Análisis Elemental de

Muestras Clínicas

Amparo Villar
Especialista de Producto SPSD
 Elementos de interés en fluídos biológicos
(orina, sangre, suero, plasma)

METALES PESADOS ALTAMENTE TÓXICOS

• Cd, Pb, Hg (As), etc.

ELEMENTOS POTENCIALMENTE TÓXICOS

• Al, Sb, Ba, Be, Bi, Li, Ni, Sr, Tl, etc.

ELEMENTOS ESENCIALES
• Cr, Co, Cu, Mg, Mn, Se, V, Zn, etc.

ESPECIES QUIMICAS
• MeHg, Metaloproteínas, péptidos y fosfopétidos, metalodrogas, etc
 Necesidades analíticas para la medida de metales
en un laboratorio clínico
Sistema de introducción de muestras robusto
 Para todas las matrices manejadas rutinariamente (orina, sangre, etc.)

Medida de muchos elementos en una misma adquisición

 Reducción tiempos de análisis
 Mejora de la productividad
 Reducción de los costes de análisis

Medidas a nivel de trazas y de altas concentraciones en una misma adquisición

 Reducción tiempos de análisis
 Mejora de la productividad
 Reducción de los costes de análisis

Posibilidad de determinación de especies con heteroátomos

 Especiación, farmacocinéticas, estudios metabólicos, etc
Agilent en Espectroscopía Atómica. Hoy!!.
Espectroscopía Atómica: Técnicas de análisis elemental

Nuevo!!

AA Llama MP-AES ICP-MS

Nuevo!!

AA Cámara de Grafito
ICP-OES
ICP-MS QQQ
Criterios de Selección de la Técnica Adecuada

• LOD’S
• Productividad:
-Número de muestras
-Número de elementos por muestra
-Elementos concretos de interés
• Matriz
- Complejidad (TDS)
- Una o varios tipos?
• Presupuesto
Necesidades futuras del laboratorio
Introducción al ICP-MS
¿Que es un ICP-MS?
Técnica de análisis elemental inorgánico

ICP - Inductively Coupled Plasma MS – Espectrómetro de masas

• Fuente de iones a alta Tª • Diferentes tipos de analizadores de
• Decompone, atomiza e ioniza la muestra masas (Qpole, TOF, DF)

• Intervalo de masas de 7 a 250 amu

(Li a U.)

• Detector de modo dual (ppt a ppm)

• Proporciona información isotópica

¿Qué elementos pueden ser medidos mediante
ICP-MS?
TODOS a excepción de:
• Presentes en el plasma
• Elementos <5 amu o >260 amu
• No ionizables
Limitaciones de la técnica de ICP-MS

A pesar de la gran evolución de las técnicas instrumentales en los últimos 20

años, todavía existen algunas limitaciones de la técnica:

1) Tolerancia del plasma: supresión de la ionización o problemas en la interfase

(bloqueo de los conos y deriva de la señal) debido a muestras con alto contenido
de matriz (>0.3%)

2) Presencia de interferencias espectrales derivadas de la matriz: varían en función

de la composición de las muestras. Generalmente son variables y desconocidas.

3) Rango lineal limitado, especialmente cuando se trabaja en muy diferentes

niveles de concentración (configuración de alta sensibilidad para elementos
ultratraza, podría saturar la señal de mayoritarios).
 Enabling a new era in
Evolución de Agilent en ICP-MS ICP-MS analysis

Enabling a new level of

ease of use in ICP-MS
Enabling a new level 8800 ICP-QQQ
of interference 7700 Series
management World’s first ICP-QQQ for
unparalleled interference
removal and sensitivity
Enabling routine 7500 Series
robust ICP-MS
analysis

Enabling high 4500 Series HMI, ISIS-DS, 3rd Generation ORS

sensitivity Masshunter SW
metal analysis
9 orders detector range
Octopole Reaction System

PMS 100
World's first benchtop system.
Hyperbolic profile quad, motorized torch XYZ, cool plasma

First computer-controlled ICP-MS

1987 1994 2000 2009 2012

 Agilent 7700x ICP-MS con Octopole Reaction System (ORS3)
Lentes iónicas Off-axis 3º generación
Entrada del gas Octopole Reaction
System (ORS3) Detector
de celda
Entrada de gas simultáneo dual
de dilución del rápido (109
kit HMI intervalo dinámico
lineal)

Sistema de
introducción de
muestra de bajo Cuadrupolo
flujo hiperbólico de
alta frecuencia
Cámara de (3MHz)
nebulización
refrigerada por
Peltier

Sistema de vacío
de alto
rendimiento
Generador de RF de
27MHz de frecuencia Interfase de extracción
variable (alta transmisión,
tolerancia a matriz)

Page 11
3 Características únicas del 7700x
Temperatura del plasma más alta que ningún otro ICP-MS
• Sistema de introducción de muestra de bajo flujo (0.15mL/min, frente a 1mL/min en otros sistemas)
• Cámara de spray con temperatura controlada
• Antorcha con mayor ID (2.5mm, comparado con 1.8 – 2.0mm en otros sistemas)
• Generador de RF de estado sólido y alta eficacia (algunos ICP-MS aun emplean sistemas de válvulas).

