Universidad Galileo

Microbiologia Aplicada I
1.- DEFINIR BIORREMEDIACIÓN Y BIODEGRADACIÓN

2.- RECONOCER LA IMPORTANCIA DE LA BIORREMEDIACIÓN

3.- MENCIONAR LOS DIFERENTES TIPOS DE BIORREMEDIACIÓN

4.- EXPLICAR QUE ES EL PROCESO DE BIOVENTING

5.- EXPLICAR QUE SON LAS BIOPILAS

6.- EXPLICAR EL PROCESO DE ATENUACIÓN NATURAL

7. RECONOCER LOS FUNDAMENTOS Y LIMITACIONES DEL PROCESO

1. INTRODUCCION

2. BIORREMEDIACION

A) BIOVENTING
3. TIPOS DE BIORREMEDIACIÓN B) PILAS
C) ATENUACION NATURAL

4. FUNDAMENTOS DE LA BIODEGRACION

5. FACTORES LIMITANTES

6. MICROBIOS DEGRADADORES DE PETROLEO

El aumento de la población y el desarrollo industrial sin precedentes
alcanzados durante el siglo XX han elevado la presencia de
contaminantes sólidos y líquidos a niveles críticos.

La consecuencia ha sido la aparición de problemas de

contaminación que antes se desconocían y para los cuales la
sociedad no estaba preparada.
 La industria química produce gran cantidad de compuestos
xenobióticos, cuya estructura química difiere de los compuestos
organicos naturales.

Algunos de estos compuestos xenobióticos, con grupos

halógenos y nitrogenados, utilizados como propelentes,
refrigerantes, disolventes, bifenoles policlorados(PCB),
plásticos, detergentes, explosivos y plaguicidas, son
resistentes (recalcitrantes) a la biodegradación.
 Otros se degradan muy lentamente, de modo
co-metabólico sólo en presencia de un segundo
sustrato, que es empleado como fuente primaria de
energía, o dan lugar a residuos ,a veces poliméricos,
peligrosos para el ambiente.

Algunos de los xenobióticos más recalcitrantes sufren un

proceso de biomagnificación en las redes tróficas.
Este proceso se inicia con los microorganismos y causa la
acumulación del xenobiótico en los niveles tróficos superiores,
donde provoca graves daños ecológicos.
 Aunque los hidrocarburos del petróleo no sean xenobióticos, su
uso a gran escala y los vertidos accidentales como el caso del
Prestige han provocado daños ambientales graves.

La compresión científica de estos fenómenos complejos y

del papel que los microorganismos desempeñan en ellos es
esencial para prevenir o controlar los daños que pueden
ocasionar los vertidos o fugas de hidrocarburos y
xenóbioticos.
 La degradación de estos contaminantes es un proceso
que se puede dar de forma natural por los microorganismos
autóctonos de la zona contaminada siempre que tengan las
vias metabólicas apropiadas..

Para mejorar estas posibilidades que los

microorganismos nos pueden ofrecer se están
desarrollando tecnologías basadas en el uso de los
microorganismos con amplias capacidades
biodegradadoras para su uso en la prevención y
remediación de la contaminación.
 LA BIORREMEDIACIÓN UTILIZA LA CAPACIDAD NATURAL DE
LOS ORGANISMOS COMO BACTERIAS, HONGOS, LEVADURAS O
PLANTAS QUE ACUMULAN O DEGRADAN LOS ELEMENTOS
TOXICOS EN EL AMBIENTE.
LOS SISTEMAS DE BIORREMEDIACION CONSISTEN PRINCIPALMENTE
EN EL USO DE MICROORGANISMOS NATURALES
(LEVADURAS, HONGOS O BACTERIAS) EXISTENTES EN EL
MEDIO AMBIENTE PARA DESCOMPONER O DEGRADAR
SUSTANCIAS PELIGROSAS EN SUSTANCIAS DE
CARÁCTER MENOS TÓXICO O BIEN INOCUAS
PARA EL MEDIO AMBIENTE Y LA SALUD HUMANA

Derrame de petróleo
 LA BIORREMEDIACION O MEDIDAS BIOCORRECTIVAS SE HAN
VENIDO UTILIZANDO EN LA DESCONTAMINACIÓN DE SUELOS Y
AGUAS CONTAMINADAS CON HIDROCARBUROS DESDE
HACE MUCHOS AÑOS CON BASTANTE EXITO.

ESTAS TÉCNICAS BIOLÓGICAS PUEDEN SER

DE TIPO:
1) AEROBICO ( EN PRESENCIA DE
OXÍGENO) O
2) ANAEROBICO (EN AUSENCIA DE
OXÍGENO)
EXISTEN TRES TIPOS DE BIORREMEDIACION DE
TIPO AEROBICO:

BIOVENTING – Ventilación forzada

del aire en el suelo.

