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Practica #4 Determinacion de HB, Hto, Vsg....
Practica #4 Determinacion de HB, Hto, Vsg....
Guía de Prácticas:
HEMATOLOGIA
Profesora:
Diana Lucia Díaz Montoya Arequipa – Perú
Alumna:
Shirley Huancahuire Mamani
Turno: 2021
Miércoles 4:30 – 7:50 pm
PRACTICA N° 4
DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA,
HEMATOCRITO, VSG, RECUENTO DE
ERITROCITOS E ÍNDICES ERITROCITARIOS
1. DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA
FUNDAMENTO.
MATERIAL
REACTIVOS:
1. Se marcan 2 tubos de ensayo, uno como blanco (B) y otro como problema (P) y se
colocan 5 ml. del Reactivo de Drabkin en cada uno.
2. Con la pipeta de Shali, se toma 0.02 ml (20 l) de sangre limpiando perfectamente la
pipeta por fuera con un segmento de papel desechable humedecido con solución
salina, se pasan al tubo, lavando la pipeta 2 o 3 veces, por aspiración y expulsión del
reactivo dentro de la misma.
3. Se mezcla vigorosamente con cuidado. Dejar reposar la mezcla por 5 minutos. Pasar a
las celdas.
4. Ajustar el espectrofotómetro a cero de absorbancia con el blanco de reactivo (B) a 540
nm. y se lee la absorbancia del tubo problema.
5. Calcular la concentración de la Hemoglobina, a partir de la Ley de Beer o bien
extrapolando en la Curva de calibración.
CURVA DE CALIBRACIÓN.
1. Marca 5 tubos de ensaye de 13x100 mm: Blanco (B), 5, 10, 15, 20 g/dl
2. Pipetear con precisión, de la solución valorada de Cianometahemoglobina (St) de
concentración de 20 g/dl y del Reactivo de Drabkin, en cada uno de los tubos
correspondientes y mezclar bien.
CONCENTRACION
B 5 10 15 20 g/dl
HEMOGLOBINA
Estándar de
0.0 ml 1.25 ml 2.5 ml 3.75 ml 5.0 ml
cianometahemoglobina
PRECAUCIONES.
VENTAJAS.
DESVENTAJAS.
La única desventaja es que se trabaja con pequeños volúmenes de sangre (20 µl) por lo
que aumenta la probabilidad de error.
VALORES DE REFERENICA
FUNDAMENTO:
Consiste en dejar que la sangre sedimente por la acción de la gravedad formando un paquete
más o menos compacto separado del plasma, ello depende de varios factores como son:
MATERIAL.
PROCEDIMIENTO.
El tubo de Wintrobe deberá llenarse desde el fondo hasta la marca cero, evitando la
formación de burbuja.
Durante el proceso de reposo deberá verificarse que se encuentre exactamente vertical,
de lo contrario el valor determinado será erróneo.
Verificar que el reposo del tubo de Wintrobe este exento de vibraciones.
La sangre debe de estar perfectamente mezclada para evitar un cambio en la relación,
eritrocitos-plasma.
VENTAJAS.
DESVENTAJAS.
VALORES DE REFERENCIA.
HOMBRES 0 a 7 mm/hr.
MUJERES 0 a 15 mm/hr.
3. DETERMINACION DE HEMATOCRITO.
MATERIAL.
PROCEDIMIENTO.
LECTURA:
En la graduación en la que el “0” cero está en el fondo del tubo, léase a que nivel está el límite
superior de la columna roja (la sangre se ha separado en cuatro capas: roja formada por los
eritrocitos, blanca grisácea por leucocitos, amarillenta cremoso por plaquetas y la última
líquida formada por plasma habitualmente de color amarillento.).
3.2 MICROHEMATOCRITO.
MATERIAL.
PROCEDIMIENTO.
1. Llenar con sangre capilar o venosa un tubo capilar aproximadamente tres cuartas
partes del total de su longitud.
2. Cierre el extremo del tubo capilar distante de la sangre acercándolo a la flama del
mechero y rotándolo, también se puede sellar con plastilina (cerciórese de que el cierre
de dicho extremo haya sido completo).
3. Centrifúguese en la centrífuga para microhematocrito durante 5 min.
4. Leer en el lector del microhematocrito.
PRECAUCIONES.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS.
VALOR DE REFERENCIA.
HOMBRES 46 a 56 %
MUJERES 39 a 50 %
4. RECUENTO CELULAR ERITROCITARIO
INTRODUCCIÓN.
MÉTODO DE CONTEO.
El conteo se inicia por la parte superior de izquierda a derecha y luego de derecha a izquierda
sucesivamente, teniendo la precaución de contar las células que tocan una de cualquiera de las
tres líneas como si estuvieran en los cuadros y teniendo la precaución de no contar una célula
dos veces. Figura (3)
MATERIAL.
REACTIVOS:
1 frasco con 100ml. de Líquido diluyente de Gower para eritrocitos por sección
PROCEDIMIENTO.
NOTA: Llenar ambos lados de la cámara de Neubauer, sacar un promedio de los conteos y
calcular el número de eritrocitos 7 mm3 multiplicando por el factor de 10000 mm3 Reportar el
número de eritrocitos por milímetro cúbico de sangre.