Unica celda de colisión / reacción capaz de eliminar eficazmente

todas las interferencias en modo He
• Debido a un excepcional control de la energía de los iones proporcionado por el sistema ShieldTorch
System, combinado con un compacto y bien focalizado haz iónico proporcioando por la celda
octopolar

Mayor intervalo dinámico lineal que ningún otro ICP-MS

• 9 órdenes de rango dinámico lineal verdaderos.
• Otros sistemas emplean lentes de desenfoque, incremento de resolución, atenuación del detector o
interfases alternativas para alcanzar el mismo rango de concentración.
“Autosampler” integrado ultra-inerte

Diseñado especialmente para aplicaciones que requieran alta

pureza donde la prevención de la contaminación es clave
 Tapa para proteger las muestras de la contaminación ambiental (e.g. polvo).
 Viales PFA ultra-inertes.
 Sonda y tubos de muestra ultra-inertes.
 Puerto para lavado continuo, más tres viales de lavado adicionales (e.g. lavado alcalino,
lavado ácido, etc.) para máxima flexibilidad.
 Bandejas de muestras configurables.
 Más pequeño volumen de muestra (<0.5mL).
 Diseñado, construido y soportado por Agilent.
Análisis de muestras alto contenido en sólidos y alta
viscosidad. Clinical Sample Introduction Kit.
• Permite la introducción directa de sangres y sueros con una mínima preparación de muestra
(dilución). Elimina la necesidad de digestión por microondas.

Construido en PFA
• Químicamente inerte
• Reduce efectos de memoria (especialmente útil
para análisis de yodo)
• Irrompible por golpes e impactos
• Acorta tiempo de limpieza entre muestras

Alta tolerancia a sólidos

disueltos
• Ideal para análisis de orinas
• Alta estabilidad de los estándares internos
Aplicaciones Clínicas/Biomédicas en ICP-MS
 Análisis de Orinas

Análisis directo de la muestra tras una dilución 1/5 ó 1/10 (v/v) en 1 %

HNO3/0,5 % HCl y adición de patrones internos

• SIN obturación del nebulizador

• SIN formación de depósitos en el tubo del inyector (12 h análisis)

Elemento Concentración (µg/L)

Lyphochek, level 1 Lyphochek, level 2

medido certificado medido certificado

Cr 1.7 ± 0.3 1.2 ± 0.3 18.6 ± 2.6 20.2 ± 4.1

Co 6.6 ± 0.7 6.9 ± 1.4 18.9 ± 1.4 19.1 ± 4.2
Cu 24 ± 2.1 26.7 ± 5.4 45 ± 5.5 50 ± 10
Se 56 ± 5.3 49 ± 10 192 ± 17 187 ± 37
As 65 ± 6 67 ± 14 162 ± 15 163 ± 33
Cd 8.4 ± 1.1 8.6 ± 1.7 14.9 ± 1.9 15.6 ± 3.1
Sb 6.9 ± 1.1 9 ± 1.8 34.8 ± 4.4 36.9 ± 7
Tl 9.6 ± 0.8 9.7 ± 2.0 185 ± 17 198 ± 40
Pb 13.5±1.1 14.3 ± 2.9 68 ± 5 69 ± 14
Características analíticas para el análisis de orina por ICP-MS

Isótopo LOD (ng/L) RSD (%)

Orina sin diluir

2 min, n = 10 20 min, n = 20 5 horas, n = 60

7Li 6 0.8 2.7 4.5

9Be 4 1.5 4.2 3.9
52Cr 16 1.7 3.1 4.6
51V 16 2.4 3.4 4.1
55Mn 21 3.0 3.1 3.6
59Co 5 1.8 2.6 4.9
60Ni 9 2.9 3.4 5.1
63Cu 121 0.9 3.1 4.4
66Zn 92 0.8 3.0 5.1
75As 73 2.1 2.8 5.6
78Se 143 2.4 3.7 6.2
LOD= 3 RSDb c/SBR
RSDb: Desviación estandar relativa de la intensidad del fondo (10 medidas), c: concentración el elemento en la disolución;
SBR: relación señal/ruido
 Características analíticas para el análisis de orina por ICP-
MS (continuación)

Isótopo LOD (ng/L) RSD (%)

Orina sin diluir
2 min, n = 10 20 min, n = 20 5 hours, n = 60
98Mo 27 1.8 2.8 5.4
103Rh 0.6 1.2 3.3 4.8
111Cd 8 2.4 3.2 3.9
115In 4 0.5 3.0 3.7
118Sn 19 1.6 3.2 5.8
121Sb 6 1.1 2.6 5.3
138Ba 8 1.5 2.8 4.1
184W 7 0.9 2.2 4.6
195Pt 3 0.7 1.9 3.8
205Tl 3 0.6 2.1 2.3
208Pb 2 0.7 2.3 2.5
238U 0.4 1.2 2.2 3.2

