consideración el recuento

de creatinina sérica y otros factores, como la edad y el sexo. Una puntuación de la tasa de

filtración glomerular por debajo de 60 indica una enfermedad renal. El rango de puntuaciones

por debajo de 60 puede utilizarse para controlar el tratamiento y la evolución de la

enfermedad.