ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

Integrantes: CLARA ANGULO DAZA DAYANA BURGOS FLOREZ JULIO CORDERO DANIEL PEREZ ISAZA

Profesor: (Bilogo) LUIS ALFONSO CAUSIL VARGAS

UNIVERSIDAD DE CORDOBA FACULTAD DE MVZ PROGRAMA MVZ ASIGNATURA BIOLOGIA CELULAR LABORATORIO GRUPO

INTRODUCCIN

El ser humano posee el sentido de la vista desarrollado. Sin embargo, no se pueden ver a simple vista cosas que midan menos de una dcima de milmetro. Y muchos de los avances en qumica, biologa y medicina no se hubieran logrado si antes no se hubiera inventado el microscopio. El primer microscopio fue inventado, por una casualidad en experimentos con lentes, lo que sucedi de similar manera pocos aos despus con el telescopio de Hans Lippershey (1608). Entre 1590 y 1600, el ptico holands Zacharas Janssen (1580-1638) invent un microscopio con una especie de tubo con lentes en sus extremos, de 8 cm. de largo soportado por tres delfines de bronce; pero se obtenan imgenes borrosas a causa de las lentes de mala calidad. Estos primeros microscopios aumentaban la imagen 200 veces. Estos microscopios pticos no permiten agrandar la imagen ms de 2000 veces. En la actualidad los de efecto tnel los amplan 100 millones de veces. El progreso de la ciencia depende de la formulacin de ideas y del desarrollo de las herramientas de trabajo. El trabajo que se planteo fue con una de las importantes herramientas del campo de la biologa y de la medicina, todo esto con el fin y la idea de demostrar cmo ha sido usado este instrumento a travs del tiempo para explorar nuevas ideas y responder viejas preguntas, y al mismo tiempo generar ideas e interrogantes. Nos referimos al microscopio ptico que por ms de dos siglos ha sido la principal herramienta del investigador.

OBJETIVOS

Objetivos generales: Iniciar al estudiante en el rea de microscopia, para manejar y evaluar conceptos, principios y tcnicas de informacin con el uso del microscopio. Aplicar los conocimientos acerca del microscopio para la realizacin de enfoques de muestras biolgicas con los diferentes tipos de objetivos. Reconocer las diferentes partes y sus funciones en el microscopio Objetivos especficos: Valorar la importancia del microscopio como instrumento bsico para el estudio e investigacin e las ciencias biolgicas. Demostrar el dominio y entendimiento el funcionamiento del microscopio, hacindolo relevante para las labores educativas e investigativas. Analizar las potencialidades del microscopio y darles aplicabilidades desde una perspectiva de estudio e investigacin. Lograr la adquisicin de los conocimientos bsicos del microscopio para su aplicacin en el enfoque de muestras biolgicas.

MATERIALES Microscopio ptico compuesto Cinta de enmascarar Porta Objetos y Cubre Objetos Corcho Polvillo de Ala de mariposa lirio Cuchilla delgada Pipeta pasteur Papel absorbente

MARCO TEORICO

CARACTERISTICAS Y FUNCIONAMIENTO DEL MICROSCOPIO Entre los instrumentos pticos conocidos con el nombre de microscopio se incluyen los llamados microscopios simples o lupas, compuestos por una sola lente, o un solo sistema de lentes convergentes; y los microscopios compuestos, cuya parte ptica consta de dos lentes, o dos sistemas de lentes convergentes: ocular y objetivo. El microscopio simple da una imagen aumentada, derecha y virtual. El microscopio compuesto da una imagen aumentada, invertida y virtual. DESCRIPCIN DEL MICROSCOPIO COMPUESTO Partes mecnicas. La base tiene forma de U, sirve para darle estabilidad al instrumento. El brazo sirve para transportarlo y soportar algunas piezas como el tornillo macromtrico (para enfoque aproximado) y el tornillo micromtrico (para enfoque de precisin). A veces estos tornillos estn acoplados en uno solo. La platina es una placa metlica con una perforacin central sobre ella se coloca la preparacin que se va a observar. Generalmente posee un par de pinzas para sostener la lmina y un sistema mecnico denominado carro, para mover la preparacin de derecha a izquierda y de adelante hacia atrs. A veces posee dos escalas que permiten fijar una determinada estructura en la preparacin observada. El tubo ptico tiene como funcin soportar los oculares. El revolver o porta objetivo se encuentra en la parte inferior del tubo ptico y en l se encuentran los objetivos. El condensador: se encuentra debajo de la platina y su funcin es la de soportar las lentes que recogen los rayos luminosos.

