Objetivos.

1. El alumno conocerá la técnica de cromatografía en capa fina (ccf) y en

columna, sus características y los factores que en ella intervienen.
2. Demostrará que la cromatografía constituye una técnica valiosa para
separar mezclas de compuestos, efectuar purificaciones, determinar
homogeneidad (pureza) de sustancias químicas y su identificación así como
su control en producción técnica.
1.- Concepto de cromatografía. Tipos de cromatografía. Cromatografía de
adsorción y cromatografía de partición. Ejemplos.
La cromatografía es una técnica de separación en la que los componentes de una
muestra se separan en dos fases: una fase estacionaria de gran área superficial y
una fase móvil, el objetivo es identificar los componentes de una mezcla y obtener
el estado más puro de la materia.
Dependiendo del proceso y de la fase estacionaria utilizada para separar
componentes, existen diferentes tipos de cromatografía como la cromatografía por
gases, por papel, intercambio iónico, de líquidos, liquida de alta resolución, por
afinidad y fluidos supercríticos. Existen dos tipos de mayor importancia para los
laboratorios son la cromatografía de capa fina la cual consiste en una técnica
donde un material absorbente de capa delgada se encuentra sobre una placa de
vidrio la cual es sometida a altas temperaturas y la cromatografía de columna en
donde obtenemos compuestos químicos puros y consiste en preparar una solución
en polvo que se esparce en una columna de vidrio de 50cm a 1m y se inserta un
líquido o gas que nos dará la separación de los componentes.
La cromatografía de adsorción se basa en las diferencias de afinidad relativa de
los compuestos solidos utilizadas como fase estacionaria, las separaciones
obtenidas se determinan casi exclusivamente para interacciones polares, por lo
que la fase estacionaria es más polar que la móvil. La cromatografía de partición
la fase estacionaria es un líquido soportado en un sólido inerte, la fase móvil
puede ser un líquido o un gas por lo que se utilizan cromatografías liquido-liquido,
gas-liquido. Existen muchos ejemplos donde se utiliza la cromatografía uno muy
simple es cuando se derrama vino en un mantel blanco, al momento de secarse el
vino podemos observar los diferentes componentes y esto se observa por los
diferentes tipos de color que pintan el mantel blanco, un análisis de sangre o de
orina, la escena de un crimen y la comprobación sanitaria de alimentos son
algunos de las aplicaciones que tiene la cromatografía.
2.- Fenómeno de adsorción. La propiedad de retención. Concepto de Rf.
La adsorción es la tendencia de un componente del sistema a concentrarse en la
interface, en la cromatografía este fenómeno se da cuando se retiene una especie
química en los sitios activos de la superficie de un sólido, quedando limitado el
fenómeno a la superficie que separa las fases.
La propiedad de retención refleja la distribución del soluto entre la fase móvil y la
fase estacionaria, el volumen de fase móvil necesario para transportar la banda de
soluto desde el punto de inyección en la columna, hasta el detector se le conoce
como volumen de retención V R el cual se obtiene directamente del cromatograma
multiplicado por el tiempo de retención correspondiente, t r, por el gasto o flujo
volumétrico, F c, expresado como el volumen de fase móvil por unidad de tiempo y
se expresa como:
V R=t R . FC

El parámetro que se mide en una cromatografía plana o fina se denomina relación

de frentes (Rf) la cual representa la distancia que recorre un analito sobre la fase
estacionaria respecto a la distancia que recorre la fase móvil, este parámetro toma
medidas entre 0 y 1, por lo que entre más cercano a 0 el valor de Rf tiene más
afinidad el analito en la fase estacionaria, mayor retención, mientras que más
cercano a 1 el valor de Rf, menor afinidad del analito en fase móvil, meno
retención, este parámetro nos ayuda a identificar la ausencia o presencia del
analito en una muestra.
3.- La cromatografía en capa fina. Sus características y aplicaciones.
