NORMA TÉCNICA COLOMBIANA

NTC 5732
2009-12-16

DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS. ENSAYO CUANTITATIVO DE SUSPENSIÓN PARA LA EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD BACTERICIDA DE PRODUCTOS PARA EL TRATAMIENTO POR FROTACIÓN Y LAVADO HIGIÉNICO Y QUIRÚRGICO DE LAS MANOS. MÉTODO DE ENSAYO. REQUISITOS (FASE 2/ETAPA 1)

E:

CHEMICAL DESINFECTANTS AND ANTISEPTICSQUANTITATIVE SUSPENSION TEST FOR THE EVALUATION OF BACTERICIDAL ACTIVITY OF PRODUCTS FOR HYGIENIC AND SURGICAL HANDRUB AND HANDWASH USED IN HUMAN MEDICINE –TEST METHOD AND REQUIREMENTS (PHASE 2/STEP1).

CORRESPONDENCIA:

esta norma es una adopción idéntica (IDT) de la EN 12054:2001. investigación; desarrollo; innovación; proyectos; requisitos; planificación; beneficios.

DESCRIPTORES:

I.C.S.: 11.080.20
Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC) Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435

Prohibida su reproducción

Editada 2009-12-24

PRÓLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993. ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en los mercados interno y externo. La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último caracterizado por la participación del público en general. La NTC 5732 fue ratificada por el Consejo Directivo de 2009-12-16. Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en todo momento a las necesidades y exigencias actuales. A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a través de su participación en el Comité Técnico 81 Desinfectantes y productos afines para uso hospitalario.

3M DE COLOMBIA S.A. ALKAMEDICA B BRAUN MÉDICAL BIOCONTROL LTDA. CENTRO DE MEDICINA NAVAL CLÍNICA SHAIO COMPENSAR ELECTROQUÍMICA WEST, ELECTROWEST GRUPO CENTRALES DE ESTERILIZACIÓN HOSPITAL DE LA VICTORIA HOSPITAL SANTA CLARA INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA DE MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS -INVIMA JOHNSON & JOHNSON DE COLOMBIA

JOHNSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA. JONSON DIVERSEY COLOMBIA LAB EUFAR LABORATORIO SFC LTDA. LAOREM INTERNACIONAL LABORATORIO NULAB LTDA PRODUCTOS PERFEX LTDA Y FULLER MANTENIMIENTO S.A. QUIRUMÉDICAS SOPSALUD-SOCIEDAD DE PROFESIONALES DE LA SALUD LTDA. SOPSALUD-SOCIEDAD DE PROFESIONALES DE LA SALUD LTDA. TEJADA TRADING

Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las siguientes empresas: ASOCIACIÓN COLOMBIANA ENFERMEROS EN CONTROL INFECCIONES-ACECI CLÍNICA DEL CAMPESTRE ELECTROWEST ELECTROQUÍMICA WEST S.A. DE DE INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA DE MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS INVIMAJOHNSON & JOHNSON DE COLOMBIA S.A. JOHNSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA.

LABORATORIO SFC LTDA. LABORATORIOS EUFAR S.A. LAOREM INTERNATIONAL LTDA.

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUD UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA

ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados. DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN

..................1 5..........8 .............................................7 5...............14 CONCLUSIÓN..........2 5......3 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS Y LAVDO HIGIÉNICO DE MANOS........................................................................................................... TÉRMINOS Y DEFINICIONES .................................................................5 5.....................4 MÉTODO DE ENSAYO PRINCIPIO.............................2 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS.............................................................. 4..................................................... 5..........................NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 CONTENIDO Página 1.......................................... 5.............2 4.............6 5...................................................1 3.................................................5 4.................................................................................3 5....................1 2..........................7 PREPARACIÓN DE LAS SUSPENSIONES Y LAS SOLUCIONES PARA ENSAYO................................. REFERENCIAS NORMATIVAS ......4 4..............................1 4...............................................................................................3 LAVADO HIGIÉNICO DE MANOS........................................4 EQUIPOS Y MATERIALES DE VIDRIO ..................................................................................................18 5............6 REQUISITOS.................................................8 PROCEDIMIENTO............3 LAVADO QUIRÚRGICO DE MANOS ............................3 FRICCIÓN QUIRÚRGICA DE MANOS .............................2 GENERALIDADES..........10 CÁLCULO Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS ................3 MATERIALES Y REACTIVOS ................................................ ALCANCE ..............................................................................................................3 4........................................2 4.........................................................................................................................................17 INFORME DE ENSAYO ...........................

............NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Página ANEXOS ANEXO A (Normativo) MÉTODO DE ENSAYO PARA LA VALIDACIÓN DE LOS MÉTODOS DE DILUCIÓN-NEUTRALIZACIÓN Y FILTRACIÓN PORM MEMBRANA ..............................................26 ANEXO C (Informativo) LÍQUIDOS DE ENJUAGUE ...............................................................20 ANEXO B (Informativo) NEUTRALIZADORES .................27 ANEXO D (Informativo) EJEMPLO DE UN INFORME DE ENSAYO TÍPICO................................................................................................................................... Tiempo de contacto para diferentes categorías de producto ...28 ANEXO E (Informativo) CEPAS DE REFERENCIA CORRESPONDIENTE EN OTRAS COLECCIONES DE CULTIVO ........................................................31 Tabla 1.....................................................................................30 ANEXO F (Informativo) INFORMACIÓN SOBRE LA APLICACIÓN Y LA INTERPRETACIÓN DE LAS NORMAS EUROPEAS SOBRE LOS DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS...............................

Es aplicable en los sitios de trabajo y del hogar. ENSAYO CUANTITATIVO DE SUSPENSIÓN PARA LA EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD BACTERICIDA DE PRODUCTOS PARA EL TRATAMIENTO POR FRICCION Y LAVADO HIGIÉNICO Y QUIRÚRGICO DE LAS MANOS. Por lo tanto.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS. MÉTODO DE ENSAYO REQUISITOS (FASE 2/ETAPA 1) 1. Antisépticos y desinfectantes químicos. No es posible determinar la actividad bactericida del producto para FRICCION de manos no diluido usando esta norma . dado que siempre se produce algún grado de dilución al añadir el inóculo. Para referencias no fechadas. Tales indicaciones se presentan en el cuidado del paciente. Para referencias fechadas. ALCANCE Esta norma establece un método de ensayo y los requisitos para determinar la actividad bactericida mínima de productos para fricción (sin agua) y lavado de las manos. por ejemplo: en hospitales. para el tratamiento poscontaminación de las manos. Campo de aplicación: se emplea en las áreas y situaciones donde se indica médicamente la desinfección de las manos. (EN 12353) 1 de 33 . se aplica la última edición del documento normativo referenciado. NTC 5150. Antisépticos y desinfectantes químicos. jardines infantiles y hogares geriátricos. (EN 1040) NTC 5593. se aplica únicamente la edición citada. Método de ensayo y requisitos (fase 1). REFERENCIAS NORMATIVAS Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicación de este documento normativo. en instalaciones médicas comunitarias y en instituciones odontológicas en clínicas de escuelas. Igualmente se pueden incluir servicios como lavanderías y cocinas que suministran productos directamente a los pacientes. Conservación de las cepas microbianas utilizadas para la determinación de la actividad bactericida y fungicida. no es posible el ensayo confiable de productos que contienen 5% de agua o menos. o para la desinfección quirúrgica de las manos. Actividad bactericida básica. (incluida cualquier corrección). 2.

7 Lavado quirúrgico de manos.6 Fricción quirúrgica de manos. Procedimiento poscontaminación que implica la frotación de las manos. 4. 4. 3.2. sin adición de agua. utilizando un producto bactericida dirigido contra microorganismos transitorios para evitar su transmisión. Chemical Disinfectants and Antiseptics . Procedimiento prequirúrgico que implica la frotación de las manos sin la adición de agua. se aplican los siguientes términos y definiciones. 4. Pseudomonas aeruginosa.1 REQUISITOS GENERALIDADES El producto. 3.4 Fricción higiénica de manos. 3. prEN 12791.Surgical hand disinfectants . 3.5 para cada uno de los siguientes organismos de ensayo: Eschericia coli.5 Lavado higiénico de manos Procedimiento poscontaminación que implica el lavado de las manos con agua.Test Method and Requirements (phase 2/step 2). utilizando un producto bactericida dirigido a la reducción de la flora microbiana de las manos con el fin de evitar la transmisión de los microorganismos durante procedimientos invasivos .Hygienic Handrub . 3. utilizando un producto bactericida dirigido a la reducción de la flora microbiana de las manos para evitar la transmisión de los microorganismos en procedimientos invasivos. 3. utilizando un producto bactericida dirigido contra microorganismos transitorios para evitar su transmisión.Hygienic Handwash .4 o 4. sin tener en cuenta la flora residente en la piel (EN 1499) 3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES Para los propósitos de esta norma. Capacidad de un producto para reducir la cantidad de células bacterianas viables de los organismos pertinentes bajo las condiciones definidas por esta norma (en concordancia con la NTC 5150).1 Producto (para desinfección y/o antisepsia química). Agente o formulación química que se utiliza como desinfectante o antiséptico químico (NTC 5150 ). 4. debe demostrar una reducción en los recuentos viables tal como se indica en los numerales 4. 2 . cuando se somete a ensayo según lo indicado en el numeral 5. Chemical Disinfectants and Antiseptics .2 Bactericida.Test Method and Requirements (phase 2/step 2). Procedimiento prequirúrgico que implica el lavado de las manos con agua. Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus.Test method and requirements (phase 2/step 2).3.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 EN 1499. 3. EN 1500. sin tener en cuenta la flora residente en la piel ( UNE EN 1500). Producto que destruye las bacterias vegetativas bajo condiciones definidas.3 Actividad bactericida (en esta norma). Chemical disinfectants and antiseptics.

