HMÑB Puno Laboratorio de Bioquimica

SERVICIO DE PATOLOGIA CLINICA HRMNB-PUNO
Código: 01
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE BIOQUIMICA Revisión:01

Fecha:03/2015
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Revisado Blgo. Felix Condori Coapaza Aprobado DR. Francisco Armando Lajo Soto
Jefe de Servicio de Patología Clínica Jefe de Departamento de Patología Clínica y Anatomía
Patologica
ÍNDICE
 INTRODUCCIÓN 2
 GENERALIDADES 3
 BISEGURIDAD 5
 RECOLECCCION DE MUESTRAS DE SANGRE 8
 METODOLOGÍA E INSTRUMENTACIÓN 14
 GLUCOSA 21
 CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA 24
 UREA 26
 CREATININA 29
 DEPURACIÓN DE CREATININA 32
 ACIDO URICO 36
 COLESTEROL TOTAL 39
 HDL - COLESTEROL 42
 LDL - COLESTEROL 45
 TRIGLICÉRIDOS 47
 CALCIO 50
 FOSFORO 53
 BILIRRUBINA TOTAL Y DIRECTA 56
 CRATIN KINASA 59
 HEMOGLOBINA GLIUCOSILADA 62
 ADENOSINA DEAMINASA 66
 ASPARTATO AMINOTRANSFERASA - TGO 68
 ALANINA AMINOTRANSFERASA – TGP 71
 AMILASA 73
 LIPASA 76
 PROTEÍNAS TOTALES 78
 ALBUMINA 80
 FOSFATASA ALCALINA 83
 DESHIDROGENASA LÁCTICA – LDH 86
 GAMA GLUTAMIL TRANSFERASA 89
 ANTIESTREPTOLISISNAS O 92
 PROTEÍNA C REACTIVA 96
 FACTOR REUMATOIDEO 99
 RPR 102
 EXAMEN DE FLUIDOS BIOLÓGICOS (LCR) 104
 EXAMEN DE FLUIDOS BIOLÓGICOS (OTROS) 107
 HEMORRAGIAS OCULTAS 110
 PROTEÍNAS DE 24 HORAS 112
 VIH 116
 TEST DE ACIDO SULFOSALISILICO 118
 ANALIZADOR AUTOMATIZADO 121
Blgo. Mario David Arela Mamani Página 1 Manual de Bioquímica

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INTRODUCCIÓN
Para establecer un diagnóstico eficaz en el manejo de pacientes utilizando métodos

bioquímicos .de sangre y fluidos biológicos, es fundamental la participación del Laboratorio
Clínico .en el área de Bioquímica.
En muchas enfermedades los exámenes Bioquímicos son decisivos para el diagnóstico,

de ahí la importancia del laboratorio clínico, por lo tanto es indispensable que el área de
bioquímica cuente con un manual de procedimientos, instructivos y registros, con ello
pretendemos asegurar la CALIDAD de los resultados.
El presente Manual de Procedimientos contiene información básica para los diversos ensayos
de la mayoría de laboratorios. La finalidad es establecer criterios que permitan entender los
principios metodológicos de las pruebas, las diferencias que puede haber entre ellas y la
instrumentación diversa para tales fines. Según las normas contenidas en el documento
ISO/FDIS 15189. Contiene procedimientos generales sobre Recolección de Muestras,
Metodología Instrumental y Bioseguridad, conocimientos básicos sobre el trabajo pre analítico
y analítico.
En el laboratorio del HRMNB PUNO, estamos utilizando métodos estandarizados nacionales e

internacionales usados por la mayoría de los laboratorios. Para otro tipo de ensayos, solo
hemos señalado lineamientos generales de los principales métodos, sin desarrollar ninguno en
especial.

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GENERALIDADES
FINALIDAD.
El presente Manual de Procedimientos de Laboratorio en el diagnóstico Bioquímico, tiene por

finalidad presentar las actividades analíticas relacionadas a las principales pruebas del área de
Química Clínica, reuniendo criterios de aceptación internacional y enmarcadas de acuerdo a la
guía ISO/FDIS 15189. Es propósito de la norma que los laboratorios establezcan su propia
documentación en relación a su infraestructura y funciones.
ALCANCE
Para la aplicación y modelo de los laboratorio Región Puno del Ministerio de Salud..
DOCUMENTOS DE REFERENCIA
International Organization for Standardization. ISO / FDIS 15189. 2000. Quality

Management in the Clinical Laboratory. 2001.
Ministerio de Salud. Manual de Procedimientos de Laboratorio. Laboratorios Locales I.

