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C.F.G.S: Laboratorio de Análisis y de Control de Calidad Módulo: Ensayos Microbiológicos
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1. CLASIFICACIÓN DE BACTERIAS
Los diferentes géneros de bacterias pueden agruparse para su estudio siguiendo tres criterios:
1. Respuesta a la tinción de Gram. Esto divide a las bacterias en dos grandes grupos: las Gram
positivas y las Gram negativas, según cómo se tiña su pared celular. Las características de la
tinción nos informan acerca de la composición química de la pared celular bacteriana.
2. Morfología.
3. Metabolismo respiratorio: aerobio, anaerobio, anaerobio facultativo, etc.
Staphylococcus aureus
S. aureus puede sobrevivir y crecer en ambientes de osmolaridad elevada. Es por ello por lo que se
le puede encontrar proliferando en alimentos que se han conservado mediante salado (jamón,
bacalao, etc.) o secado (huevas de pescado secas, etc.), que son condiciones que normalmente
inhiben el crecimiento de otros microorganismos. La presencia de S. aureus en alimentos es
peligrosa para la salud porque, a pesar de que la bacteria es destruida en el estómago y no ocasiona
infecciones gastrointestinales, mientras se multiplica en los alimentos libera una enterotoxina que,
al ser ingerida con los alimentos, ocasiona náuseas y vómitos. Este es uno de los tipos más
frecuentes de intoxicación alimentaria.
Debido a que puede ocasionar infecciones urinarias y a que puede encontrarse en las fosas nasales,
es necesario investigar su presencia en esta parte del cuerpo de los manipuladores de alimentos
(cocineros, personal que trabaja en la industria conservera, etc.). En caso de que se encuentre la
bacteria, debe impedirse que el portador sano continúe trabajando hasta que un tratamiento
antibiótico elimine al S. aureus de sus fosas nasales. De lo contrario, la proyección involuntaria de
material nasal contaminado sobre los alimentos puede poner en peligro la salud de los
consumidores.
S. aureus puede ser fácilmente diferenciado de otros estafilococos porque es coagulasa positivo (S.
aureus, S. intermedius, S. hyicus), mientras que las demás especies de su género son coagulasa
negativas (S. epidermidis, S. saprophyticus).
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S. epidermidis forma parte de la flora normal de la piel y es la bacteria más abundante que está
presente en este órgano cuando está sano. Su abundancia ejerce un papel protector, ya que dificulta
la colonización de la piel por bacterias peligrosas que, cuando llegan, encuentran "el lugar ocupado"
por millones de individuos de S. epidermidis y no pueden establecerse. Es un patógeno oportunista
dando lugar a infecciones en catéteres, válvulas, prótesis…
S. saprophyticus es también un componente de la flora normal de distinta zonas del cuerpo humano.
Ocasiona infecciones urinarias en mujeres jóvenes. Presenta resistencia a la novobiocina (nos sirve
para distinguirlo de S. epidermidis).
Los estreptococos se distinguen de los estafilococos en el laboratorio con facilidad porque los
estreptococos son catalasa negativos. Varias de sus especies se pueden diferenciar fácilmente por el
tipo de hemólisis ocasionado en el medio de cultivo agar sangre (hemólisis , o ).
Los estreptococos poseen un carbohidrato C en la pared, que es un polisacarido que puede presentar
distintas características y, en función de éstas, se han divido los estreptococos en grupos designados
por las letras que van desde la A hasta la V (serogrupos: A, B, C, D, E… o grupos de Lancefield).
Además, existen estreptococos no clasificables en estos grupos, debido a que no poseen este
carbohidrato C.
Streptococcus pyogenes
Estreptococos del grupo A (S. pyogenes) son de los estreptococos más virulentos. Es, junto a
Staphylococcus aureus, la bacteria que con más frecuencia infecta heridas. También el S. pyogenes
ocasiona infecciones de tejidos blandos (piel y músculos) y abscesos en órganos internos. La
faringitis ocasionada por S. pyogenes es especialmente peligrosa pues suele dejar secuelas graves y
permanentes. Son betahemolíticos y muy sensibles a los agentes externos.
