INFORME BIOENSAYO

Biología para la Industria

Nombre Integrantes: Darly Espinoza Manríquez

Nataly Rubio Villalobos
Jennifer Campos Palma
Sección:010v
02/julio/2021

I
Informe Bioensayo

Contenido
Nombre Químico (Pb) ...................................................................................................................
2
Tipo de Toxòn ............................................................................................................................
2
Forma ........................................................................................................................................
2
Reactividad ................................................................................................................................
2
Exposición ..................................................................................................................................
2
ADME .............................................................................................................................................
3
Absorción ..................................................................................................................................
3
Distribución ...............................................................................................................................
3
Metabolismo .............................................................................................................................
3
Distribución ...............................................................................................................................
3
Identificación del Bioindicador ......................................................................................................
3
Hipótesis ........................................................................................................................................
4
Montaje del Bioensayo .................................................................................................................
4
Especificaciones de las condiciones base para el Bioensayo ........................................................
6
Bibliografía ....................................................................................................................................
8

1
Informe Bioensayo

Nombre Químico (Pb)

Plomo es de origen metal pesado el uso más amplio es la fabricación de acumuladores,
fabricación de tetratilplomo (componente de la química órgano metálica, usado para la gasolina con plomo súper 97 octanos
y normal 92 octanos como aditivo antidetonante).

También utilizado para el forro de cables, elementos de construcción, pigmentos, soladuras y

municiones. Además de están desarrollando compuestos órgano plúmbico, para aplicaciones
como son la de catalizadores en la fabricación e espuma de poliuretano, tóxicos para la pintura
navales con el fin de inhibir la incrustación en los cascos, agentes biosidas contra bacterias
Gram-positivas, protección de la madera contra ataque de termitas y hongos.

Tipo de Toxòn
Elemento Químico
Metal pesado
Formula Pb

Forma
Metal pesado de color Gris azulado, brillante en las superficies recientes, muy maleable
(puede ser trabajado con facilidad, pues es altamente moldeable).

Extensamente distribuido como plomo metálico, compuestos inorgánicos y compuestos

organometalicos (basado en cadenas de carbono).

Variedad toxica inorgánica del plomo proviene de varias fuentes industriales y mineras donde
existe agua en estado de oxidación. Además de las fuentes contaminantes, la caliza portadora
del plomo y la galena (PbS) aportan este metal a las aguas naturales en algunos lugares.

Reactividad
La intoxicación u envenenamiento por Plomo Pb
Provoca inhibición de enzimas
Acumulación de ácido D-aminolevulinico en el plasma Aumento
de excreción urinaria.

Exposición
Exposición aguda con plomo en seres vivos, causa difusión severa en los riñones, sistema
reproductor, hígado, cerebro y el sistema nervioso central dando como resultado
enfermedades o incluso la muerte.

2
Informe Bioensayo

Subaguda o crónica puede sentir dolores de cabeza y dolores musculares generalmente

fatigada e irritable.

En casos leves podría causar anemia

En el presente documento vemos como se ve afectado por intoxicación de plomo el sistema

nervioso central, donde se puede presentar dificultad en el aprendizaje y concentración,
también déficit cognitivo CI reducido, además en mujeres embarazadas los niveles de
exposición altos a este metal pueden producir abortos. El plomo traspasa la barrera
placentaria, siendo la concentración en la sangre del recién nacido similar a la materna (Díaz,
Espinoza & Escobedo, 2013)

ADME
Absorción
Es absorbido a través de la mucosa digestiva a través de alimentos o líquidos contaminados. Vía
respiratoria Inhalación su cantidad estará determinada por el tamaño de partículas inhaladas.
Vía cutánea plomotetraetilo utilizado para la fabricación de combustible Distribución
Su distribución atreves de la sangre se distribuye entre el plasma y el eritrocito Plomo
plasmático de distribuye en tejidos blandos (sangre, hígado, riñones).
Sistema mineralizado (huesos y dientes)
Metabolismo
La vida media del plomo varía según donde se presente
Sangre perdurara 36 días aproximado
Tejidos blandos 40 días
Huesos 27 días
Distribución
Este químico es excretado por diferentes vías
Orina, heces, estructuras epiteliales siendo este sudor, cabello, uñas.

Identificación del Bioindicador

Para la realización del bioensayo se utilizará como Bioindicador la cepa de rata de laboratorio
Sprague Dawley, la cual se caracteriza por ser una cepa no consanguínea, de múltiples usos
principalmente en el área de investigación médica, cuya ventaja principal es su facilidad de
manejo y rendimiento reproductivo, dado que el tamaño promedio de la camada es de 11
individuos (LEBi, s.f).