Laboratorios Locales II. Lima, 1999.
Ministerio de Salud. Manual de Procedimientos de la Red de Laboratorios de Primer Nivel de

Atención, Lima, 2000.
TERMINOS Y ABREVIATURAS
Absorbancia. Propiedad de una molécula o conjunto de ellas por retener parte de las
longitudes de onda de un espectro de luz, no permitiendo su pasaje.
Acondicionamiento. Proceso por el cual se aseguran todas las propiedades de una muestra,
permitiendo su correcto análisis, desde la recolección hasta su ingreso al área de análisis.
Análisis. En la práctica laboratorial, la realización técnica de un proceso, básicamente
la determinación de algún compuesto.
Analito. Elemento capaz de ser analizado o determinado.
Catalizador. Elemento químico capaz de modificar la velocidad de una reacción, básicamente
acelerarla. Ejemplo: enzimas.
Coenzima. Molécula orgánica que unida a una enzima le permite mejorar su acción.
Corrida. Término utilizado en la práctica laboratorial, la cual denota el proceso
por el cual se determinan concentraciones de un analito en un mismo tiempo o en serie.
Cromógeno. Sustancia o componente químico capaz de virar hacia una tonalidad de color

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dentro de una reacción química.

Enzima. Proteína que cataliza una reacción química.
Filtro. Dispositivo que al paso de todo el espectro de la luz, permite separar sólo una banda de
longitudes de onda de la misma.
Kit. Denominación de un set ó contenedor de diversos productos reactivos y materiales
necesarios para un análisis.
Linealidad. Capacidad de un análisis de permitir crecimientos progresivos y lineales a medida
que aumenta la concentración del analito.
Método. Proceso o conjunto de procesos que permiten realizar una actividad, en este caso un
análisis. Las técnicas son variaciones para poner en la práctica un método.
Prisma. Vidrio o cuarzo con caras laterales que al girar permite reflejar una longitud de onda
(luz) específico. Se usa en espectrofotómetros.
Reproducibilidad. Capacidad de verificar una misma concentración bajo el mismo método de
análisis, pero con analista distinto y en un momento diferente de la determinación original.
Repetitividad: Capacidad de mantener la determinación de una concentración analítica bajo las
mismas condiciones de analista, equipo y momento.
Standard. Solución o sustancia pura de concentración conocida.
Suero control. Solución de analitos que se utiliza en el control de precisión. La concentración
obedece a una media y a un rango de valores calificados a ambos lados de esta media.
Transmitancia. Pasaje de luz o de longitudes de onda no retenidas al atravesar un cuerpo o
compuesto molecular.

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2.1METODOLOGIA E INSTRUMENTACIÓN EN LOS EXÁMENES BIOQUÍMICOS:
2.1.1 FOTOMETRIA:
El término equivale a “medición de luz”, lo que se traduce en la práctica laboratorial
como el proceso de determinar la intensidad de luz absorbida o emitida por una
sustancia coloreada.
Ley de Beer
La Ley de Beer explica mediante una fórmula matemática que la concentración de una
sustancia está en relación directa a la cantidad de luz absorbida o en relación inversa al
logaritmo de la luz transmitida. L a relación establecida entre Absorbancia (A) y
Transmitancia (T) se expresa de la siguiente manera:
A = log 100 = log 100 – log % T = 2 – log % T % T
En el terreno de la foto colorimetría, sin embargo, usamos una fórmula práctica que nos
permite relacionar la concentración frente a la absorbancia de una solución:
Fotómetros y Espectrofotómetros.
Son los instrumentos esenciales para realizar labores de foto colorimetría y, en general,
para la realización de los procedimientos de bioquímica. Los fotómetros mantienen en su
interior ( a manera de tambores) diversos filtros, los cuales dejan pasar ciertas
longitudes de onda , las cuales incidirán sobre la solución a ser medida. El resto de las
longitudes de onda son absorbidas por este filtro. Los espectrofotómetros, en cambio,
permiten mediante prismas o rejillas de difracción seleccionar longitudes de onda más
estrechas. En general, estos últimos permiten obtener bandas que, en promedio, no
sobrepasan los 0.5 a 1.5 nm, a diferencia de los filtros que obtiene aislamientos de luz
con bandas promedios de 5 a 10 nm.
Componentes de un Fotómetro o Espectrofotómetro

