Inmunoelectroforesis

Alumnas: Marin Villalobos Adriana Mariel, Valencia Ortiz Fernanda,

Flurscheim Lopez Ana Paula

Laboratorio: Técnicas de Inmunología

Docente: Dr. en C. Silva Escobedo Jesús Gabriel
 ¿Qué es?
Son métodos bioquímicos para la separación y
caracterización de proteínas basadas en la electroforesis y la
reacción con anticuerpos. Todas las variantes de la
inmunoelectroforesis requieren inmunoglobulinas,
anticuerpos que van a reaccionar con las proteínas que se
desea separar o caracterizar..
 Fundamento
Se fundamenta en la separación de las proteínas aplicando una corriente eléctrica a un gel de
agarosa. La mezcla de antígenos colocada en los pocillos se separa en componentes antigénicos
individuales según su carga y tamaño. Tras la electroforesis, los antígenos separados reaccionan con
antisueros específicos colocados en cubetas paralelas a la migración electroforética y se deja que se
produzca la difusión.

El antisuero presente en la cubeta se desplaza hacia los componentes del antígeno, lo que da lugar a
la formación de líneas de precipitación separadas en 18-24 horas, cada una de las cuales indica la
reacción entre las proteínas individuales con su anticuerpo.
Metodología para preparativos
 Metodología “Separación
electroforética de antígenos”
 Métodos
inmunoelectroforéticos:
● La inmunoelectroforesis cruzada
● La inmunoelectroforesis en cohete
● La contrainmunoelectroforesis
● La inmunoelectroforesis de afinidad
CREDITS: This presentation template was created
by Slidesgo, including icons by Flaticon, and
infographics & images by Freepik
 Inmunoelectroforesis
cruzada
También llamada Inmunoelectroforesis cuantitativa de dos dimensiones, difiere del método de inmunoelectroforesis
original en el hecho de que las proteínas, tras su electroforesis inicial, no se incuba con anticuerpos. En su lugar, se
vuelven a someter a una segunda electroforesis, esta vez en un gel que además de buffer y agarosa, contiene los
propios anticuerpos contra la proteína de interés, formando los inmunoprecipitados, los cuales tendrán:
● sus propias características migratorias
Este tipo de inmunoelectroforesis ha
● cada banda que veamos corresponderá a un antígeno diferente,
sido especialmente usado en estudios
● según la posición del precipitado se conocerá la cantidad de
de proteínas serias y extractos
proteína así como la cantidad de anticuerpo específico en el gel,
biológicos.
de manera que se puede realizar una relativa cuantificación de los
componentes.
 Inmunoelectroforesis en
cohete
Se denomina así por la forma característica del precipitado que se forma en el gel.
El principio consiste en cargar en el gel, de forma consecutiva y en perpendicular a la dirección
del campo eléctrico, diluciones seriadas con progresivo aumento de la cantidad de antígeno,
mientras que el anticuerpo se encuentra repartido por el gel. Esto dará lugar a un precipitado
cada vez mayor que da un aspecto cónico que recuerda a un cohete.

Estos métodos se utilizan para la

cuantificación de proteínas serias
antes de que aparecieran los
métodos automatizados.
Contrainmunoelectroforesis
Consiste en el aprovechamiento de la distinta movilidad electroforética de los dos componentes implicados.
Dado que las inmunoglobulinas migran hacia el polo negativo y las proteínas, dada su carga neta negativa,
lo hacen hacia el positivo, se colocan de forma inversa a su migración, forzando así su encuentro.
Colocando cerca del polo positivo el suero con los anticuerpos que irán contra nuestro antígeno, migrando
hacia el polo negativo, mientras que cerca del polo negativo se cargarán los antígenos de interés. De este
modo, ambos se encontrarán a una distancia intermedia, asegurando así la interacción.
 Inmunoelectroforesis de
afinidad
Basada en los cambios del patrón electroforético de las proteínas debido a su interacción
específica con sus ligandos. Esta técnica se utiliza para estimar constantes de unión.
La estructura laxa del gel permite la unión adicional de anticuerpos marcados radiactivamente
para revelar proteínas específicas. Esta variación se ha usado en la identificación de alérgicos a
través de su reacción con IgE.
 Aplicación
● La prueba ayuda a la identificación y cuantificación aproximada de varias proteínas
presentes en el suero.
● Se utiliza en pacientes con sospecha de gammapatías monoclonales y policlonales.
● Detección de proteínas normales y anormales.
● Análisis de mezclas complejas de proteínas que contienen diferentes antígenos.
● Este método es útil para controlar la pureza del antígeno y del antígeno-anticuerpo
y para identificar un único antígeno en una mezcla de antígenos.
● Análisis cualitativo de las proteínas M en suero y orina.
● Diagnóstico y evaluación de la respuesta terapéutica en muchos estados de
enfermedad que afectan al sistema inmunitario.
 Ventajas
● La inmunoelectroforesis es una potente
técnica analítica con alto poder de
resolución ya que combina la separación
de antígenos por electroforesis con la
inmunodifusión contra un antisuero.
● La principal ventaja de la
inmunoelectroforesis es que se pueden
identificar varios antígenos en el suero.
 Desventajas
○ La inmunoelectroforesis es más lenta, menos sensible y más difícil de
interpretar que la electroforesis por inmunofijación.
○ No detecta algunas proteínas M (inmunoglobulina del mieloma)
monoclonales pequeñas porque las inmunoglobulinas que migran más
rápidamente presentes en las concentraciones más altas pueden ocultar la
presencia de proteínas M pequeñas.
○ El uso de inmunoelectroforesis en el análisis de alimentos está limitado por
la disponibilidad de anticuerpos específicos.
 Referencias
● Sagar Aryal. (2018) Immunoelectrophoresis- Principle, Procedure, Results and Applications, Advantages
and Limitations. Recuperado de:
https://microbenotes.com/immunoelectrophoresis-principle-procedure-results-and-applications-advantage
s-and-limitations/#:~:text=Immunoelectrophoresis%20refers%20to%20precipitation%20in,tested%20by%2
0double%20immuno%2Ddiffusion.
● Varios. (2021) Inmunoelectroforesis. Recuperado de:
https://es.wikipedia.org/wiki/Inmunoelectroforesis#:~:text=Se%20fundamenta%20en%20la%20separaci%C
3%B3n,se%20encuentren%20con%20sus%20anticuerpos