Multiplicación in vitro de Cúrcuma

Carlos Manuel Cerrada Mena

La Cúrcuma es una planta empleada mundialmente como condimento,

colorante y fines medicinales, entre otros usos. Su propagación in vitro ha sido
llevada a cabo anteriormente; sin embargo, los índices de multiplicación
obtenidos han sido bajos. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto
del estado físico del medio de cultivo, la concentración de las sales propuestas
por Murashige y Skoog (1962) y el 6-bencilaminopurina (6-BAP) a diferentes
concentraciones en la multiplicación in vitro de la Cúrcuma. Se emplearon
vitroplantas en el segundo subcultivo, las cuales fueron sembradas utilizando
como medio de cultivo basal el propuesto por Salvi et al. (2002). El empleo del
medio de cultivo en estado semisólido propició un mayor coeficiente de
multiplicación en comparación con el medio de cultivo en estado líquido.
Cuando se emplearon las sales propuestas por Murashige y Skoog (1962) al 75 y
100% de su concentración se logró el mayor coeficiente de multiplicación y la
longitud de las plantas in vitro. La adición de 6-BAP a concentraciones de 3.0 y
4.0 mg.l-1 en el medio de cultivo, posibilitó un incremento en el coeficiente de
multiplicación y la disminución en la longitud de las vitroplantas.
Palabras Claves: Curcuma longa, micropropagación, 6- bencilaminopurina,
medio de cultivo, sales inorgánicas.
Turmeric in vitro multiplication
Abstract
Turmeric is a used worldwide as spice, as dyes or as medicinal drugs among
others. It is in vitro propagation has been done in others occasion but the
multiplication rate have been too low. The objective of present paper is to
evaluate the effect of physical state of culture medium, the Murashige and Skoog
(1962) salt concentration and the 6-bencilaminopurine on the turmeric
vitroplants multiplication rate and size. Vitroplants in the second subculture
were planting in the basal medium of Salvi et al. (2002). The semisolid cultured
medium used provided a greater multiplication rate than the corresponding rate
in liquid medium. When using 75 % MS salt concentration there were the best
results in the both vitroplant multiplication rate and size. The addition of 6-BAP
in concentration of 3.0 y 4.0 mg.l-1 to culture medium provided an increase of
vitroplant multiplication rate and a decrease of vitroplant size.
Key words: Curcuma longa, micropropagation, 6- bencilaminopurine, culture
medium, inorganics salts.
INTRODUCCIÓN
 La Cúrcuma es una planta herbácea de origen asiático, que pertenece
a la familia de las Zingiberaceas, sus rizomas o
tallos subterráneos desde hace siglo se emplean como condimento,
tinte, y estimulante medicinal.
  En lo culinario es uno de los ingredientes del curry en polvo, dándole
precisamente su color amarillo característico; está indicado para
platos de pescados, huevos y arroz.