2. el producto debe satisfacer el requisito de la Tabla 1 para uno de los siguientes tiempos de contacto opcional: 1 min ± 5 s.3 LAVADO HIGIÉNICO DE MANOS El producto debe demostrar una reducción de 103 en el recuento viable en 1 min ± 5 s. 2 min ± 10 s. Nota. 4.5 LAVADO QUIRÚRGICO DE MANOS El producto debe demostrar una reducción de 103 en el recuento viable en 5 min ± 10 s. 3 min ± 10 s.4 y 4. El producto debe cumplir con los requisitos que se indican en los numerales 4.3. 4 min ± 10 s. o de lavado higiénico de manos. Además.4 FRICCIÓN QUIRÚRGICA DE MANOS El producto debe demostrar una reducción de 105 en el recuento viable en 5 min ± 10 s. 5.1 MÉTODO DE ENSAYO PRINCIPIO Una suspensión de bacterias para el ensayo se adiciona a una muestra preparada del producto que se somete a prueba. el producto debe satisfacer el requisito de la Tabla 1 para uno de los siguientes tiempos de contacto opcional: 1 min ± 5 s.3 y se van a utilizar adicionalmente para la desinfección quirúrgica de manos. si el fabricante recomienda una exposición inferior a 1 min. si el fabricante recomienda una exposición inferior a 1 min.7). no requieren de ensayo adicional en la fase 2/etapa 1 (para el ensayo de fase 2/etapa 1. Además. véase Anexo F). el producto debe demostrar una reducción similar en el recuento viable en 30 s ± 5 s.6 de acuerdo con su aplicación.5 se aplican a productos utilizados únicamente para desinfección quirúrgica de manos y que no se han sometido a ensayo previamente según lo indicado en los numerales 4. 5. La mezcla se conserva a una temperatura de 3 . si el fabricante recomienda una exposición inferior a 5 min. 2 min ± 10 s.2 o 4.2 a 4. Además. 4. Los requisitos de los numerales 4. Únicamente para productos de lavado de manos. el producto debe demostrar una reducción similar en el recuento viable en 30 s ± 5 s. 4.6 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS Y LAVADO HIGIÉNICO DE MANOS Los productos que cumplen con los requisitos según lo indicado en los numerales 4.2 FRICCIÓN HIGIÉNICA DE MANOS El producto debe demostrar una reducción de 105 en el recuento viable en 1 min ± 5 s. El tiempo adecuado de contacto no debe ser superior al tiempo de exposición recomendado por el fabricante. la muestra se prepara en agua dura (véase el numeral 5.2. por lo cual es necesario un ensayo adicional de fase 2/etapa 2 (EN 1499: año. 4. 4.EN 1500) antes de que se pueda cumplir la declaración del rótulo que indica desinfectante quirúrgico de manos de fricción higiénica de manos. 4 min ± 10 s. UNE. El tiempo adecuado de contacto no debe ser superior al tiempo de exposición recomendado por el fabricante. 3 min ± 10 s.2 o 4. Además. si el fabricante recomienda una exposición inferior a 5 min.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Este método corresponde a un ensayo de fase 2/etapa 1.

Pseudomonas aeruginosa. La cantidad de bacterias en la suspensión de ensayo también se determina y se calcula la reducción en el recuento viable. Esta información se suministra para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobación por parte de ICONTEC del producto mencionado. 1 4 . la acción bactericida de esta porción se neutraliza o suprime inmediatamente mediante un método validado. 5. Tiempo de contacto para diferentes categorías de producto Tiempo de contacto recomendado por el fabricante 1 minuto < 1 minuto 1 minuto < 1 minuto 5 minuto < 5 minuto 5 minuto < 5 minuto Procedimiento Fricción manos Lavado manos Fricción manos Lavado manos higiénica higiénico quirúrgica de de de Tiempo de contacto “t” usado en el ensayo 1 min ± 5 s 1 min ± 5 sy 30 s ± 5 s 1 min ± 5 s 1 min ± 5 s y 30 s ± 5 s 5 min ± 10 s 5 min ± 10 s y opcional: 1 min ± 5 s. 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s 5 min ± 10 s 5 min ± 10 s y opcional: 1 min ± 5 s. NOTA Véase el Anexo E para el número de cepa correspondiente en algunas otras colecciones de cultivos. pero siempre en los intervalos establecidos en la Tabla 1.2. Sin embargo.2.2 Medios de cultivo y reactivos 5. 2 min ± 10 s. si no se puede establecer un medio de neutralización adecuado. El método de elección es el de diluciónneutralización. incluyendo todos los períodos indicados en las instrucciones del fabricante.2 5.2. ATCC 15442. A intervalos de tiempo especificados. se toma una porción alícuota. ATCC 6538 y ATCC 10541 son los números de colección de la cepas suministradas por la colección nacional de cultivos tipo y la colección estadounidense de cultivos tipo. se utiliza la filtración por membrana. Las cepas correspondientes suministradas por otras colecciones se pueden utilizar si se puede demostrar que producen los mismos resultados. 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s quirúrgico de El ensayo se lleva a cabo utilizando Escherichia coli. 2 min ± 10 s. Tabla 1.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 20 °C.1 MATERIALES Y REACTIVOS Organismos de ensayo La actividad bactericida se debe evaluar utilizando cuatro cepas. Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus. Se deben utilizar las siguientes cepas: Escherichia coli (K12) Pseudomonas aeruginosa Staphylococcus aureus Enterococcus hirae 1 NCTC1) 10538 ATCC1) 15442 ATCC1) 6538 ATCC1) 10541 5.1 Generalidades 1) NCTC 10538. Se determina la cantidad de bacterias sobrevivientes.2.

2.0 g 15. 5 . el pH del medio debe ser equivalente a 7.0.5 g 1 000.3.2. de acuerdo con lo indicado en el Anexo A. digerido papaínico de harina de soya NaCl Agar Agua (5.0 g 5.2 +/. este paso no es necesario. Después de la esterilización.0 +/. Triptona. NOTA 1 Si el agua se esteriliza durante la esterilización de los reactivos. digerido pancreático de caseína Peptona de soya.2) 15.0 g 1 000. Esterilice en autoclave (véase el numeral 5.2.5 Neutralizador El neutralizador se debe validar para el producto que se somete a ensayo.2. NOTA En el Anexo B se presenta información sobre los neutralizadores adecuados para algunas categorías de productos. 5.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Los reactivos deben tener grado analítico y deben ser apropiados para los propósitos microbiológicos.2. el pH del medio debe ser equivalente a 7.2.1). se recomienda la utilización de material deshidratado disponible en el comercio para la preparación de los medios de cultivo.0.2) 1.1). NOTA Para mejorar la reproducibilidad. 5. se puede utilizar agua para preparaciones inyectables (véase la Farmacopea Oficial). 5. digerido pancreático de caseína NaCl Agua (véase el numeral 5. El neutralizador debe estar estéril.2.2 Agua El agua debe estar libre de sustancias que sean tóxicas o inhibitorias para las bacterias. Después de la esterilización.2. NOTA 2 Si el agua destilada con calidad adecuada no está disponible.0 ml Esterilice en autoclave (véase el numeral 5.4 Diluyente Solución de cloruro de sodio y triptona: Triptona. El agua debe estar destilada en vidrio recientemente y no desmineralizada.0 g 5.0 g 8.3.3 Agar tripticasa de Soya (TSA) Para la conservación de las cepas bacterianas y la realización de los recuentos viables.2 cuando se mide a 20 °C. 5.2 cuando se mide a 20 °C.1).2.0 ml Esterilice en autoclave (véase el numeral 5. Se recomienda cumplir rigurosamente las instrucciones del fabricante relacionadas con la preparación de estos productos.2.2.3.2.

NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 5. Solución B: Disuelva 35.5 g/l (cerca de 1 mol/l) de ácido clorhídrico (HCl). Almacene la solución a una temperatura entre 2°C y 8°C durante un período no superior a un mes.2. El pH del agua dura debe ser de 7. luego 8. NOTA Cuando se preparan las soluciones de ensayo del producto (véase el numeral 5.2. Esterilice en autoclave (véase el numeral 5.2). NOTA En el Anexo C se presenta información sobre las soluciones de enjuague adecuadas para algunas categorías de productos.0 +/.2.2.2) en un matraz volumétrico de 1 000 ml (véase el numeral 5.2.0 ml de la solución B. Mezcle y diluya hasta completar 1 000 ml con agua (véase el numeral 5.3.2. Almacene la solución a una temperatura entre 2 °C y 8 °C durante un período no superior a una semana.2. En todo caso la dureza final es inferior a 300 mg/kg de carbonato de calcio (CaCO3) en el tubo de ensayo.0 ml de la solución A.02 g de bicarbonato de sodio (NaHCO3) en agua (véase el numeral 5.2. 5.3. la adición del producto a esta agua dura produce una dureza final del agua diferente en cada uno de los tubos de ensayo.4.2) y diluya hasta completar 1 000 ml.12) y adicione 6.2) y diluya hasta completar 1 000 ml.2.2.2.84 g de cloruro de magnesio anhidro (MgCl2) o un cloruro de magnesio hidratado equivalente y 46.2.3. 6 . compatible con la membrana filtrante y con capacidad para la filtración a través de la membrana.2. El agua dura debe ser de preparación reciente bajo condiciones asépticas y se debe utilizar en un período de 12 h.0. Agua dura: Para la preparación de 1 litro. ajuste el pH utilizando una solución de aproximadamente 40 g/l (cerca de 1 mol/l) de hidróxido de sodio (NaOH) o aproximadamente 36.2). vierta por lo menos 600 ml de agua (véase el numeral 5.2. bajo las condiciones de ensayo que se describen en el Anexo A.7 Agua dura para la dilución del producto de lavado de manos El agua dura para la dilución de los productos se debe preparar de la siguiente manera: Prepare: Solución A: Disuelva 19.6 Solución de enjuague (para filtración por membrana) La solución debe ser estéril.7). Esterilice mediante filtración por membrana (véase el numeral 5.1). Si es necesario.24 g de cloruro de calcio anhidro (CaCl2) o un cloruro de calcio hidratado equivalente en agua (véase el numeral 5.2.

