UNIVERSIDAD ANDRÉS BELLO

Facultad de Ciencias de la Vida

Departamento de Ciencias Biológicas
BIOL256

Introducción a la Microbiología

Clasificación Bacteriana

Dra. Liliana Berrocal

l.berrocal@uandresbello.edu
 ¿Qué es la Microbiología?
“Ciencia que se dedica al estudio de los
microorganismos”
(microorganismos: organismos microscópicos)

Deriva de 3 palabras griegas:

mikros (pequeño), bios (vida) y logos (ciencia)
Bacterias

Arqueas

Algas
Tipos de microorganismos
Virus

Hongos

Protozoos
La ciencia de la Microbiología

“En la naturaleza, el papel de lo infinitamente

pequeño es infinitamente grande”
Louis Pasteur

Bacilos en la punta de un alfiler

100 m
20 m 10 m
100 nm * 1 cm = 10 -7 cm
10 -9 nm
La ciencia de la Microbiología
Bacteriología Virología

E. coli Virus Influenza

Micología Parasitología

Penicillium Trypanosoma cruzi

 La ciencia de la Microbiología
La ciencia de la microbiología estudia dos ámbitos principales
interconectados:
1. Comprender la biología y funcionamiento de los organismos
microscópicos.
2. Aplicar este conocimiento de los procesos microbiológicos para el
beneficio de la humanidad y el planeta.

Por lo tanto, la microbiología puede ser considerada como una

ciencia básica y aplicada.
 La ciencia de la Microbiología
La microbiología estudia la diversidad de los microorganismos y
su evolución, sus interacciones con otros organismos y su
participación en los ecosistemas.

Los microorganismos influyen en la física y química del planeta. Son los

encargados de los ciclos de elementos químicos indispensables para la vida (C,
N, S, H, O).
Se calcula que en la Tierra existen 5x1030 células microbianas! Lo que
constituye el 90% de la biomasa del planeta.

Tierra
Agua dulce
Mar
Organismos complejos
 Resumen de la vida en la Tierra
a través del tiempo, y origen
de los distintos tipos celulares.

Biology of Microorganisms (Brock) 13th

edition.

3,8 bya aprox

Los microorganismos existieron en la Tierra billones de años antes que aparecieran plantas y
animales. Esta larga historia evolutiva da cuenta de la diversidad genética y fisiológica de la vida
microbiana.
 La ciencia de la Microbiología

Los tres principales dominios de los organismos celulares: Bacteria, Archaea y

Eukarya.
Al principio, el árbol habría estado compuesto por dos ramas, Bacteria y
Archaea. El núcleo de las células eucariontes habría emergido de una sub-rama
desde Archaea.
Molecular Biology of the cell (Alberts) 6th edition.
Impacto de los microorganismos
a la vida humana
ENFERMEDAD
Sin embargo, la mayoría de los
microorganismos no son patogénicos
para el humano.

Importante rol de los

microorganismos en:
• Industria alimenticia
• Agricultura
• Industrial
• Efecto ambiental
 Principios para la identificación de microorganismos: Taxonomía

Ordenamiento de los microorganismos en

Clasificación grupos (taxa) en base a semejanzas o
interrelaciones

Nombrar un microorganismo según sus

TAXONOMÍA Nomeclatura características siguiendo las reglas
internacionales.

Uso práctico de un esquema de clasificación

Identificación en base a distintas propiedades del
microorganismo

TAXONOMÍA: Orden jerarquizado y sistemático, con sus nombres, de los grupos

de organismos.
 Taxonomía vs. filogenia

TAXONOMÍA BACTERIANA FILOGENIA BACTERIANA

FENOTIPO GENOTIPO
GENOTIPO

Análisis fenotípico Análisis genotípico RNA ribosomal

mayor conservación

Clasificación – Identificación
Diagnóstico
Relación evolutiva
 Ejemplo de categorías taxonómicas

Reino Bacteria Bacteria

División Proteobacteria Firmicutes
Clase gammaproteobacteria Bacilli
Orden Enterobacteriales Bacillales
Familia Enterobacteriaceae Staphylococcaceae
Género Escherichia Staphylococcus
Especie Escherichia coli Staphylococcus aureus
 Cómo identificar un microorganismos a partir de cultivo axénico

Criterio Metodología de ejemplo

Observación Macroscópica Observación de colonias

(formas, pigmentos, etc.)