La rata de laboratorio es una subespecie domesticada de la especie Rattus Norvegicus, la cual

ha sido criada específicamente para la investigación científica, existiendo hoy en día gran
variedad de cepas tanto endógenas como exógenas, siendo estas últimas las más utilizadas.

Este pequeño mamífero de hábitos nocturnos desarrolla su vida en túneles y escondrijos de

poca profundidad y preferentemente cercano a una fuente de agua, por su naturaleza de presa
tiende a evitar espacios abiertos. Para orientarse en su entorno presenta una conducta
exploratoria, realizando la mayor parte de sus actividades en horas de oscuridad. En cuanto a
su capacidad visual se puede decir que es bastante reducida, ya que no son capaces de
distinguir colores, sin embargo, sus otros sentidos como oído y olfato están más desarrollados.

3
Informe Bioensayo

Al igual que el ratón, la rata posee glándulas de Harder localizadas detrás de los ojos, las cuales
secretan una sustancia roja, principalmente cuando están en situaciones de estrés. La
presencia de estas “lágrimas rojas” junto a un aspecto despeinado pueden indicar problemas
de salud, ya que gran parte de su tiempo lo invierten en acicalamiento.

Considerando lo anterior, la conducta usual de una rata de laboratorio saludable está dada por
su estado de alerta, aseo, curiosidad y la formación de relaciones sociales (3Rs-Centre Utrecht
Life Sciences, 2016). Por lo que será necesario que la rata cuente con las condiciones mínimas
que le permitan desarrollarse de manera adecuada en cautiverio.

En cuanto a las características físicas de la rata Sprague Dawley específicamente alcanzan un

peso de 250-300 gr hembras y 450-520 gr machos, tienen una vida útil de 2,5 a 3,5 años. A
pesar de su corta vida tienen una elevada tasa metabólica y rápida maduración y reproducción,
alcanzando su madurez sexual a las 6 a 8 semanas y un período de gestación de
aproximadamente 21 días. Estas características hacen que el individuo sea apto para el estudio
a realizar ya que se necesita medir los efectos del metal pesado frente a un metabolismo
mamífero, pero de manera experimental en un corto plazo por lo que el rápido metabolismo
de las ratas es favorable, además el corto periodo de gestación y grandes camadas permite
analizar los efectos toxicológicos del plomo sobre un sistema reproductivo altamente fértil.

Hipótesis
El Toxòn presenta síntomas leves a moderados como problemas gastrointestinales,
estreñimiento, anorexia, hasta problemas más severos como daño neuronal, daño hepático y
muerte. En cuanto a la reproducción, niveles altos de plomo pueden generar aborto
espontaneo. En base a la sintomatología anterior, se corrobora una baja de peso junto a
cambios conductuales en los individuos afectados, así como los efectos abortivos debido a una
alta concentración de plomo. En cuanto a la reproducción, niveles altos de plomo pueden
generar aborto espontaneo en mujeres embarazadas (Díaz, Espinoza&Escobedo,2013).

En base a la sintomatología anterior, se corrobora una baja de peso a causa de la anorexia

provocada por la alta concentración de plomo en ratas Rattus Norvegicus de la cepa de Sprage
Dawley, lo que se analiza bajo exámenes de sangre que a su vez evidencian diferencias en
concentraciones de hierro, indicando anemia. Junto a esto se observan cambios conductuales
en los individuos con Toxòn debido a la afección del metal pesado sobre el sistema nervioso,
como falta de concentración, letargo, pérdida de memoria o dificultad para realizar tareas que
anteriormente tomaban menos tiempo, en el caso de las tareas de laberinto los individuos que
reciben mayores concentraciones de plomo presentaran dificultad para resolver, incluso
pueden fallecer antes del fin del experimento. Del mismo modo los efectos abortivos son
comprobados en hembras preñadas quienes ven interrumpido su embarazo a causa de los
efectos del plomo. En caso contrario, de nacer las camadas presentaran concentración de
sangre similares a la de las madres ya que el plomo traspasa la barrera placentaria durante la
etapa de gestación y es capaz de trasmitirse a través de la lactancia.

Montaje del Bioensayo

Para la realización del bioensayo se utilizará una batería de 40 ratas de laboratorio Sprague
Dawley, agrupados en grupos de 8, de los cuales al menos 2 individuos corresponderán a ratas
preñadas, los demás a 3 ratas adultas y 3 juveniles, los cuales serán tratados con acetato de
plomo Pb(C2H3O2)2 en el agua de bebida a concentraciones de 5, 10 y 50 ppm cada 24horas,
con inoculación durante 4 semanas, correspondiendo a un ensayo indirecto.