A los rizomas se le atribuyen propiedades terapéuticas y protectoras,

especialmente a nivel hepático y cutáneo. La curcumina es el compuesto activo
responsable de su actividad biológica (Mesa et al., 2000), se ha comprobado
que posee propiedades antiinflamatorias y que tiene efecto de calmante en
personas que padecen de artritis, favoreciendo la eliminación de toxinas
(Chandra y Gupta, 1972); puede reducir los niveles de glucosa y colesterol,
reduciendo los riegos de formación de coágulos en la sangre. Se ha comprobado
que la curcumina inhibe la transactivación de la proteína segregada por el IIIV-
1, la cual podría estar implicada en la patogénesis del SIDA (Barthelemy et al.,
1998). En Cuba, hasta hace pocos años, la Cúrcuma estuvo como un cultivo
marginado y se encontraba en estado silvestre; sin embargo, desde los años 90
del pasado siglo y hasta el presente, se ha ido popularizando su cultivo a
pequeña escala y su uso como condimento y se va conociendo por su utilización
en calidad de medicina alternativa para determinados padecimientos (Terán et
al., 2004). Actualmente su cultivo y propagación han sido ha incluidos
como objetivos importantes en los lineamientos que rigen la Agricultura Urbana
Cubana, específicamente en los subprogramas de Producción de Semillas
(Minagri, 2004), sin embargo, las cantidades de semillas con las que se cuenta
para enfrentar esta tareas no son suficientes, lo que hace muy lenta la
propagación y diseminación de este cultivo en el país.
El cultivo de tejidos ha surgido como una alternativa para la propagación de
diferentes cultivos, posibilitando la obtención de material vegetal en corto plazo,
libre de plagas y enfermedades y con una alta uniformidad. Sin embargo es
necesario continuar trabajando para elevar los coeficientes de multiplicación de
muchas especies que se propagan por esta vía, para de esta forma disminuir
los costos de producción (Orellana, 1998).
La micropropagación de la Cúrcuma ha sido publicada (Borthakur y Bordoloi,
1992; Salvi et al., 2002); sin embargo, los coeficientes de multiplicación
obtenidos son bajos y las metodologías propuestas son costosas. Teniendo en
cuenta lo anterior se desarrolló este trabajo, con el objetivo de evaluar el efecto
del estado físico del medio de cultivo, la concentración de las sales propuesta
por Murashige y Skoog (1962) y del 6-bencilaminopurina a diferentes
concentraciones en la multiplicación in vitro de Cúrcuma (Curcuma longa, L.).
Materiales y Métodos
El presente trabajo se desarrolló en el laboratorio del Centro de Estudios
de Biotecnología Vegetal de la Facultad de Ciencias Agrícolas, Universidad de
Granma, para lo cual se desarrollaron los siguientes experimentos.
 Efecto del estado físico del medio de cultivo en la
multiplicación in vitro de la Cúrcuma.

 Con el objetivo de evaluar el efecto del estado físico del medio de

cultivo en la multiplicación in vitro de la cúrcuma, se utilizaron dos
variantes:
Tratamiento 1. Medio de cultivo líquido.
 Tratamiento 2. Medio de cultivo solidificado con agar E a
concentración de 6.0 g.l-1

Efecto de la concentración de sales propuestas por Murashige y

Skoog (1962) en la multiplicación in vitro de la Cúrcuma.
Con la finalidad de evaluar el efecto de la concentración de las sales propuestas
por Murashige y Skoog (1962) en la multiplicación in vitro de la Cúrcuma,
fueron utilizadas a: 25, 50, 75 y 100% de su concentración en el medio de
cultivo.
Empleo de diferentes concentraciones de 6-BAP en la
multiplicación in vitro de Cúrcuma.
Para determinar el efecto del 6-BAP en la multiplicación in vitro de la Cúrcuma
se utilizaron las siguientes concentraciones.
Tabla 1. Concentraciones de 6-BAP evaluadas en la multiplicación in vitro de la
Cúrcuma.

Tratamientos 6- BAP (mg.l-1)

1 1.0
2 2.0
3 3.0
4 4.0

En los distintos experimentos el material vegetal empleado fueron plantas in

vitro de Cúrcuma en su segundo subcultivo, mantenidas en el medio de cultivo
propuesto por Salvi et al (2002). Como medio de cultivo basal se utilizó el
propuesto por Salvi et al (2002), compuesto por las sales de MS (1962), 6- BAP
(2.0 mg.l-1), ácido naftalenacético (ANA) a 0.1 mg.l-1, vitaminas MS (10.0 ml.l-
1) y sacarosa (40.0 g.l-1). El pH fue ajustado a 5,7. La esterilización de los medio
de cultivo se realizó en autoclave a 121°C y 120 Kpa durante 20 minutos y se
distribuyeron a razón de 10 ml en tubos de ensayo de 3 cm de diámetro y 10 cm
de largo. La siembra del material vegetal se realizó en condiciones asépticas,
colocándose un explante por frasco. Se utilizaron 20 explantes para cada
tratamiento. La incubación se realizó en cámara de cultivo en condiciones
de iluminación solar de 45-54 µmol m-2 s–1 de intensidad luminosa, humedad
relativa del 70-80 % y 25 ± 2°C de temperatura.
A los 40 días posteriores a la siembra se evaluaron, para todos los tratamientos,
las variables siguientes: Coeficiente de multiplicación y longitud de
las plantas in vitro. Se empleó un diseño completamente aleatorizado y el
procesamiento estadístico de los datos se realizó mediante un análisis de
varianza de clasificación simple, aplicándose la prueba de rangos múltiples de
Tukey para p≤0.05 al existir diferencias significativas y se utilizó el paquete
estadístico desarrollado por el Departamento de Matemática Aplicada del
Instituto de Ciencias Agrícolas (1991).
Resultados y Discusión
 Efecto del estado físico del medio de cultivo en la
multiplicación in vitro.