Streptococcus agalactiae
Estreptococos del grupo B (S. agalactiae) son saprófitos del hombre. Se asocia a infecciones
oportunistas. Suelen ser betahemolíticos. Con cierta frecuencia causan meningitis e infecciones
pulmonares. Presentan cápsula que puede tener propiedades antigénicas.
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Estreptococos del grupo D, también llamados estreptococos fecales, son estreptococos alfa, gamma
y en ocasiones betahemolíticos, que resisten muy bien los agentes externos. Se van a dividir en
enterococos y no enterococos. Los enterococos van a corresponder a E. faecalis, E. faecium y E.
durans. Son saprófitos del intestino del hombre. Los no enterococos van a corresponder entre otros
a S. bovis y S. equinus, que afectan a vacas y caballos, respectivamente. Se utiliza como indicador
de contaminación fecal en aguas.
Los enterococos dan lugar a infecciones como: peritonitis, endocarditis bacteriana subaguda e
infección del tracto urinario.
Crecimiento
Enterococos + + - + +/-
No enterococos - + + - +/-
Estreptococos alfahemolíticos o Viridans aquí se engloban varios tipos de estreptococos que forman
parte de la flora normal de la boca y colon. Ocasionan endocarditis bacteriana subaguda
(infecciones del corazón). No poseen el carbohidrato C de la pared, por lo que son estreptococos no
agrupables.
Streptococcus pneumoniae
Pertenecen a la familia Neisseriaceae. Las bacterias de este género son diplococos gram negativos
aerobios estrictos. Crecen en las mucosas humanas y mueren rápidamente a temperaturas de
refrigeración.
Medios de cultivo utilizados: agar sangre y agar chocolate. Para aislar se utiliza el medio Thayer
Martin. Se incuban en una atmósfera con un 5-10% CO2, a 35-37ºC, durante 5 días.
Dentro de los cocos anaerobios Gram positivos tenemos ciertos estreptococos anaerobios que se
encuentran frecuentemente en la flora gastrointestinal y que no suelen ir asociados a procesos
patógenos y el género Peptococcus que no produce efectos patógenos sobre el hombre.
Dentro de los cocos anaerobios Gram negativos tenemos el género Veillonella que forma parte de la
flora intestinal y bucal y no produce efecto patógeno para el hombre.
La identificación se puede realizar por cromatografía gaseosa y líquida al producir este tipo de
microorganismos ácidos grasos volátiles, existen también para su identificación kits comerciales
rápidos con distintas pruebas bioquímicas.
Pueden dar lugar en individuos inmunodeprimidos a infecciones genitales, del tracto respiratorio…
Los distintos géneros que componen esta familia se clasifican en dos grandes grupos:
b) Enterobacterias lactosa negativas (no fermentan la lactosa). Hay muchos géneros, entre los que
podemos destacar: Salmonella, Shigella, Yersinia, Proteus, Morganella y Providencia.
2.4.1.1. Escherichia
La especie principal del género es Escherichia coli. Es la bacteria más estudiada. Forma parte de la
flora normal del intestino humano y de muchos otros mamíferos, estando presente en un número
muy elevado de individuos. Es beneficiosa para el hombre porque sintetiza vitamina K que es
absorbida por el epitelio intestinal.
Otras enfermedades provocadas por E. coli presentan cuadros extraintestinales como: infecciones
aparato urinario, meningitis, sepsis…
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La supervivencia de E. coli en medios ambientes naturales fuera del intestino animal suele ser corta.
Es por ello por lo que suele ser usada como marcador de contaminación fecal reciente en aguas.
2.4.1.2. Enterobacter
Tres especies de este género, E. aerogenes, E. cloacae y E. agglomerans, pueden producir diarreas
e infecciones del tracto respiratorio. Suelen encontrarse en el tubo digestivo del hombre y otros
animales, así como en aguas naturales, aguas residuales y suelo. Son enterobacterias oportunistas.