4
Informe Bioensayo

Las condiciones bajo las que se llevará a cabo el bioensayo corresponden a una temperatura
ambiente de 22° ± 2°C, con ciclos de luz y oscuridad de 12 horas cada uno y una humedad
relativa del 10%. En cuanto a las condiciones de las ratas, estas fueron colocadas en cajas
acrílicas aisladas con sustrato de viruta, agua y comida en pellet, todas con las mismas
circunstancias durante las cuatro semanas de estudio. Para analizar los parámetros sobre los
blancos que serán sistema nervioso, alteraciones digestivas y gestación, se realizarán pruebas
cada 4 días en las que se evaluaran primordialmente el peso y la sangre, se aran pruebas de
inteligencia sobre laberintos y se monitoreara de modo particular la situación de las hembras
preñadas.

Grupo Individuos Observación

A 3 adultos, 3 juveniles y Inoculación será a través de acetato de plomo en el agua
2 hembras preñadas a una concentración de 5 ppm por 4 semanas.
B 3 adultos, 3 juveniles y Inoculación será a través de acetato de plomo en el agua
2 hembras preñadas a una concentración de 10 ppm por cuatro semana
C 3 adultos, 3 juveniles y Inoculación será a través de acetato de plomo en el agua
2 hembras preñadas a una concentración de 50 ppm por 4 semanas.
D 3 adultos, 3 juveniles y (Control +) Este grupo corresponderá al de control
2 hembras preñadas positivo, por lo tanto, se inoculará con Cadmio en dosis
de 80 μg Cd/día. Este conocido Toxòn genera daño en el
sistema nervioso, hepático y gestación (García &
Hernández, 2014)
E 3 adultos, 3 juveniles y (Control -) Este grupo se mantendrá como grupo de
2 hembras preñadas control, por lo tanto, no se inoculará y se alimentará con
agua purificada, con el objetivo de ver cómo se
desarrollan los individuos najo condiciones normales.

5
Informe Bioensayo

Especificaciones de las condiciones base para el Bioensayo

• Para realizar el bioensayo las ratas pasan por un período de aclimatación de 2 semanas
previas, en donde se adaptan al hábitat, las condiciones y aprenden las pruebas de
laberinto. Esta semana es fundamental para descartar enfermedades por estrés debido
a cambio de ambiente, algo común por la naturaleza de la especie.
• Cada grupo de ratas debe marcarse con su letra respectiva (A, B, C, D, E) y los
individuos deben diferenciarse en adultos, juveniles y hembras preñadas con un
registro de letra número de individuo (AA1 = jaula A Adulto 1, BH2 jaula B Hembra
preñada 2).
• El hábitat de cada grupo corresponde a cajas acrílicas con respiraderos de 120x40 cm,
el suelo del hábitat debe contar con sustrato de viruta de álamo, no de pino ya que
puede generar enfermedades respiratorias y hepáticas a largo plazo.
• La temperatura debe estar entre los 22° ± 2°C y contar con ciclos de luz y oscuridad de
12 horas cada uno, de 8:00 a 20:00 y de 20:00 a 8:00 respectivamente, la luz solar no
debe ser completamente directa o intensa ya que molesta al animal por su naturaleza.
• El aseo de las jaulas debe ser diario, considerando retiro de desechos y renovación de
parte del sustrato, permitiendo también monitorear anomalías que puedan en las
heces u orines.
• La alimentación consistirá de pellet, todas las jaulas recibirán la misma cantidad de
180gr entregado diariamente a la misma hora (18:00 horas) y contarán con agua
purificada de libre disposición.
• El enriquecimiento del hábitat consiste en tubos, ruedas y escondrijos para habitar.
• Las ratas se desarrollarán libremente dentro del hábitat, la inoculación será diaria a
partir de las 21:00 horas de manera inducida con jeringa para que todos los individuos
beban la misma cantidad de líquido inoculado.
• Cada 4 días se registrará el peso del animal, temperatura corporal y frecuencia
cardíaca. Se tomará una muestra de sangre para ver la concentración de plomo y para
analizar posible aparición de anemia. En el caso de las hembras preñadas se realizará
también monitoreo de circunferencia abdominal.
• En tanto la prueba de inteligencia y memoria contará con un laberinto especialmente
diseñado, al que los individuos han sido sometidos durante las semanas de adaptación
y sobre el cual tienen conocimiento, por lo que se medirá el tiempo que demoran en
resolverlo en cada control.
• Para el registro continuo de la actividad de los animales se utilizarán cámaras
grabadoras en cada jaula.

