BIO0022-7

Equipo 1
Maura Eunice Alemàn Esparza Trabajo de Investigaciòn de
Ruben Campos Alcàntara Laboratorio.
Norma Cristina Alvarez Caloca
Ana Mary Castilla Ponce
Dra. Nancy Antonia Rivera Neri
PRACTICA 1
PRACTICA 1. OBSERVACIÓN DE LEUCOCITOS

PROPÓSITO

Realizar frotis sanguíneos preparados cuidadosamente y teñidos con el colorante

Wright, el cual tiñe el núcleo de los leucocitos de un color púrpura que facilita la
diferenciación.

INTRODUCCIÓN

“Los cinco principales tipos de leucocitos son los neutrófilos (50-70%), los
eosinófilos (15%), basófilos (0.5-1.0%), linfocitos (20-30%), y monocitos (2 –6%).
Por cuenta diferencial se entiende la determinación del porcentaje relativo de cada
tipo de leucocito en una muestra de sangre. Se realiza en extendidos (frotis)
preparados cuidadosamente y teñidos con colorantes tales como Wright, el cual tiñe
el núcleo de los leucocitos de un color púrpura que facilita la diferenciación.”

Las células hematopoyéticas precursoras de la médula ósea e hígado fetal, que se

dirigen al timo mediante un fenómeno llamado "Homing," y penetran en él sufren
estadios de diferenciación, lo que da como resultado linfocitos T maduros que se
vierten en sangre y tejidos linfoides periféricos. La maduración del linfocito T en
timo, se acompaña de una serie compleja de cambios en su genotipo y fenotipo, el
primer marcador que aparece sobre su superficie es el CD2 (una glicoproteína que
tiene función de molécula de adhesión), posteriormente se lleva a cabo un rearreglo
de los genes TCR (receptor de la célula T) posteriormente aparece la molécula de
superficie CD3 (marcador, al igual que el CD2, que poseen todos los linfocitos T y
que sirve para la transducción de señales). Al madurar el linfocito todavía en timo
adquiere en su superficie los marcadores CD1, CD4 y CD8 entre otros receptores y
es en timo dónde se lleva a cabo una selección de los linfocitos T eliminándose
aquellas clonas de alta afinidad autorreactivas y aquellas sin sentido, y perduran las
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clonas útiles. Los linfocitos se caracterizan de acuerdo a marcadores de superficie;
por ejemplo, los

linfocitos T citotóxicos expresan el CD8, mientras que los linfocitos T cooperadores

expresan el CD4. Dentro de las funciones de la respuesta inmune mediada por
linfocitos T están: respuestas efectoras antígeno-específicas mediante la secreción
de linfocinas, citotoxicidad mediada por células e inmunidad mediada por células,
intervienen en la activación y diferenciación de células T y B (cooperación y
amplificación), regulación de respuestas inmunitarias. Los linfocitos B son las
células precursoras de las células plasmáticas (productoras de inmunoglobulinas),
su fuente principal es hígado fetal y médula ósea. La médula ósea es la encargada
de madurar a los linfocitos B, a diferencia de los T que maduran, como ya se dijo,
en timo. Las células B tienen en su superficie marcadores específicos como el CD19
y CD20, así como receptores para C3b de complemento.

Un frotis o extendido sanguíneo se hace con la finalidad de teñir las células

sanguíneas con colorantes policromatófilos y poder detectar alteraciones
morfológicas de los eritrocitos. De igual manera es posible identificar leucocitos
(glóbulos blancos) con base a afinidades tintoriales o morfológicas.

Los colorantes policromatófilos son mezclas de compuestos básicos como el azul de

metileno y ácidos como la eosina. La tinción dependerá de la afinidad ácido – base
que tengan las diferentes estructuras celulares. Los componentes ácidos, como el
núcleo se tiñen con el colorante básico, por lo que reciben el nombre de basófilos
mientras que los componentes básicos se tiñen con el colorante ácido (eosinófilos).
Algunas estructuras celulares se tiñen con ambos colorantes y se conocen como
neutrófilos. En la siguiente tabla se resume la información anterior.
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Colorante Estructura celular que Tipo celular Color

tiñe

Ácido Básico Eosinófilo Rojo

Básico Ácido Basófilo Azul

Ácido y Básico Neutro Neutrófilo Violeta

Características de los leucocitos

Leucocitos (Granulocitos y Agranulocitos)

Micrografía Nombre % Normal Características principales

Poseen un núcleo multilobulado (3-5

lobulaciones), y gránulos azurófilos
lisosomas), en su citoplasma contienen
Neutrófilos 55-65 enzimas hidrolíticas, lisozima y
mieloperoxidasa, las cuales le permiten
actuar en la fase aguda de la inflamación.

Tienen un núcleo multilobulado y poseen

granulaciones acidófilas que contienen
enzimas hidrolíticas y peroxidasa que son
Eosinófilos 0.5-4 liberadas en las vacuolas fagocíticas.
Aumentan en infecciones parasitarias y
procesos alérgicos, principalmente.
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Poseen un núcleo multilobulado y grandes
gránulos esféricos basofílicos y
metacromáticos dados por heparina e
Basófilos 0.5 histamina. Liberan además aminas
vasoactivas y sustancia de reacción lenta
de la anafilaxia.

Generalmente son células pequeñas que

contienen un núcleo circular oscuro y un
escaso citoplasma azul claro. Existen dos
tipos:

Linfocitos T: Se maduran en el timo y

circulan en la sangre periférica, donde
ellos son los principales artífices de la
inmunidad celular. Poseen funciones como
Linfocitos 25-35 cooperadores (CD4) ó citotóxicos (CD8),
modulando la respuesta a través de sus
efectos sobre otras células.