3. 5. un autoclave con capacidad para conservar una temperatura de 121+30 °C para un tiempo continuo mínimo de 15 min. en un esterilizador de calor seco (véase el numeral 5.2. Equipo microbiológico de laboratorio común2) y.45 μm (para el método de filtración por membrana) y tamaño de poro de 0. excepto aquellos que se suministran estériles.3 5.3 5. 170 °C para un tiempo continuo mínimo de 1 h o 160 °C para un tiempo continuo mínimo de 2 h.1) conservando una temperatura de 180 °C durante un tiempo continuo mínimo de 30 min. Se puede utilizar una incubadora a 37 °C ± 1 °C si no se dispone de una incubadora a 36 °C ± 1 °C. con tamaño de poro 0. con capacidad para controlar la temperatura a 20 °C ± 1 °C y 45 °C ± 1 °C.2 Baños de agua o de maría.3 Incubadora.4 Medidor de pH con una exactitud de calibración de ± 0. un horno de aire caliente con capacidad para conservar una temperatura de 180 °C durante un tiempo continuo mínimo de 30 min. mediante uno de los siguientes métodos: a) en un autoclave (véase el numeral 5. Esta información se suministra para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobación de este producto por parte de ICONTEC. Para esterilización con calor seco.2.3.3.2. 170 °C para un tiempo continuo mínimo de 1 hora o 160 °C para un tiempo continuo mínimo de 2 h.2.1) conservando una temperatura de 121+30 °C durante un tiempo continuo mínimo de 15 min.7 Equipo para filtración por membrana construido con un material compatible con el producto que se somete a ensayo.2.22 μm (para esterilización por filtración). como el mezclador Vortex ®. 3 7 . b) 5.3.2 5.3. Con el fin de obtener una distribución uniforme de los microorganismos sobre la membrana en el método 2) El equipo desechable es una alternativa aceptable para el material de vidrio reusable.3.2.3. La fuente de vacío utilizada debe suministrar una tasa de flujo de filtración uniforme.3. en particular.2.1 NTC 5732 EQUIPOS Y MATERIAL DE VIDRIO Generalidades Esterilice el material de vidrio y las partes del equipo que tendrán contacto con el medio de cultivo y los reactivos o la muestra.2. VORTEX ® es un ejemplo de un producto adecuado que se encuentra en el comercio. 5. con capacidad para controlar la temperatura a 36 °C ± 1 °C o 37 °C ± 1 °C.2 5. el siguiente: b) 5. con un porta filtro de volumen utilizable mínimo de 50 ml y adecuado para utilizar con filtros de diámetro entre 47 mm y 50 mm.2.5 Cronómetro 5.1 Equipos para esterilización a) Para esterilización con calor húmedo.6 Agitador (agitador electromecánico.3.3.1 unidades de pH a 25 °C.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA 5.3.

3. siempre que el subcultivo se haya conservado en una incubadora durante un periodo de 48 h.2.3.2.4.2 Cultivo de trabajo de los microorganismos Con el fin de preparar el cultivo de trabajo de las cepas (véase el numeral 5.11).1) mediante trazos en los cultivos inclinados de TSA (véase el numeral 5. 5. frascos o matraces de cultivo con capacidad adecuada.2. prepare un cultivo de 24 h adicionales después del procesamiento.1. No tome un cuarto subcultivo.3). 5.2) y transfiera con el asa redonda las células hacia el diluyente. Tome los cultivos de trabajo (véase el numeral 5. 5.4. 5.2. A partir de este segundo subcultivo se puede producir de la misma manera un tercer subcultivo.12 Matraces volumétricos calibrados a 20 °C.3.3.4.13).4.2. Ajuste el número de células en la suspensiones hasta un 8 .10 Cajas de Petri que tengan un diámetro entre 90 mm y 100 mm.4 5.2.1.2.2.1 ml. sumergiendo el asa en éste y frotándola contra la pared lateral del matraz para desprender las células. Agite el matraz durante 3 min utilizando un agitador mecánico (véase el numeral 5.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 de ensayo de filtración por membrana y para evitar una filtración excesivamente prolongada.11 Perlas de vidrio con diámetro entre 3 mm y 4 mm.3. Las células se deben suspender en el diluyente. realice un subcultivo a partir del cultivo inicial (véase el numeral 5.2. 5. El segundo y/o tercer subcultivos representan el cultivo de trabajo.13 Agitador mecánico 5.3 Suspensión bacteriana para ensayo Tome 10 ml del diluyente (véase el numeral 5. NOTA Para el método de recuento de caja. 5. se pueden utilizar cajas de tamaño superior (140 mm).8 Recipiente: tubos de ensayo.3. En estas circunstancias.1). se puede utilizar un subcultivo de 48 h para el cultivo posterior. con capacidades nominales de 10 ml. el dispositivo se debe ajustar de manera tal que se obtenga la filtración de 100 ml del líquido de enjuague en un período entre 20 s y 40 s.2. prepare de la misma manera un segundo subcultivo a partir del primero y lleve a incubación durante 18 h a 24 h.2.3. 5.4. Después de un período entre 18 h y 24 h.3.4) y colóquelo en un matraz de 100 ml con cinco gramos de perlas de vidrio (véase el numeral 5.2.2. 1 ml y 0. Si no es posible preparar el segundo subcultivo en un día particular.1.2.1 PREPARACIÓN DE LAS SUSPENSIONES Y LAS SOLUCIONES PARA ENSAYO Suspensiones bacterianas 5. se pueden utilizar pipetas calibradas automáticas. por el método de dispersión.4.1. Aspire la suspensión de las perlas de vidrio y transfiera a otro tubo.9 Pipetas graduadas.3.1 Cultivos iniciales de los microorganismos de ensayo Los cultivos iniciales se deben conservar de acuerdo con los requisitos de la NTC 5593:2008 5. Nota.3) e incube (véase el numeral 5.1.

2.0 ml sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5.0 ml en cajas de Petri (véase el numeral 5. Deseche las cajas que.3.2.2 Solución de ensayo para lavado de manos Utilizando agua dura (véase el numeral 5. Para el recuento de la suspensión bacteriana para ensayo.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA (véase el numeral 5. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.6. (Siembra en superficie) Si se utiliza la técnica de siembra en caja. disperse cada muestra de 1. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas. prepare una dilución al 55 % (V/V) de la preparación del producto de lavado de manos para ensayo. Calcule el número de ufc/ml en la suspensión para ensayo (N) utilizando el método que se indica en el numeral 5.1. Tome una muestra de 1.5 x 108 ufc/ml y 5 x 108 ufc / ml 4 utilizando el diluyente.2.2.4 Recuento de la suspensión bacteriana para ensayo Incube las cajas a temperatura de 36 ºC ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) (véase el numeral 5.4.2.2. Si se utiliza la técnica de dispersión en caja. Incube las cajas durante 24 h adicionales.2. 5.3. una con Pseudomonas aeruginosa.3. por cualquier razón. estimando la cantidad de unidades mediante algún método adecuado. Se deben registrar los detalles de las muestras de producto tal como se reciben. otra con Enterococcus hirae y otra con Staphylococcus aureus. prepare diluciones de 10-6 y 10-7 de la suspensión de ensayo utilizando el diluyente (véase el numeral 5.1.2.2.3.4. Conserve esta suspensión en el baño de agua o maría a 20 °C ± 1 °C y utilice dentro de las 2 h siguientes. Prepare cuatro suspensiones bacterianas para ensayo.4) y mezcle (véase el numeral 5.2.2. 4 ufc/ml = unidades formadoras de colonias por mililitro 9 .) durante 24 h.0 ml de cada dilución en duplicado e inocule usando la técnica de siembra en caja o de dispersión en caja. (siembra en profundidad) vierta con pipeta cada muestra de 1.) como diluyente. una utilizando Escherichia coli.4.2 Solución del producto para ensayo 5.3). 5. Determine el mayor número de colonias para cada muestra de 1.1 Soluciones de ensayo para fricción de manos El producto para fricción de manos se utiliza sin diluir como solución del producto para ensayo. 5.3) fundido y enfriado a 45 °C ± 1 °C.6). no se puedan contar.2.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 valor entre 1.7.1. Vuelva a contar las cajas restantes.0 ml.2. La solución del producto para ensayo debe ser de preparación reciente y se debe utilizar durante un día de trabajo máximo (o menos si tiene baja estabilidad).4.

2.2 Procedimiento de ensayo para determinar la actividad bactericida de los productos para fricción higiénica de manos o lavado higiénico de manos. Mezcle y coloque en el baño de agua o maría controlado a 20 °C ± 1 °C. NOTA Al añadir las suspensiones bacterianas para ensayo a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente.3.2.5.0 ml de la solución de ensayo para fricción higiénica de manos (véase el numeral 5. se puede utilizar el método de filtración por membrana en lugar del método de diluciónneutralización.5. seleccionado de acuerdo con la experiencia del laboratorio y los datos publicados.2. usados para el tratamiento poscontaminación de las manos Vierta con pipeta 9. a) Los productos de ensayo para fricción de manos: después del tiempo de neutralización de 1 min ± 5 s. tiosulfato de sodio (5 g/l) bien sea en diluyente (véase el numeral 5. L-histidina (1 g/l).3. suspensión bacteriana para ensayo. el producto también se debe ensayar en un tiempo de contacto de 30 s ± 5 s.2).5) y 1.2.1) o de la solución de ensayo para lavado de manos (véase el numeral 5.4) o en 0. saponina (30 g/l).2 Método de dilución-neutralización 5. Mezcle (véase el numeral 5.2. lecitina (3 g/l).4.2.2. prepare una dilución de 10-1 de la mezcla neutralizada en el diluyente (véase el numeral 5. La actividad del producto se debe determinar para un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s.0 ml de una de las suspensiones bacterianas para ensayo (véase el numeral 5.4).4.002 5 mol/l de solución amortiguadora de fosfatos.5. Si este neutralizador no es válido. Si el fabricante recomienda una exposición inferior a 1 min.5. Si ambos neutralizadores no son válidos. Los productos de ensayo para lavado de manos: después del tiempo de neutralización de 1 min ± 5 s. mezcle y coloque el recipiente en un baño de agua o maría controlado a 20 °C ± 1.1 Generalidades Antes del ensayo.0 ml de la mezcla y su dilución de 10-1 en duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en caja o dispersión en caja.0 ml de neutralizador (véase el numeral 5.2.5 5.2. La validación del método de diluciónneutralización (véase el literal A. se debe adoptar el siguiente procedimiento. neutralizador) a la temperatura de ensayo de 20°C ± 1°C utilizando el baño de agua o maría (véase el numeral 5.2. repita el ensayo de validación utilizando un neutralizador alterno que contenga una combinación de: polisorbato 80 (30 g/l). equilibre todos los reactivos (solución del producto para ensayo.1) se deben llevar a cabo utilizando un neutralizador adecuado.3). En el tiempo de contacto seleccionado. Tome una muestra de 1. 5.2. 5. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro.4.2.1 PROCEDIMIENTO Generalidades NTC 5732 El método de elección es el de dilución-neutralización.4.2).2) en un recipiente estéril con capacidad aproximada de 25 ml.2.0 ml de la mezcla para ensayo en un tubo que contenga 8. Para determinar un neutralizador adecuado. Verifique que la temperatura de los reactivos se estabilice en 20 °C ± 1 °C. Añada 1. prepare una dilución de 10-2 y 10-3 de la mezcla neutralizada en el 10 b) .2. vierta con pipeta 1.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA 5.0 ml de agua (véase el numeral 5.6) justo antes de finalizar el tiempo de contacto seleccionado.1.

