Reporte de Laboratorio de bioquímica.

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30 de 25 de Octubre del 2021.
PRÁCTICA 7. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA
VELOCIDAD ENZIMÁTICA.
Espinosa Cisneros A., Hernández Salgado A.L, Quiñones Ventura A.G.

Resumen.
Se elaboró una gráfica de velocidad que mostraba la reacción en función de la temperatura, todo esto mediante la
determinación de la velocidad de una reacción enzimática, obteniendo la cantidad de glucosa que existía y era producida en
cada tubo de la incubación, para llegar a los resultados se utilizó una curva de calibración y el método de Nelson-Somogyi.

Introducción.
Una reacción química se conoce como la ruptura de los átomos que conforman a un enlace, generando nuevos
enlaces, donde intervienen los reactivos que antes se tenían y como resultado generan los “productos” de las
reacciones químicas. Dichas reacciones ocurren en todo momento y en todo lugar, provocando que al haber una
reacción, los elementos o reactivos que se ven involucrados, se transformen (estructura molecular y enlaces).

La actividad enzimática se ve regulada por la velocidad en la que la reacción va a llegar al equilibrio. Todo esto
en reacciones que sean catalizadas por enzimas. La temperatura es un factor muy importante que regula la
actividad enzimática pues, se sabe que hay un rango en el que cada enzima trabajará de la manera más óptima.
Si se supera dicha temperatura se da paso a la desnaturalización, provocando que la enzima pierde su
estructura, dejándola sin una función biológica.

La enzima carbohidrasa amilasa salival es un claro ejemplo de una proteína que lleva a cabo actividad
enzimática, ya que ésta cataliza los enlaces α-1,4-glucosídicos de los almidones y los carbohidratos. Por lo que en
esta práctica se buscará conocer la velocidad dicha enzima a diferentes temperaturas, para calcular la cantidad de
glucosa que se concentre en cada tubo, con ayuda de una curva de calibración y del método de Nelson-Somogyi y así
a través de la comparación de los resultados de cada tubo, llegar a una conclusión de si se produce la
desnaturalización..

Objetivo.
Observar el efecto que tienen distintas temperaturas sobre la enzima obtenida y con esto comprender la relación
que existe entre la temperatura y la actividad enzimática.

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Metodología.
I.- PREPARACIÓN DE EXTRACTO.
1. Es necesario que un miembro de tu equipo realice lo siguiente:
a. Enjuaga tu boca con abundante agua.
b. Mastica un trozo de papel filtro para estimular la salivación.
c. Colecta una muestra de saliva, la cual se irá pasando por un embudo con un filtro humedecido
colocado sobre un tubo de ensayo. ¡Es necesario que colectes por lo menos 6 mL aprox.
2. Diluye la muestra 10 veces. Esta muestra contiene la enzima para tu práctica.

II.- MEDICIÓN DEL EFECTO DE LA TEMPERATURA

1. Coloca en 5 tubos por duplicado el sustrato (solución de almidón) y el extracto, de acuerdo con la Tabla I.

2. Incuba todos los tubos a las temperaturas señaladas durante 30 minutos, al cabo de los cuales, agrega
0.5 ml del reactivo I de Nelson, el que debe ser recientemente preparado (12.5 ml de reactivo A con 0.5
mL de reactivo B).
3. Trata todos los tubos de acuerdo con el procedimiento de la sección III, “Determinación de azúcares
reductores y curva de calibración”.

III. DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES Y CURVA DE CALIBRACIÓN.

1. Los 10 tubos trabajados en la sección anterior se usarán ahora para la determinación de azúcares
reductores formados por la acción de la enzima, al mismo tiempo que se corre una curva de calibración
con solución estándar de glucosa.
En Tabla II los 10 tubos son mencionados solamente como “tubos problema”, mientras que los de la curva de
calibración con concentraciones crecientes de glucosa serán etiquetados desde 1 hasta 6. Lee la absorbancia a
520 nm después de agitar perfectamente.

