Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Unidad Zacatenco
Licenciatura en Qumico Farmacutico
Industrial
Departamento de Fisiologa Dr. Mauricio Russek Berman

Practica #1 Aspectos Generales del manejo de animales de

laboratorio y vas de administracin

Fisiologa General
Grupo: 4FM2
Equipo #3

Fecha de entrega: 01/Marzo/2016

Introduccin
Aunque se reconoce que el progreso de la investigacin cientfica
desarrollada en todas las reas biomdicas repercute en la mejor calidad
de vida de los seres vivos, la experimentacin con animales, ha sido un
tema de controversia pblica desde mediados del siglo XVIII. Al
comienzo del siglo diecinueve, los experimentos con animales
emergieron como un importante mtodo de la ciencia; lo cual marc el
surgimiento de la fisiologa y las neurociencias experimentales, tal como
se conocen en la actualidad.

El primer registro del uso de animales vivos, fue un estudio de humores

corporales efectuado por Erasistrato, en Alejandra en el siglo tercero a.
C. Despus, el mdico Galeno (129 200 d.C.) us cerdos vivos para
investigar las funciones de varios nervios y tambin demostrar la
posicin de los urteres. Entre otros eruditos que condujeron
experimentos con animales, se encuentran: Francis Bacon (15611626),
William Harvey (15781657) (cuyos estudios en venados vivos y algunas
otras especies de animales, condujeron al importante descubrimiento de
la circulacin sangunea), Anthony van Leeuwenhoek (16321723) y
Stephen Hales (16771761). Para el final del siglo XVII, emergi una
fuerte tradicin en Inglaterra y Francia de la experimentacin con
animales, basada en la nocin de que stos son incapaces de sentir
dolor. El camino haba sido abierto para sta opinin, por el filsofo
francs Rene Descartes (15961650), cuyas ideas, tales como el ms
grande de todos los prejuicios que retenemos desde nuestra infancia es
aquel de que las bestias piensan.

Dos fisilogos franceses, Francois Magendie (17831855) y su alumno

Claude Bernard (18131878) refutaron los mtodos existentes, y
postularon innovaciones, estableciendo la experimentacin y los
principios cientficos para experimentar con animales vivos, como una
prctica comn. Probablemente, el cientfico ms frecuentemente citado
en la progresin del uso de animales en la investigacin mdica es
Claude Bernard, cuyo trabajo Una Introduccin a la Medicina
Experimental es considerado un clsico. Bernard produjo muchos
conceptos y observaciones importantes, y de l fue la idea de que la
observacin en la especie animal adecuada es la clave cientfica para las
observaciones relevantes de la situacin humana bajo estudio. Esto es,
la base del experimento completo reside en la seleccin del animal
apropiado.

Para la segunda mitad del siglo, el fisilogo ruso Ivn Pavlov, llev a
cabo sus famosos experimentos sobre el sistema nervioso autnomo y
su relacin funcional con el aparato digestivo del perro. Quiz no haya
otra frase relacionada al uso de animales en la investigacin tan usada
como los perros de Pavlov.El trabajo de fisilogos como Magendie y
Bernard, aunado con el descubrimiento de las propiedades anestsicas
del ter (por Crawford Long en 1842, y William Morton en 1847), result
en la adopcin de procedimientos quirrgicos tcnicamente ms
sofisticados. La experimentacin con animales, en toda Europa, se hizo
una prctica comn en los laboratorios de fisiologa.

En Mxico, aunque no se tiene un censo al respecto, s se cuenta con

una normatividad interna que tiene por objeto establecer y uniformar las
especificaciones tcnicas para la produccin, cuidado y uso de los
animales de laboratorio que deben cumplir todas las personas
relacionadas, en todos los campos, con este tipo de animales.1

El animal de laboratorio tiene que ser respetado como ser vivo, entender
que padece necesidades y sufre dolor, por ley es obligacin del personal
que lo cuida, mantiene y utiliza (investigador), asegurar su bienestar y
confort mientras viva. El manejo debe hacerse con gentileza, firmeza y
respeto por el animal. Para transferir por ejemplo un ratn de una jaula a
otra debe tomarse de la base de la cola, usando guantes.