Fuente de energía luminosa: Se requieren lámparas específicas para mediciones en el
espectro de luz visible (360 a 950 nm aproximadamente) y en el ultravioleta (no visible,
de 220 a 360 nm aproximadamente). Para las mediciones con luz visible se usan
lámparas de wolframio o tungsteno y para las del rango ultravioleta, son apropiadas las
de hidrógeno o deuterio.
Selector de longitud de onda: Se usan filtros o monocromadores (prismas, rejillas de
difracción). La selección de una determinada longitud de onda dependerá del color de la
solución a ser medida.
CUADRO N 01
Color de la Solución Longitud de Onda Color absorbido a
Seleccionada (nm) dicha longitud de
onda.
Amarillo Verdoso 380-430 Violeta
Amarillo 430-475 Azul

Naranja 475-495 Verde Azulado

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Rojo 495-505 Azul verdoso

Púrpura 505-555 Verde
Violeta 555-575 Verde amarillo
Azul 575-600 Amarillo
Azul verdoso 600-620 Naranja
Verde azulado 620-700 Rojo
Cubetas: Son los recipientes donde se colocará la solución a ser medida. Los hay de
diverso tamaño y material de construcción.
Detectores de Energía Radiante o Luminosa: Se encargan de transformar la energía
luminosa en energía eléctrica.
Dispositivos de Lectura: Para transformar la energía eléctrica en un valor de absorbancia
o transmitancia.
2.1.2 MÉTODOS DE ANÁLISIS BIOQUÍMICOS:

La medida de la concentración de sustancias por fotometría se realiza por cuatro tipos
de métodos: los de absorbancia, los de punto final, tiempo fijo y los cinéticos.
2.1.2.1 Métodos de Punto Final

En estos métodos se incuban según cada procedimiento, reactivos y muestra, además
del mismo reactivo con el patrón o standard, esperando un tiempo determinado para
lograr la finalización de la reacción. Al final se leen las absorbancias de la muestra, del
patrón o estándar, del blanco de reactivos y debe conocerse la concentración del
patrón.
Concentración de la muestra = Factor x (Abs. Muestra-Abs. Blanco)
El Factor es obtenido de la siguiente manera:
Factor = Concentración del patrón o Standard
(Abs. Del Patrón-Absorbancia Blanco) .
EJEMPLOS:
a. PARA DETERMINACIÓN DE LA GLUCOSA (MÉTODO DE PUNTO FINAL)
 Fundamento del método.

La enzima glucooxidasa cataliza la oxidación de glucosa a gluconato y peróxido de
hidrógeno. La concentración de glucosa es proporcional al H2O2, este puede
medirse apareándolo con un indicador de peroxidasa.

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La determinación de glucosa se efectúa mediante el método de Trinder según las

siguientes reacciones:
GOD
Glucosa + O2 + H2O -----► H2O2 + Gluconato
POD
2H2O2 + Fenol + 4-AF -----► Quinona + 4H2O
Abreviaturas: GOD = Glucosa oxidasa

POD = Peroxidasa
4-AF = 4-aminofenazona.
 Muestra
- Suero o plasma.
- La muestra debe recolectarse en ayuno.
 Reactivos:
- Mono reactivo : Tampón fosfato 100 mmol/L pH7.5, Glucosa oxidasa >
10 KU/L, peroxidasa > 2 KU/l, 4-aminoantipirina, 0.5 mmol/L, fenol 5 mmol/L.
- Estándar: Concentración 100 mg/dL.
 Material.
- Tubos de ensayo de 13 X100mm.
- Micro pipeta de 10, 500 y 1000 uL.
- Tips o punteras.
- Vacutainer sin anticoagulante con aguja /jeringa.
- Gradilla.
 Equipo.
- Analizador bioquímico semiautomático /automático para lecturas 505-510
nm.
- Centrifuga.
- Baño María
 Procedimiento
Longitud de onda: 505nm (490-550)
Temperatura: 37°C.
Ajuste a cero con blanco de reactivo.
Pipetear en tubos de ensayo:
Blanco Estándar Muestra
Estándar -- 10µL --
Muestra -- -- 10 µL

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Reactivo 500uL 500 uL 500 uL

Mezclar e incubar 5 a 10 min a 37°C. y Leer.
Reacción estable 30 minutos a temperatura ambiente.
 Resultados
Cálculos.
[ ]
Abs. Muestra x Factor = RESULTADO mg/Dl
Linealidad del método:

