PRÁCTICA 9 – INTEGRACIÓN Y

REGULACIÓN DEL METABOLISMO

RELACION DE EXPERIMENTOS
1. Determinación de glucosa en sangre total
2. Determinación de glucosa en orina
3. Determinación de cuerpos cetónicos en orina
4. Curva de tolerancia a la glucosa

INTRODUCCION
El metabolismo intermediario de Carbohidratos, Lípidos, Proteínas (aminoácidos), así
como de otros compuestos, es por lo general considerado por separado; sin embargo,
estos procesos ocurren en nuestro organismo en forma concertada, esta integración
exquisitamente regulada, es la que permite a cada célula llevar a cabo sus funciones
bioquímicas y sin duda, de esta íntima y armoniosa organización dependerá la función
integrada de todas las células que conforman un organismo, caso contrario sobrevendrá
una enfermedad.
Un aspecto muy interesante en la regulación del metabolismo celular corresponde a la
participación de las hormonas que son sintetizadas en Glándulas, secretadas a la sangre y
luego transportadas hasta alcanzar sus células “blanco”, donde previa interacción con sus
receptores ejercerán sus efectos regulatorios fundamentalmente a través de:
 Activación y desactivación de enzimas ya existentes en las células “blanco”, a
través de segundos mensajeros.
 Inducción de la síntesis de enzimas o alguna otra proteína.

En esta práctica centraremos nuestra atención en algunas acciones metabólicas de la

insulina usando como modelo experimental el estado diabético.
La Diabetes Mellitus es una enfermedad producida por la carencia relativa o absoluta de
Insulina en el organismo, se conoce dos tipos de esta enfermedad. La Diabetes tiop I o
Insulina Dependiente y la Diabetes tipo II o Insulino No Dependiente. Hay varias
diferencias en cuanto a la etiopatología y alteraciones metabólicas entre los dos tipos
mencionados; pero, lo que caracteriza a cada una de ellas y les da el nombre es el hecho
de que en la Diabetes tipo I, la causa primaria es un defecto o destrucción de las células
beta de los islotes de Langerhans del Páncreas, productores de Insulina, y el paciente sólo
se alivia con la administración de Insulina. En la Diabetes tipo II, la causa primaria es un
defecto en la respuesta a Insulina, aquí el paciente alivia sus síntomas por administración
de antidiabéticos que estimulan la secreción de Insulina por las células Beta del Páncreas
y raramente hacen cetosis, además este tipo II de diabetes aparece en épocas tardías de la
vida (después de los cuarenta años) y la herencia juega un rol importante. En cambio, en
la Diabetes tipo I, la cetosis es común y aparece en etapas tempranas de la vida niñez o
juventud.
La tabla resume las características más importantes de ambos tipos de Diabetes.
Hay muchas sustancias que pueden producir los síntomas diabéticos, cuando son
administrados al organismo debido a que pueden producir deterioro o destrucción de las
células del páncreas con el consiguiente defecto en la síntesis y liberación de Insulina.
El Aloxano (2.4.5.6 tetraoxipirimidina o pirimidina tetrona), causa daño permanente a las
células beta de los islotes de Langerhans, produciéndose un cuadro de Diabetes Mellitus,
a mayores dosis también es hepatotóxico.

TABLA I: CARACTERÍSTICAS DISTINTIVAS ENTRE LA DIABETES MELLITUS INSULINO

DEPENDIENTE (TIPO I) Y LA DIABETES MELLITUS INSULINO NO DEPENDIENTE (TIPO II).

CARACTERISTICAS DIABETES TIPO I DIABETES TIPO II

Edad de inicio Menos de 30 años Más de 40 años
Cetosis Común Raro
Peso corporal No obeso Obeso (80%)
Prevalencia 0,2 – 0,3% 2–4%
Anticuerpos contra Si No
islotes Frecuentes Frecuentes
Complicaciones Casi nula o nula Normal o casi normal
Secreción de insulina Impresindible No es necesario
Tratamiento con insulina Ocasional Usual
Resistencia a la insulina
La estreptozotoxina es un antibiótico de amplio espectro, obtenido por el
Streptomyceachromogenes, y que produce necrosis de las células beta del páncreas y su
acción es más selectiva sobre dichas células que el aloxano, razón por la cual ahora se usa
más en Diabetes Experimental.
Otra sustancia con capacidad de producir diabetes por afectar a las células beta de los
islotes de Langerhans son el ácido dehidroascórbico, la 8-hidroxiquimolina, la ditizona y
otras quimolinas; pero, su acción diabetogénica es menos pronunciada y menos específica
que el aloxano y estreptozotocina.