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Datos crudos

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Tratamiento de datos.
1. Construye una curva de calibración para la determinación de azúcares reductores. Toma en cuenta la
concentración de la solución estándar de glucosa para el cálculo de concentraciones de cada mezcla de
reacción de la Tabla II.

2. Calcula la velocidad de reacción enzimática en cada tubo de la Tabla I. Para ello, sigue estos pasos:
A. Calcula la cantidad de glucosa que se produjo en cada tubo durante los 30 min de incubación.
Para esto, usa tu curva de calibración.

𝑦 = 0. 0219𝑥 + 0. 0109
𝑦
𝑥= 0.0219
− 0. 4977

T= 0ºC

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(0.072)
𝑥= 0.0219
− 0. 4977

𝑥 = 2.789ᶙg/30min
T= 15ºC
(0.131)
𝑥= 0.0219
− 0. 4977

𝑥 =5.484ᶙg/30min
T= 30ºC
(0.789)
𝑥= 0.0219
− 0. 4977

𝑥 =35.529ᶙg/30min
T= 40ºC
(0.813)
𝑥= 0.0219
− 0. 4977

𝑥 =36.625ᶙg/30min
T= 100ºC
(0.06)
𝑥= 0.0219
− 0. 4977

𝑥 =2.242ᶙg/30min

B. Determina la cantidad de glucosa que se produjo cada minuto en cada tubo.

T= 0ºC
𝑥 = 2.789ᶙg/30min
𝑥 =0.0927ᶙg/min
T= 15ºC
𝑥 =5.484ᶙg/30min
𝑥 =0.183ᶙg/min
T= 30ºC

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𝑥 =35.529ᶙg/30min
𝑥 =1.184ᶙg/min
T= 40ºC
𝑥 =36.625ᶙg/30min
𝑥 =1.221ᶙg/min
T= 100ºC
𝑥 =2.242ᶙg/30min
𝑥 =0.075ᶙg/min

3. Elabora una gráfica de velocidad de reacción en función de la temperatura. Esta gráfica expresa el perfil
de actividad de carbohidrasas del organismo que estudiaste.

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INVESTIGA.
1. ¿Qué es una enzima?
R= Las enzimas son conocidas como proteínas complejas que son capaces de catalizar reacciones químicas,
produciendo cambios químicos en las reacciones químicas que se ven involucradas.
2. ¿Qué reacción cataliza la carbohidrasa? Escribe la reacción completa.
R= Cataliza la hidrólisis de carbohidratos superiores, logrando convertirlos en azúcares simples.
3. Identifica el sustrato, el producto e indica si son necesarios coenzimas o cofactores.
R= Son necesarios cofactores
Sustrato: almidón
Producto: glucosa
4. ¿Cuál es el pH y la temperatura óptimas de esta enzima?
pH= 6.9
Temperatura: 60 grados centígrados.

Discusión.
Los resultados arrojaron que al llegar a los 100 grados centígrados la enzima se encontraba totalmente
desnaturalizada, y como se observó en la pregunta #4, se dice que la temperatura óptima de esta enzima se

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encuentra rondando los 60 grados centígrados, aunque al realizar los cálculos pertinentes y comparar con
nuestros resultados obtenidos podemos notar que la temperatura óptima que la enzima mostraba rondaba entre
los 30 y 40 grados centígrados, mencionando entonces que esa fue nuestra única discrepancia entre la literatura
y los resultados obtenidos en la experimentación.

Conclusión.
Se llegó a la conclusión de que los tubos que tenían glucosa en menor concentración presentaban mayor
absorbancia, entendiendo también que los tubos con mayor concentración de glucosa tenían menor absorbancia
provocando una desnaturalización de la enzima. Fue de gran ayuda también que la práctica se viera relacionada
con los colores, pues de esta manera pudimos conocer la cantidad de producto que cada tubo posee mediante la
intensidad de su color.

Referencias

● La a-amilasa salival: relación con la caries dental y la salud en general. (s. f.). Revistas

Javeriana. Recuperado 25 de octubre de 2021, de

https://revistas.javeriana.edu.co›article›view›pd

● Enzima. (s. f.). Mediline. Recuperado 25 de octubre de 2021, de

https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/002353.htm

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