- El método es lineal hasta valores de 500 mg/dL.
- Si la concentración de glucosa es superior, diluir la muestra a 1:2 con
solución salina 0.9% y multiplicar el resultado por 2.
 Valores Normales
mg/dL
Suero o plasma 70 - 110
Neonato nacido a término 30 – 60
Calibre periódicamente colocando un Standard en cada corrida. De esta forma

obtendrá un factor confiable para su prueba
En algunas reacciones se recomienda el uso de blanco de muestra para reducir la
interferencia que algún compuesto en la misma pudiera causar al proceso.
Sencillamente mida la absorbancia de este blanco de muestra y proceda a la
sustracción con la absorbancia de la muestra.
Dentro de este método se encuentran las pruebas de:

b. Ácido úrico
c. Colesterol total
d. HDL – colesterol
e. LDL – colesterol
f. Triglicéridos
g. Calcio
h. Fosforo
i. Bilirrubinas total y directa
j. Proteínas totales y fraccionadas, Etc.
2.1.2.2 MÉTODOS DE TIEMPO FIJO.

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EJEMPLO:
a. PARA DETERMINACION DE LA CREATININA.
 Fundamento del método.

La reacción química aplicable para fotometría es la descrita por Jaffe, basada en
el color anaranjado que se produce al reaccionar la creatinina con el picrato
alcalino. Se logra una gran especificidad debido a que la creatinina reacciona con
el picrato alcalino con más rapidez que los cromógenos (metilguanidina,
picramato), por lo que la medida del incremento de color en un breve período
de tiempo inicial de la reacción valorarán principalmente creatinina, con poca
influencia de los cromógenos inespecíficos, por esto es recomendable la
determinación cinética.
pH > 12
Creatinina + ácido pícrico --------› Complejo de adición rojo
37° C
 Muestras
- Suero o plasma heparinizado.
- La creatinina en suero y plasma tiene una estabilidad de al menos de 24 horas
a 2-8°C.
- Orina .Diluir previamente a 1:50 con agua destilada, multiplicar el resultado
por 50.
 Reactivos:
- Reactivo 1 Ac. pícrico 17.5 mmol/L
- Reactivo 2 Hidróxido sódico 0.29 mol/L
- Estándar Sol. Creatinina 2.0 mg/Dl
 Mezcla reactivo de trabajo:

- Mezclar ambos reactivos a partes iguales según necesidades V/V.
- Esta mezcla es estable 10 días a temperatura ambiente.
 Materiales:
- Micro pipeta de 500 µL
- Micro pipeta de 50 µL.
- Piseta con agua desionizada o destilada.
- Tubos de vidrio de 13X100
- Puntas para micro pipeta
- Gradilla.
 Equipo.
- Analizador Bioquímico Semiautomáticos con filtro de 490-510 nm.
- Centrífuga
 Procedimiento

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- Longitud de onda: 490 nm (490-510)

- Temperatura: 37°C
- Paso de luz: 1 cm paso de luz
- Ajuste del cero con blanco de reactivo.
Estándar Muestra
Estándar 50 µL
Muestra 50 µL
Reactivo 500 uL 500 uL
Mezclar y leer en el Analizador Bioquímico Semiautomático.

Anotar la D. Óptica a los 30 segundos (E1) y a los 90 segundos (E2).
Lectura a 492 nm (490-510)
 Resultados
Cálculos
mg/dL creatinina = Δ. Extinción muestra/ Δ. Extinción estándar x conc. Estándar
= conc. Muestra mg /dL
 Valores Normales
En suero o plasma: 0,8 a 1,4 mg/dl.
b. Urea.
2.1.2.3 MÉTODOS CINÉTICOS.

En estos métodos se determinan variaciones en la absorbancia de una reacción a
través de mediciones por intervalos de tiempo, generalmente no mayor a los 5
minutos (varía de acuerdo al procedimiento específico y al tipo de instrumentación
disponible). Por lo tanto, habrá una serie de absorbancias obtenidas durante el
lapso de tiempo total. Para ello, se consigue calcular una delta A, mediante la
sustracción entre la segunda determinación y la primera, la tercera y la segunda y
así consecutivamente, terminando por promediar dichas diferencias y aceptando
ese promedio como delta A. Luego, se procede a multiplicar dicha cifra por el
factor proporcionado por el fabricante.
EJEMPLOS:
a. PARA DETERMINACION DE ASPARTATO AMINO TRANSFERASA – TGO
 Fundamento del método:

Se mide la actividad de la aspartato aminotransferasa mediante un método
cinético enzimático. En la reacción, la aspartato aminotransferasa cataliza la
transaminación reversible de L-aspartato y a-cetoglutarato a oxalacetato y L-
glutamato. Luego, el oxaloacetato se reduce a malato en presencia de malato
deshidrogenasa (MDH), con la oxidación concurrente de a dinucleótido de

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nicotina mida adenina reducida (NADH) a dinucleótido de nicotina mida adenina

(NAD).
 Esquema De La Reacción Química

↔
↔
 Muestras
- Suero o plasma
 Reactivos
REACTIVO 1 Tampón TRIS pH 7.8, 80 mmol/L
Tampón L-Aspartato 200 mmol/L
REACTIVO 2 NADH 0.i8 mmol/L

Comprimido LDH 800 U/L MDH 600 U/L
α-cetoglutarato i2 mmol/L
 EQUIPO
- Analizador Bioquímico Semiautomático.
- Centrifuga.
- Cronómetro
 MATERIAL
- Tubos de ensaye de 13 X100mm.
- Micro pipeta de 50, 100, 500 y 1000 ul.
- Puntas para micro pipeta.
- Gradilla.
 PROCEDIMIENTO
CONDICIONES DE ENSAYO:
- Longitud de onda: 340nm
- Temperatura: 37°C.
- Cubeta: 1cm. Paso de luz
DESARROLLO:
Semi micro test

Reactivo de trabajo 500 uL
Muestra 50 uL
Mezclar, y leer. Primera lectura a los 30 segundos. Segunda lectura a los 90
segundos.

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* Preparación reactivo de trabajo: R1 400ul + R2 100ul

Muestra 50ul
 RESULTADOS
CÁLCULOS:
- Factor : -1745 (según inserto)
LINEALIDAD DEL MÉTODO:
Si la linealidad es superior la muestra deberá diluirse a 1:10 con solución salina
0.9%. Resultado multiplicar x 10
 VALORES NORMALES
- Hasta 35 U/L
 OBSERVACIONES
La hemólisis interfiere en el resultado.
Dentro de este método se encuentran:

b. Alanina amino transferasa
c. Creatin kinasa
d. Amilasa
e. Lipasa
f. Fosfatasa alcalina
g. Deshidrogenasa láctica - LDH
h. Gama glutamil transferasa, etc.
2.1.3 CENTRIFUGACIÓN.
Técnica de separación por la cual las partículas de una solución son separadas lejos de
un centro de rotación, gracias al movimiento originado por la fuerza centrífuga. Dicha
separación dependerá de la masa y la forma de las partículas.
 Tipos de Centrífugas
Existen dos tipos fundamentales de centrífuga en el trabajo de un laboratorio de
Bioquímica. Estos tipos dependen del cabezal o rotor que soporta los envases donde se
colocan los tubos. Dichos cabezales pueden ser horizontales o angulares. En los primeros,
los tubos se centrifugan en forma horizontal, en forma paralela al eje de rotación. En los
llamados angulares, la disposición de los tubos en ángulo con respecto al eje, permite
una centrifugación que empuja las partículas hacia el fondo y hacia una pared lateral del
tubo.
- Realizar mantenimientos preventivos en los carbones del instrumento y en las
mediciones de rpm mediante un tacómetro.
- Calibrar si fuera posible al menos una vez al año (esto se consigue por medio de alguna
empresa que brinde dicho servicio metrológico). No es lo mismo calibrar que controlar
las rpm en forma interna.
- Mantenga una ficha de mantenimiento en el archivo general de Mantenimiento de
Equipos.

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2.1.4 ANALIZADORES AUTOMATIZADOS