Linfocitos B: se maduran en la médula

ósea y son los principales encargados de
la respuesta humoral a través de la
producción de anticuerpos.

MATERIAL

● Portaobjetos
● Lancetas desechables
● Torundas con alcohol
● Colorante de Wright
● Solución reguladora pH 6.4
● Microscopio
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PROCEDIMIENTO.

1. A partir de la muestra de sangre preparar 2 extendidos (frotis) siguiendo

las indicaciones del instructor.

2. Dejar secar completamente los frotis, colocar en un puente de tinción y

cubrirlos (contar el número de gotas) con colorante de Wright. Dejar al
colorante 10 minutos y añadir el mismo número de gotas de solución
reguladora pH 6.4 durante 15 minutos.
3. Lavar suavemente la preparación con agua corriente por 30 segundos y
secar el exceso de agua.
4. Cuando la preparación esté completamente seca, colocar una gota de aceite
de inmersión y observar al microscopio con el objetivo de inmersión.
5. Para facilitar la identificación consultar las láminas a color que ilustran los
diferentes leucocitos.
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RESULTADOS.

1
3

En
la observación de Leucocitos, la imagen representa los componentes de un frotis
sanguíneo.

1. Se observa un linfocito con un núcleo circular oscuro y muy poco citoplasma

de color azul claro, existen 2 tipos de linfocitos los cuales son el t (madura en
el timo) y el b (maduran en la medula osea). Son células mononucleares que
corresponden a un grupo de leucocitos, circulan por el cuerpo por medio de la
sangre y linfa. Son parte del sistema inmunitario adaptativo y su función es
reaccionar y actuar frente microorganismos externos, células anómalas y
antígenos.

2. Se observa un monocito con un núcleo en general arriñonado, lobulado o

cerebriforme, que se tiñe irregularmente en forma de "rejilla" o reticular de
color violeta-azulado. El citoplasma es abundante y de color gris azulado
pudiendo estar acompañado de vacuolas blanquecinas, son células
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circulantes de la sangre que derivan de progenitores mieloides de la médula
ósea. Son importantes en la respuesta inflamatoria.

3. Se observa un basófilo con un núcleo multilobulado y grandes gránulos

esféricos basofílicos y metacromáticos dados por heparina e histamina. Es un
tipo de célula inmunitaria que tiene gránulos con enzimas que se liberan
durante las reacciones alérgicas y el asma.

4. Eosinófilo o gránulo de eosinófilo con un núcleo multilobulado y poseen

granulaciones acidófilas que contienen enzimas hidrolíticas y peroxidasa que
son liberadas en las vacuolas fagocíticas. Estas celulas umplen la función de
regular la respuesta alérgica y las reacciones de hipersensibilidad mediante
la neutralización de la histamina, y a su vez producir un factor inhibidor
derivado de los eosinófilos para inhibir la degranulación de las células
cebadas o de los basófilos. (Jenni, P. 2020)

5. Neutrófilo o gránulo de neutrófilo, se llaman neutrófilos porque no se tiñen

con colorantes ácidos ni básicos, por lo que su citoplasma (contiene enzimas
hidrolíticas, lisozima y mieloperoxidasa) al microscopio óptico aparece de
color rosa suave. Se caracterizan por presentar un núcleo con cromatina
compacta segmentada multilobulado (3-5 lobulaciones), y gránulos azurófilos
lisosomas). Su función es ayudar a combatir infecciones a partir de la ingesta
de los microorganismos y segregan enzimas que los destruyen.(Jenni, P.
2020)

● Importancia de la tinción: La tinción de Wright nos ayuda principalmente para

teñir los núcleos de los leucocitos y así poder ver las diferencias morfológicas
en ellas y poder distinguirlos, pero también sirve para que podamos observar
si hay alguna alteración morfológica y detectar algún daño que provoque
alguna enfermedad.
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● Aplicación clínica: En las prácticas de hematología, la observación de

leucocitos está indicado en todos los hemogramas que muestren alguna
desviación en los recuentos directos, indirectos o calculados, o cuando se
sospeche clínicamente de una enfermedad de origen hematológico o de
origen no hematológico con manifestaciones hematológicas, aun con
parámetros entre rangos esperados para la edad y el género. Es posible
observar alteraciones relacionadas con la morfología de los eritrocitos, las
plaquetas, etc.

Conclusiones

Primero que nada es importante recalcar la importancia de que se realice

correctamente el frotis sanguíneo pues esto permitirá una adecuada observación de
los leucocitos, evitando que se sobrepongan por un frotis muy grueso o que no se
puedan visualizar por que este sea muy delgado o carezca de uniformidad.

Ahora una vez teniendo un frotis adecuado, la tinción es también un paso

importante, pues ayuda a diferenciar las características morfológicas de los
leucocitos, haciendo posible su diferenciación.

Por último, la observación de leucocitos tiene diversas aplicaciones en la práctica

clínica, por ellos es importante aprender a diferenciar cada uno y saber a groso
modo su cantidad apropiada en el tejido. Así como para ser capaces de distinguir
cuando se presenta alguna patología debido a algún cambio o alteración en las
características ya antes mencionadas.
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Referencias Bibliograficas.

- Jenni, P. (2020a). Kuby Inmunologia (8va. Edición). Mcgraw-Hill.