EXPERIMENTO 1
DETERMINACION DE LA GLICEMIA
OBJETIVO
Determinar la concentración de glucosa en sangre de un paciente, utilizando el
método colorimétrico (Nelson y Somogy).*
FUNDAMENTO
El filtrado libre de proteínas se calienta en presencia de una solución cúprico-alcalina
(Cu++) obteniéndose la reducción del cobre a CuO (Cu +), el cual actúa luego sobre
arsenomolibdato produciéndose un complejo de molibdeno reducido de color azul, cuya
intensidad se mide en el fotocolorímetro.
PROCEDIMIENTO
El uso de este método requiere de desproteinización de la muestra de sangre total, a fin de
evitar la interferencia en las reacciones que dependen únicamente de glucosa.
Desproteinizado: En un tubo de ensayo medir, cuidadosamente los siguientes
componentes de la mezcla, teniendo cuidado de no carbonizar la muestra, para ello
mezclar suavemente y esperar al menos 30 segundos, antes de agregar el siguiente.
3.0 ml de NaCl 0,9%
0,2 ml de Sangre total
0,4 ml de Sulfato de zinc al 5%
0,4 ml de Hidróxido de Bario al 0,3%
Dejar en reposo por 5 minutos, luego filtrar o centrifugar para recuperar el filtrado libre
de proteínas.
Determinación Colorimétrica: En un tubo Folin Wo, medir lo siguiente:
1. Un mililitro de filtrado libre de proteínas
2. Un mililitro de reactivo cúprico alcalino
3. Mezclar y calentar en baño maría hirviente por 15 minutos
4. Enfriar en agua corriente y luego añadir: 1 ml de reactivo arseno molibdato
5. Mezclar suavemente y añadir agua destilada hasta la marca 25 ml, mezclar por
inversión, dejar en reposo por 5 minutos y leer en el fotocolorímetro con filtro
verde.
6. Prepare un Blanco usando 1 ml de agua destilada en lugar del filtrado (paso 1).
7. Prepare un Estándar de glucosa 50 ug/ ml; proceder como el filtrado libre de
proteínas (paso 1).
RESULTADOS

DETERMINACION CUANTITATIVA DE GLUCOSA EN SANGRE RESULTADOS

TOTAL

ABSORBANCIA ABSORBANCIA CONCENTRACIÓN (***)

BRUTA NETA

BLANCO 0.029
ESTANDAR 0.171 0.142 50 ug/ ml 100%
MUESTRA A 0.227 0.198 50 ug/ ml 139.4
MUESTRA B 0.082 0.053 50 ug/ ml 37.3
MUESTRA C

ESTIMAR EL FACTOR DE CALIBRACIÓN PORCENTUAL

(***) Anote en Resultados: (A) si el valor esta aumentado, (N) si el valor es normal y (D)
si el valor esta disminuido, comparado con el valor normal para el método y la población.
EXPERIMENTO 2
DETERMINACION DE GLUCOSURIA

OBJETIVO
Determinar la concentración de glucosa en orina utilizando la prueba de Benedict.

FUNDAMENTO
Agentes reductores como los monosacáridos (Glucosa) en presencia de Hidróxido de
Cobre en medio alcalino, generan la reducción del cobre proporcionalmente a la
concentración existente del agente.

PROCEDIMIENTO
1. Colocar 5 ml de reactivo de Benedict en un tubo de ensayo.
2. Añadir VIII gotas de muestra de orina, mezclar bien.
3. Incubar en baño maria hirviente durante 3 minutos.
4. Anotar el resultado explicando lo observado.

RESULTADOS
Evalúe los resultados en cruces:
Azul turquesa (0)-Verde(+)-Amarillo(++)-Naranja(+++)-Precipitado rojo ladrillo(++++)

Evaluación Observación
Muestra 1 ( ++++) NORMAL
Muestra 2 ( ++++) NORMAL

En observación coloque: Orina Normal o Glucosuria.