 Clasificación según su grado de automatización:
Automatización completa: Son equipos que partiendo de suero u otro líquido
susceptible de análisis, son capaces de realizar todos los pasos técnicos hasta la
entrega de resultados en forma de concentraciones.
Automatización parcial o Semi automatización: Son aquellos que requieren de algún
manipuleo previo del suero o líquido a analizar, antes de suministrarlo a la máquina
para que lo siga procesando.
 Mantenimiento de Analizadores automatizados:
Los analizadores automatizados requieren de un plan de mantenimiento.
Planifique anualmente el mantenimiento que le dará a fotómetros, centrífugas,
estufas, pipetas, refrigeradores y termómetros. Incluya igualmente en fichas
separadas, el correspondiente al analizador de uso.
Poner por escrito las principales indicaciones que el fabricante aconseja para el
mantenimiento diario, semanal, mensual o anual implementar una ficha de
mantenimiento de equipos en la sección de anexos.
Delegue a una persona la responsabilidad del mantenimiento.
Mantener el contacto y datos precisos del distribuidor de su instrumento, con el
objeto de coordinar mantenimientos preventivos y necesidades de reparación.
2.1.5 PIPETAS
Instrumentos empleados para trasvasar un volumen líquido de un recipiente físico hacia
otro. Se emplea en los análisis de laboratorio tanto para reactivos como para muestras
biológicas.
 Clasificación
Pipetas de vidrio. Pueden ser volumétricas (aspiran y transportan volúmenes) y
graduadas (permiten las aspiración y transporte de volúmenes medidos).
Pipetas Mecánicas: Las llamadas micro pipetas mecánicas permiten trabajar en la rutina
diaria con volúmenes de 0.5 a 1000 ul. Pueden ser de desplazamiento de aire
(indirectas) o de desplazamiento directo
2.1.6 BAÑO MARÍA

Dispositivo para calentar agua. El calor se obtiene a partir de un módulo eléctrico.
Se utiliza para trabajos a 25°, 30°, 37°, 42° o 56 °, siendo de utilidad en bioquímica los
tres primeros rangos.
Recomendaciones de Uso
Controlar el nivel de agua, de modo que se mantenga por encima del nivel de la
solución que se ha de incubar.
- Mantener la tapa del baño maría abierta cuando se proceda a la incubación de
recipientes o tubos, evitando contaminaciones y la dilución del material por el
agua condensada.
- Cambiar el agua con regularidad para evitar la proliferación de algas, bacterias u
hongos.

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BIOSEGURIDAD
RESPONSABILIDADES
La bioseguridad del laboratorio compromete a todo el personal; se deriva de esta afirmación

que cada empleado debe comunicar a sus superiores cualquier acto o condición que atente
contra ella, así como contribuir a su cumplimiento. Es aconsejable que el Jefe del Laboratorio
designe o se encarguen de la supervisión de las normas.
PRINCIPALES MEDIDAS EN LABORATORIOS DE BIOQUIMICA
Protección Individual
Facilitar equipo de protección necesario y mantenerlo en buenas condiciones de higiene y

seguridad. Este equipo incluye: mascarillas, gafas de protección ocular y bata o mandiles
apropiados, además de guantes. La infraestructura tomará en cuenta de agua potable.
Almacenamiento de Líquidos Inflamables
Utilizar recipientes adecuados. Disponer señales en el área de almacenamiento señalizaciones

y extintores suficientes y en vigencia.
Saneamiento del medio
Mantener limpieza e higiene en mobiliarios, zonas de trabajo, pisos, corredores, indumentaria.

Disponer de adecuados recipientes de basura y mantenerlos cerrados. Destinar espacio
suficiente para la alimentación del personal, así como vestidores para comodidad de los
mismos.
Requisitos mínimos:
· Capacitación del personal.
· Señalizaciones adecuadas.
· Identificar los extintores y mantenerlos en buen uso.
· Utilizar cables de tres conductores (con toma a tierra) en todas las instalaciones
eléctricas.
Uso de tomas de corriente de un solo enchufe, evitando las conexiones múltiples.
REGLAS DE BIOSEGURIDAD.
Lavado de manos del personal después de haber manipulado material infeccioso.

No permitir pipetear con la boca
Prohibir al personal comer, beber o fumar en zonas de trabajo.
Evitar el uso de cosméticos en áreas de trabajo.

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No guardar alimentos o bebidas en los refrigeradores de trabajo.

Mantener el laboratorio limpio y aseado. Descontaminar superficies de trabajo una vez al día.
Usar batas, uniformes, mandiles en el ambiente de labores. No trasladar dicha indumentaria
fuera del mismo.
Autorizar el paso a la zona de trabajo al personal del mismo y a todo aquel que sea informado
de los requisitos para su permanencia en el lugar. Mantener las puertas cerradas.
No permitir niños en zonas de trabajo.
Utilizar guantes en todos los trabajos que impliquen relación directa con material
sanguíneo.
Esterilizar en autoclave el material de desecho permisible de dicha acción, antes de su
eliminación.
DESINFECCION
Los desinfectantes recomendados para el trabajo general de laboratorio son:
Cloro: Hipoclorito sódico. El cloro es un desinfectante universal, activo contra

