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Pruebas especiales
Version: 1.0
ELISA PSA TOTAL
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1.- OBJETIVO
Detección cuantitativa de la concentración del antígeno prostático especifico total PSA
circulante en el suero humano mediante el análisis inmunoenzimometrico de microplaca
2.- ALCANCE
pacientes adultos mayores, población general
3.- RESPONSABLES
Bioquímicos.
4.- DEFINICIÓN
El Antígeno Especifico Prostático humano, es una serin-proteasa.el PSA se
encuentra en cáncer prostático ,benigno, maligno y metastatico . debido a que el
cáncer de próstata es la segunda forma mas prevalente de malignidad en el
hombre.se ha establecido que encontrar niveles elevados de PSA juega un papel
importante en el diagnóstico temprano. Debido a la mayor sensibilidad y
especificidad. La reacción entre los diversos anticuerpos de PSA y el PSA nativo
forman un complejo en sándwich que se enlaza con la estreptividina recubierta en el
pozo.
5.- FUNDAMENTO
Los reactivos esenciales requeridos para un análisis inmunoenzimatico incluyen
anticuerpos altamente afines y específicos (enzima e inmovilizados), con
reconocimiento de epitopes claramente diferencias, en exceso con antígenos nativos y
el anticuerpo anti-PSA monoclonal marcado con biotina agregado en forma exógena.
El anticuerpo marcado con enzima y el suero que contiene el antígeno nativo, lugar a
una reacción para formar un complejo soluble tipo sándwich .la actividad enzimática en
la fracción de anticuerpo unido será directamente proporcional a la concentración del
antígeno del antígeno nativo.
MUESTRA REQUERIDA
TIPO DE MUESTRA
Suero.
CANTIDAD DE MUESTRA
25 ul de muestra
CONDICIONES DEL PACIENTE
Pacientes en ayuno.
RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA
Obtener la muestra de la manera usual por venopunción.
CONSERVACIÓN DE LA MUESTRA
En caso de no procesarse de inmediato la muestra puede refrigerarse a 2-8ªC
SUSTANCIAS INTERFERENTES
Lipemicas
REACTIVOS
Calibradores de PSA Total 1 ml/ vial
Reactivo enzimático PSA13 ml/vial
Microplaca cubierta de estreptavidina -96 pocillos
Instrutivo de Trabajo de Código: ITPE - 07
Pruebas especiales
Version: 1.0
ELISA PSA TOTAL
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Solución de Lavado 20 ml
Sustrato A-7 ml/vial
Sustrato B-7 ml/vial
Solución de parada – 8ml/vial
MATERIALES NESARIOS
Micropipetas de 10-100ul.
Micropipetas de 100-1000ul.
Punteras amarilleras.
Punteras blancas.
Cronometro.
Vaso precipitado.
Probetas.
EQUIPOS
Lector de Elisa
CONDICIONES DE REACCIÓN
La reacción se lleva acabo a temperatura ambiente.
PROCEDIMIENTO
Pipetear 25 ul del suero, controles y calibradores
Adicionar 100 ul de Reactivo Enzimático PSA a cada pocillo.
Revolver la microplaca ligeramente por 20-30 segundos
Incubar 30 minutos a temperatura ambiente.
Preparar la solución de lavado (para 20 ml de la solución de Wash - 1000 ml de
H2O destilada, preparación para 8 pacientes).
Realizar tres lavados a cada pocillo cada lavado con 350 ul de solución de lavado
preparada anteriormente.
Adicionar 100 ul de solución de trabajo de sustrato
Incubar 15 minutos a temperatura ambiente.
Adicionar 50ul de solución de Stop.
Leer en el lector de Elisa.
REFERENCIA:
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