NORMA TÉCNICA NTC

COLOMBIANA 4458

2007-12-12

MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS Y DE ALIMENTOS

PARA ANIMALES.
MÉTODO HORIZONTAL PARA EL RECUENTO DE
COLIFORMES O Escherichia coli O AMBOS. TÉCNICA
DE RECUENTO DE COLONIAS UTILIZANDO MEDIOS
FLUOROGÉNICOS O CROMOGÉNICOS

E: MICROBIOLOGY OF FOOD AND ANIMAL FEEDING STUFFS.

HORIZONTAL METHOD FOR THE ENUMERATION OF
COLIFORMS AND/OR ESCHERICHIA COLI. COLONY COUNT
TECHNIQUE USING FLUOROGENIC OR CHROMOGENIC
CULTURE MEDIA.

CORRESPONDENCIA:

DESCRIPTORES: método horizontal; método de análisis;

microbiología; análisis microbiológico;
recuento; recuento en placa; escherichia
coli; coliformes; alimentación animal.

I.C.S.: 07.100.30

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)

Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435

Prohibida su reproducción Primera actualización

Editada 2007-12-21
 PRÓLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo

nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.

ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.

La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica

está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último
caracterizado por la participación del público en general.

La NTC 4458 (Primera actualización) fue ratificada por el Consejo Directivo de 2007-12-12.

Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.

A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a

través de su participación en el Comité Técnico 25 Microbiología.

ACEGRASAS S.A. JHONSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA.

ALIMENTOS POLAR COLOMBIA S.A. KOYOMAD S.A.
ALPINA PRODUCTOS ALIMENTICIOS S.A. LA CAMPIÑA S.A.
ANNAR DIAGNOSTICA IMPORT LTDA. LABCONTROL E.U.
ARCHIVO DE BOGOTÁ LABFARVE LABORATORIO DE
ASBIOQUIM LTDA. FARMACOLOGÍA VEGETAL
ASEBIOL LABORATORIO LTDA. LABORATORIO DE GENÉTICA Y
ASINAL LTDA. BIOLOGÍA MOLECULAR
ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE CIENCIA Y LABORATORIO EMICAL LTDA.
TECNOLOGÍA COSMÉTICA -ACCYTEC- LABORATORIOS GRAM LTDA.
ASOCIACIÓN DE MICROBIÓLOGOS LABORATORIOS MICROLAB LTDA.
JAVERIANOS LESNIAK E.U.
AVESCO KOKORICO S.A. MERCADEO DE ALIMENTOS DE
BIANALISIS COLOMBIA S.A.
BIOCONTROL LTDA. MERCK S.A.
BIOMERIEUX COLOMBIA S.A. MICROBIÓLOGOS ASOCIADOS LTDA.
BIOQUILAB LTDA. NULAB LTDA.
CALIDAD INDUSTRIAL LTDA. PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE FLUIDOS
CARULLA VIVERO S.A. LTDA.
COLOMBINA S.A. QUIK LTDA.
COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES S.A. SOLUCIONES INTEGRALES
CREPES & WAFLES S.A. MICROBIOLÓGICAS E.U. -SIM-
DON MAÍZ S.A. SUIZO S.A.
ENZIPÁN DE COLOMBIA LTDA. UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
FRIGORÍFICOS COLOMBIANOS S.A. UNIVERSIDAD MANUELA BELTRÁN
FRIGORÍFICOS GUADALUPE S.A. UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA.
Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las
siguientes empresas:

3M COLOMBIA S.A. LA CONSTANCIA COLOMBIA S.A.

ALGARRA S.A. LABORATORIO MICROBIOLÓGICO SIS
AQUALAB LABORATOTORIO MICROBIOLÓGICO DE
ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE BARRANQUILLA
MICROBIOLOGÍA LARKIN LTDA.
BAVARIA S.A. LEVAPÁN S.A.
BIOTRENDS LABORATORIOS LLOREDA GRASAS S.A.
CASA LUKER S.A. MEDIIMPLANTES LTDA.
CENICAÑA MICROLABY LTDA.
CENTROAGUAS S.A. E.S.P. MINISTERIO DE LA PROTECCIÓN
CERCAL LTDA. SOCIAL.
CERVECERÍA LEONA S.A. NESTLÉ DE COLOMBIA S.A.
CONGELAGRO PASIFLORA COLOMBIANA S.A.
CONSULTORA BLANCA USECHE PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
COOPERATIVA DE GANADEROS DE PRODUCTORA DE CONCENTRADOS Y
CARTAGENA LTDA. JUGOS DE FRUTA
DU PONT QUALICON COLOMBIA S.A. QUALA S.A.
EMPRESA DE ACUEDUCTO Y QUIOS LTDA.
ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ REPRESENTACIONES
FABRICA DE ESPECIAS Y BIOTECNOLÓGICAS LTDA.
CONDIMENTOS EL REY S.A. RICA RONDO, INDUSTRIA NACIONAL DE
FRUGAL S.A. ALIMENTOS S.A.
HOSPITAL DEPARTAMENTAL DE SCHERING COLOMBIANA S.A.
VILLAVICENCIO SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUD DE
INGENIO PICHICHI S.A. BOGOTÁ
INGENIO RIOPAILA TECNIMICRO LABORATORIO DE
INSTITUTO COLOMBIANO ANÁLISIS
AGROPECUARIO ICA UNIVERSIDAD CATÓLICA INGECAL
INSTITUTO NACIONAL DE SALUD -INS VIKINGOS S.A.
INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA
DE MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS -
INVIMA-

ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.

DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4458 (Primera actualización) RESUMEN

CONTENIDO

Página

1. OBJETO .......................................................................................................................1

2. REFERENCIAS NORMATIVAS ...................................................................................1

3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES .....................................................................................2

4. PRINCIPIO ....................................................................................................................2

4.1 BACTERIAS COLIFORMES FRENTE A UN MEDIO CROMOGÉNICO .....................2

4.2 Escherichia coli FRENTE A UN MEDIO FLUOROGÉNICO .....................................2

4.3 Escherichia coli FRENTE A UN MEDIO TRIPTONA BILIS X-GLUCORÓNIDO .......3

4.4 GENERALIDADES .......................................................................................................3

5. MEDIOS DE CULTIVO Y DILUYENTE .......................................................................3

5.1 GENERALIDADES ......................................................................................................3

5.2 DILUYENTE ..................................................................................................................3

5.3 MEDIO SELECTIVO SÓLIDO: AGAR - LACTOSA - BILIS - ROJO NEUTRO -

CRISTAL VIOLETA, VRBL - PARA COLIFORMES ....................................................3

5.4 MEDIO SELECTIVO SÓLIDO: AGAR-LACTOSA-BILIS-ROJO

NEUTRO-CRISTAL VIOLETA, + MUG – PARA COLIFORMES Y E COLI.................4

5.5 MEDIO SELECTIVO SÓLIDO: AGAR CON TRIPTONA BILIS X GLUCORÓNIDO ...5

6. EQUIPO Y MATERIAL DE VIDRIO PARA LABORATORIO…………………………...6

6.1 APARATO PARA ESTERILIZACIÓN EN SECO (HORNO) O ESTERILIZACIÓN

EN HÚMEDO (AUTOCLAVE) ......................................................................................6

6.2 INCUBADORA..............................................................................................................6
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4458 (Primera actualización) RESUMEN

Página

6.3 CAJAS DE PETRI .......................................................................................................6

6.4 PIPETAS DE SUMINISTRO TOTAL O MICROPIPETAS ............................................6

6.5 BAÑO DE MARÍA ........................................................................................................6

6.6 EQUIPO DE RECUENTO DE COLONIAS ...................................................................6

6.7 MEDIDOR DE pH .........................................................................................................6

7. MUESTREO ..................................................................................................................6

8. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA DE ENSAYO .......................................................6

9. PROCEDIMIENTO ........................................................................................................7

9.1 SUSPENSIÓN INICIAL Y DILUCIONES ......................................................................7

9.2 INOCULACIÓN E INCUBACIÓN .................................................................................7

9.3 RECUENTO DE LAS COLONIAS ................................................................................7

10. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS ........................................................................8

10.1 Escherichia coli - MEDIO FLUOROGÉNICO .............................................................8

10.2 Escherichia coli – MEDIO CROMOGÉNICO ..............................................................8

10.3 Escherichia coli – MEDIO AGAR CON TRIPTONA BILIS

X GLUCORÓNIDO 5-BROMO-4-CLORO-3-INDOLIL-D-GLUCURONIDO .................8

11. MÉTODO DE CÁLCULO ..............................................................................................8

11.1 CASO GENERAL .........................................................................................................8

11.2 CASO EN EL QUE CADA CAJA CONTIENE MENOS DE 15 COLONIAS

CARACTERÍSTICAS ....................................................................................................9

11.3 ESTIMACIÓN DE NÚMEROS PEQUEÑOS……………………………………………….9

11.4 COLONIAS NO CARACTERÍSTICAS .......................................................................10

NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4458 (Primera actualización) RESUMEN

Página

12. PRECISIÓN ................................................................................................................10

12.1 CAJAS QUE CONTENGAN ENTRE 15 Y 150 COLONIAS

CARACTERÍSTICAS ..................................................................................................10

12.2 CADA CAJA CONTIENE MENOS DE 15 COLONIAS CARACTERÍSTICAS ...........10

13. INFORME DEL ENSAYO ...........................................................................................10

ANEXOS

ANEXO A (Normativo)
LÍMITES DE CONFIANZA PARA LA ESTIMACIÓN DE NÚMEROS PEQUEÑOS
DE COLONIAS .......................................................................................................................11

ANEXO B (Informativo)
BIBLIOGRAFÍA ......................................................................................................................12
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4458 (Primera actualización) RESUMEN

MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS Y DE ALIMENTOS PARA ANIMALES.