En la tabla 2 se muestra el coeficiente de multiplicación y la longitud de las

vitroplantas alcanzados al comparar los medios de cultivo en cuanto a su estado
físico. Los mayores valores del coeficiente de multiplicación se alcanzaron
cuando se utilizó el medio solidificado, con diferencias altamente significativas
en relación con el medio de cultivo líquido, en cuanto a la longitud de las
vitroplantas de forma general los valores alcanzados en el medio de cultivo
líquido tuvieron un comportamiento ligeramente superior al del medio de
cultivo semisólido, aunque no existieron diferencias significativas.
Tabla 2. Efecto del estado físico del medio de cultivo en coeficiente de
multiplicación y longitud de las plantas in vitro de Cúrcuma.

Tratamientos Coeficiente de Longitud

multiplicación
(cm)

Medio de cultivo líquido 2.1 b 2.91

Medio de cultivo semisólido 4.2 a 2.85

Los resultados indican que la Cúrcuma es una especie que responde mejor a la
multiplicación en medios de cultivo sólidos. Respecto a esto Pierik (1989) señaló
que la respuesta de los cultivos al empleo de medios líquidos depende en gran
medida de la especie y de la fase de desarrollo en que este se encuentre.
Jiménez et al. (1996) recomendaron el empleo de medios semisólidos para
inducir brotes axilares de Musa sp, debido fundamentalmente a una mejor
oxigenación de los explantes y con ello una disminución de los daños por
hipoxia.
Machado et al. (2002) durante la multiplicación in vitro de Gerbera jamessonii
H utilizando medios de cultivo semisólido, obtuvieron un mayor coeficiente de
multiplicación en comparación con el medio de cultivo líquido. El efecto
negativo de los medios de cultivo líquidos en esta fase en condiciones estáticas
ha sido observado por diferentes autores en otras especies como plátanos y
bananos (Orellana, 1995), papa (Agramonte, 1999).
Resultados obtenidos por Machado et al. (2002) indican una longitud
significativamente superior de plantas in vitro de Gerbera jamessonii H,
cuando utilizaron el medio de cultivo en forma semisólida en comparación con
el empleo del medio de cultivo líquido.
Al evaluar el efecto del estado físico del medio de cultivo en la micropropagación
del cultivar de plátano FHIA -21 (AAAB), Jiménez et al. (2002) lograron
resultados similares en cuanto a la altura de la planta y el número de raíces al
comparar medios de cultivo semisólido y líquido.
Fajardo (2006), obtuvo resultados significativamente superiores en el número
de yemas brotadas y la supervivencia cuando utilizó el medio de cultivo
semisólido (2.5 g .l-1 de Gelrite) en el establecimiento in vitro de yemas axilares
de Guagua angustifolia en comparación con el empleo del medio de cultivo
líquido.
Efecto de las sales propuestas por Murashige y Skoog (1962) a
diferentes concentraciones en la multiplicación in vitro.
La influencia de la concentración de las sales propuestas por Murashige y Skoog
(1962) en el coeficiente de multiplicación y longitud de las plantas in vitro a los
cuarenta días después de la siembra se presenta en la tabla 3, y se puede
observar una tendencia general a aumentar con el aumento de la concentración
de las sales. Los mayores valores del coeficiente de multiplicación
correspondieron a los tratamientos 3 y 4, los cuales difieren de forma
significativa de los tratamientos 1 y 2 y a su vez estos difieren entre si. La
longitud de las vitroplantas fue significativamente superior al utilizar las sales al
100%.
Tabla 3. Influencia de la concentración de las sales propuestas por Murashige y
Skoog (1962) en el coeficiente de multiplicación y longitud de vitroplantas de
Cúrcuma a los 40 días después del subcultivo.