6
Informe Bioensayo

Jaula: Individuo: Fecha/Hora:

Control 1 2 3 4 5 6 7 8
(Día1) (Día 4) (Día 8) (Día 12) (Día 16) (Día 20) (Día 24) (Día 28)
Peso/tº corporal

Frecuencia Cardiaca

Circunferencia
Abdominal

Resultado muestra de
sangre
(concentración de
plomo)

Resultados muestra
de sangre (niveles de
Hierro)

Tiempo de resolver
laberinto

• Cuando las hembras preñadas den a luz, las camadas deben ser sometidas a exámenes
de sangre para comparar sus niveles de concentración de plomo con los de su madre.
• Finalmente, los individuos serán sacrificados, dando la posibilidad de someter algunos
tejidos a estudios posteriores, como, por ejemplo, el tejido hepático para conocer el
nivel de daño.

Bibliografía

Martínez, N., & Sant, R. R. (2001). Efectos de la exposición a bajas concentraciones de plomo
en ratones sobre diferentes parámetros bioquímicos. Revista de toxicología, 18, 82-86.

7
Informe Bioensayo

Obtenido de http://rev.aetox.es/wp/wp-
content/uploads/hemeroteca/vol182/revtox.18.2.2001.pdf

Nava-Ruiz, C., Méndez-Armenta, M., & Ríos, C. (2012). Efecto del plomo sobre aprendizaje y
memoria de ratas adultas, en un modelo subagudo. Archivo Neurociencia, 17(2), 89-95.
Obtenido de https://www.medigraphic.com/pdfs/arcneu/ane-2012/ane122c.pdf
https://www.lenntech.es/periodica/elementos/pb.htm#ixzz6zBhUJ19k
https://www.medigraphic.com/pdfs/arcneu/ane-2012/ane122c.pdf

introducción a la química ambiental

STANLEY E. MANAHAN
3Rs-Centre Utrecht Life Sciences . (2016). Salud y actividad. Obtenido de Humane Endpoints:
https://www.humane-endpoints.info/es/rata/salud-y-actividad#

Diaz, L., Espinoza, A., & Escobedo, J. (Julio de 2013). EFECTO DEL PLOMO EN RATAS PREÑADAS.
Rattus norvergicus. Postgrado Scientiarvm, 3(2), 71-77. Obtenido de
http://scientiarvm.org/cache/archivos/PDF_850947613.pdf

García, M., & Hernández, E. (2014). EVALUACIÓN DEL RIESGO DE TOXICIDAD CRÓNICA POR
EXPOSICIÓN A CADMIO EN RATAS (Rattus norvegicus). Ciencia e Investigación, 17(2),
74-79. Obtenido de
https://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/farma/article/view/13593

LEBi. (s.f). Sprague Dawley. Obtenido de Laboratorio de Estudios Biológicos - Universidad de

Costa Rica: http://lebi.ucr.ac.cr/biomodelos/ratas/spraguedawley

López-Hernández, J., López-Durán, R., Vázquez-Trujillo, K., Salame-Méndez, A., García-Suárez,

D., Serrano, H., . . . Salinas-Arreortua, N. (2015). La exposición a bajas dosis de plomo
en ratones CD-1 altera las actividades de las colinesterasas en órganos reproductores.
iencia en la Frontera: Revista de Ciencia y Tecnología de la UACJ, 12(2), 69-82. Obtenido
de
file:///C:/Users/dcesp/Desktop/Ciencia_en_la_frontera_XIII_2_2015CDCPlomo.pdf

Martínez, N., & Sant, R. R. (2001). Efectos de la exposición a bajas concentraciones de plomo
en ratones sobre diferentes parámetros bioquímicos. Revista de toxicología, 18, 82-86.
Obtenido de http://rev.aetox.es/wp/wp-
content/uploads/hemeroteca/vol182/revtox.18.2.2001.pdf

Nava-Ruíz, C., & Méndez-Armenta, M. (2011). Efectos neurotóxicos de metales pesados

(cadmio, plomo, arsénico y talio). Archivo Neurociencias, 16(3), 140-147. Obtenido de
https://www.medigraphic.com/pdfs/arcneu/ane-2011/ane113f.pdf

Nava-Ruiz, C., Méndez-Armenta, M., & Ríos, C. (2012). Efecto del plomo sobre aprendizaje y
memoria de ratas adultas, en un modelo subagudo. Archivo Neurociencia, 17(2), 89-95.
Obtenido de https://www.medigraphic.com/pdfs/arcneu/ane-2012/ane122c.pdf