Observación Microscópica Tinciones (Gram)

(formas, agrupación)
(esporas, cápsula, flagelos, etc.)

Metabolismo Baterías bioquímicas

(uso de sustratos [fermentación])
(producción de metabolitos secundarios)
(presencia de enzimas)

Otras propiedades Resistencia a antibióticos

(antibiograma, MIC, etc.)

Genotipo Secuenciación, PCR, etc.

LOS CRITERIOS VAN DE LO MÁS GENERAL A LO MÁS ESPECÍFICO HASTA

LLEGAR A IDENTIFICAR LA ESPECIE.
 Observación macroscópica

Siembra y aislamiento:
 Colonia bacteriana

S. aureus

S. aureus

S. aureus

Colonias de
S. aureus

S. aureus
 Observación macroscópica: Colonias

Morfología de colonias:
 Medios de cultivo

Según su estado físico...

Medio sólido Medio semi sólido

(agar 1,5%) (agar 0,8%)

Medio líquido
 Medios de cultivo

Según su presentación... En placa…

En tubo…
 Medios de cultivo

Según su contenido de nutrientes...

Medios definidos (químicamente):
Contienen cantidades precisas y bien formuladas de diversos
componentes inorgánicos y orgánicos. Reúnen los requerimientos
nutricionales para el desarrollo de un determinado microorganismo…

Medios complejos (indefinidos):

No poseen una formulación precisa.
Se preparan en base a infusiones de
digeridos proteicos (carne, soya,
caseína, extracto de levadura). La
mayoría de estos medios se venden
deshidratados, lo que facilita su
preparación…
 Medios de cultivo
Agar Chocolate
Según su utilidad...
1.- Corriente (básicos):
Contienen los elementos nutritivos esenciales. Ej.: caldo
Luria (medio líquido) y agar corriente (medio sólido)
2.- Especiales:
Mejorados o enriquecidos: Son medios corrientes
adicionados de sustancias de alto valor nutritivo (sangre, Agar MacConkey
suero, vitaminas, extractos de levaduras), que permiten el
desarrollo de bacterias más exigentes. Ej.: Agar sangre
(medio sólido), agar chocolate (medio sólido)
Medios selectivos: Contienen sustancias inhibidoras para
determinadas bacterias. Ej.: Agar SS para Salmonella y
Shigella, Thayer Martin para N. gonorrhoeae y Agar
MacConkey para Gram (-)
Agar Sangre
Medios diferenciales: Permiten establecer si una bacteria
desarrolla una determinada función metabólica que la
diferencia de otras bacterias. Ej.: Citrato de Simmons, TSI,
MIO, LIA, Caldo urea
 Medios de cultivo

Básicos: Agar LB

Streptococcus pyogenes

Bacillus subtilis
 Medios de cultivo

Enriquecido y diferencial: Agar sangre

-hemólisis: Parcial -hemólisis: Total

-hemólisis: No produce hemólisis...

 Medios de cultivo

Selectivo y diferencial: Agar McConkey

E. coli S. Typhimurium S. aureus

Gram (-), lac+ Gram (-), lac- Gram (+)
 Medios de cultivo

Selectivo y diferencial: Agar Manitol salado

En éste medio sólo crecen

Staphylococcus (y Enterococcus)
Es selectivo por su alta
concentración de sal.
Diferencia según la capacidad
de utilizar manitol

Staphylococcus S. aureus
coagulasa (-) coagulasa (+)
No utiliza manitol Utiliza manitol
 Observación microscópica

Microscopía óptica Microscopía electrónica

Campo claro (luz)
Transmisión (en 2D)
Campo oscuro
Barrido (3D)
Fluorescencia, etc.
Aumento efectivo: 1.200 veces Aumento efectivo: 1.000.000 de veces
 Microscopía óptica
Campo claro

Cianobacteria Bacterias
(al fresco) (teñidas)

Gram +

Gram -

Es descendiente de los microscopios primitivos

La muestra a observar debe ser fina para que pueda

ser atravesada por la luz

Generalmente se utilizan tinciones porque el campo

claro no produce contraste
 Microscopía óptica
Campo oscuro

Espermios Treponema pallidum

El objetivo recibe la luz dispersa o refractada

La muestra se ilumina con luz fuerte indirecta

Permite observar células sin teñir y resulta

especialmente útil para células vivas
Microscopía óptica de fluorescencia

Células de ratón

Bacterias

Permite marcar estructuras específicas o células

determinadas con fluoróforos (emiten luz cuando son
excitados)
 Microscopía electrónica
Transmisión