Espejo: tiene dos caras una plana y otra cncava. La segunda se usa solo cuando el microscopio no tiene condensador. Partes pticas. El objetivo es el lente ms importante del microscopio la que controla el aumento posible y la claridad de la imagen. Todos los objetivos se acoplan a los microscopios mediante roscas estndar y pueden ser cambiadas de un microscopio a otro independientemente de su marca. Los aumentos ms utilizados son: 5X, 10X, 20X, 40X y 100X. Si examinamos un objetivo observamos que hay cifras grabadas por ejemplo: 40X / 0,70:160/ 0,17 en donde: 40X es el aumento del objetivo y 0,70 es la abertura numrica, es decir la medida del tamao del cono de luz que el objetivo puede admitir, 160 es la longitud en mm del tubo ocular que debe ser utilizado con ese objetivo, 0,17 es el espesor del cubre objeto (en mm) que debe utilizarse con ese objetivo. El ocular se compone de dos lentes. La lente inferior recoge la imagen del

objetivo, la reduce y la reforma dentro del ocular a nivel del limitador del campo visual. La lente superior forma una imagen virtual aumentada para ser vista. El aumento de los oculares oscila normalmente entre X5 y X15. El condensador es la lente que ilumina la lente del objetivo, su abertura numrica debe ser suficientemente alta para suministrar el cono de luz requerido. En la parte inferior del condensador hay una abertura regulable, o diafragma-iris controlado por una palanca lateral. Hay tambin un anillo para alojar filtros coloreados o de luz natural. CMO SE FORMA LA IMAGEN? Algunos principios fsicos La imagen en un microscopio se forma por la transmisin de los rayos provenientes de una fuente luminosa a travs del objeto. Los rayos luminosos atraviesan el diafragma, que a manera de iris, delimita el dimetro del haz lumnico

que penetra por el condensador. Este ltimo, est formado por un sistema de lentes convergentes que concentra y proyecta el haz lumnico sobre el objeto a examinar, a travs de la abertura de la platina. El objetivo recoge la luz que atraves el objeto examinado y proyecta una imagen real, invertida y aumentada que se forma dentro del tubo y que es recogida por el ocular que es la segunda lente, la cual forma una imagen virtual, invertida y aumentada del objeto examinado.

CMO SE PREPARA EL MATERIAL PARA SU OBSERVACIN BAJO EL MICROSCOPIO? Existen diversas tcnicas de preparacin del material para su observacin bajo el instrumental ptico. Fundamentalmente, se requiere que los portas y cubreobjetos se encuentren perfectamente limpios, preferiblemente enjuagados con alcohol fino y secos. La preparacin del material se debe realizar sobre una superficie limpia y plana. En caso de realizar cortes, estos deben ser sumamente delgados como para permitir el paso de la luz a travs del material. Adems del montaje hmedo existen dos tcnicas especiales para realizar el montaje del material: SQUASH o aplastado y FROTIS o extendido. SQUASH: consiste en la disgregacin de la muestra mediante el aplastamiento del material entre el porta y cubreobjetos. Para realizarlo se siguen los siguientes pasos: Se disgrega el material con la ayuda de pinzas y alfileres o agujas. Si se requiere, se somete a coloracin durante el tiempo necesario. Se cubre el material con un cubreobjetos Se apoya el portaobjetos sobre una superficie dura y completamente plana Se coloca sobre el cubreobjetos un papel secante o un papel de filtro doblado y se aplasta con el dedo pulgar sin deslizar ni rotar el cubreobjetos Se debe operar con precaucin pero con firmeza para evitar la rotura del material

FROTIS: consiste en esparcir el material generalmente lquido o semilquido de modo que quede distribuido uniformemente en una delgada capa. Para ello se utiliza otro portaobjetos de borde muy parejo que se desliza sobre el primero desde un extremo al opuesto. Se procede del siguiente modo: Se coloca una gota de material sobre un extremo del portaobjetos limpio y seco Se apoya sobre la gota un borde del otro portaobjetos formando un ngulo agudo Cuando la gota e extienda por capilaridad a todo el ancho del portaobjetos, se desliza hacia el otro extremo con un movimiento suave, rpido y uniforme