Incube las cajas durante 24 h adicionales.6) y coloque el recipiente en un baño de agua o maría (véase numeral 5.0 ml de agua (véase el numeral 5.6) y coloque en el baño de agua o maría (véase el numeral 5. el factor de dilución es 10-1 (para fricción de manos) o 10-2 y 10-3 (para lavado de manos). el producto también se debe ensayar para un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s.0 ml en cajas de Petri (véase el numeral 5.2.4.1. Tome una muestra de 1.2. En el tiempo de contacto seleccionado. 11 .0 ml de una de las suspensiones bacterianas para ensayo (véase el numeral 5.0 ml de neutralizador (véase numeral 5. mezcle (véase el numeral 5.6).3) y enfriado a 45 °C ± 1 °C.0 ml de las diluciones de 10-2 y 10-3 de la mezcla neutralizada en duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en caja o dispersión en caja ( siembra en superficie) Si se utiliza la técnica de siembra en caja (siembra en profundidad).2.3).2.3. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas. Tome una muestra de 1.1. La actividad del producto se debe determinar para un tiempo de contacto de 5 min ± 10 s.2.2. prepare una serie de diluciones decimales de la mezcla neutralizada en el diluyente (véase el numeral 5.6.3.3). vierta con pipeta cada muestra de 1. 5.2).2. Realice este procedimiento utilizando las otras suspensiones bacterianas para ensayo. Vuelva a contar las cajas restantes.2.2.2.3.2.2. Si se utiliza la técnica de dispersión en caja.2) en un recipiente estéril con capacidad aproximada de 25 ml.0 ml de la mezcla y su dilución de 10-1 por duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en profundidad en caja o siembra en superficie. 2 min ± 10 s.) durante 24 h.3 Recuento de la suspensión bacteriana para ensayo Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) (véase el numeral 5. Mezcle justo antes de finalizar el tiempo de contacto seleccionado (véase numeral 5.2. Añada 1.2. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro.2.1) o de la solución de ensayo para lavado quirúrgico de manos (véase el numeral 5.4. 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s.3.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 diluyente (véase el numeral 5. Realice el recuento en las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.0 ml sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5.5. 5.4). por cualquier razón. Calcule el número de ufc/ml en la mezcla para ensayo (Na) utilizando el método que se indica en el numeral 5.3. no se puedan contar.2) controlado a 20 °C ± 1 °C. Determine el mayor número de colonias para cada caja.2.2. Para calcular el recuento viable de la mezcla de ensayo.3. disperse cada muestra de 1.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA fundido (véase el numeral 5.0 ml de la solución de ensayo para fricción quirúrgica de manos (véase el numeral 5.2.2) controlado a 20 °C ± 1 °C. Deseche las cajas que.0 ml de la mezcla para ensayo en un tubo que contenga 8. Mezcle (véase el numeral 5.4). a) Los productos de ensayo para fricción de manos: después del tiempo de neutralización de 5 min ± 10 s.5.2. Si el fabricante recomienda una exposición inferior a 5 min.4 Procedimiento de ensayo para la actividad bactericida de los productos para fricción quirúrgica de manos y lavado quirúrgico de manos Vierta con pipeta 9.3.2.4.2.2.2. NOTA Al añadir las suspensiones bacterianas para ensayo a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente.2. vierta con pipeta 1.3.5) y 1.

5.4.0 ml de la mezcla 12 .3. mezcle y coloque el recipiente en un baño de agua o maría controlado a 20 °C.3). Calcule el número de ufc/ml en la mezcla para ensayo (Na) utilizando el método que se indica en el numeral 5.2) en un recipiente estéril con capacidad aproximada de 25 ml. Añada 1.4.1) o de la solución de ensayo para lavado de manos (véase el numeral 5. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.2. Para calcular el recuento viable de la mezcla de ensayo.3).0 ml de las diluciones de 10-2 y 10-3 de la mezcla neutralizada por duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en profundidad en caja o siembra en superficie.2 Procedimiento de ensayo para la actividad bactericida de los productos para fricción higiénica de manos o lavado higiénico de manos Vierta con pipeta 9. Determine el mayor número de colonias para cada caja.2. Realice este procedimiento utilizando las otras suspensiones bacterianas para ensayo. 5. Vuelva a contar las cajas restantes. el factor de diluciones es 10-1 (para fricción de manos) o 10-2 y 10-3 (para lavado de manos).2.0 ml en cajas de Petri (véase el numeral 5. Deseche las cajas que. La actividad del producto se debe determinar para un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s. Si se utiliza la técnica de siembra en superficie.6.3.0 ml sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5.1.3. disperse cada muestra de 1. lleve todos los reactivos (solución del producto para ensayo.2.2.2.3) y enfriado a temperatura de 45°C ± 1°C.2.4.2. Verifique que la temperatura de los reactivos se estabilice en 20 °C ± 1 °C.1.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA b) NTC 5732 Los productos de ensayo para lavado de manos: después del tiempo de neutralización de 5 min ± 10 s.0 ml de una de las suspensiones bacterianas para ensayo (véase el numeral 5.3. el producto también se debe ensayar en un tiempo de contacto de 30 s ± 5 s. 5. por cualquier razón. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro. NOTA 1 Al añadir las suspensiones bacterianas para ensayo a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente. En el tiempo de contacto seleccionado.2.2. vierta con pipeta cada muestra de 1. suspensión bacteriana para ensayo.2.3 Método de filtración por membrana 5.5.2. Tome una muestra de 1. no se puedan contar.2.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA fundido (véase el numeral 5.5 Recuento de la suspensión bacteriana para ensayo Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) (véase el numeral 5.4). Mezcle justo antes de finalizar el tiempo de contacto seleccionado (véase el numeral 5. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.0 ml de la solución de ensayo para fricción higiénica de manos (véase el numeral 5.1 Generalidades Antes del ensayo.3. prepare una serie de diluciones de decimales de a mezcla neutralizada en el diluyente (véase el numeral 5.5. Incube las cajas durante 24 h adicionales.2) y controle la temperatura a 20 °C ± 1 °C.3) durante 24 h. vierta con pipeta dos muestras de 1.2. solución de enjuague) a la temperatura de ensayo de 20 °C ± 1 °C utilizando el baño de agua o maría (véase el numeral 5. Si el fabricante recomienda una exposición inferior a 1 minuto.3.5. 5.6). Si se utiliza la técnica de siembra en profundidad.

5. Si el fabricante recomienda una exposición inferior a 5 min. Añada 1. El tiempo necesario para transferir y filtrar no debería exceder 1 min.1) o de la solución de ensayo para lavado quirúrgico de manos (véase el numeral 5.2. Enjuague con 150 ml como mínimo pero no más de 500 ml de solución de enjuague (véase el numeral 5.2.0 ml de una de las suspensiones bacterianas para ensayo (véase el numeral 5. se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en la cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no quede aire atrapado entre la membrana y la superficie de agar.3. NOTA 1 Al añadir las suspensiones bacterianas para ensayo a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente. 5.2. Incube las cajas durante 24 h adicionales.3 Recuento de la mezcla de ensayo Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h (véase el numeral 5.6).0 ml de la solución de ensayo para fricción quirúrgica de manos (véase el numeral 5. Realice este procedimiento utilizando las otras suspensiones bacterianas para ensayo.6). Realice el recuento en las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.2. Determine el mayor número de colonias para cada caja.4.3.2.2) controlado a 20 °C ± 1 °C. Deseche las cajas que. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro.4. vierta con pipeta dos muestras de 1.2) en un recipiente estéril con capacidad aproximada de 25 ml.6).6).0 ml de la mezcla para ensayo y transfiera cada muestra hacia un equipo de filtración por membrana independiente que disponga de una membrana y que contenga 50 ml de solución de enjuague (véase el numeral 5.6) y coloque el recipiente en un baño de agua o maría (véase el numeral 5.4. El tiempo necesario para transferir y filtrar no debería exceder 1 minuto.2. mezcle (véase el numeral 5.2. 5. Vuelva a contar las cajas restantes.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 para ensayo y transfiera cada muestra hacia un equipo de filtración por membrana independiente que disponga de una membrana y que contenga 50 ml de la solución de enjuague (véase el numeral 5.4 Procedimiento de ensayo para la actividad bactericida de los productos de fricción quirúrgica de manos y lavado quirúrgico de manos Vierta con pipeta 9.5. Filtre inmediatamente. Luego transfiera las membranas sobre la superficie de dos cajas individuales de TSA (véase el numeral 5.2.2. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.1.2.2.6. NOTA 2 Al realizar la transferencia. Si es superior a 1 minuto.3. Si es superior a 1 min. Realice este procedimiento utilizando las otras suspensiones bacterianas para ensayo. 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s.10). 2 min ± 10 s.3. el producto también se debe ensayar para un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s.6).3).2. En el tiempo de contacto seleccionado. Filtre inmediatamente. Mezcle justo antes de finalizar el tiempo de contacto seleccionado (véase el numeral 5.1. 13 .2. Luego transfiera las membranas sobre la superficie de dos cajas individuales de TSA (véase el numeral 5. La actividad del producto se debe determinar para un tiempo de contacto de 5 min ± 10 s. se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en la cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no quede aire atrapado entre la membrana y la superficie de agar.2.2.3). este tiempo se debe registrar en el informe del ensayo. no se puedan contar. NOTA 2 Al realizar la transferencia. por cualquier razón.10).3. este tiempo se debe registrar en el informe del ensayo. Enjuague con 150 ml como mínimo pero no más de 500 ml de solución de enjuague (véase el numeral 5.3.3.2. Calcule el número de ufc/ml en la mezcla para ensayo (Na) utilizando el método que se indica en el numeral 5.2.3.