Concentración Coeficiente de multiplicación Longitud

de sales MS ( cm)

T1 (25%) 1.17 c 2.07 c

T2 (50%) 2.11 b 2.13 c

T3 (75%) 3.40 a 2.91 b

T4 (100%) 3.65 a 3.26 a

Error estándar 0.28 0.40

Medias con letras no comunes difieren para (p0.05) según la prueba de rangos
múltiples de Tukey.
Según los resultados obtenidos, todo parece indicar que la Cúrcuma es un
cultivo que requiere de altas concentraciones de compuestos inorgánicos para
su desarrollo, y una disminución del contenido mineral en el medio de cultivo
provoca retardos en su crecimiento y multiplicación. Al respecto, Mroginski y
Scocchi, (1998), al conservar meristemos de Paraíso (Melia azedarach) durante
seis meses, obtuvieron que la reducción de las sales Murashige y Skoog (1962)
hasta un 25% de su concentración, provocó una reducción del crecimiento y
desarrollo de las plantas in vitro. García et al. (1999) refirieron un retardo en el
crecimiento de vitroplantas caña de azúcar (Saccharum spp) al reducir la
concentración de las sales MS en el medio de cultivo hasta un cuarto de su
concentración.
Trabajos realizados por Trujillo et al. (2001) en los cuales variaron la
concentración de sales inorgánicas en el medio de cultivo para la
micropropagación de A. andracarium, posibilitaron obtener vitroplantas de
mayor altura, cuando el medio de cultivo contenía el 100% de las sales.
Alvarado et al. (2000), obtuvieron un mayor número de yemas brotadas, mayor
longitud del brote y número de nudos al utilizar las sales MS al 100% de su
concentración en la micropropagación de Ruda.
Empleo de diferentes concentraciones de 6- BAP en la
multiplicación in vitro de Cúrcuma.
Los reguladores del crecimiento son muy empleados en el cultivo in vitro, ya
que sus efectos favorecen en gran medida el crecimiento y desarrollo de las
plantas. En la tabla 4, al evaluar el 6-BAP a diferentes concentraciones se
observa que el coeficiente de multiplicación mostró una tendencia a aumentar
con el incremento de la concentración de 6-BAP, obteniéndose valores
significativamente menores cuando se utilizó la concentración de 1.0 mg.l-1, la
longitud de las vitroplantas fue disminuyendo a medida que aumentó la
concentración de 6-BAP, alcanzando los valores más bajos en las
concentraciones de 3.0 y 4.0 mg.l-1. En los tratamientos donde se empleó el 6-
BAP a la concentración de 4.0 mg.l -1 se observó la aparición de plantas con
síntomas de hiperhidricidad.
Tabla 4. Efecto del 6- BAP a diferentes concentraciones en la multiplicación in
vitro de Cúrcuma.

Concentración de 6- Coeficiente de Longitud de las plantas in

BAP (mg.l-1) multiplicación vitro (cm)