PROCEDIMIENTO POLVILLO DE ALA DE MARIPOSA Espolvoree el ala de la mariposa sobre un portaobjetos con golpes suaves para no maltratar la mariposa, agregue una gota de agua y coloque el cubreobjetos, observe al microscopio con objetivos de 10x y 40x y luego esquematice lo observado

4x

10x

40x

Descripcin: Se pueden apreciar claramente una serie de elementos alargados, los cuales sujetos los unos a los otros y dispuestos en un orden, son los que le brindan la coloracin de las alas a las mariposas. Y generalmente son los que le proporcionan el nombre caracterstico a las mariposas (LEPIDO=escama y pteron=ala)

 OBSERVACION DEL EPITELIO DE LA HOJA DE LIRIO Haga un corte delgado de la hoja de lirio, desprenda el epitelio transparente, coloque un pequeo corte de este sobre el portaobjetos, agregue una gota de agua y colquele el cubreobjeto evitando que se formen burbujas. Observe con objetivos de 10x y 40x.

4x

10x

40x

Descripcin: En esta epidermis se observan claramente las clulas epidrmicas, unas

clulas arrionadas agrupadas por parejas, que forman los estomas, en estas clulas hay cloroplastos, son como esferitas color verde.

RESULTADOS Polvillo de ala de mariposa: se enfoc y observ con objetivos de 4x 10x 40x Epitelio de la hoja de lirio: se enfoc y observo con objetivos de 4x 10x 40x Con el objetivo de 4X observamos cuerpos a gran escala Al incrementar nuestro objetivo a 10X , logramos observar una mayor cobertura en el campo visual Luego aumentamos nuevamente la intencidad de nuestro lente objetivo a 40X e inmediatamente logramos observar la muestra, pero esta vez a una mayor escala, es decir a un mayor tamao.

DISCUSION DE RESULTADOS El microscopio nos revela no slo que las plantas estn constituidos por clulas o por productos celulares si no que existe todo un mundo invisible a simple vista. La hoja de lirio nos interesaba debido a que esta, se encuentra compuesta con una epidermis que posee parnquima cloroflico. Debido a que La epidermis de

esta es una capa finsima que cubre a la hoja y que se puede separar de ella haciendo uso de una hoja de afeitar, por lo tanto se facilita su estudio, adems de ello al momento de su observacin, se pueden apreciar una serie de organelas, las cuales se encuentran presentes en esta. Por parte del polvillo de las alas de la mariposa, se pueden apreciar una serie de elementos o partculas alargadas y esparcidas, a diferencia del epitelio de la hoja de lirio en la cual se encuentran dispuestos los unos con los otros de tal manera que dan la apariencia de unas pequeas celdas que se encuentran unidas, pero a la vez separadas, por una capa o membrana especial

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

1. Por qu realizamos una permeabilizacin de las clulas en las tcnicas empleadas para su observacin? este paso es siempre necesario? 2. compare las imgenes anteriormente observadas, en que se asemejan? en qu se diferencian? 3. Qu diferencia tiene la imagen con respecto a la que se ve desde afuera? 4. Cundo usted mueva la lmina hacia adelante. en qu direccin se mueve la imagen? 5. es la iluminacin ms o menos brillante con el objetivo de mayor aumento que con el objetivo de menor aumento? Por qu? 6. Cules son los poderes del microscopio? 1. R/ realizamos la permeabilizacin de las clulas en las tcnicas empleadas para su observacin debido a que esto es muy til y provoca la penetracin de marcadores fluorgenos en una clula mientras que preserva la viabilidad de dicha clula, se hace necesario en determinados casos, en los cuales se dificulta la observacin de dicha clula 2. R/ las imgenes nos asemejan de que ambas son celulas que cumplen funciones de revestimiento, y se diferencian en que el polvillo de las alas de la mariposa Son diminutas escamas que se encuentran solo en estos insectos y son responsables del color y los dibujos de sus alas. Estas escamas que estn dispuestas como las tejas de un tejado sobre las alas les dan su nombre caracterstico, y para el caso del epitelio de la hoja de lirio, estas se encuentran recubriendo a estas plantas, cumpliendo funciones de hidratacin, revestimiento, y evitan la desecacin de las hojas.