Calcule el número de ufc/ml en la mezcla para ensayo (Na) utilizando el método que se indica en el numeral 5. Incube las cajas durante 24 h adicionales.5. agua dura si se utiliza y neutralizador o solución de enjuague) usadas en el ensayo (Véanse los numerales 5. es recomendable calcular los recuentos viables utilizando por lo menos un par de cajas. 5. es el factor de dilución correspondiente a la primera dilución considerada. Determine el mayor número de colonias para cada caja.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 5. es el número de cajas consideradas en la segunda dilución.2. (1) 14 .5.3. Para que un resultado sea válido. Deseche las cajas que.3.1.5. El ensayo de validación (véase el Anexo A) también se debe realizar al mismo tiempo que el procedimiento (véase el numeral 5. 5. es el número de cajas consideradas en la primera dilución.3) durante 24 h. por cualquier razón.6. Si las cajas provenientes de una sola dilución están dentro de este rango.4 Validación del método de dilución-neutralización y del método de filtración por membrana Los métodos de dilución-neutralización y de filtración por membrana se deben validar para cada uno de los de los cuatro microorganismos de ensayo (véase el Anexo E). se calcula la media aritmética. en las cuales una o ambas cajas contengan más de 15 colonias y ambas contengan menos de 300 colonias. no se puedan contar. Vuelva a contar las cajas restantes.2.4) se deben calcular según los principios que se describen a continuación: a) Se deben tener en cuenta únicamente los recuentos de colonias inferiores a 300 ufc/caja para el cálculo de los recuentos viables.5) utilizando las mismas condiciones (suspensiones bacterianas para ensayo. se calcula el número de ufc/ml como el recuento recuento medio ponderado.6. por lo menos una caja debe contener 15 o más colonias. según se indica en el Anexo A.1. solución del producto para ensayo.3).1 CÁLCULO Y EXPRESIÓN DE RESULTADOS Cálculo de los recuentos viables (ufc/ml) 5. Para el cálculo del recuento medio ponderado (en ufc/ml) se utiliza la fórmula (1): c d ( n1 + 0. Realice el recuento en las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.1 n2 ) en donde c n1 n2 d es el número de colonias contadas en todas las cajas consideradas.6 5.4.6. Si las cajas provenientes de dos diluciones están dentro de este rango.5.5 Recuento de la mezcla de ensayo Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) (véase el numeral 5. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.2 y 5.1.1 Suspensión bacteriana para ensayo Los recuentos viables de la suspensión bacteriana para ensayo (véase el numeral 5.

2.3 y 5.5. 5. 5. Para el procedimiento de ensayo de dilución-neutralización (véanse los numerales 5. si la última cifra es igual a cinco.3.2) el factor de dilución es 10-1.4 y Anexo A literal A.5 x 101 ufc/ml (<1. Para ello.5. si la última cifra está por debajo de cinco.5.1) y la suspensión bacteriana (véase el Anexo A. 15 .2. Cuando el número de ufc en todas las cajas contadas es superior a 300. registre la cantidad de recuentos viables de la mezcla de ensayo como inferior a 1. la cifra anterior no se modifica. Cuando por lo menos una caja contienen 15 o más colonias.3. V Para el procedimiento de ensayo (véase el numeral 5. Se recomienda utilizar únicamente los recuentos de colonias inferiores a 300 ufc por caja para el cálculo de los recuentos viables.5. se utiliza la siguiente fórmula (2) para el cálculo de los recuentos viables (en ufc/ml): c n − d− V (2) en donde: c n d es la suma de las colonias contadas en ambas cajas.2.1.2. el volumen de la muestra es de 1.5) y la suspensión bacteriana (véase el literal A.2) el recuento viable se debería calcular utilizando el siguiente método.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Los resultados calculados se aproximan hasta dos cifras decimales. es el factor de dilución que corresponde a la dilución considerada.2. la cantidad de ufc/ml se expresa con un número entre 1.2 y 5. registre el recuento viable de la muestra de ensayo como superior a 3 x 102 ufc/ml (> 3 x 102 ufc/ml).1 y A.9 multiplicado por la potencia de 10 adecuada. EJEMPLO: 168 + 215 + 14 + 25 ( 2 + 0.3. se aproxima la cifra precedente hasta la cifra superior más próxima.5.5. si la última cifra está por encima de 5.2) el volumen de la muestra es de 0. 5.0 y 9.2).1 ml.5) cuando el número de ufc en todas las cajas contadas es inferior a 15.918 2 x 108 → 1.6. 5. A.3.4.2.2.2 − 10 − 6 = 1.4.5 x 101 ufc/ml).4.4 y Anexo A. la cifra precedente se incrementa en una unidad. Para el método filtración por membrana y el procedimiento de validación (véanse los numerales 5. Prosiga por pasos hasta obtener dos cifras decimales.5.1 − 2 ) 10 −6 = 422 2.4.4. a) como resultado. Tales recuentos se deberían calcular utilizando las colonias provenientes de ambas cajas.9 x 108 (en ufc / ml ) (1) 5. es el volumen de la muestra.2 Procedimiento y validación del ensayo Para el procedimiento de ensayo (véanse los numerales 5.2.4) y el ensayo para la validación (véanse los literales A.5.2.5. es la cantidad de cajas consideradas. Para el método de dilución-neutralización y el procedimiento de validación (véanse los numerales 5.5.0 ml.2.

2. es el recuento promedio de la caja de no toxicidad del control del neutralizador (en ufc/ml) (véase el Anexo A A.5 veces N. es el recuento promedio de la caja del control de la suspensión de ensayo para la validación de las condiciones experimentales (agua dura) (en ufc/ml) (véase el Anexo A literal A. 4.4.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA 5.6. C es igual o superior a 0.2). B y A son iguales o superiores a 0.1.2.4) A B C 5.4.5 veces B.2. b) c) en donde N es el recuento promedio de la caja del control de la suspensión de ensayo (en ufc/ml) (véase el numeral 5. A B C 16 . es el recuento promedio de la caja del control del método de dilución-neutralización (en ufc/ml) (véase el Anexo A A.1.3).6. ningún recuento de caja individual empleado para el cálculo de B es superior a 150 ufc/ml y que B está entre 50 ufc/ml y 150 ufc/ml.2 Método de filtración por membrana Asegúrese de lo siguiente: a) ningún recuento de caja individual empleado para el cálculo de N y A es superior a 300 ufc/ml y que N y A están entre 100 ufc/ml y 300 ufc/ml.4).4). es el recuento promedio de la caja del control de la suspensión de ensayo para la validación de las condiciones experimentales (agua dura) (en ufc/ml) (véase el Anexo A A.6.5 veces B.4.1. A y B están entre 100 ufc/ml y 300 ufc/ml. C es igual o superior a 0.1 Método de dilución-neutralización Asegúrese de lo siguiente: a) ningún recuento de caja individual utilizado para calcular el valor de N.1. b) c) d) en donde N es el recuento promedio de la caja del control de la suspensión de ensayo (en ufc/ml) (véase el numeral 5.4.4.4). es el recuento promedio del control de filtración (en ufc/ml) (véase el Anexo A literal A.2. es el recuento promedio de la caja del control del método de filtración por membrana (en ufc/ml) (véase el Anexo A literal A.4. N.2 Verificación de la metodología NTC 5732 5.4.1.2).3).2. A y B debe ser superior a 300 ufc/ml.

5. 2 min ± 10 s. se considera que el producto ha aprobado el ensayo si logra una reducción similar en 1 min ± 5 s. 2 min ± 10 s.EN 1500). 17 . se considera que el producto ha aprobado el ensayo si se logra una reducción similar en 30 s ± 5 s. Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus han aprobado el ensayo. se considera que el producto ha pasado la prueba si se logra una reducción similar en 30 s ± 5 s. 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s. Los productos que aprueban el ensayo se pueden describir como preparaciones bactericidas para desinfección quirúrgica de manos y se puede proseguir la evaluación adicional para determinar su eficacia en las condiciones que simulan las prácticas rutinarias de uso EN 12791). Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus han aprobado el ensayo.7. se considera aprobado el ensayo.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA 5.1 Se considera que los productos para la fricción higiénica de manos que demuestran una reducción de 105 en los recuentos viables en un periodo de 1 minuto ± 5 s a 20 °C en las condiciones definidas por este ensayo cuando los organismos de ensayo son Eschericia coli.3 Se considera que los productos para fricción quirúrgica de manos que demuestran una reducción de 105 en los recuentos viables en un periodo de 5 min ± 10 s a 20 °C en las condiciones definidas por este ensayo cuando los organismos de ensayo son Eschericia coli. Pseudomonas aeruginosa.7. se considera que el producto ha aprobado el ensayo si logra una reducción similar en 1 min ± 5 s. Si el fabricante recomienda tiempos de exposición inferiores a 1 minuto. Los productos que aprueban el ensayo se pueden describir como preparaciones bactericidas para desinfección higiénica de manos y se puede proseguir a la evaluación adicional para calificar su eficacia en las condiciones que simulan su uso sobre las manos –UNE.2) también han cumplido con los requisitos para fricción quirúrgica de manos (véase el numeral 4.7.7. Si el fabricante recomienda tiempos de exposición inferiores a 5 min. Los productos que aprueban el ensayo se pueden describir como preparaciones bactericidas para desinfección higiénica de manos y se puede proseguir la evaluación adicional para determinar su eficacia en las condiciones que simulan las prácticas rutinarias de uso (EN 1499) 5. Pseudomonas aeruginosa.4 Se considera que los productos para lavado quirúrgico de manos que demuestran una reducción de 103 en los recuentos viables en un periodo de 5 min ± 10 s a 20 °C en las condiciones definidas por este ensayo cuando los organismos de ensayo son Eschericia coli. Si el fabricante recomienda tiempos de exposición inferiores a 5 min.4).5 Se considera que los productos que han cumplido con los requisitos para ficción higiénica de manos ( véase el numeral 4.3) también se consideran conformes con los requisitos para el lavado quirúrgico de manos (véase el numeral 4. 5. Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus han aprobado el ensayo. 3 min ± 10 s y/o 4 min ± 10 s. Los productos que aprueban el ensayo se pueden describir como preparaciones bactericidas para desinfección quirúrgica de manos y se puede proseguir la evaluación adicional para determinar su eficacia en las condiciones que simulan las prácticas rutinarias de uso (EN 12791). Los productos que han cumplido con los requisitos para lavado higiénico de manos (véase el numeral 4.2 Se considera que los productos para lavado higiénico de manos que demuestran una reducción de 103 en los recuentos viables en un periodo de 1 min ± 5 s a 20 °C en las condiciones definidas por este ensayo cuando los organismos de ensayo son Eschericia coli.7. Pseudomonas aeruginosa.7 CONCLUSIÓN NTC 5732 5. 5. Si el fabricante recomienda tiempos de exposición inferiores a 1 minuto. Pseudomonas aeruginosa. Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus.5).

