UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE BIOLOGIA

PARASITOLOGIA
INFORME DE PRACTICA N°05
Formas evolutivas de Cryptosporidium e Isospora sp.

Docente: Mc. Blgo. Luis Lloja Lozano

Estudiante: Carlos Daniel Quispe Chura

Código: 2019-118007

TACNA-PERÚ
2021
I. INTRODUCCION

Cryptosporidium es un protozoario parásito perteneciente al Phylum

Apicomplexa. Se ha establecido que sus ooquistes son los más pequeños de
los coccidios una vez ingeridos se enquistan en el tubo digestivo y liberan
esporozoítos, que parasitan las células epiteliales gastrointestinales. En estas
células, los esporozoítos se transforman en trofozoítos y producen ooquistes.

La fase infectante del parásito es el ooquiste, estos son resistentes a

condiciones inhóspitas, como los niveles de cloro que suelen utilizarse en los
sistemas públicos de tratamiento de las aguas y las piscinas, a pesar del
cumplimiento de los niveles de cloro residual recomendados.

Las especies patógenas para el humano son: C. hominis, 70%; C. parvum,

20%; C. meleagris, C. canis y C. felis, menos de 10%.

Isospora belli es la única especie de Isospora que parasita al hombre, puesto

que la especie inicialmente descrita como Isospora hominis es actualmente una
especie de Sarcocystis. Mediante observaciones morfológicas, utilizando un
microscopio óptico o electrónico se ha logrado demostrar que esquizontes,
merozoítos, gametocitos y ooquistes tienen la misma disposición general del
núcleo, que se observa en otras coccidias.

II. OBJETIVOS

• Identificar las formas evolutivas de Cryptosporidium sp e Isospora sp.

• Realizar las técnicas de concentración y coloración para la observación de
Cryptosporidium sp e Isospora sp.

III. MATERIALES Y PROCEDIMIENTOS

4.1 Sheather Sugar: Método de concentración por flotación con
centrifugación en una solución de azúcar:

4.1.1 Fundamento:
Se basa en la flotación de quistes, ooquistes y huevos de parásitos en una
solución de azúcar que posee mayor densidad que ellos. Esta técnica es útil
para la concentración de quistes, ooquistes de protozoos y huevos de
helmintos, se usa como método preferencial en el diagnóstico de los
coccidios: Cryptosporidium sp e Isospora sp.
4.1.2 Materiales:

• Tubos de ensayo 13 x 100.

• Láminas portaobjetos.
• Laminilla cubreobjetos.
• Aplicador.
• Solución saturada de azúcar
 • Asa de platino.
• Gradilla para tubos de ensayo.
• Suero fisiológico.
• Embudo de vidrio.
• Gasa.

4.1.1 Procedimiento:

• Homogeneizar 1 a 2 g de materia fecal en solución salina fisiológica.

• Colocar un embudo de vidrio con una gasa doblada en la abertura del
tubo de ensayo y filtrar el material homogeneizado.
• Centrifugar el tubo con el material homogeneizado a 1 500 r.p.m.
durante 2 a 5 minutos.
• Eliminar el sobrenadante, y agregar la solución de azúcar hasta 1 cm del
borde del tubo, agitar hasta disolver el sedimento, centrifugar como en el
paso anterior, completar con la solución de azúcar hasta el borde y
esperar de 2 a 5 minutos la formación de un menisco.
• Con la ayuda del asa de platino, tomar una muestra de la superficie del
menisco y colocarla en una lámina portaobjeto, agregar lugol, cubrir con
una laminilla y observar al microscopio. En el caso de observar
coccidios, de la superficie del preparado, tomar con la asa de platino o
con una pinza curva, una muestra para preparar un frotis para teñir por
el método de Ziehl-Neelsen modificado.
 4.2 Método de coloración: Método de Ziehl-Neelsen (modificado para
observación de coccidias: Cryptosporidium)

4.2.1 Fundamento:

Se basa en el comportamiento ácido-resistente de la cubierta de estos

parásitos, los cuales se tiñen de rojo y destacan sobre un fondo verde o azul,
dependiendo del colorante de contraste usado.