CÁLCULOS:
1.5 que corresponde a la fracción de la cámara en la que se cuentan los eritrocitos (los
25 cuadros centrales).
1/10 es la profundidad de la cámara de Neubauer. 1/200 es la dilución realizada a la
sangre con la pipeta de Thoma.
Esto será válido en el caso de que la dilución inicial haya sido 1:200 y se cuenten los cinco
cuadros marcados con la letra E.
CONCENTRACIONES.
El líquido diluyente de Gower para eritrocitos es isotónico y actúa como fijador para preservar
la forma celular.
VALORES DE REFERENCIA
EN EL S.I
HOMBRES: 5.5 a 6.3 Millones/ mm3 o µl 5.5 a 6.3 x 1012/l
MUJERES: 4.1 a 5.7 Millones/ mm3 o µl 4.1 a 5.7 x 1012/l
1 mm3 = 1 µl
INDICES CORPUSCULARES
Guarda estrecha relación con el volumen corpuscular medio. En consecuencia, las anemias
microcíticas se acompañan siempre de una disminución de la HCM, lo que corresponde al
criterio morfológico de hipocromía, y las anemias macrocíticas de un aumento de la HCM.
Indica la variación existente entre los tamaños de los hematíes. Cuando ésta es muy grande, el
IDH es superior al 15 % y se dice que hay una anisocitosis.
Hay anisocitosis en los periodos iniciales del tratamiento de las ferropenias y también puede
haberla en las fases inmediatas a la administración de transfusiones.
RESULTADOS
Calculo de Hemoglobina
39 %
Hematocrito % 𝐻𝑒𝑚𝑜𝑔𝑙𝑜𝑏𝑖𝑛𝑎 =
3
𝐻𝑒𝑚𝑜𝑔𝑙𝑜𝑏𝑖𝑛𝑎 =
3
𝐻𝑒𝑚𝑜𝑔𝑙𝑜𝑏𝑖𝑛𝑎 = 13 g/dl
Este resultado de hemoglobina está dentro de los valores normales en una mujer, pero si fuera
hombre tendría la hemoglobina muy baja lo que indicaría posiblemente un tipo de anemia por
falta de hierro.
Calculo del Hematocrito
En la siguiente imagen del capilar se puede observar que la cantidad de muestra total (100%)
es de 6.8 realizando una proyección hacia la regla y los glóbulos rojos van a 3.1, a partir de
esos valores se hallara el porcentaje de hematocrito.
3.1 ∗ 100
6.8 ---------- 100 % 𝑥=
6.8
3.1 ---------- X %
𝑥 = 45.6 %
El resultado del hematocrito tiene un valor de 45.6% lo que indica que están en un rango
normal si la mujer vive en la altura ya que estos valores van desde el 42 – 50%, pero si la
mujer vive en zona baja el hematocrito sería elevado (hemoconcentración) lo que indicaría
que la mujer es adicta al tabaco ya que este eleva el hematocrito, también se podría decir que
está embarazada o quizás en su ciclo menstrual. El hematocrito mide la cantidad de sangre
compuesta por glóbulos rojos.
Recuento de eritrocitos
El número total de eritrocitos es de 1.3 * 106 lo que indicaría que los valores son demasiados
bajos por lo tanto se podría decir que la persona tendría leucemia y que la medula ósea roja
está en mal funcionamiento.
CUESTIONARIO
Cada una de las cadenas polipeptídicas de la Hb cuenta con genes propios; los genes α
y β son independientes y se ubican en cromosomas distintos. El grupo α, se localiza en
el brazo corto o p del cromosoma 16 y contiene además los codificadores de la cadena
z. El grupo β se localiza en el brazo corto del cromosoma 11 e incluye a los genes de
las cadenas γ, δ y ε.
3. Como se llama la hemoglobina que está cargada de CO2
El 2,3 DPG se forma a partir del 1,3 DPG, que es un intermediario de la vía
glucolitica. Este compuesto fosforilado se encuentra en grandes cantidades en el
eritrocito. El 2,3 DPG funciona como un efector alostérico para la Hb. En la
conformación desoxi existe una cavidad lo suficientemente grande para admitir al 2,3
DPG entre las cadenas beta. Este compuesto estabiliza a la forma T de la Hb al formar
enlaces cruzados con las cadenas beta. Las variaciones de la concentración del 2,3
DPG desempeñan un papel fundamental en la adaptación a la hipoxia, de manera que
en la hipoxemia aumenta este compuesto y la afinidad por el oxígeno declina y el
aporte a los tejidos se facilita.
Cuando el eritrocito alcanza su tiempo límite de vida media (100 a 120 dias) la
membrana celular se rompe, donde la hemoglobina es liberada y fagocitada por
algunos macrófagos celulares.
La hemoglobina se separa en dos fracciones, la molécula globina (se transforma a
aminoácidos) y la molécula hemo (degradada por los macrófagos) dando lugar a la
biliverdina.
La biliverdina con ayuda de la biliverdina reductasa da lugar a la bilirrubina (plasma,
esta es hidrolizada y reducida en el hígado generando el urobilinógeno (color a las
heces y orina).
BIBLIOGRAFÍA
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