se deben suministrar detalles completos de los ensayos para la validación del neutralizador. fabricante. concentraciones del producto para ensayo. e) Resultados de ensayo: ensayos de validación. temperatura de ensayo. También se deben indicar todos los detalles de procedimiento que se realizaron para justificar el uso del método de filtración por membrana.8 INFORME DE ENSAYO NTC 5732 El informe debe hacer referencia a esta norma. si se utilizó el método de filtración por membrana. diluyente para usar con el producto recomendado por el fabricante. Método de ensayo y su validación: si se utilizó el método de dilución-neutralización. se deben suministrar detalles completos de los ensayos para la validación del método.2).NORMA TÉCNICA COLOMBIANA 5. valuación de la actividad bactericida (véanse también las Tablas D. El informe de ensayo debe indicar como mínimo la siguiente información: a) b) Identificación del laboratorio que realiza el ensayo. fecha de entrega. tiempos de contacto. Identificación de la muestra: 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) c) nombre del producto. - d) Condiciones experimentales: 1) 2) 3) 4) 5) 6) período de análisis.1 y D. 18 . temperatura de incubación. número del lote. procedimiento de recuento. condiciones de almacenamiento. principios activos y sus concentraciones .

NORMA TÉCNICA COLOMBIANA f) g) NOTA NTC 5732 Conclusión. fecha y firma identificada. 19 . Localidad. En el Anexo D se suministra un ejemplo de un informe de ensayo típico.

se usa el método de filtración por membrana según las indicaciones de véase el Anexo A literal A.2.2. Determine el mayor número de colonias para cada caja.4. Tome una muestra de 1. Incube las cajas durante 24 h adicionales.2.2 Preparación de la suspensión bacteriana Para preparar la suspensión bacteriana.1.5).4.2.1 Método de dilución-neutralización A.4 ENSAYO PARA VALIDACIÓN A.3) fundido y enfriado a 45 °C ± 1 °C. el producto se utiliza sin diluir como la solución de producto para ensayo. Si se utiliza la técnica de siembra en superficie.3.2. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas. prepare una dilución de 10-1 con el diluyente (véase el numeral 5.3.2. Si se utiliza la técnica de siembra en profundidad.0 ml de la mezcla sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5. por cualquier razón.1. no se puedan contar.4. disperse cada muestra de 1.2. neutralizador) a la temperatura de ensayo de 20 °C ± 1 °C 20 . Para el recuento de la suspensión. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.2.2. Vuelva a contar las cajas restantes.0 ml de la dilución de 10-1 en duplicado e inocule usando la técnica de siembra en profundidad o siembra en superficie.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 ANEXO A (Normativo) MÉTODO DE ENSAYO PARA LA VALIDACIÓN DE LOS MÉTODOS DE DILUCIÓNNEUTRALIZACIÓN Y FILTRACIÓN POR MEMBRANA A.1 PRINCIPIO Para cada producto se selecciona un neutralizador según las indicaciones de véase el Anexo A literal A.5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml. prepare una dilución al 55% (V/V) del producto de lavado de manos de ensayo en agua dura (véase numeral 5. Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h.2. Calcule el número de ufc/ml en la suspensión bacteriana (Nv) utilizando el método que se indica en el numeral 5.2. diluya la suspensión bacteriana para ensayo (véase el numeral 5.2. equilibre todos los reactivos (solución del producto para ensayo.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA (véase el numeral 5.1 Generalidades Antes del ensayo. Para productos de fricción de manos. agua.4.7) como solución del producto para ensayo A.6.3 PREPARACIÓN DE LA SOLUCIÓN DEL PRODUCTO PARA ENSAYO Véase el numeral 5.4) para obtener la suspensión bacteriana de 4. A.4) y mezcle (véase el numeral 5. Para productos de lavado de manos.1.1 (véase el numeral 5. vierta con pipeta cada muestra de 1.3) con el diluyente (véase el numeral 5.2. Deseche las cajas que.6).3).4. Si no se puede encontrar un neutralizador adecuado.0 ml de la mezcla en cajas de Petri (véase el numeral 5.2.4. A. suspensión bacteriana para ensayo.2.

10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA (véase numeral 5.2.6) durante unos s.6. Deseche las cajas que.3.0 ml de la mezcla sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5. Incube las cajas durante 24 h adicionales. Deje en el baño de agua a 20 °C ± 1 °C durante un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s (lavado higiénico de manos o fricción higiénica de manos) o 5 min ± 10 s (lavado quirúrgico de manos o fricción de manos quirúrgica).1. A.1.1.4.5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml preparada según se indica en el Anexo A literal A.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 utilizando el baño de agua (véase el numeral 5. literal A.6) durante unos s. Adicione 1.2. no se puedan contar.6) durante unos s. Determine el mayor número de colonias para cada caja.2.0 ml de una suspensión bacteriana diluida que contengan de 4. NOTA 2 Los productos destinados para uso tanto en lavado higiénico de manos como lavado quirúrgico de manos se deberían someter a ensayo únicamente para el tiempo de contacto más prolongado de 5 min. NOTA 1 Al añadir las suspensiones bacterianas a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente.2. Si se utiliza la técnica de siembra en superficie.2.0 ml de la mezcla en duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en profundidad o de siembra en superficie. NOTA 1 Al añadir las suspensiones bacterianas a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente. Al final del tiempo de contacto mezcle (véase el numeral 5. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una. A.2 Validación de las condiciones experimentales (agua dura) seleccionadas (A) Este ensayo de validación se lleva a cabo para productos de lavado de manos únicamente.0 ml de la mezcla en cajas de Petri (véase el numeral 5.2) controlado a 20 °C ± 1 °C. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro y mezcle (véase el numeral 5. Si se utiliza la técnica de siembra en profundidad.5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml preparada según se indica en el Anexo A. disperse cada muestra de 1.0 ml de agua dura (véase el numeral 5.0 ml de neutralizador (véase el numeral 5. Tome una muestra de 1. Vuelva a contar las cajas restantes.3. Deje en el baño de agua a 20 °C ± 1 °C durante un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s (lavado higiénico de manos) o 5 min ± 10 se (lavado quirúrgico de manos.3. los cuales se deben someter a ensayo en una dilución de 55 % (V/V) en agua dura. vierta con pipeta cada muestra de 1.2.2.2.3). Calcule el número de ufc/ml en el control de las condiciones experimentales (agua dura) (A) utilizando el método que se describe en el numeral 5.2.4. Adicione 1.2.2. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro y mezcle (véase el numeral 5.5) en un tubo de ensayo estéril.3 Validación de no toxicidad del neutralizador (B) Coloque 9.3) fundido y enfriado a 45°C ± 1°C. Verifique que la temperatura de los reactivos se estabilice en 20 °C ± 1 °C.2. Coloque 9. 21 .7) en un tubo de ensayo estéril. por cualquier razón. Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h. Repita el procedimiento anterior para cada organismo de ensayo.3.2.3.2. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.0 ml de una suspensión bacteriana diluida que contengan de 4.2.2.

1. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.3.2.0 ml de la solución del producto para ensayo (véase el numeral 5. A.2.1.3.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA (véase el numeral 5.2. Tome una muestra de 1.0 ml de una suspensión bacteriana que contengan de 4.0 ml de la mezcla en cajas de Petri (véase el numeral 5. Si se utiliza la técnica de siembra en superficie.2. Al final del tiempo de contacto mezcle (véase el numeral 5. Tome una muestra de 1. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una. Incube las cajas durante 24 h adicionales.3.5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml preparada según se indica en el Anexo literal A A.0 ml de la mezcla en cajas de Petri (véase el numeral 5. por cualquier razón. NOTA 1 Al añadir las suspensiones bacterianas a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente.2). Vuelva a contar las cajas restantes.3) fundido y enfriado a 45 °C ± 1 °C.2. Calcule el número de ufc/ml en el control de no toxicidad del neutralizador (B) utilizando el método que se describe en el numeral 5. Deje en el baño de agua durante 5 min ± 10 s.0 ml de la mezcla sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5.2. . Adicione 1.2.2. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro y mezcle (véase el numeral 5. Deje en el baño de agua a 20 °C durante 5 min ± 10 s. 22 .3.6) durante unos s.3).0 ml de la mezcla en duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en profundidad o de siembra en superficie Si se utiliza la técnica de siembra en profundidad. Después.2.5) que se ha mantenido previamente en un baño de agua a 20 °C ± 1 °C. vierta con pipeta cada muestra de 1.2.6) durante unos s.2.3) fundido y enfriado a 45 °C ± 1 °C.6) durante unos s. Si se utiliza la técnica de siembra en profundidad. Determine el mayor número de colonias para cada caja. simultáneamente.0 ml de diluyente para la suspensiones bacterianas (véase el numeral 5. encienda el cronómetro y adicione 9.2. Repita el procedimiento anterior para cada organismo de ensayo. Deseche las cajas que. NOTA 2 Los productos de fricción y lavado de manos destinados para uso tanto de tratamiento de las manos poscontaminación como para desinfección de manos quirúrgica se deberían someter a ensayo únicamente para el tiempo de contacto más prolongado de 5 min. disperse cada muestra de 1.2.0 ml de neutralizador (véase el numeral 5. Al final del tiempo de contacto mezcle (véase el numeral 5. no se puedan contar. Deje en el baño de agua a 20°C ± 1°C durante un tiempo de contacto de 1 min ± 5 s (lavado higiénico de manos o fricción higiénica de manos)) o 5 min ± 10 s (desinfección quirúrgica de manos).2.4 Validación de la neutralización del método de dilución-neutralización (C) Coloque 1.2.10) independientes y adicione 12 ml a 15 ml de TSA (véase el numeral 5.4. vierta con pipeta cada muestra de 1.6.0 ml de la mezcla en un tubo de ensayo que contenga 8.4) en un tubo estéril y luego.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 NOTA 2 Los productos de fricción y lavado de manos destinados para uso tanto de tratamiento poscontaminación como para desinfección de manos quirúrgica se deberían someter a ensayo únicamente para el tiempo de contacto más prolongado de 5 min. transfiera 1. Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h.4.2.3.2.0 ml de la mezcla en duplicado e inocule utilizando la técnica de siembra en profundidad o de siembra en superficie.