1.0 2.05 b 4.62 a

2.0 3.43 a 2.41 b

3.0 3.46 a 1.13 c

4.0 4.00 a 1.09 c

Error Estándar 1.11 0.13

Los resultados evidencian un efecto positivo del 6-BAP en la multiplicación in

vitro de la Cúrcuma, los cuales coinciden con Pierik (1987), quien refirió que el
6-BAP promueve la formación de brotes axilares, pues hace decrecer la
dominancia apical, efecto que se incrementa con el aumento de su
concentración.
Marcia et al. (2000), al evaluar la multiplicación in vitro de la Cúrcuma
zedoaria, partiendo de ápices y utilizando el medio de cultivo propuesto por
Murashige y Skoog (1962) suplementado con 2.0 mg.l-1 de 6-BAP concluyeron
que es una técnica sencilla y económicamente viable. Prathanturarug et al.
(2007), lograron la multiplicación y regeneración de yemas de Cúrcuma
empleando el medio de cultivo propuesto por Murashige y Skoog (1962),
suplementado con diferentes concentraciones de 6-BAP (1-5 mg.l-1) y kinetina
(0.5-1.0 mg.l-1); además, determinaron que la concentración de 5.0 mgl-1 de 6-
BAP fue óptima para la multiplicación in vitro.
Al analizar la respuesta in vitro de la Teca (Tectona grandis) a diferentes
citoquininas, Daquinta et al. (2000) observaron en los explantes analizados
(ápices) un número mayor de brotes emitidos en los tratamientos donde se
combinaron 6-BAP y kinetina. Agramonte et al. (2001), al evaluar el efecto de
diferentes las dosis de 6-BAP (0, 0.35, 0.50 y 1.0 mg.l-1) en la multiplicación in
vitro de Eucaliptus grandis, observaron tendencia al aumento de los valores de
la variable número de brotes por explantes y disminución de la longitud de los
mismos con el aumento de la concentración, demostrando con esto que dosis
relativamente altas inducen a un alto ahijamiento axilar y reducen el tamaño del
brote, lo que produce una afectación del coeficiente de multiplicación, pues en el
momento del subcultivo, muchos de estos brotes no pueden ser
individualizados.
Conclusiones
El empleo del medio de cultivo en estado semisólido propició un mayor
coeficiente de multiplicación en comparación con el medio de cultivo en estado
líquido.
Se logró un incremento en el coeficiente de multiplicación y la longitud de
vitroplantas en la fase de multiplicación al emplear las sales propuestas por
Murashige y Skoog (1962) al 75 y 100% de su concentración.
La adición de 6-BAP a concentraciones de 3.0 y 4.0 mg.l-1 en el medio de
cultivo, durante la fase de multiplicación propició un incremento en el
coeficiente de multiplicación y una disminución en la longitud de las
vitroplantas.
Bibliografía
Agramonte, D.1999. Métodos biotecnológicos para la producción de semilla
original de papa (Solanum tuberosum, L.) Tesis en Opción al Título de Doctor
en Ciencias Agrícolas. Instituto de Biotecnología de las Plantas. Universidad
Central de Las Villas. Santa Clara. Cuba.
Agramonte D., Delgado L., Troncones A., Pérez M., Ramírez D y Gutiérrez O.
2001. Micropropagación del Eucaliptus grandis (Hill ex Maide) a partir de
segmentos nodales. Biotecnología Vegetal, 1 (2): 109-114.
Alvarado K., Calas M y Rodríguez R. 2000. Efecto de la concentraciones de sales
MS en el establecimiento in vitro de segmentos nodales de Ruda. XIII Congreso
Científico del INCA. Programas y Resúmenes. P 22.
Barthelemy S., Vergnes L., Moynier M., Guyot D., Labidalle S y Bahrsoni L.
1998. Curcumin and Curcumin derivates inhibitTal-mediated transactivation of
type 1 human inmunodeficiency virus long terminal repeat. Res. Virol, 149: 43-
52.
Borthakur M y Bordoloi DN. 1992. Micropropagation of Curcuma amada Roxb.
Journal of Spice and Aromatic Crops, 1: 154-156.
Chandra D y Gupta S. 1972. Anti- inflamatory and anti-arthritic activity of