todos los microorganismos.
Como desinfectante general para toda clase de trabajos de laboratorio, se utilizará una
concentración de 1gr/L (1000 ppm) de cloro libre. En los casos de salpicaduras de sangre o en
presencia de material orgánico en cantidad apreciable, para la desinfección se debe recurrir a
una solución más concentrada de 10 g/L (10 000 ppm), de cloro libre.
Compuestos fenólicos. Muchos compuestos fenólicos que constituyen la base de cierto

número de desinfectantes corrientes. Los compuestos fenólicos pueden emplearse cuando no
se dispone de hipocloritos, diluyéndolos de acuerdo con las recomendaciones del fabricante.
Yodo y yodoformos. La acción de estos desinfectantes es parecida a las de los hipocloritos; las
superficies limpias pueden tratarse eficazmente con soluciones que contengan 0.075 g/L (75
ppm) de yodo libre. Los yodoformos pueden diluirse en alcohol etílicos para el lavado de
manos o como esporicida.
Alcohol etílico y alcohol isopropilico. Estos desinfectantes son de menos eficacia que los ya
mencionados.
ELIMINACION DE DESECHOS
Los desechos no contaminados se introducen en bolsas negras y pueden eliminarse con

la basura corriente.

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Las agujas hipodérmicas y jeringas, deben colocarse en recipientes rojos con paredes
que no puedan traspasarse fácilmente.
El material contaminado, se coloca en recipientes impermeables, que contengan una

cantidad de desinfectante suficiente para cubrir el contenido. Los recipientes se colocan
luego en autoclave.

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RECOLECCION DE MUESTRAS DE SANGRE
DISPOSICIONES GENERALES
· Ayuno: Para ciertos estudios que requieren muestras sanguíneas, se deben conservar
condiciones de ayuno. Dicho tiempo puede variar entre 8 horas a 12 horas.
· La sangre debe recolectarse en tubos de vidrio o plástico limpios. La contaminación por
bacterias podría acarrear la metabolización de ciertos analitos (ej. glucosa), evitando
movimientos bruscos y posterior hemólisis.
· Luego de la recolección de la sangre, debe permitirse que se coagule antes de la
centrifugación y separación del suero. Para la totalidad de los procedimientos
descritos en este manual, bastará con la utilización de este componente sanguíneo. Sin
embargo, para el manejo de muestras para ensayo de Hemoglobina glicosilada y en la
eventualidad de usarse como alternativa el plasma, se recomienda someter los tubos a
maniobras de inversión para lograr el mezclado correspondiente con el anticoagulante,
evitando la formación de coágulos.
ANTICOAGULANTES PARA RECOLECCION DE MUESTRAS
Los anticoagulantes son sustancias que previenen la formación de coágulos. No siendo

necesarios en el trabajo bioquímico, con excepción de las muestras para ensayos de
Hemoglobina glicosilada.
EDTA (Etilen Diamino Tetra Acetato): Usado para estudios celulares, es factible su uso en el
trabajo bioquímico de algunos componentes (ej. glucosa).
Citrato de Sodio: Usado en concentraciones al 3.8%, generalmente para estudios de
coagulación.
Heparina: Se utiliza en presentaciones con concentraciones de litio y sodio. Para estudios
bioquímicos es preferible el uso de heparina con litio.
Oxalatos: De menor uso en la actualidad, se restringe a los ensayos de glucosa.
Códigos de colores internacionales:
· Tapa Roja: Sin Anticoagulante
· Tapa Violeta: Con EDTA.
· Tapa Celeste: Con Citrato de Sodio.
· Tapa Verde o Blanca: Con Heparina.
· Tapa Gris: Con Oxalatos.
Material para Toma de Muestras
- Guantes
· Jeringa, aguja
· Tubo recolector
· Algodón 70°

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Patologica
· Alcohol
· Ligadura
· Lancetas
· Capilares
· Venditas
· Contenedor de desechos
GUIAS BASICAS DE ASEPSIA
 Utilizar siempre guantes y mandil para la obtención de muestras. Los guantes deben
desecharse y ser cambiados por un nuevo par después de atender a cada paciente.
 Lavarse prolijamente las manos antes y después de la atención de un paciente.
 Todas las agujas, jeringas y de preferencia tubos de recolección deben ser
estériles.
 Desinfectar adecuadamente el área de punción con alcohol 70° u otras soluciones
antisépticas como el yodo.
 No tocar el sitio de punción luego de la desinfección.
REVISION DE PETITORIOS U ORDENES MÉDICAS
Examine con cuidado el petitorio u orden, asegurándose haber entendido la solicitud. En caso
contrario, pregunte a su superior o intente comunicarse con el médico tratante.
LOS TIEMPOS EN LA TOMA DE MUESTRAS
Tómese en cuenta las siguientes indicaciones en ambos tipos de tiempos de toma de muestras:
· Las condiciones de preparación del paciente deben ser escrupulosamente respetadas.