LOD= 3 RSDb c/SBR

RSDb: Desviación estandar relativa de la intensidad del fondo (10 medidas), c: concentración el elemento en la disolución;
SBR: relación señal/ruido
Análisis de elementos tóxicos y nocivos en orina (análisis
semicuantitativo o “Screening” elemental)
Barrido cualitativo de orina diluida 1:10 para identificar envenenamientos
[1] Spectrum No.1 [ 181.531 sec]:004SMPL.D# /
181.525 sec]:004SMPL.D#
sec]:002SMPL.D# / Tune
Tune #1
#1 [CPS]
[CPS] [Linear]
[Linear]

5.0E5
1.0E5

C Na Rb
Mg

Elemento “desconocido” adicionado

a la muestra de orina

2.5E5
5.0E4

Ca Zn

Li Mo
Cu Sr I
Br
Sb Cs Ba
Fe As Pb
Sn
m/z-> 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100110120130140150160170180190200210220230240250260
 Análisis de elementos tóxicos y nocivos en orina
(análisis semicuantitativo o “Screening” elemental)

 Confirmación (por perfil isotópico) de la presencia de Talio (2ppb)

 210Po podría ser detectado en esta región de masas

[1]
[1] Spectrum
Spectrum No.1
No.1 [[ 175.118
175.118 sec]:003SMPL.D
sec]:005SMPL.D#/ Tune
/ Tune
#1#1
[CPS]
[CPS]
[Linear]
[Linear]

1.0E5
5.0E5

5.0E4
2.5E5
205Tl
Tl

203Tl

208Pb
Pb

m/z->
m/z-> 194
194 196
196 198
198 200
200 202
202 204
204 206
206 208
208 210
210 212
212 214
214 216
216
 Análisis de sangre/suero empleando el ICP-MS 7700x

Muestra y patrones son diluídos con una disolución compuesta por:

0.7 mM NH3
0.01 mM AEDT
0.07 % (v/v) Triton X-100
2 % (v/v) 1-Butanol
10 ppb P.I (No “online”)

Dilución final de la muestra de 1/20

(CSF dil. 1/10)

Más de 100 muestras pueden ser preparadas en menos de 1 h por una sola persona
Características Analíticas del análisis de sangre por ICP-MS

Límites de cuantificación
(LOQs) calculados en sangre sin diluir:
De 0.003 µg/L para 238U hasta
0.1 µg/L para 69Ga

Recuperaciones
De 1 µg/L a excepción de:
10 µg/L para B, Mn y Sr y de
200 µg/L para Cu y Rb
obteniendo valores entre 94 -108%
Estabilidad de estándares internos (muestras de sangre
y suero diluidas 1:10 en disolución amoniacal)

Calibracion Muestras de sangre Muestras de Suero

Interfase de muestreo robusta

Cono de muestreo o “Sampler “ Cono de extracción o “Skimmer”

Imágenes tomadas después del análisis de 90 muestras de sangre

Page 24
Análisis de Selenio en suero con el Agilent 7700x ICP-MS
Análisis de yodo en el Agilent 7700x ICP-MS

o Estabilización en 0.1M NH4OH/ 0.01M AEDT/ 0.07% Triton X

o Limpieza en disolución básica (NH3/AEDT/Triton X)
o Calibraciones a nivel bajo de concentración
o Empleo de Teluro como patrón interno
Acoplamientos con ICP-MS para especiación metálica

GC-ICP-MS
LC-ICP-MS
(IC, RP-LC, SEC, FFF)

Optional
Conventional
(Organic compound)
Detector(s)

CE-ICP-MS

Page 27
Especiación de As en orina por LC-ICP-MS
Separación isocrática de AsB & Cl del As inorgánico usando una nueva columna

*Surface Aminated Polymer Substrate Column G3288-80000 (4.6 x 250 mm)

Guard Column G3154-65002

Fase móvil (alcalina):

2 mM phosphate buffer solution (PBS)
pH 11.0 ajustado con NaOH
0.2 mM EDTA
10 mM, CH3COONa
3.0 mM NaNO3
1% etanol
Agilent Application Note:
Routine Analysis of Toxic
Arsenic Species in Urine
Using HPLC with ICP-MS,
5989-5505EN, by Tetsushi
Sakai and Steven Wilbur,
Agilent Technologies

*Ajustado a pH 11 para separar la AsB. La fuerza iónica de la fase móvil acorta la elución del As V
10ug/L de cada especie de As

Page 28
 Conclusiones
El ICP-MS ofrece una combinación única
de propiedades como son:

 Gran capacidad multielemental (casi toda la Tabla Periódica)

 Bajos límites de detección (muy pocas ppt para la gran mayoría de los elementos)
 Amplio intervalo dinámico lineal
 Análisis muy rápidos (<5 minutos para un barrido multielemental completo)
 Espectros libres de interferencias espectrales (celda de colisión/reacción)
 Tolerancia a gran variabilidad de matrices
 Robustez
 Facilidad de acoplamiento de una técnica de separación cromatográfica al ICP-MS
aumentando las aplicaciones de la técnica
Gracias!!
Contacto
Web: www.chem.agilent.com
Mail: amparo_villar@agilent.com
Teléfono: 901.11.68.90