volatile oil of Cúrcuma longa (Holdi) Indian Journal Medicines, 60: 138.
Daquinta M., Ramos L., Rodríguez R y Escalona M. 2000. Algunos elementos en
la micropropagación de la Teça. Biotecnología Vegetal, 1: 39-44.
Fajardo, L. 2006. Establecimiento in vitro de yemas axilares de Guadua
angustifolia Kunt. Tesis en Opción de Título de Master en Biotecnología
Vegetal. IBP. UCIV 80.pp.
García L., Rodríguez M., Martínez Y., Sarría B y Pichardo T. 1999. Aplicación de
la Biotecnología en la conservación de los recursos filogenéticos de la caña de
azúcar (Saccharum spp. híbrido). Libro de Reportes Cortos. V Coloquio
Internacional de Biotecnología Vegetal. IBP. Villa Clara.
Jiménez F., Ramírez A y Agramonte D. 2002. Empleo de Biobrás-16 en la
micropropagación del cultivar de plátano FHIA- 21 (AAAB). Biotecnología
Vegetal, 2 (3): 131-136.
Jiménez E. 1996. Generalidades del cultivo in vitro. En: Pérez JN (ed).
Propagación y Mejora Genética de plantas por Biotecnología. Cap. 1. Vol.1. IBP.
Santa Clara. P. 13-14.
Machado P., Agramonte D., Almanza N., Díaz D y Gómez L. 2002.
Micropropagación de Gerbera jasmessonii H. Bolus. Biotecnología Vegetal, 2
(2) 169- 178.
Márcia M., Antônio F., Amaral C y Murilo M. 2000. Quantificação da
micropropagação de Curcuma zedoaria Roscoe. Science Agriculture, 57 (4).
Mesa M., Ramírez-Tortosa M., Aguilera C., Ramírez-Bosca A y Gil A. 2000.
Efectos farmacológicos y nutricionales de los extractos de Cúrcuma longa L. y
de los curcuminoides. Ars Pharmaceutica, 41: 3, 307-321.
Ministerio de la Agricultura. 2004. Lineamientos para los subprogramas de la
Agricultura Urbana para el 2005-2007 y sistemas evaluativos. Grupo Nacional
de Agricultura Urbana.
Mroginski L y Scocchi A. 1998. Conservación de germoplasma de Paraíso (Melia
azedarach) mediante el cultivo de meristemos. Libro de resúmenes. III
Encuentro Latinoamericano de Biotecnología Vegetal. Palacio de las
Convenciones. Ciudad de la Habana.
Murashige T y Skoog F. 1962. A revised medium for rapid growth and bioassays
with tobacco tissue cultures. Physiologia Plantarum, 15: 473 - 497.
Orellana P. 1995. Tecnología para la micropropagación in vitro de clones de
Musa sp. Tesis en Opción al Título de Doctor en Ciencias Agrícolas. Instituto de
Biotecnología de las Plantas. Villa Clara. Cuba.
Orellana P.1998. Introducción a la propagación masiva. En: Pérez, JN (eds).
Propagación y Mejora de Plantas por Biotecnología. Instituto de Biotecnología
de las Plantas. Villa Clara.
Pathanturarug S., Soothrochacreannon S., Chuakul N., Phaideen W y Saralamp
P. 2003 High frequency shoot multiplication in Curcuma longa using
thidiazuron. Plant Cell Reports, 21(11): 1054-1059.
Pierik R.1987. Preparation and composition of the nutrients media. En: In vitro
culture high plant. Martinus Nijoff Publisher p. 45- 71.
Pierik, R. 1989. Cultivo in vitro de las plantas superiores. Editorial.
Mundi Prensa. Madrid. P. 49-113.
Salvi N., Deela G y Eapen S. 2002. Micropropagation and Fiel evaluation of
micropropagated plant of tumeric. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 68:
143-151.
Terán Z., Cabrera A y Peña L. 2004. Cúrcuma (Cúrcuma longa L.) Importancia
y necesidad de su producción en las condiciones de Cuba. XIV Congreso
Científico del INCA. Libro de Programas y Resúmenes.
Trujillo R., Concepción O., Daquinta M., Nápoles L y Barmaseda M. 2000.
Propagación in vitro de Anthurium andraeanum Lind. variedad Sonate.
Biotecnología Vegetal, 1: 33-38.
Agradecimientos
Agradecemos al Ingeniero Zoilo Terán del Instituto Nacional de Ciencias
Agrícolas (INCA) por la entrega del material vegetal utilizado en nuestro trabajo
y a ONG Euskadi- Cuba del país Vasco España, por
el financiamiento del proyecto.