Para un manejo ms sencillo, se utilizan anestsicos de apoyo. Los

anestsicos utilizados en los animales sirven para provocarles un estado
de inconsciencia, con ello se evita su sufrimiento y se puede realizar su
manejo adecuado. 2

Estos frmacos (anestsicos) varan de acuerdo a los distintos grupos

taxonmicos. Se han probado algunos anestsicos especficos, de los
cuales se recomiendan de acuerdo a la asociacin americana de
medicina veterinaria ,2001. Estos son: pentobarbital sdico, pentotal,
ketamina, uretano, exobarbital, thiamynal. Generalmente para roedores
como ratas y ratones.
 El anestsico ms usual es el pentobarbital sdico, este es un
barbitrico que se utiliz como anestsico desde el ao 1930. Actan
potenciando los efectos inhibitorios del GABA. Produce una rpida
induccin en promedio de 45 segundos y una anestesia por un periodo
promedio de 45 minutos, con una disminucin de la frecuencia cardiaca,
respiratoria as como de la temperatura colonal y produce una buena
sedacin para procedimientos de corta duracin.3

Hiptesis
Dado que el realizar un correcto manejo en animales de laboratorio, en
este caso ratas, influye directamente en la obtencin de buenos
resultados en este tipo de prcticas, podemos esperar una diferencia
significativa en cuanto a los valores graficados sobre los efectos
provocados por la administracin de Pentobarbital sdico a travs de
diferentes vas, tomando como variables: La temperatura colonal, el
reflejo flexor y el reflejo de enderezamiento en funcin del tiempo.

En especfico con ayuda de informacin consultada en la bibliografa,

podemos suponer que la va de administracin ms recomendada, es la
intraperitoneal, ya que es en donde se presenta mayor absorcin del
sedante, que es lo que buscamos al administrar una sustancia como
esta. El lograr resultados objetivos al trmino de la prctica nos indicar
que se realiz una correcta manipulacin de las ratas de laboratorio.
Fundamento
Los investigadores requieren el uso de animales porque son el sistema
viviente ms cercano relacionado con el humano; los cuales
comnmente ofrecen el mejor medio para determinar reacciones y
respuestas biolgicas humanas. Proporcionan una ayuda como dobles en
la investigacin de enfermedades y desordenes humanos, as como en
las nuevas formas prevencin y tratamiento, y no solo del ser humano
sino que tambin sirven como sus propios modelos o para otras especies
de animales en estudios relacionados a la salud animal y en las formas
de prevenir y tratar enfermedades en animales.4

Es obligacin de quien manipula animales con fines de estudio procurar

darles un trato y cuidado apropiado y digno, desde los procedimientos
de captura y durante su mantenimiento en condiciones de cautiverio
previo al manejo en el laboratorio. Asimismo, se deber contar con la
preparacin adecuada y conocimientos actualizados para aplicar el
principio de las 3R (Norma Oficial Mexicana NOM-062- ZOO-1999) en el
manejo de animales en el laboratorio: Reemplazar (utilizacin de
alternativas que produzcan los mismos resultados, tales como
experimentos in vitro, cultivos celulares, modelos inanimados, modelos
por computadora), Reducir (utilizar un nmero mnimo de animales),
Refinar (utilizar tcnicas adecuadas para evitar al mximo el
sufrimiento).1

Para un manejo ms sencillo, se utilizan anestsicos de apoyo. Los

anestsicos utilizados en los animales sirven para provocarles un estado
de inconsciencia, con ello se evita su sufrimiento y se puede realizar su
manejo adecuado.

La administracin de frmacos u otro tipo de sustancias se realiza por

diferentes vas, que se clasifican en enteral y parenteral.