BIOPILAS – Compostaje de suelos

ATENUACIÓN NATURAL – Biorrecu-

peración natural del suelo.
 Estos sistemas de descontaminación se basan en la digestión de las
sustancias orgánicas por los microorganismos, de la cual obtienen la
fuente de carbono necesaria para el crecimiento de sus células y una
fuente de energía para llevar a cabo todas las funciones metabólicas
que necesitan sus células para su crecimiento

Para que estos procesos metabólicos

se lleven a cabo, y puedan ser
utilizados como una técnica
remediativa, será necesario que existan
en el medio unas condiciones fisico-
químicas óptimas
En general, se necesitará la existencia
de determinadas poblaciones de
microorganismos autóctonos
capaces de utilizar los hidrocarburos
como fuente nutricional y de energía
Para el diseño de estos sistemas de tratamiento se llevan a
cabo varias etapas de trabajo:

– Investigación y caracterización de la contaminación

– Análisis y elección de las medidas biocorrectivas

– Evaluación de la efectividad del sistema elegido

– Diseño y evaluación del sistema

– Evaluación del control y seguimiento

– Análisis e interpretación de resultados

 La técnica del bioventing es un tratamiento de biorrecuperación
de tipo “in situ”, consistente en la ventilación forzada del suelo
mediante la inyección a presión de oxígeno (aire) en la zona no
saturada del suelo a través de pozos de inyección.

Debido a la aireación del suelo se va a favorecer la degradación

de los hidrocarburos por dos motivos:

- por volatilización, facilitando la migración de la fase volátil de

de los contaminantes y

- por biodegradación, ya que al incrementar la oxigenación del

suelo se va a estimular la actividad bacteriana.
Los factores a tener en cuenta en la aplicación del bioventing o inyección de aire natural
son:

– Se degradarán más fácilmente las moléculas más pequeñas (hasta C20), siendo más
fácilmente biodegradables los compuestos parafinados o de cadena lineal que los
compuestos aromáticos. En general, son favorables los compuestos de alta volatilidad
(presión de vapor mayor de 10 mm de Hg a 20ºC).

– Los suelos deben contener bajos contenidos en arcilla y ser lo más homogéneamente
posible, con un valor de permeabilidad al aire adecuado (> 10-10 cm2).

– El principal problema es la biodisponibilidad de losmicroorganismos. Cuanto menor

es la solubilidad de los contaminantes menor será la biodisponibilidad.

– Los aportes de oxígeno deben ser suficientes, así como la existencia de fuentes de
carbono, aceptores de electrones y energía suficientes
– No debe existir producto libre en flotación sobre el nivel freático.

– Deben existir unas condiciones óptimas de pH (6 y 8), de humedad (12-30% en peso),

potencial redox mayor de -50 mV, temperatura entre 0 y 40 ºC y los nutrientes del
suelo en relación N:P de 10:1.

– Necesidad de tiempos de actuación cortos (meses) y coste medio-alto

Derrame de petróleo
 A continuación hay un esquema que ilustra un ejemplo de
biorremediación in situ de un acuífero contaminado por hidrocarburos.
Biorremediación in-situ: se intenta acelerar el proceso en el mismo
ambiente modificando las condiciones ambientales o por inoculación
microbiana.
La técnica de biopilas es un tratamiento de biorrecuperación de tipo “ex situ”

La técnica consiste en la formación de pilas de material biodegradable de

dimensiones variables, formadas por suelo contaminado y materia orgánica
(compost) en condiciones favorables para el desarrollo de los procesos de
biodegradación de los contaminantes.

Estas pilas de compost pueden ser aireadas de forma activa, volteando la pila, o
bien de forma pasiva, mediante tubos perforados de aireación.
Entre los factores que influyen en la aplicación de las biopilas destacan:

– Los hidrocarburos deben ser no halogenados y deben encontrarse en el suelo

en concentraciones menores a 50.000 ppm.

– Dada la necesidad de excavación y posterior depósito del suelo contaminado,

se requiere una superficie de trabajo relativamente grande cuyas dimensiones
dependen del volumen de suelo a tratar.

– Necesidad de una densidad de poblaciones microbianas (>1.000 CFU/gramo

de suelo), condiciones de humedad (40-85% de capacidad de campo),
teperatura (10 y 45ºC), textura (baja proporción de arcillas), pH del suelo
adeciadas (6 y 8) y baja presencia de metales pesados (< 2.500 ppm).
Entre los factores que influyen en la aplicación de las biopilas destacan:
(continuación)
– La concentración de nutrientes en el suelo cuyo rango normal de C:N:P sea
de 100:10:1.

– El tiempo de actuación puede ser alto (meses a años) y el costo bajo.