Virus Bacteria en división

Amplificación de 106 veces

Es análogo al microscopio óptico de campo claro pero

utiliza electrones en vez de luz
 Microscopía electrónica
Barrido

Bacterias creciendo en el estoma Bacilos

Permite tomar imágenes tridimensionales porque capta

los electrones que rebotan en las células cubiertas con
una delgadísima película de un metal denso
 Microscopía óptica requiere generalmente tinciones
Tinciones simples o inespecíficas

Azul de metileno

Levaduras Bacterias

Tinciones diferenciales
TINCIONES

Tinción Gram

Gram positivo Gram negativo

Tinciones específicas o especiales

Cápsulas Esporas
Tinciones simples

Levaduras

Bacterias
Microscopía óptica. Tinciones diferenciales. GRAM.

Gram positivo Gram negativo

Creada por el danés Hans Christian Gram en 1884

Es capaz de clasificar a las bacterias en dos grupos diferentes según

sus propiedades de tinción

Corresponde a la tinción más importante en la microbiología

Indicada para la observación de morfología y agrupación bacteriana

Fundamental en la identificación de agentes etiológicos

Tinción de Gram

Gram (-)

Gram (+)
La pared celular define a las bacterias Gram (+) y Gram (-)

Gram (-) Gram (+)

La pared celular define a las bacterias Gram (+) y Gram (-).

Gram (+) Gram (-)

Microscopía óptica. Tinciones diferenciales. Ziehl-Neelsen.

También llamada tinción de ácido – alcohol resistencia

Mycobacterium

Se calienta una solución fucsina básica, la cual penetra a la célula con la ayuda de
fenol

Se decolora con solución con ácido – alcohol y se agrega una tinción de contraste
(azul de metileno)

Sólo las bacterias ácido – alcohol resistentes retienen el color rojo

 Tinción de cápsula

Se realiza como tinción negativa con tinta china

 Tinción de esporas

Se realiza con verde malaquita (el cual presenta afinidad por las esporas) y
una tinción de contraste.
Morfología celular: Forma bacteriana

ESFÉRICA
Staphylococcus aureus cocos, cocáceas

CILÍNDRICA ALARGADA
Bacillus cereus bacilos

CILÍNDRICA CURVA
Vibrio cholerae bacilos curvos

ESPIRAL
Treponema pallidum espirilos, espiroquetas
Morfología celular: Forma bacteriana

ALARGADA
Actinomyces israeli filamentosa
 Principales morfologías celulares bacterianas

Esférica
(Cocos, cocáceas)

Microscopía óptica; tinción de

Gram

Staphylococcus aureus
Microscopía electrónica de
barrido
 Principales morfologías celulares bacterianas

Cilíndrica alargada Escherichia coli

(Bacilos)

Bacillus subtilis
Principales morfologías celulares bacterianas

Cilíndrica curva
(Bacilos curvos)

Vibrio cholera
 Principales morfologías celulares bacterianas

Espiral
Alargada
(Espirilos, espiroquetas)
(Filamentosas)

Treponema pallidum Actinomyces israeli

 Morfología celular: Agrupaciones

Planos de división celular definen la agrupación bacteriana

Principales agrupaciones bacterianas

Cadena
(del griego: Strepto)

Streptococcus pyogenes
Principales agrupaciones bacterianas

Racimo
(del griego: Staphylo)

Staphylococcus aureus
 Principales agrupaciones bacterianas
Agrupaciones pequeñas y
empacadas
(Tétradas, octetos)

Pares
(Diplo)

Neisseria gonorrhoeae Sarcina lutea

Observación macroscópica y observación microscópica

Observación Macroscópica

Colonias: Agrupación bacteriana

producida por la división sucesiva de
una bacteria original. La colonia se
observa a simple vista.

Observación Microscópica

Bacterias teñidas con Tinción

Gram. Se observan
microscópicamente.
Estudio del metabolismo

Uso de sustratos
Producción de metabolitos
Presencia de enzimas
Estudio de la resistencia a antibióticos
 Pruebas moleculares que contribuyen a identificación de m.o.

• Alta sensibilidad
• Alta especificidad
• Alta seguridad

• Detección de ácido nucleicos

• Detección de proteínas
• Pruebas serológicas