EXPERIMENTO 3
DETERMINACION CUALITATIVA DE CETONURIA
OBJETIVO
Identificar la Cualitativamente, la presencia de cuerpos cetónicos en orina, a través de una
reacción de color.
FUNDAMENTO
El Nitroprusiato de Sodio en medio alcalino, forma un complejo de color violeta –
morado, en contacto con Acetoacetato y Acetona, la prueba es positiva si el color
aparece en pocos segundos.
PROCEDIMIENTO
1. En una luna de reloj colocar unos mg de polvos de nitroprusiato sódico, en medio
alcalino.
2. Colocar unas gotas de la orina a estudiar.
3. Esperar un minuto y observar
4. La aparición de color violeta-morado da positividad a la reacción, por la presencia de
Cuerpos cetónicos.
RESULTADOS OBSERVACIÓN

Muestra 1 (++) NORMAL

Muestra 2 (+++) GLUCOSURIA

EXPERIMENTO 4.
OBJETIVO
Estimar las variaciones de la glicemia luego de la administración de una descarga de
glucosa.
PROCEDIMIENTO
Seguiremos el procedimiento recomendado por la Asociación Americana de Diabetes,
con las modificaciones propuestas por el “Nacional Diabetes Data Group”.
1. Indicar al paciente que en los días previos a la prueba, haga una dieta sin
restricción alguna, pero que contenga por lo menos 150 g de carbohidratos por
día.
2. La prueba se realiza en la mañana, después de 10 a 16 horas de ayuno, al que sólo
se le permitirá la ingesta de agua.
3. Se obtiene una muestra de sangre en ayunas para hacer la primera determinación
de glicemia.
4. Se disuelva 75 gramos de glucosa en agua y se administra al paciente por vía oral.
5. Se retiran muestras de sangre del paciente cada 30 minutos hasta completar tres
horas.

RESULTADOS

Se practicó la prueba en un paciente aparentemente normal (control) y en un paciente que

en una determinación de glicemia en ayunas se encontró 137mg%. Las determinaciones
de glicemia se hicieron por el método de Somogy Nelson. Luego de practicadas las
lecturas se hicieron los cálculos correspondientes de la glucosa plasmática, obteniéndose
lo siguiente
Tiempo Control Paciente
Glucosa mg% Glucosa mg%
Basal 87 148
30 min 115 220
60 min 121 256
90 min 94 297
120 min 76 288
180 min 85 275

Con los resultados mostrados en la Tabla anterior construya en el siguiente espacio de

papel milimetrado las curvas correspondientes, anotando en el eje vertical las
concentraciones de glucosa sanguínea y en el horizontal los tiempos respectivos.

INTERPRETACION

Los resultados obtenidos en la primera experiencia de las muestras AyB nos indicant que
la muestra A, sufre hiperglicemia y la muestra B nos da como resultado que sufre de
hipoglicemia.

INTERROGANTES

1. Explique el mecanismo por el que se produce cetonúria en el estado diabético.

 La diabetes es una enfermedad metabólica relacionada fundamenfalmente con la

insuficiencia insulínica. Esta insuficiencia no responde a un mecanismo patogénico
único conocido y aceptado por todos. En su producción pueden intervenir
distintos factores etiopatogénicos, algunos de los cuales son bien conocidos, pero
otros han escapado a las investigaciones clínicas, biológicas y experimentales.

2. ¿Qué función cumple la insulina?

 La insulina es una hormona principal que regula el metabolismo de secretada por

las β-células de los islotes de Langerhans del páncreas. La principal función de la
insulina es contrarrestar la acción concertada de varias hormonas generadoras de
hiperglicemia y para mantener bajos los niveles de glucosa en sangre.

3. ¿Qué células dependen de Insulina para ingresar la glucosa?

 El ingreso de la glucosa a las células se realiza mediante dos tipos de

proteínas acarreadoras: los transportadores de glucosa asociados a sodio
(SGLT) y los sistemas facilitadores del transporte de glucosa (GLUT).