VA ENTERAL: Utiliza la forma natural de absorcin que es el intestino,

aunque dichas sustancias no solo se ingieren por la boca, sino que se
depositan directamente en otros tramos del intestino como el recto. La
sustancia de suministra en el alimento, en el agua de bebida, o bien
mediante la administracin forzada utilizando una sonda.

VA PARENTERAL: Esta va implica la ruptura de las barreras del

organismo, la piel y las mucosas para depositar las sustancias en tejidos
o cavidades internas del organismo, como la abdominal.5
El mtodo ms comn es la inyeccin con depsitos de sustancias
dentro de la piel (va intradrmica ID), o debajo de ella en el tejido
subcutneo (va subcutnea SC) en los msculos (va intramuscular IM),
en venas (va intravenosa IV), o en cavidades como la pleura (va
intrapleural) o peritoneal (va intraperitoneal IP).

Intraperitoneal: La inyeccin intraperitoneal se utiliza para administrar

volmenes relativamente grandes de sustancias solubles. Su utilizacin
es muy comn en pequeos roedores y peces. Ofrece una amplia
superficie absorbente desde la cual los frmacos pasan fcil y
rpidamente a la circulacin.

Intragastrica: Comnmente usada para la administracin de compuestos

irritantes o imposibles de ser administrados por otras vas. Permite que
los frmacos interaccionen de una manera fisiolgica con las enzimas
digestivas.

Subdermica: La inyeccin intradrmica o subdrmica es una tcnica

utilizada frecuentemente en estudios de:
inflamacin, sensibilizacin, diagnstico de flujo sanguneo cutneo y
en inmunologa. La velocidad de absorcin es a menudo lo
suficientemente lenta y constante para mantener un efecto sostenido.6

Los barbitricos son un ejemplo de frmacos con mltiples acciones

sobre su clula diana, la neurona. Por un lado se unen al receptor
gamma-aminobutco (GABA) produciendo la entrada del in Cl- que
hiperpolariza la neurona bloqueando el impulso nervioso (depresores
inespecficos del sistema nervioso central). Este efecto se produce tanto
a nivel postsinptico como presinptico .El lugar de unin de los
barbitricos al receptor GABA no se conoce con exactitud, si bien se
sabe que es distinto al de las benzodiacepinas. El fluamecenilo,
antagonista competitivo de las benzodiacepinas, no presenta actividad
antagnica frente a los barbitricos hecho que demuestra un punto de
unin alostrico distinto entre ambos. La unin a este receptor, si bien
no se conoce el lugar de unin exacto, se ha demostrado que es distinta
al de las benzodiacepina.7

Las acciones farmacolgicas de los barbitricos son; frmacos

antiepilpticos gracias a sus accin anticonvulsiva que no parece ser
reflejo de la depresin inespecfica del SNC; frmacos anestsicos, a
pesar de que carecen de actividad analgsica, pero s pueden ser usados
como sedantes y ansiolticos.
Los barbitricos como cidos o en forma de sal tienen muy buena
absorcin va oral e intramuscular. Tambin es habitual su
administracin por va intravenosa y no tanto la rectal.2