2.4.1.3. Citrobacter
Son comensales del tubo digestivo del hombre aunque se puede asociar a procesos infecciosos
cuando el huésped se encuentra debilitado (enterobacterias oportunistas). Son fermentadores lentos
de lactosa, fermentan la glucosa con producción de ácido.
2.4.1.4. Serratia
Son enterobacterias oportunistas. Se caracterizan por ser: DNasa, citrato, Voges Proskauer y ONPG
positivos. Son móviles. En individuos debilitados pueden dar lugar a infecciones urinarias.
2.4.1.5. Klebsiella
Son comensales del tracto gastrointestinal, de la boca y de las vías respiratorias superiores, aunque
podría intervenir en ciertos procesos patógenos, dando lugar a infecciones respiratorias y urinarias.
Se conocen dos especies importantes: K. pneumoniae y K. oxytoca. Son enterobacterias
oportunistas.
2.4.1.6. Salmonella
Estas enterobacterias lactosa negativas son de difícil clasificación. Han llegado a establecerse
decenas de especies, pero en muchos casos las diferencias entre unas y otras no están claras.
Características generales: móviles, glucosa positivos, lactosa negativos, gas y H 2S variable, IMViC:
-+-+.
Salmonella forman parte de la flora normal intestinal de muchos animales, especialmente de las
aves de corral y del ganado vacuno. Todas son patógenas para el hombre. Son la causa más
frecuente de gastroenteritis. Pueden contaminar los alimentos y es así como se adquiere la
salmonelosis (transmisión fecal-oral utilizando los alimentos como vehículo). Son especialmente
propensos a ser contaminados los huevos y los alimentos derivados de estos (especialmente las
mayonesas). La razón es que las gallinas ponen los huevos por la cloaca, el mismo orificio natural
que utilizan para expulsar los excrementos, por lo que todo huevo recién puesto está recubierto de
bacterias patógenas. Es imprescindible lavarlo bien y dejarlo durante unos minutos sumergido en
agua que lleve unas gotas de lejía para eliminar las posibilidades de infección.
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Salmonella typhi origina una infección especialmente grave: la fiebre tifoidea. Esta enfermedad en
muchos casos es mortal si no se trata. Afortunadamente es menos frecuente que la salmonelosis,
pero no es inhabitual.
S. paratyphi A, B y C ocasiona también fiebres paratíficas algo menos graves. No es muy frecuente.
La mayoría de las gastroenteritis son producidas por S. enteritidis, bajo este nombre se agrupan un
elevado número de salmonellas que siguiendo otros criterios se clasificarían como decenas de
especies distintas. Todas tienen en común el producir gastroenteritis leve o moderada. Las
gastroenteritis ocasionadas por S. enteritidis suelen curarse espontáneamente en pocos días. Sin
embargo, existe la posibilidad de que el paciente se deshidrate, algo frecuente en niños pequeños y
que puede ocasionarles la muerte.
2.4.1.7. Shigella
Características microbiológicas: IMViC: ++--, glucosa positivos, lactosa negativos, no producen gas
ni H2S y son inmóviles.
Su hábitat normal es el intestino del hombre y primates. Siendo los principales vectores de
enfermedades las heces.
La especie Shigella dysenteriae da lugar a disentería bacilar (DI: 102). La especie Shigella sonnei da
lugar a toxiinfección alimentaria.
Estas bacterias son muy móviles y causan problemas en los medios de cultivo con agar, pues
dificultan o impiden el reconocimiento de otras bacterias. Ocasionan infecciones urinarias, de
heridas y algunas gastroenteritis infantiles. Enterobacterias oportunistas.
2.4.1.9. Yersinia
En el género Yersinia se encuentran varias especies muy patógenas para el hombre, como es el caso
de Yersinia pesti, causante de la peste bubónica y Y. enterocolitica, que afecta más a animales,
aunque puede afectar al hombre y especialmente a niños.
Yersinia enterocolitica
Son móviles a temperaturas inferiores a 37ºC, no presentan cápsula, psicotrofo y glucosa positivos.
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2.4.2. Pseudomonas
2.4.3. Vibrio
La bacteria es un vibrión, bacilo en forma de coma. Es flagelada y se mueve en el agua con gran
rapidez.