mezcle (véase el numeral 5.2. Ponga en marcha inmediatamente el cronómetro y mezcle (véase el numeral 5.2. líquido de enjuague) a la temperatura de ensayo de 20 °C ± 1 °C utilizando el baño de agua (véase el numeral 5.7) en un tubo de ensayo estéril. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una. Tome dos muestras de 0. Deseche las cajas que.3.3).2. suspensión bacteriana para ensayo. Al añadir las suspensiones bacterianas a los recipientes se recomienda tener precaución para evitar tocar la parte superior de los lados del recipiente.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Si se utiliza la técnica de siembra en superficie.2.2. Nota 1. 23 . Filtre y enjuague con 50 ml del líquido de enjuague (véase el numeral 5. equilibre todos los reactivos (solución del producto para ensayo. Nota 2. por cualquier razón.1 ml de la suspensión bacteriana y transfiera cada muestra hacia un equipo de filtración por membrana independiente.6) durante unos segundos. Verifique que la temperatura de los reactivos se estabilice en 20 °C ± 1 °C.2.1 Generalidades Antes del ensayo. Coloque 9. Vuelva a contar las cajas restantes.2.0 ml de una suspensión bacteriana diluida que contengan de 4.0 ml de la mezcla sobre una cantidad adecuada de cajas secas que contengan TSA (véase el numeral 5.4. este tiempo se debe registrar en el informe de ensayo. Los productos destinados para uso tanto en lavado higiénico de manos como lavado quirúrgico de manos se deberían someter a ensayo únicamente para el tiempo de contacto más prolongado de 5 min. A.2.2.5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml preparada según se indica en el Anexo A literal A.2. Incube las cajas durante 24 h adicionales.4.2. NOTA 3 Al realizar la transferencia.2 Método de filtración por membrana A.2. Determine el mayor número de colonias para cada caja. Adicione 1. los cuales se deben someter a ensayo en una dilución de 55 % (V/V) en agua dura. Deje en el baño de agua a 20 °C ± 1 °C durante un tiempo de contacto de 1 minuto ± 5 s (lavado higiénico de manos) o 5 min ± 10 s (lavado quirúrgico de manos).2. no se puedan contar. Al final del tiempo de contacto.2. agua.6) y luego transfiera las membranas sobre la superficie de dos cajas individuales de TSA (véase el numeral 5.6) durante unos s.0 ml de agua dura (véase el numeral 5. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.3.2.2) controlado a 20 °C ± 1 °C. Calcule el número de ufc/ml en el control del método de dilución-neutralización (C ) utilizando el método que se describe en el numeral 5.6. que disponga de una membrana y que contenga 50 ml del líquido de enjuague (véase el numeral 5.2. Si es superior a 1 min. A. Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h.3. El tiempo necesario para transferir y filtrar no debería exceder 1 min. Repita el procedimiento anterior para cada organismo de ensayo.3).2 Validación de las condiciones experimentales (agua dura) seleccionadas (A) Este ensayo de validación se lleva a cabo para productos de lavado de manos únicamente.4.1. disperse cada muestra de 1.2.5). se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en la cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no queda aire atrapado entre la membrana y la superficie del agar.

Filtre y enjuague la membrana con no menos de 150 ml y no más de 500 ml del líquido de enjuague (véanse los numerales 5.1 ml de una suspensión bacteriana diluida que contengan de 4.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Incube las cajas a temperatura de 36 C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h.2.2. este tiempo se debe registrar en el informe de ensayo. Deseche las cajas que.1. Determine el mayor número de colonias para cada caja.1 ml de la suspensión bacteriana diluida que contenga de 1 x 102 ufc/ml a 3 x 102 ufc/ml preparada según se indica en el literal A. Vuelva a contar las cajas restantes. Filtre y enjuague con 50 ml del líquido de enjuague (véanse los numerales 5. Al final del tiempo de contacto mezcle (véase el numeral 5. que disponga de una membrana independiente. por cualquier razón.6) durante unos s.5 x 102 ufc/ml a 3 x 103 ufc/ml preparada según se indica en el literal A. El tiempo necesario para transferir y filtrar no debería exceder 1 minuto. A. que disponga de una membrana independiente . Realice el recuento recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.0 ml de la solución del producto para ensayo (véase el numeral 5. Mezcle y deje en el baño de maría a 20 °C durante 5 min ± 10 s. no se puedan contar.4. 24 .5 y 5.2. simultáneamente. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas. no se puedan contar.3) en un tubo estéril y luego. Incube las cajas durante 24 h adicionales.1.5 y 5.4.6).2 y transfiera cada muestra hacia un equipo de filtración con una capacidad mínima de 50 ml.2.3).2.2). No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas.1 ml de la mezcla y transfiera cada muestra hacia un equipo de filtración con una capacidad mínima de 50 ml. Al realizar la transferencia.2. se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en la cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no quede aire atrapado entre la membrana y la superficie del agar. Si es superior a 1 minuto.2. Luego cubra las membranas con 150 ml de líquido de enjuague y adicione 0.6. Tome dos muestras de 0.6.2.2. Deseche las cajas que. Determine el mayor número de colonias para cada caja.2. Repita el procedimiento anterior para cada organismo de ensayo. Vuelva a contar las cajas restantes. Repita el procedimiento anterior para cada organismo ensayo A.3.3 Control del procedimiento de filtración (B) Tome dos muestras de 0. Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h.2.2.2.0 ml de diluyente para las suspensiones bacterianas (véase el numeral 5.6) y luego transfiera las membranas sobre la superficie de dos cajas individuales de TSA (véase el numeral 5. Incube las cajas durante 24 h adicionales.2. Calcule el número de ufc/ml en el control de las condiciones experimentales (agua dura) (A) utilizando el método que se describe en el numeral 5. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.4.2.2. active el cronómetro y adicione 9.2. Nota. por cualquier razón. Calcule el número de ufc/ml en el control del procedimiento de filtración (B) utilizando el método que se describe en el numeral 5.4 Validación de la neutralización mediante el método de filtración por membrana (procedimiento de filtración) Coloque 1.2.

2. Determine el mayor número de colonias para cada caja. Si es superior a 1 minuto. Realice el recuento de las cajas y determine el número de unidades formadoras de colonias en cada una.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Transfiera las membranas sobre la superficie de dos cajas individuales de TSA (véase el numeral 5. Deseche las cajas que.2. por cualquier razón. Repita el procedimiento anterior para cada organismo de ensayo.1. se debe tener precaución para garantizar que las bacterias se encuentran en la cara superior de la membrana cuando se coloca sobre el TSA y que no queda aire atrapado entre la membrana y la superficie del agar.6. No vuelva a contar las cajas que ya no presentan colonias bien separadas. Calcule el número de ufc/ml en el control del método de filtración por membrana (C) utilizando el método que se describe en el numeral 5. 25 . A. Vuelva a contar las cajas restantes. no se puedan contar. El tiempo necesario para transferir y filtrar no debería exceder 1 min.5 Validación Verifique que los resultados de ensayo cumplen con los requisitos correspondientes de los numerales 5.2.3). Incube las cajas durante 24 h adicionales.6.2.2 o 5.6. Incube las cajas a temperatura de 36 °C ± 1 °C (o 37 °C ± 1 °C) durante 24 h. NOTA Al realizar la transferencia.1. este tiempo se debe registrar en el informe de ensayo.

NOTA La siguiente lista no es exhaustiva y se pueden probar otros medios. Tabla B. para la neutralización completa) polisorbato 80 a) (30 ml) + lecitina de huevo (3 g) + histidina (1 g) + tiosulfato de sodio (5 g) + albúmina de suero bovino. Ejemplos de neutralizadores Desinfectante Gluconato de clorhexidina Neutralizadores (concentración por litro de fluido o diluyente de muestreo) polisorbato 80 a) (30 ml) + lecitina de huevo (3 g) + histidina (1 g) (puede ser necesario utilizar concentraciones superiores. se puede utilizar cualquiera de los que se indican a continuación.1. Esta información se suministra para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobación de este producto por parte de ICONTEC 26 . hasta cinco veces. no hidrolizado según el documento Farmacopea Europea volumen 1 TWEEN 80® es un ejemplo de un producto adecuado disponible en el comercio. liofilizada (1 g) polisorbato 80 a) (30 ml) + lecitina de huevo (3 g) + histidina (1 g) + tiosulfato de sodio (5 g) amonio polisorbato 80 a) (30 ml) + saponina (30 g) + histidina (1 g) + cisteína (1 g) Compuestos de cloro y yodo povidona Compuestos fenólicos Compuestos cuaternario de a) Con grado analítico.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 ANEXO B (Informativo) NEUTRALIZADORES Cuando se especifica un neutralizador.

5 % (V/V) de polisorbato 80 5).2.1 % (V/V) de polisorbato 80 5).NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 ANEXO C (Informativo) LÍQUIDOS DE ENJUAGUE Se puede utilizar cualquiera de los siguientes líquidos de enjuague: NOTA agua (véase el numeral 5.4). solución acuosa al 0. Esta lista no es exhaustiva y se pueden probar otros líquidos de enjuague. neutralizador (véase el numeral 5. solución acuosa al 0. solución acuosa al 0.07 % de lecitina. soluciones amortiguadoras.2). diluyente (véase el numeral 5.2.5). Esta información se suministra para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobación de este producto por parte de ICONTEC 27 .2. no hidrolizado según el documento Farmacopea Europea volumen 1 TWEEN 80® es un ejemplo de un producto adecuado disponible en el comercio. 5) Con grado analítico.5 % (V/V) de polisorbato 805) 5) y 0.2.2.2.