3. La imagen que da el microscopio es mayor, virtual e invertida. Adems el microscopio nos brinda la imagen con una mayor facilidad de alcance de apreciacin por parte de la vista humana, a diferencia de que si observamos la muestra desde afuera, no logramos apreciar la muestra en todo su contexto. 4. Luego de mover la muestra hacia adelante, notamos que nuestra muestra se movia hacia atrs, pero esto se debe a que la imgenes que se obtiene el en el microscopio optico son bidimencionales e invertidas , por eso es que se observa el efecto de contrariedad al manipular la muestra. 5. Cuando se ilumina un objeto, los puntos de su superficie reflejan las ondas luminosas. Dos puntos prximos de la superficie se vern como distintos si la distancia que los separa es grande comparada con la longitud de onda que reciben. Si la distancia que los separa es inferior a la longitud de onda que los ilumina aparecern a nuestra vista como dos puntos unidos. De nada sirve entonces aumentar el poder amplificador del microscopio. Lo que lograramos es aumentar de tamao aparente esa mancha difusa procedente de la unin de los dos puntos, pero sin conseguir verlos separados. La teora de la difraccin de la luz nos ensea que la imagen que da un punto luminoso no es un punto sino una mancha circular brillante rodeada de anillos concntricos ms apagados. El dimetro de la mancha depender de la longitud de onda con que se ilumine. Poder separador se define como la capacidad para separar ntidamente las imgenes de dos puntos prximos. Si "d" es la distancia mnima a que pueden estar separados dos puntos para que sus imgenes se vean como separadas. Existen tres maneras de aumentar el poder separador de un objetivo (disminuir la distancia a la que dos puntos prximos aparecen separados): Aumentando el ndice de refraccin del espacio objeto. Para el aire n=1, pero en los microscopios de inmersin, que introducen el objetivo en una gota de lquido que cubre el cubreobjetos puede lograrse, con aceite de cedro, un n=1,515 y con monobromonaftaleno n=1,66. Usando lentes frontales planas que dan un ngulo "a" mayor. Se pueden alcanzar valores de Sen a =0,95. El lmite de la A.N es de 1,4. Disminuyendo la longitud de onda de la luz empleada. La luz ultravioleta l =200 nm es invisible al ojo y es absorbida por el vidrio pero estas dificultades pueden resolverse. Se pueden usar lentes de fluorita o cuarzo fundido. La imagen debe recogerse sobre placa fotogrfica o una pantalla sensible a esa luz. Se debe enfocar primero usando luz visible y luego iluminar con luz ultravioleta.

 Profundidad de foco o Poder penetrante. Existen dos poderes de resolucin del microscopio uno en el plano horizontal del enfoque que se estudia como Poder separador y otro en el plano vertical que se estudia como Profundidad de foco o Poder penetrante. El poder penetrante expresa la cualidad de un objetivo de poder presentar perfectamente detalladas los diversos planos de una preparacin sin variar la posicin de enfoque. Depende del diseo del objetivo. El Poder penetrante (Profundidad de foco) es inversamente proporcional al cuadrado de la apertura numrica (A.N.)

CONCLUCION

El microscopio es un instrumento ptico que nos permite observar seres o estructuras que no se pueden percibir a simple vista. Hay diversas clases de microscopio, como el microscopio simple o lupa, el microscopio compuesto, el microscopio de luz ultravioleta, el microscopio electrnico, el microscopio de contraste de fases, el microscopio de polarizacin y otros El microscopio compuesto es el principal instrumento de todos los utilizados en el estudio de los organismos vivientes. Tiene dos sistemas de lentes: objetivo y ocular. Para el mdico es un instrumento fundamental, ya que permite estudiar los cambios celulares que la enfermedad produce y contribuye as en forma fundamental al diagnstico clnico.

BIBLIOGRAFIA

CASTRO FERNANDO, VLEZ MARIA CATALINA.

GONZLEZ IVN.

RONDN FERNANDO. Manual De Prcticas Y Talleres En Biologa General. Universidad Del Valle 2002 GMEZ O. HUMBERTO, GALN ROBERTO, HEREDIA FABIO. Curso de Biologa (vegetal, Animal y Humana). Editorial Norma. 1964 TORRES CELINA. BRAND LIZETH. ERAZO MNICA. Prcticas De

Laboratorio De Microbiologa. Departamento De Biologa. Facultad De Ciencias. Universidad De Antioquia 2002