La cromatografía den capa fina (CCF) es un método que permite la separación e
identificación de sustancias presentes en una mezcla, consiste en una capa fina o
delgada de un adsorbente como gel de sílice, alúmina y celulosa el cual se coloca
sobre un soporte plano como una placa de vidrio, aluminio o plástico. En este
método la capa fina funciona como la fase estacionaria de la cromatografía, es
decir, la que se mantiene fija, mientras que el solvente o mezcla de solventes
usados funcionan como la fase móvil, la que se desplaza con las sustancias a ser
separadas. La distancia alcanzada por la sustancias en esta cromatografía (las
manchas coloridas) dependerá de la polaridad de los solventes, la de las
sustancias y de la fase estacionaria.
Como sabemos la CCF es un método analítico por lo que se utilizan cantidades
pequeñas de sustancia a analizar, otra característica de este método son los
materiales que se emplean para obtener la separación de mezclas y el
procedimiento que se utiliza, en este caso se utiliza un vaso de vidrio o de
precipitados, se vierte 1cm de altura del solvente y se introduce la lámina
verticalmente en el vaso de esta manera se da la separación de mezclas y por
ultimo podemos calcular el factor de retención el cual nos da la identificación y
característica de las diferentes sustancias.
Las aplicaciones más comunes de este método se dan al analizar componentes
de medicamentos, la determinación de pureza de una sustancia, identificar los
edulcorantes, colorantes y saborizantes en la industria alimentación y la
determinación de del estado de desarrollo de una reacción química.
4.- Eluyentes, soportes y reveladores más comunes para cromatografía en
capa fina.
Los eluyentes se dividen en dos dependiendo de la polaridad y son los polares y
no polares, los más comunes para este método son: éter de petróleo, cloruro de
metileno, acetato de etilo, acetona, etanol, cloroformo, metanol y ácido acético.
Los soportes son aquellos donde se puede llevar acabo la cromatografía y solo se
utilizan 3 que son recipientes de vidrio, plástico y metal. Por último los reveladores
son utilizados cuando las manchas de color no son visibles y para este método se
utilizan reveladores como luz UV, vapores de yodo y roció con una solución de
agua/ácido sulfúrico donde después se calienta hasta que se carbonicen los
compuestos.
5.- Factores que influyen en una separación por cromatografía en capa fina.
Existen varios factores que pueden afectar la eficiencia de la cromatografía en
capa fina, una de ellas es la temperatura ya que a menor temperatura las
sustancias se adsorben más en la fase estacionaria, la limpieza de las placas
debe ser muy importante ya que al no estar bien limpias pueden presentar errores
al momento de la separación y mostrar coloraciones diferentes, para ello se
emplea una mezcla de cloroformo y metanol para su limpieza, otro factor que
influye es la pureza de los disolventes y la cromatografía debe llevarse a cabo en
áreas sin corrientes de aire.
6.- Cromatografía en columna. Características y aplicaciones.
En este método la separación se consigue haciendo fluir la mezcla a través de una
columna de adsorbente, los compuestos emergen de la columna a tiempos
diferentes y pueden ser recogidas en fracciones separadas. Este método se
caracteriza por tener varios factores como el matraz de la columna que es la
sustancia que esta empapada de solvente y que se empaqueta en la columna,
longitud de la columna que es la longitud del dispositivo donde se empaqueta la
columna, volumen de la columna y el volumen muerto de la columna que es la
cantidad de solvente que tiene que atravesar la columna, los adsorbentes más
utilizados en este método son el gel de sílice, alúmina y florisil. Las aplicaciones
de esta cromatografía son muy similares a la de la CCF pero en cantidades
mayores a los 100 mg.
7.- Cromatografía de adsorción y de partición o reparto.
En esta cromatografía se aprovecha esta el fenómeno de adsorción al analito que
queremos separar, como es una mezcla, cada componente de la mezcla se
adsorbe con distinta fuerza lo cual origina que el analito se retenga en la fase
estacionaria, en donde el analito se absorbe y los demás componentes se
eliminan. Durante la separación se filtra una solución atreves de una columna de
adsorbente que actúa como la fase móvil, esta es absorbida en la superficie de la
fase estacionaria sólida, formando así una “cama” de partículas del analito, para
que se lleve a cabo esta cromatografía deben estar en equilibrio la fase móvil y la
estacionaria.