.................................... 28 .................................................................................................................................................. 1996-02-20 a 1996-03-12 Concentración del producto para ensayo................................................................................... aquellas del fabricante Sustancias activas y sus concentraciones (opcional) ..NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 ANEXO D (Informativo) EJEMPLO DE UN INFORME DE ENSAYO TÍPICO Actividad bactericida de un producto de lavado higiénico de manos destinado para el tratamiento postcontaminación de las manos 1..... Conclusión Según el documento EN 12054..... Localidad..... Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442.............. lecitina................... esterilizada en autoclave 4.... 36 °C ± 1 °C 5.............. 6............................. 1996-05-11 Condiciones de almacenamiento ........................ 96-71-51 Fabricante ..... el número de lote y el fabricante se suministran únicamente como ejemplos imaginarios.................................................. Identificación de la muestra Nombre del producto......... 20 °C ± 1 °C Tiempo de contacto ......................... Método de ensayo y su validación Método ....................................... producto diluido al 55 % (V/V) en agua dura Temperatura de ensayo .......... Condiciones experimentales Período de análisis ......................... siembra en superficie Temperatura de incubación ................... 7............................ Lavado de manos Bacticen Número de lote ................ Fecha de entrega .. Staphylococcus aureus ATCC 6538 y Enterococcus hirae ATCC 10541 en un tiempo de contacto de 1 minuto acorde con los requisitos para un producto de lavado higiénico de manos..... dilución-neutralización Neutralizador ......................................... Centipede Formulations Inc.................... agua dura 3......... fecha y firma identificada NOTA El producto........................... el lote 96-71-51 del producto "lavado de manos Bacticen" tiene una actividad bactericida para las cepas indicadas de Escherichia coli (K 12) NCTC 10538.. Resultados de ensayo Véanse las Tablas D... 1 minuto Procedimiento de recuento ........1 y D......... 30 g/l......................... Identificación del laboratorio de ensayo Besson Test House 2......2.... no se indican Diluyente para uso con el producto recomendado por el fabricante ..............................................

La neutralización se valida con el neutralizador que se ensaya. B) Validación de las condiciones experimentales (agua dura) Organismo de ensayo Recuentos de colonias por caja (cantidad promedio de ufc) Suspensión bacteriana para Ensayo experimental con ensayo (véase el numeral agua dura 5. 149 139. 9 143 . 98 2. 150 135. 141 139.8 x 1 03 1. 148 Staphylococcus aureus (N = 148) (A = 145) 143. B es mayor a 0. Tabla D.5 veces N. 143 129. 124 Escherichia coli (N = 146) (B = 137) (C = 122) 149.1. 131 Pseudomonas aeruginosa (N = 146) (B = 137) (C = 130) 142.45 x 10 7 1. Verificación de la metodología y la validación del método de dilución-neutralización A) validación del método de dilución-neutralización Organismo de ensayo Recuentos de colonias por caja (cantidad promedio de ufc) Suspensión bacteriana Validación de la neutralización para ensayo (véase el numeral 5. 11 1. 150 146.1.4) Control Ensayo 149. 140 128. Resultados de ensayo para el producto de lavado de manos diluido al 55% en agua dura Organismo de ensayo Muestra de ensayo Recuento de colonias por caja después de 1 min de contacto ufc/ml de la mezcla de ensayo Recuento inicial (N) En tiempo de contacto de 1 min (C) 1.4) 149.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 Tabla D.5 veces B. 140 143. 147 142.04 x 103 2. >300 29 .12 x 103 Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli dilución 10-2 dilución 10-3 dilución 10 -3 dilución 10 dilución 10-2 dilución 10-3 dilución 10-2 dilución10-3 -2 110 .48 x 10 7 1.139 19 . El método se valida para la condiciones experimentales de la dilución del producto al 55 % (V/V) en agua corriente. A es mayor a 0. 29 114 . 139 120.2.4. 110 10 .5 veces N. 142 Escherichia coli (N = 146) (A = 144) 149. 147 Pseudomonas aeruginosa (N = 146) (A = 143) 142. 147 135. C es mayor a 0.46 x 10 7 Enterococcus hirae 1.4. 141 133. 149 134. 121 Staphylococcus aureus (N = 148) (B = 139) (C = 125) 143. 145 Enterococcus hirae (N = 145) (A = 142) Para las cepas sometidas a ensayo: N y A está entre 100 ufc y 300 ufc.41 x 103 29 .0 >300 .1.46 x 107 1. 131 Enterococcus hirae (N = 145) (B = 137) (C = 137) Para las cepas sometidas a ensayo: N y B están entre 100 ufc y 300 ufc.

55 3320 8192 Escherichia coli: Staphylococcus aureus: Enterococcus hirae: 30 .NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 ANEXO E (Informativo) CEPAS DE REFERENCIA CORRESPONDIENTE EN OTRAS COLECCIONES DE CULTIVO Pseudomonas aeruginosa: ATCC CIP DSM NCIMB ClP NCTC NCIMB ATCC CIP DSM NCTC NCIMB ATCC CIP DSM NCIMB 15442 103467 939 10421 54.117 10538 10083 6538 4.83 799 10788 9518 10541 58.

otros ensayos de laboratorio de fase 2/etapa 2. los productos desinfectantes y antisépticos químicos se deberían someter a un programa específico de ensayo que incluya ensayos de fase 1. a) b) c) d) - e) Se acepta que para algunas aplicaciones. por ejemplo ensayos de superficies. ensayo de suspensión de fase 2/etapa 1 bajo las condiciones representativas del uso práctico.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5732 ANEXO F (Informativo) INFORMACIÓN SOBRE LA APLICACIÓN Y LA INTERPRETACIÓN DE LAS NORMAS EUROPEAS SOBRE DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS El comité CEN/TC 216 quiere llamar la atención del lector de esta norma a los acuerdos logrados con respecto a la relación entre esta norma y normas futuras. “Las recomendaciones de uso” deben estar soportadas por los resultados de los ensayos en fase 3. Se recomienda tener en cuenta esta información cuando se utilizan las Normas Europeas sobre desinfectantes y antisépticos químicos. los cuales son apropiados para el campo de aplicación y el método de aplicación. Para tal fin. los ensayos de fase 2/etapa 1 y fase 2/etapa 2 pueden suministrar suficiente información para la aplicación particular y que los ensayos adicionales de fase 1 pueden no ser pertinentes. Las diversas fases y etapas se definen así: ensayo de suspensión de fase 1 para la actividad básica del producto. fungicidas. F. 31 . Tales aplicaciones estarán indicadas en la propia norma o en la norma adicional que especifica las directrices para la aplicación e interpretación de los ensayos. excepto para las situaciones que se indican en los ítems e). se recomienda indicar la justificación para omitir los ensayos de fase 1. f) y g).1 GUÍA GENERAL PARA LA APLICACIÓN E INTERPRETACIÓN DE LOS MÉTODOS DE ENSAYO SEGÚN LAS NORMAS EUROPEAS PARA DESINFECTANTES Y ANTISÉPTICOS QUÍMICOS Todas las "recomendaciones de uso" para los productos desinfectantes y antisépticos químicos deberán estar sustentadas por los resultados de ensayos bactericidas. de lavado y fricción de manos que simulen las condiciones prácticas. fase 2/etapa 1 y fase 2/etapa 2. esporicidas y virucidas de EN que sean adecuados para el campo y el método de aplicación previstos. ensayos de campo de fase 3 bajo condiciones prácticas. Para las aplicaciones en las que se utilizan los ensayos de fase 2/etapa 1 y fase 2/etapa 2 sin ensayos de fase 1 para sustentar las recomendaciones de uso.

h) Todas las declaraciones de bactericidas.NORMA TÉCNICA COLOMBIANA f) NTC 5732 Se acepta que para algunas aplicaciones. se recomienda indicar la justificación para omitir los ensayos de fase 2/etapa 2. Tales aplicaciones estarán indicadas en la propia norma o en la norma adicional que especifica las directrices para la aplicación e interpretación de los ensayos. Tales aplicaciones pueden estar indicadas en el "método estandar" o en la norma para la aplicación e interpretación de los ensayos. Para las aplicaciones en las que se utilizan los ensayos de fase 2/etapa 2 sin ensayos de fase 2/etapa 1 para sustentar las recomendaciones de uso. F. esporicidas como "sustancias bioactivas" deben estar sustentadas por ensayos de fase 1 adecuados. Para las aplicaciones en las que se utilizan los ensayos de fase 2/etapa 1 sin ensayos de fase 2/etapa 2 para sustentar las recomendaciones de uso. los ensayos de suspensión de fase 2/etapa 1 pueden suministrar suficiente información para la aplicación particular y que los ensayos adicionales de fase 2/etapa 2 pueden no ser pertinentes. g) Se acepta que para algunas aplicaciones los ensayos de fase 2/etapa 2 junto con ensayos de fase 1 pueden suministrar suficiente información para la aplicación particular y que los ensayos adicionales de fase 2/etapa 1 pueden no ser pertinentes. fungicidas.2 Guía para la interpretación de los ensayos para desinfectantes y antisépticos químicos Se elaborará una norma (o normas) independiente que será utilizada como "guía para la interpretación de los ensayos para desinfectantes y antisépticos químicos" después de que se pacten los métodos de ensayo normales. se recomienda indicar la justificación para omitir los ensayos de fase 2/etapa 1. el propósito de esta norma será especificar en detalle la relación entre los diversos ensayos entre sí y con las recomendaciones de uso. 32 .

NORMA TÉCNICA COLOMBIANA DOCUMENTO DE REFERENCIA NTC 5732 EUROPEAN COMMITTEE FOR STANDARDIZATION. (prEN 12054:2001 E) 33 . Quantitative Suspension Test for the Evaluation of Bactericidal Activity of Products for Hygienic and Surgical Handrub and Handwash Used in Human Medicine. Bélgica. Bruselas. EUROPEAN STANDARD. Chemical Disinfectants and Antiseptics. 2001. Test Method and Requirements (Phase 2/step 1). 31 p.

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