Los ratones machos son menos susceptibles a los barbitricos

(Pentobarbital Sdico) que las hembras, mientras los ratones Swiss-
Webster duermen ms tiempo que las ratones hembras con la misma
dosis de pentobarbital. La cantidad de pentobarbital necesaria para
inducir la anestesia quirrgica en ratones (60-90 mg/kg) es mucho ms
alta que los niveles de anestesia equivalentes para perros y gatos, la
cual es de 30-35 mg/kg. La anestesia quirrgica se produce unos 5-10
min despus de la inyeccin intraperitoneal y dura unos 20-30 mino Para
procedimientos ms largos, es decir, 40-50 min una dosis intraperitoneal
de 50 mg/kg puede seguirse de una dosis subcutnea de 25 mg/kg). Las
dosis ms pequeas, es decir, 40-60 mg/kg de pentobarbital se utilizan
con frecuencia, pero stas se suelen usar para estudiar los efectos de los
frmacos, la deshidratacin, etc. en el tiempo de inconsciencia, prdida
de reflejo recuperativo y otras variables.3
Objetivos
Comprender la importancia de efectuar experimentos en ratas de
laboratorio, y su adecuado manejo.
Aplicar los conocimientos acerca del correcto marcado y pesado de
los animales as como la manera de administrar anestsico por
las vas: intragstrica, intraperitoneal, y subcutnea.
Determinar el volumen de pentobarbital sdico a utilizar en las 3
ratas de acuerdo a su peso, y la dosis establecida.
Determinar el efecto del anestsico sobre las temperatura colonal
y los reflejos (flexor y enderezamiento) por las tres vas de
administracin en distintos tiempos.
Comparar los datos obtenidos a partir de una ANOVA bifactorial
de medidas repetidas para las variables temperatura colonal y
tiempo.
Metodologa Practica 1. Aspectos generales del manejo de
animales de laboratorio y vas de
administracin.

Distribuir aleatoriamente 18 ratas

en los 6 equipos.

Marcar y pesar a las ratas

Concentracin
Calcular de acuerdo al peso el volumen pentobarbital: 35
de anestsico (pentobarbital sdico) a mg/kg
administrar a las ratas.

Introducir por el recto el Medir la temperatura colonal y

bulbo del termmetro
presencia o ausencia de reflejos
con vaselina (5 cm/ 1.30
(enderezamiento y flexor). Valores
min)
basales

Observar y registrar la ausencia

o presencia de reflejos flexor y
de enderezamiento.

Determinar va de
administracin para las 3 ratas
(intraperitoneal, intragstrica,
subcutnea)

Administrar el volumen de
pentobarbital calculado.

Determinar las temperaturas colonales y la

ausencia o presencia de reflejos cada 5
minutos por 25 min.
Fig.12 Comparacin del efecto del pentobarbital sdico a una dosis de 35 mg/Kg,
sobre el reflejo de enderezamiento de en ratas de laboratorio, administrado por
la va intragstrica (IG), intraperitoneal (IP) y subcutnea (SC) en distintos
tiempos.

*Literales iguales = No hay diferencia significativa entre vas o tiempos.

**Literales diferentes = Existe diferencia significativa ente vas o tiempos.

Fig.11 Comparacin del efecto del pentobarbital sdico a una dosis de 35

mg/Kg, sobre el reflejo flexor en ratas de laboratorio, administrado por la va
intragstrica (IG), intraperitoneal (IP) y subcutnea (SC) a distintos tiempos.

*Literales iguales = No hay diferencia significativa entre vas o tiempos.

**Literales diferentes = Existe diferencia significativa ente vas o tiempos.
Fig.10 Efecto del pentobarbital sdico a una dosis de 35 mg/Kg, sobre la temperatura
colonal en ratas de laboratorio, administrado por la va intragstrica (IG),
intraperitoneal (IP) y subcutnea (SC). Tomando la temperatura en rangos de 5 min
durante 25 min. Se realiz el anlisis estadstico ANOVA bifactorial de medidas
repetidas, para demostrar cuales son las diferencias que existen entre las vas de
administracin respecto al tiempo y la disminucin de la temperatura.

*Literales iguales = No hay diferencia significativa entre vas o tiempos.

**Literales diferentes = Existe diferencia significativa ente vas o tiempos.
Discusin de resultados
El manejo de animales de laboratorio fue algo nuevo para el grupo en
general y esto llevo a varias complicaciones, en un principio para llevar
acabo la tcnica de manipulacin correctamente. Por la falta de
experiencia en el manejo de ratas, estas se estresaron en el marcaje y
el pesado, como consecuencia al tomar la temperatura colonal el
trabajo result ms complicado.