Su característica principal es la utilización de los procesos fisico-quimicos de
interacción contaminante-suelo y los procesos de biodegradación que tienen
lugar de forma natural en el medio. Estos procesos se conocen como procesos
de biotransformación natural
 También se conoce como:

Biorremediación intrínseca: se deja que el propio ambiente natural

resuelva el problema si se determina que en el propio ambiente hay las
poblaciones y condiciones optimas( temperatura, pH, nutrientes etc...).
Aún así se sigue un control para asegurarse que no se producen
compuestos tóxicos secundarios. A continuación se muestra una figura
que esquematiza los procesos de degradación intrínseca que dispone
el ambiente:
 Los procesos de biotransformación natural son aquellos que van a reducir la
concentración de los contaminantes y entre los que se encuentran la dilución,
dispersión, volatilización, adsorción, biodegradación y aquellas reacciones
químicas que se producen en el suelo o en el agua y que contribuyen de
alguna forma a la disminución de la contaminación.

Esta técnica se aplica en aquellos casos en los que exista contaminación

tanto en suelos como aguas subterráneas producida por hidrocarburos de
tipo halogenado o no halogenado.
Entre los factores que influyen en la eficacia y viabilidad de la atenuación
natural se destacan:

– La exigencia de protección y el riesgo de los potenciales receptores durante el

tiempo que dura la atenuación.

– La existencia de unas condiciones geológicas y geoquímicas favorables.

– Las necesidades de reducción de la masa contaminante en un intervalo

razonable de tiempo (meses a años), tanto en la superficie del suelo como en
la zona más subsuperficial del mismo, así como de la calidad de las aguas
subterráneas.

– Confirmación de la existencia de los tipos y número de poblaciones de

microorganismos que puedan biodegradar los contaminantes.
 Entre los factores que influyen en la eficacia y viabilidad de la
atenuación natural se destacan: (continuación)

– Producción y conservación en el medio de subproductos de carácter persistente o

más tóxicos que los iniciales, durante y después de la atenuación natural.

– No existencia de producto libre en flotación sobre el nivel freático

– Para condiciones aerobias la condición ambiental óptima de concentración de

oxígeno disuelto en el agua debe ser superior a 0,5 mg/l.
– La concentración de los compuestos utilizados como aceptores de electrones en
condiciones anaerobias debe ser superior a 0,21 mg/l para nitratos, la de Fe3+
para que pueda ser reducido a Fe2+ debe ser superior a 21,8 mg/l y la de
sulfatos mayor de 0,21 mg/l.
 Entre los factores que influyen en la eficacia y viabilidad de la
atenuación natural se destacan: (continuación)

– El potencial redox debe estar situado entre un rango de -400 y 800 mV.

– Existencia de un coeficiente de retardo favorable para que se produzcan los

fenómenos de sorción con suficiente eficacia.

– Que se produzca una dilución suficiente para que la concentración se vea

disminuida aguas abajo del foco contaminante.

– La dispersión de los contaminantes aguas abajo del foco y en la dirección de flujo

debe ser adecuada para que exista una mayor disponibilidad proporción entre los
contaminantes y los aceptores de electrones.
 FUNDAMENTO BIOQUÍMICO DE LA
BIODEGRADACIÓN

El fundamento bioquímico de la biorremediación se basa en que en la

cadena respiratoria, o transportadora de electrones de las células,
se van a producir una serie de reacciones deóxido-reducción cuyo
fin es la obtención de energía.

La cadena la inicia un sustrato orgánico (compuestos

hidrocarburados) que es externo a la célula y que actúa
como dador de electrones, de modo que la actividad metabólica
de la célula acaba degradando y consumiendo dicha sustancia.
 FUNDAMENTO BIOQUÍMICO DE LA
BIODEGRADACIÓN
Los aceptores más comúnmente utilizados por los
microorganismos son el oxígeno, los nitratos, el hierro (III),
los sulfatos y el dióxido de carbono.

Cuando el oxígeno es utilizado como aceptor de electrones la

respiración microbiana se produce en condiciones aerobias,
y los procesos de biodegradación serán de tipo aerobio;

sin embargo, si utiliza los sulfatos o el dióxido de carbono se

produce en condiciones reductoras o anaerobias, y los
procesos de biodegradación serán de tipo anaerobio

Degradación aerobia:
Sustrato + O2  biomasa + CO2 + H2O

Degradación anaerobia:
Sustrato + (NO3-, SO42-, Fe3+, Mn4+, CO2)  Biomasa + CO2 + (N2, Mn2+, S2+, Fe2+, CH4)
 FUNDAMENTO BIOQUÍMICO DE LA
BIODEGRADACIÓN

La concentración y composición de la comunidad

microbiana y la tasa de transformación de contaminantes
está influenciada por diversos factores:

1.- NECESIDAD DE NUTRIENTES. Los nutrientes necesarios para

el desarrollo de los microbios son el fósforo y el nitrógeno. Por
lo general suelen estar presentes en el suelo en cantidades
suficientes, si no los hay es necesario añadirlos al suelo.