Otra especie es V. parahaemoliticus que produce gastroenteritis aguda por el consumo de alimentos
marinos contaminados.
2.4.4.1. Campylobacter
Son bacterias no fermentativas, oxidasa positivas, forma de bacilos curvos (forma de gaviotas),
móviles y microaerófilos (5-10% CO2). Son termófilas, con una temperatura característica de
incubación de 42ºC.
Da lugar a enterocolitis aguda en el hombre. Las especies más importantes son: C. jejuni que se
encuentra en aves y C. coli que se encuentra en cerdos.
2.4.4.2. Legionella
Legionella pneumophila
De este género de bacterias, descubierto hace pocos años, la especie más peligrosa es L.
pneumophila, que habita en ríos y lagos. Son bacilos aerobios Gram negativos. Coloniza zonas
húmedas de edificios, tales como tuberías de agua de edificios y conductos de aire acondicionado.
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Las personas, debido al aire acondicionado o durante la ducha, tras inhalar gotitas de agua con estas
bacterias, desarrollan una neumonía que conduce con facilidad a la muerte (enfermedad de los
legionarios y fiebre de Pontiac). La bacteria penetra por las vías respiratorias a través de aerosoles.
Características microbiológicas: aerobio estricto crece mejor con 5-10% CO2 ; es exigente, precisa
de medios que contengan cisteína; catalasa y oxidasa positivo.
2.4.4.3. Haemophilus
Haemophilus influenzae
Las bacterias de este género son bacilos Gram negativos de tamaño muy pequeño. Son inmóviles.
Aerobios/anaerobios facultativos. Algunas cepas presentan cápsula relacionada con su virulencia.
Habitan como flora normal el tracto respiratorio superior humano, la vagina y el tracto intestinal.
Haemophilus son las bacterias más abundantes en la boca del hombre. Hay varias especies
patógenas.
Haemophilus parainfluenzae
Haemophilus ducreyi
Sólo necesita para su crecimiento el factor X. H. ducreyi ocasiona el chancro blando, una
enfermedad de transmisión sexual.
2.4.4.4. Brucella
Las especies más importantes son: B. melitensis (la más normal en humanos), B. abortus (abortos en
ganado vacuno), B. suis (cerdos).
La especie más peligrosa para el hombre es la B. melitensis. La brucelosis, también llamada fiebre
de malta en el sur de España, es una enfermedad cuya principal vía de contagio es el consumo de
leche de cabra u oveja sin hervir o deficientemente esterilizada. Es una enfermedad grave. Produce
fiebres ondulantes y artritis.
2.5. ESPIROQUETAS
Las espiroquetas son bacterias que se caracterizan ante todo por su forma de filamento, hélice o
espiral, poseen una pared celular delgada y flexible y se mueven mediante un flagelo axial o
endoflagelos (contenido dentro de una vaina entre la pared celular y membrana externa; este
filamento está formado por numerosas fibrillas que tienen su punto de inserción en ambos polos de
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la célula y que se juntan en el centro). Este filamento permite a las células curvarse, flectarse o rotar
durante el movimiento. Son Gram negativas. Su observación directa se realiza por tinción argéntica
o de Giemsa con microscopio de campo oscuro o contraste de fases. Presentan un metabolismo
fermentativo y oxidativo.
No forman endosporas, pueden ser aerobias o anaerobias facultativas, algunas son patógenas.
Algunos géneros de importancia, dentro de la familia Espirochetaceas, son: Treponema
(Treponema pallidum), Borrelia (B. recurrentes, causa la fiebre recurrente que es transmitida por
garrapatas y piojos) y Leptospira (L. interrogans, las especies patógenas se transmiten al hombre a
través de aguas contaminadas -son excretadas por la orina de perros, ratas, cerdos y gatos-).
La formación de endosporas por las bacterias es importante tanto en medicina como en la industria
alimentaria debido a la resistencia de las endosporas al calor y a muchos agentes químicos. La
mayoría de las bacterias formadoras de endosporas son Gram positivas.