Se requiri calcular el volumen adecuado de pentobarbital sdico para

cada rata de acuerdo a su peso, la dosis ya se encontraba establecida
por lo que fue de suma importancia administrar volmenes adecuados,
ya que si se administra volmenes mayores a los requeridos de
anestsico, este pudo haber inducido la muerte de la rata y por otro
lado en volmenes menores no se obtiene el efecto requerido del
anestsico. En el sentido ms amplio la anestesia puede definirse como
una depresin global pero reversible de las funciones del sistema
nervioso central que se caracteriza por la ausencia de la percepcin
dolorosa y respuesta motora a los estmulos externos.8

El efecto del pentobarbital, se debe a la unin de componentes

moleculares al receptor GABAA (cido gamma aminobutrico) presente en
diferentes estructuras como la corteza, el caudado-putamen y el ncleo
caudado del sistema nervioso central. Como el pentobarbital es
modulador de la transmisin gabargica, se ha demostrado que estos
receptores pueden ejercer sus efectos farmacolgicos como anestsico
general mediante la mejora de la funcin del canal de cloro, para el
caso del pentobarbital aumenta la duracin de la apertura de los canales
de cloro controlados por GABA, inhibiendo las acciones de los
neurotransmisores excitadores y ejerciendo efectos no sinpticos en la
membrana.8

De acuerdo con los resultados obtenidos se observ a partir de una

grfica (Figura 10) de temperatura colonal (C) con respecto al tiempo,
que la va intraperitoneal disminuyo la temperatura colonal de la rata
considerablemente hasta 34.3C en el minuto 25, a comparacin de las
otras dos vas, esto se debe a que por la cavidad intraperitoneal se
ofrece una amplia superficie absorbente desde la cual el anestsico pasa
fcil y rpidamente a la circulacin., es decir, hay ms irrigacin en esta
va. Sin embargo es la va menos recomendada pues existe la posibilidad
de perforar una asa intestinal y producir infecciones graves adems del
riesgo a crear adherencias.3

Esta va es considerada de primer paso.

Por su parte la va intragastrica fue la que presento menor disminucin
en la temperatura colonal por efecto del pentobarbital sdico, debido a
que tiene una absorcin ms lenta por su directa administracin al tubo
digestivo en donde se encuentran grandes cantidades de enzimas
gstricas que pueden modificar su efecto, adems de que su efecto es
ms retardado debido a todo el proceso que debe recorrer hasta que se
absorba completamente y llegue a circulacin. La va subcutnea no es
tan recomendable a pesar de ser la ms til ya que no se absorbe con
facilidad el frmaco, esto se debe a que el tejido adiposo es una capa
que permite absorber el frmaco de una forma ms tardada ya que este
es de tipo liposoluble.

Como es evidente las diferencias significativas de temperaturas entre

vas se observa grficamente hasta el minuto 15, pero con el apoyo de
un anlisis estadstico de medidas repetidas (ANOVA) se determin que
la diferencia significativa solo es entre las vas intragastrica y la
intraperitoneal en este tiempo. Continuando con el anlisis, se
determin que en el minuto 20 la va intragastrica presento un cambio
importante con respecto a las otras dos y finalmente en el minuto 25 se
observ la mayor variacin entre ellas, es decir diferencias significativas
entre cada una de las vas.

Se hizo el anlisis estadstico de manera individual para cada va, se

encontr que en la va intragastrica no posee diferencias significativas
entre cada uno de los rangos de tiempos establecidos, tal como se
puede observar en la figura 10, lo que indica que la disminucin de la
temperatura fue de manera controlada, sin notables diferencias,
mientras que en las otras dos vas si se presentaron diferencias
significativas en la mayora de los rangos de tiempos. Esta disminucin
de la temperatura fue solo una respuesta secundaria del pentobarbital
sdico.