 Los transportadores de la glucosa SGLT y GLUT participan en el control

hormonal del metabolismo al ser mediadores de la entrada, utilización y
almacenamiento de la glucosa. Permiten un transporte de la glucosa
 altamente regulado al expresarse de manera diferencial en los tejidos y al
depender de estímulos humorales diversos para regular su función

Insulina Activa
Glucolisis Hexoquinasa
Fosfofructoquinasa 1
Piruvato quinasa
Glucogenogenesis Glucogeno Sintasa
Sintesis De Ac.Grasos Acetil Carboxilasa
Lipasa lipoproteica
Inh. La cetogenesis TG y Ac.Grasos

4. Cuáles vías activa Insulina?

 La insulina es sintetizada y almacenada en el cuerpo en forma de un hexámero, es

decir, una unidad compuesta por seis insulinas, mientras que su forma activa es
la de una hormona monomérica, es decir, la molécula de insulina sola.

5. cuáles vías inactiva Insulina?

 Seis moléculas de insulina permanecen inactivas por largo tiempo en su forma

hexamérica, como forma de almacenamiento de disponibilidad rápida y protección de
la altamente reactiva molécula de insulina. Dentro del aparato de Golgi, la proinsulina
es enviada al interior de vesículas secretoras y de almacenamiento ricas en Zn2+ y
Ca2+.

Insulina Inactiva
Gluconeogenesis Piruvato Carboxilasa
Glucogenolisis Glucogeno Fosforilasa
Inh. Lipolisis Lipasa sensible a hormonas
 6. ¿Cómo se explica la hiperglicemia y glucosuria que presentan los diabéticos tipo
II?

 La hiperglucemia es el término técnico que utilizamos para referirnos a los altos niveles
de azúcar en la sangre. El alto nivel de glucemia aparece cuando el organismo no
cuenta con la suficiente cantidad de insulina o cuando la cantidad de insulina es muy
escasa. La hiperglucemia también se presenta cuando el organismo no puede utilizar la
insulina adecuadamente.
 La diabetes tipo 2 es la forma más común de diabetes Es una enfermedad que dura toda
la vida (crónica) en la cual hay un alto nivel de azúcar (glucosa) en la sangre.

7. ¿En qué casos se indica la prueba de tolerancia a la glucosa?

 La prueba de tolerancia a la glucosa es un examen para verificar la forma en que el

cuerpo logra introducir la glucosa de la sangre a las células. El examen
generalmente se utiliza para probar para la diabetes, resistencia a la insulina e
hipoglucemia reactiva y algunas veces acromegalia, o trastornos raros del
metabolismo de carbohidratos.

8. ¿Qué importancia tiene la HEMOGLOBINA GLICASADA, en el estudio de la

Diabetes?
 La hemoglobina glucosilada es un parámetro que refleja cómo ha sido el control de
la diabetes los meses anteriores a la realización del análisis. Su determinación
permite contar con un dato objetivo que con una sola cifra nos informa de
la glucemia media de los 3 meses anteriores. Cuando se mide la fracción A1c y se
emplea el llamado “estándar DCCT”, método que utilizan la mayoría de los
laboratorios, el rango normal es 4-6 %. En los últimos tiempos tiende a ofrecerse
también la glucemia media equivalente. Por ejemplo, una A1c de 7 %, que muchas
veces se considera el objetivo a alcanzar, representaría una glucemia media de 154
mg/dl, mientras que 6 %, el límite superior del rango normal, equivaldría a 126
mg/dl. Cada punto de A1c equivale a 28-29 mg/dl. Aunque es verdad que en ciertos
pacientes no existe la misma correlación y que una cifra determinada de
hemoglobina glucosilada puede equivaler a una glucemia media más elevada o más
baja, incluso en estos casos sigue siendo una medida útil ya que la monitorización
de la evolución de la glucosilada nos dirá si el paciente está mejorando o
empeorando.

 La importancia de la hemoglobina glucosilada la reconocen todas las principales

sociedades científicas. La Asociación Americana de Diabetes recomienda medir la
A1c al menos dos veces al año en pacientes que cumplen con los objetivos de
control y que están en situación estable, ascendiendo a una determinación
trimestral para los que estén descontrolados o en los que se modifique el
tratamiento. Algunas situaciones, como por ejemplo el embarazo, pueden aconsejar
incluso una mayor frecuencia de determinación.