4.2.2 Materiales:

• Láminas portaobjetos.
• Laminillas cubreobjetos.
• Soporte de varillas de vidrio para coloración de láminas portaobjeto.
• Estiletes o pinzas punta curva.
• Colorante Fuscina fenicada.
• Colorante Verde de malaquita o azul de metileno acuoso.
• Metanol absoluto.
• Solución de Hidróxido de sodio al 4%.
• Alcohol ácido
4.2.3 Procedimiento:

• Colocar las láminas portaobjetos sobre el soporte de las varillas de

vidrio.
• Con el estilete o pinza curva hacer un frotis de heces en la lámina
portaobjeto y dejar secar.
• Fijar la lámina con alcohol metílico de 2 a 5 minutos y dejar secar.
• Agregar hidróxido de sodio sobre el preparado por un minuto, eliminar el
exceso y lavar con agua.
• Cubrir la lámina con la fucsina fenicada (previa agitación del frasco) por
5 minutos, diluida previamente en agua al tercio (1 mL colorante y 2 mL
de agua).
• Lavar suavemente la lámina portaobjeto con agua corriente.
• Decolorar con solución alcohol-ácido, cubriendo la lámina portaobjeto
por unos segundos hasta quitar el colorante.
• Lavar suavemente la lámina portaobjeto con agua de caño.
• Colocar como colorante de contraste verde de malaquita 1% o azul de
metileno 1-1,4% durante 5 minutos, diluidas previamente al tercio.
• Lavar la lámina suavemente con agua corriente y dejar secar a
temperatura ambiente.
• Realizar el montaje con bálsamo de Canadá, usar una laminilla
cubreobjeto y observar el microscopio.
IV. RESULTADOS

1. Sheather Sugar: Método de concentración por flotación con

centrifugación en una solución de azúcar:

Muestra: Materia fecal

Fase Evolutiva: Ooquistes
Técnica de coloración: Sheather
Sugar
Especie: Cryptosporidium parvum
Número de aumento: 100x
Características: Forma subesférica u
ovalada, son esporulados; se ve la
presencia de una fina membrana
citoplasmática finamente granular.
Posee un tamaño pequeño, 4 - 6 µm
de longitud.

Muestra: Materia fecal

Fase Evolutiva: Ooquistes maduro
Técnica de coloración: Sheather
Sugar
Especie: Isospora belli
Número de aumento: 40x
Características: Contiene dos
esporoquistes, el cuerpo tiene forma
ovoidal de color marrón oscuro, cada
uno de los cuales contiene 4
esporozitos en forma de “cigarro”,
rodeados por una pared de doble
capa.
 2. Método de coloración: Método de Ziehl-Neelsen (modificado para
observación de coccidias: Cryptosporidium)

Muestra: Materia fecal

Fase Evolutiva: Ooquistes
Técnica de coloración: Método de
Ziehl-Neelsen fría modificado
Especie: Cryptosporidium sp.
Número de aumento: 1000x
Características: Forma esférica.
Posee un tamaño pequeño 4 µm de
longitud, teñidos de color rojo contra
el color de fondo verde.

Muestra: Materia fecal

Fase Evolutiva: Ooquistes inmaduro
Técnica de coloración: Método de
Ziehl-Neelsen
Especie: Isospora belli
Número de aumento: 40x
Características: Tiene una forma
típica elipsoidal, mide de 25-30 de
longitud, se puede apreciar en su
interior un esporoblasto.

V. COMENTARIOS

La fase infectante son los ooquistes, al poder reconocer las fases evolutivas
de Cryptosporidium sp, Cryptosporidium parvum e Isospora belli, nos va a
ayudar a diferenciarlos de manera independiente, para que podamos
realizar un buen diagnóstico en el laboratorio con la técnica adecuada.
 VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Botero y Restrepo (2021) PARASITOSIS HUMANAS. Adaptaciones biológicas.

MedellínColombia. Editorial CIB

Goebel EF & Braendler U. Ultraestructure of Microgametogenesis, Microgametes

and ametogamy of Cryptosporidium sp in the small intestine of Mice.
Protistologica T. XVIII 1982; Fasc 3:331-4.

Página electrónica del Departamento de Microbiología y Parasitología, Facultad

de Medicina, UNAM. Recursos en Parasitología. Disponible en:
http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/parasitologia/criptosporidi asis.
html. Fecha de consulta 30/08/2017

Taxonomy browser, disponible en:

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi?mode=Info&id=28841
&lvl=3&lin=f&keep=1&srchmode=1&unlock