Como principal efecto del pentobarbital se encuentra la perdida de

reflejos y en cuanto a la prdida del reflejo de enderezamiento los
resultados indicaron (figura 12) que al minuto 5 despus de a ver sido
administrado el pentobarbital sdico por va intraperitoneal se provoc
la prdida de ms del 80 % del reflejo, y hubo una diferencia
significativa entre la va subcutnea e intraperitoneal en este tiempo, de
acuerdo al anlisis con la prueba chi cuadrada (X 2), pues el valor 4.16
 V oV
e

Ve
obtenido de la ecuacin en este tiempo rebaso el valor lmite de

x 2=

3.84 (tablas) que determinan si hay o no diferencia significativa,

mientras que entre la vas intragastrica y subcutnea no la hubo. Por la
va intragastrica no se present la perdida de reflejos y por va
subcutnea al minuto 15, se observ una prdida gradual de este.

En los minutos 10, 15 y 20 las diferencias significativas entre vas

subcutneas e intraperitoneal fueron evidentes grficamente, adems
por el anlisis estadstico, se determin que entre la va intraperitoneal
y la va intragastrica tambin existe una diferencia significativa.

En el minuto 25, entre todas las vas se encontr variaciones entre ellas
significativas.

Con respecto al relejo flexor por va intragastrica, se observ una

perdida irrelevante. En cuanto a la va intraperitoneal se obtuvieron
incongruencias en los resultados ya que se report la prdida y
presencia del reflejo de manera alternada, la causa probable de esto
pudo ser la manipulacin por diferentes individuos, ya que quiz la
aplicacin del estmulo doloroso no fue de igual magnitud para todas las
ratas. Por va subcutnea al minuto 15 comenz a aumentar el
porcentaje de prdida del reflejo.
Bibliografa
(1)
MVZ M. en C. Jaime Alonso Navarro Hernndez, MVZ Roberto Aarn
Ramrez Ojeda MVZ Carlos Villagrn Vlez (2012). Manual de
procedimientos recomendables para la investigacin con animales.
Editorial. Samara. Primera edicin. 18-19 pp.

(2)
Castro Martnez Nadir. Efrn Iguanero Tajonar Yesi .Dayana
Joaquina De La Rosa Priego Prez Bravo Manual de fisiologa
anatmica. Universidad Autnoma de Puebla Facultad de Ciencias
 Qumicas Departamento de Farmacia Licenciatura Qumico
Farmacobilogo Laboratorio de fisiologa II. Formato .pdf

(3)
Lorenzo, P, (2008), Farmacologa bsica y clnica, Ed. Medica
Panamericana, 18. edicin, pp. 22-23.

(5) Quezada, A. (1997), Introduccin al manejo de animales de

laboratorio roedores y pequeas especies, Ed. Universidad
autnoma de Yucatn, primera edicin, pp. 5.

(6)BIOCIENCIAS Revista de la Facultad de Ciencias de la Salud Vol. 8-

ao 2013 SEPARATA TOXICOLOGIA DE LOS BARBITURICOS Ruiz
Cuesta, M.; Caballero Martnez, L.; Berberana Morn, C.
Universidad Alfonso X el Sabio Facultad de Ciencias de la Salud
Villanueva de la Caada

(7)Senz, D. (1993), Principios de farmacologa y administracin de

frmacos, Ed. De la Universidad de Costa Rica, primera edicin,
pp. 43-44.

(8)Trevor AJ, Way WL. Sedantes hipnticos. En: Katzung BG, eds.
Farmacologa bsica y clnica. Mxico: Manualmoderno; 2001: 415.

Referencias Electrnicas:
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del Pentobarbital Sdico, Agrovet Market S.A, fecha de recuperacin:
19/02/2016. Recuperado de:
http://www.vetermex.com/Pdfs/Trabajos_investigacion/Penta-
Hypnol/trabajo_campo_penta_hypnol.pdf
(9).
Guyton y Hall. Tratado de fisiologa mdica. 12 edicin. Unidad XI. El
sistema nervioso. C. Neurofisiologa motora e integradora. Fecha de
recuperacin: 25/02/16. Recuperado de:
http://ual.dyndns.org/biblioteca/fisiologia/Pdf/Unidad%2011.pdf