2.- pH DEL SUELO. El crecimiento de la mayoría de los

microorganismos es máximo dentro de un intervalo de
pH entre 6 y 8.
3.- TEMPERATURA. Generalmente las bacterias y los hongos
crecen bien a temperaturas entre los 15 y los 45 oC. Decreciendo
a temperaturas por encima de los 45 o inferiores o inhibiéndose
a temperaturas inferiores a los O oC.
 FUNDAMENTO BIOQUÍMICO DE LA
BIODEGRADACIÓN

4.- HUMEDAD : los microorganismos requieren unas condiciones

mínimas de humedad para su desarrollo. Un exceso de humedad
puede reduce la concentración de oxígeno en el suelo inhibiendo
el crecimiento bacteriano.

5.- ESTRUCTURA QUIMICA DEL HIDROCARBURO. Los factores

que más afectan son la existencia de ramificaciones, la poca
solubilidad en el agua y la carga atómica.
 Al estudiar la biorremediación hay que tener en
cuenta otros factores que puedan influir
en el rendimiento

Es decir no sirve de nada tener una cepa maravillosa con una

alta eficiencia degradadora y que conozcamos muy bien su
regulación si hay factores que limiten su verdadera
potencialidad degradadora.

Por lo tanto a parte de la eficiencia de las rutas catabólicas y los

procesos microbianos de re-mineralización hay que tener en cuenta
que la etapa limitante de la biodegradación o detoxificación de la
mayoría de compuestos en el medio ambiente se relacionan con la
biodisponibilidad.
 Por eso en este capítulo vamos a tratar dos características
microbianas que pueden aumentar esta biodisponibilidad y
podrían ser utilizadas en técnicas de biorremediación.

1.- PRODUCCIÓN DE BIOSURFACTANTES

2.- PAPEL DE LA QUIMIOTAXIS

Es evidente que si el sustrato no es disponible para la célula esta no

lo podrá utilizar como sustrato y desgraciadamente esto es lo que sucede con
los hidrocarburos que son altamente insolubles en agua o pueden hacer
uniones hidrofóbicas con substratos ( rocas) haciendo difícil su eliminación.
 Como hemos dicho los hidrocarburos son moléculas
muyhidrofóbicas que forman micelas entre ellas altamente
insolubles en agua. Esto hace que la superficie de actuación que
tienen los microorganismos diminuya mucho, por lo tanto disminuye
la biodisponibilidad del sustrato.

Y es que un paso esencial en la degradación de hidrocarburos

es que estos entren en contacto directo con la membrana para
que sea interiorizado y puedan actuar las oxigenasas.

Por eso dentro de la versatilidad microbiana no es sorprendente que

algunos microorganismos puedan producir una gran variedad de
moléculas emulsionantes ( biosurfactantes) que como se ha
demostrado estimula el crecimiento de estas bacterias degradadoras
acelerando por tanto la biorremediación.
La función principal de estos biosurfactantes son:

- Reducir las tensiones entre-fases ( agua-roca por ejemplo).

-Dispersar el petróleo aumentando la superficie de contacto

- Aumentan la biodisponibilidad de compuestos hidrofóbicos.

- También tiene funciones evolutivas para los propios

microorganismos.
 La quimiotaxis es la habilidad que tienen algunos microorganismos
flagelados para detectar y responder a compuestos ambientales. Su
respuesta puede ser positiva si se dirige hacia el estímulo
(presencia de alimento) negativa si se aleja del estímulo (sustancias
tóxicas o desagradables).

En que aspectos podría la quimiotaxis acelerar el proceso de

biorremediación……

la razón mas obvia es que estas cepas serán capaces de entrar en

contacto con el compuesto a degradar reduciendo problemas de
biodisponibilidad.
 Bacterias Hongos
Achrornobacter Leumthrix Allescheria Oidiodendrum
Acinetobacter Moraxella Aspergillus Paecylomyses
Actinomyces Nocardia Aureobasidium Phialophora
Aeromonas Peptococcus Botrytis Penicillium
Alcaligenes Pseudomonas Candida Rhodosporidium
Arthrobacter Sarcina Cephalosporium Rhodotorula
Bacillus Spherotilus Cladosporium Saccharomyces
Beneckea Spirillum Cunninghamella Saccharomycopisis
Brevebacterium Streptomyces Debaromyces Scopulariopsis
Coryneforms Vibrio Fusarium Sporobolomyces
Erwinia Xanthomyces Gonytrichum Torulopsis
Flavobacterium Hansenula Trichoderma
Klebsiella Helminthosporium Trichosporon
Lactobacillus Mucor

Todos los ecosistemas acuáticos y marinos contienen algún tipo de microorganismos

degradadores de petróleo