La cromatografía de partición se basa en la retención del analito en una columna
sólida como granos de fibra o cualquier material químicamente inerte, sobre la
cual hay distribuida una capa fina de disolvente afín al analito y una fase móvil
líquida o gaseosa, cuando la fase móvil pasa a través de la columna, el equilibrio
entre esta y la estacionaria esta medida por el analito que se reparte entre ambas
y queda al final disuelto en la fase estacionaria. Las moléculas del analito se
equilibran entre la fase estacionaria y la móvil, a esto se le llama partición puesto
que se distribuyen, o sea se reparten dependiendo de la fisicoquímica del sistema
entre las dos fases, la retención depende de la solubilidad del analito con la capa
de sorbente adherida a la matriz sólida y de que tanto la fase móvil puede
arrastrarlo al fluir.
8.- Factores que influyen en una separación por cromatografía en columna.
(En una cromatografía de adsorción).
Al igual que en la cromatografía de capa fina en esta técnica existen factores que
afectan el éxito de esta cromatografía entre ellos la temperatura ya que a menor
temperatura las sustancias se adsorben más en la fase móvil y la masa de la
muestra ya que a mayor cantidad de masa de la muestra a separar más se tardara
en mostrar los resultaos de la separación así como también influyen factores
ambientales como el aire, la limpieza de las placas y los instrumentos a utilizar
podrían afectar el resultado de esta técnica.
9.- Selección de eluyentes y adsorbentes para la separación de compuestos
por cromatografía de columna.
Para saber elegir correctamente el eluyente para la cromatografía en columna, el
eluyente debe tener características ya mencionadas como polaridad y se le debe
realizar una prueba en CCF en donde debe presentar una buena separación de
los componentes de la muestra y se selecciona aquel eluyente que presente un Rf
entre <3 y >0. Una vez que ya hayamos seleccionado un eluyente para la
cromatografía en columna debemos elegir un adsorbente y como el adsorbente es
un sólido que retiene los componentes en su superficie este va de la mano con el
eluyente ya seleccionado por su elutropía.
10.- Técnicas de separación cromatográfica por elución, por adsorción y por
desplazamiento.
La técnica cromatográfica por elución es donde la fase móvil pasa de forma
continua a través o a lo largo del lecho cromatográfico y la muestra se suministra
al sistema de forma discreta, esta técnica presenta la desventaja de que los
componentes con mayor retención no son visibles, en la cromatografía de columna
la elución se puede dar por gravedad o por presión, la diferencia entre estos dos
es el tamaño de partículas de adsorción.
La cromatografía por desplazamiento se da cuando la fase móvil contiene un
compuesto (el desplazaste) que es retenido con mayor fuerza que el resto de los
compuestos a analizar, esta técnica se utiliza para separaciones analíticas y
preparativas, es más utilizada en cromatografía de cambio iónico.
La cromatografía de adsorción es una técnica útil para separar compuestos de
polaridad baja o media, esta técnica requiere de adsorbentes muy poco activos o
bien tratamientos químicos previos a fin de reducir la polaridad de los compuestos.
Bibliografía.
[1] Varios autores. (2007). Técnicas cromatográficas.
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf
[2] Varios autores. (2013). Cromatografía en capa fina.
https://quimicahidrocarburos.wordpress.com/2013/09/18/cromatografia-en-placa-
fina/
[3] Sin autor. (2020). Técnicas de separación cromatográfica.
http://ocw.uc3m.es/cursos-archivados/caracterizacion-de-materiales/material-de-
clase-1/Apuntes_Tecnicas_de_separacion_cromatografica.pdf
[4] Estela M., (2021). Cromatografía. https://concepto.de/cromatografia/.