2.6.1.1. Bacillus
Características microbiológicas: bacilos grandes de extremos rectos Gram positivos, con esporas
centrales o subcentrales. Son aerobios o anaerobios facultativos, móviles a excepción de Bacillus
anthracis.
Bacillus anthracis
Es aerobio estricto (metabolismo oxidativo), inmóvil, con cápsula y productor de una exotoxina de
carácter proteico muy tóxica.
Bacillus cereus
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Móvil, presenta hemólisis en agar sangre, esporulan en aerobiosis, las formas vegetativas pueden
ser aerobias y anaerobias.
Su hábitat es el suelo, harinas, polvo, cereales (arroz). Dando lugar a intoxicaciones alimentarias.
2.6.2.1. Listeria
La especie más importante, por ser la única patógena para el hombre es Listeria monocytogenes.
Su hábitat es el intestino del hombre, mamíferos y aves. También se encuentra en suelo, fango y
plantas y en alimentos como queso, leche y carne.
2.6.2.2. Corynebacterium
Corynebacterium diphteriae
Corynebacterium diphteriae es la especie más importante por el efecto patógeno que puede causar
en las personas. En el hombre provoca la difteria, entrando la bacteria por vía respiratoria a través
de gotas de saliva.
2.6.3.1. Clostridium
Son anaerobios obligados, móviles (excepto: C. perfringens). Forman parte de la flora normal
intestinal (C. perfringens) y del suelo y fermentan gas en tejidos. Forman tóxinas con un
extraordinario poder tóxico.
CLOSTRIDIUM NEUROTÓXICOS
Clostridium tetani
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Tiene forma de palillo de tambor (esporas esféricas y terminales). C. tetani ocasiona el tétanos
(exotoxina), enfermedad que una vez diagnosticada no tiene tratamiento eficaz y casi siempre es
mortal. Sólo es útil la prevención mediante vacuna.
Clostridium botulinum
CLOSTRIDIUM HISTOTÓXICOS
Clostridium perfringens
Clostridium difficile
2.7. MICOBACTERIAS
Características generales: son bacilos Gram positivos, ácido alcohol resistente, aerobios estrictos, no
esporulados, inmóviles. Poseen ácidos micólicos y lípidos superficiales que le dan sus
características tintoriales. Son de crecimiento lento.
Su observación directa se puede hacer por tinción ácido alcohol resistente o Ziehl-Neelsen y por
tinción fluorescente.
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Una prueba característica que se realiza para el estudio de M. tuberculosis es la prueba de Mantoux,
prueba cutánea de alergia a la tuberculina, se inyecta tuberculina y si se produce reacción alérgica
entre 48-72 horas indica contacto con M. tuberculosis.
Mycobacterium leprae
Realizar su diagnóstico es complejo debido a que no se pueden cultivar in vitro. Se colorea sólo con
el método Zhiel-Nielssen siendo por tanto AAR.(ácido alcohol resistente).
Micobacterias atípicas
2.8.1. Rickettsias
Son patógenas para el hombre, siendo los vectores transmisores: piojos, pulgas, garrapatas y ácaros.
Producen en el hombre enfermedades endémicas y/o epidémicas: tifus exantemático epidémico (R.
prowazekii), tifus murino o endémico (R. Typhi).
2.8.2. Chlamydias
Características microbiológicas: son parásitos celulares estrictos, cocos Gram negativos, inmóviles.
Poseen ADN y ARN y se multiplican por división binaria.
Están ampliamente difundidas entre los animales y el hombre, originando en algunos casos
infecciones en éste (tracoma, conjuntivitis neonatal, linfogranuloma venéreo).
2.8.3. Micoplasmas
Características microbiológicas: no tienen pared celular, pueden vivir de forma independiente, son
sensibles a la presión osmótica. Pleomórficas. Se multiplican por división binaria.
Están ampliamente difundidas en la naturaleza. Son comensales de las mucosas del hombre, aunque
existen algunas especies patógenas, como por ejemplo, M. pneumoniae, que afecta al aparato
respiratorio (neumonías).
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