MÉTODO HORIZONTAL PARA EL RECUENTO DE COLIFORMES
O Escherichia coli O AMBOS. TÉCNICA DE RECUENTO DE COLONIAS
UTILIZANDO MEDIOS FLUOROGÉNICOS O CROMOGÉNICOS

1. OBJETO

Esta norma da directrices generales de un método horizontal para el recuento de coliformes,

Escherichia coli, o ambos, presentes en productos destinados al consumo humano o
alimentación de animales, por medio de la técnica de recuento de colonias en un medio sólido
cromogénico o fluorogénico después de su incubación a 35 °C ± 1 °C.

NOTA Esta norma no aplica para la detección de E. coli H7 O157 (véase la NTC 4899).

2. REFERENCIAS NORMATIVAS

Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicación de

este documento normativo. Para referencias fechadas, se aplica únicamente la edición citada.
Para referencias no fechadas, se aplica la última edición del documento normativo referenciado
(incluida cualquier corrección).

NTC 4206, Microbiología de alimentos y de alimentos para animales. Reglas Generales para
los análisis microbiológicos (ISO 7218).

NTC 4491-1, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de muestras

para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico. Parte 1.
Reglas generales para la preparación de la suspensión inicial y de diluciones decimales.

NTC 4491-2, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de muestras

para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico. Parte 2.
Reglas específicas para la preparación de carne y productos cárnicos.

NTC 4491-3, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de muestras

para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico. Parte 3.
Reglas específicas para la preparación de pescado y productos de la pesca.

NTC 4491-4, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de muestras

para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico. Parte 4.
Reglas específicas para la preparación de productos diferentes de leche, productos lácteos,
carne, productos cárnicos, pescados y productos de la pesca.

1 de 12
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3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES

Para los propósitos de esta norma se aplican las siguientes definiciones:

3.1 Coliformes. Grupo de bacterias que presentan ciertas características bioquímicas en

común e importancia relevante como indicadores de contaminación del agua y los alimentos.
Se encuentran comúnmente en las plantas, el suelo y los animales, incluyendo a los humanos.
El grupo coliforme está conformado por los siguientes géneros tales como Escherichia,
Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter.

NOTA Se define como coliformes fecales, aquellos microorganismos que fermentan la lactosa a 44,5 °C - 45,5 °C,
análisis que permite descartar a Enterobacter, puesto que ésta no crece a esa temperatura. Si se aplica este criterio
crecerán en el medio de cultivo principalmente E. coli (90 %) y algunas bacterias de los géneros Klebsiella y
Citrobacter. La prueba de coliformes fecales positiva indica un 90 % de probabilidad de que el coliforme aislado sea
E. coli. Sirven como indicadores de contaminación fecal.

3.2 Escherichia coli. Bacilo corto gram negativo que forma parte de la flora normal de
intestino de animales de sangre caliente. Es aerobio facultativo, de metabolismo fermentativo,
O-Nitrofenli-β-D- galactopiranósido positivo y su crecimiento óptimo es a 37 °C. Algunas cepas
pueden producir enterotoxinas y tiene otros factores de virulencia de colonización e invasión
por lo cual pueden causar enfermedades diarreicas, así como infecciones urinarias y
nosocomiales.

2
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 4458 (Primera actualización) RESUMEN

ANEXO B
(Informativo)

BIBLIOGRAFÍA

[1] The Scientific Association Dedicated to Analytical Excellence, Official Methods of Analysis
of AOAC International. Method 996.02. Colifrms and E. coli in food, plate count technique.
Chapter 17. 18th Edition, 2005.

[2] INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. Microbiology. General

Guidance for the Enumeration of Coliforms. Colony Count Technique. Geneva: ISO, 12
pp. (ISO 4832:2006).

[3] GTC 125, Guía de referencias de métodos horizontales de análisis microbiológicos para
bebidas, alimentos y alimentos para animales. Tabla No. 8. 2006.

[4] Fluorocult® LMX Broth modified acc_ to MANAFI and OSSMER.htm. 2006-11-12.

[5] http://www.epa.gov/nerlcwww/online.htm. 2006-11-12.

[6] http://www.bergeys.org/. 2006-11-12.

[7] William B. Whitman. Bergey's Manual Trust. Department of Microbiology. 527 Biological
Sciences Building. University of Georgia. Athens, GA 30602-2605. USA.

3
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IMPORTANTE

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