· Preguntar por la ingesta de medicamentos; algunos de ellos interfieren en las pruebas.
· En toma de muestras de tiempo múltiple.
. La persona que inicialmente dio las indicaciones al paciente y recolectó la primera
muestra, sea la responsable de respetar los horarios indicados.
RECONOCIMIENTO DEL PACIENTE
Hable con el paciente para averiguar sus nombres y apellidos y anote el número de cama.
Transmita confianza y seguridad, explicando calmadamente el procedimiento que realizará.
Si el paciente tiene dudas, trate de absolverlas: disminuirá su natural temor.
No extienda la conversación más allá de lo pertinente.

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Patologica
Termine su procedimiento, indicando lo necesario frente a segundos muestreos, horarios de

entrega de resultados y todo aquello que Ud. pueda y le sea permitido resolver.
SELECCIÓN DEL SITIO DE PUNCION
Acomode al paciente de forma segura y confortable.
No practique ninguna punción con el paciente en posición de pie.
Elija una extremidad en la que no exista ninguna venoclisis, herida o lesión reciente,
comunicaciones arteriovenosas, heridas o procedimientos quirúrgicos y cualquier eventualidad
que le haga dudar de la necesidad de punzar dicha zona.
Elija una vena que tenga dos características: visible y palpable. Puede ubicarla en la fosa ante
cubital del antebrazo, por donde surcan las venas cefálica y braquial. Si la vena no es muy
visible, intente realizar masajes desde la muñeca hasta el codo.
Ajuste una ligadura unos 2- 4 dedos por encima del sitio elegido. La presión debe ser media, lo
suficiente para evitar presiones mayores que causarían hemólisis, colapso venoso o dolor.
Previa a la punción limpie la zona indicada con movimientos circulares y del centro hacia fuera.
Dirija la aguja en un ángulo de 15-30 ° con respecto a la superficie del brazo. Punce en forma
directa a través de la piel y hasta el lumen de la vena.
Terminada la colección retire suavemente la aguja del brazo del paciente, aplicando una gasa
compresiva o torunda de algodón en el sitio de punción.
Acabado el procedimiento, indíquele al paciente que debe conservar la presión, ejerciendo
hemostasia por unos 5 minutos. Coloque finalmente una banda adhesiva (vendita o “curita”)
sobre la herida de la punción.
Si el sangrado no se detiene, aplique presión sobre la zona durante 10 minutos adicionales. Si
el problema persiste, consulte con el superior inmediato o médico tratante.
Deposite y destruya todo el material desechable en los recipientes diseñados para tal
propósito. Este acto de destruir el material frente al paciente, aumenta su confianza en las
bondades y buenas prácticas de laboratorio.
Finalmente, y muy importante, termine su trabajo etiquetando e identificando los tubos
recolectados antes de atender una nueva tarea.
RECOLECCION DE MUESTRAS EN NIÑOS
Realice el procedimiento con la ayuda de compañeros de trabajo.

Sujete firmemente el brazo del niño, incluso cuando éste no oponga resistencia. La natural
reacción del niño es retirar bruscamente el brazo al sentir la punción, lo cual podría ocasionar
heridas en el mismo y pérdida de la maniobra.

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Patologica
RECOLECCION DE MUESTRAS DE SANGRE EN BEBES
 El sitio recomendado de punción, pertenece al talón del bebé o infante.

 Limpie la zona y mantenga firme el pie del infante para evitar sacudidas bruscas.
 Use una lanceta estéril y punce en las porciones laterales del talón (no en el centro), en
sentido contrario a los pliegues del talón, evitando que la gota de sangre resbale hacia
abajo, usando estos pliegues como camino.
 Limpie la primera gota de sangre y permita la salida de las posteriores con suaves
masajes, evitando la dilución con líquidos tisulares. Llene el capilar o contenedores con
la cantidad necesaria.
 Descarte el material desechable y etiquete apropiadamente los contenedores.
CONSIDERACIONES FINALES
Para Prevenir un hematoma:
· Punce sólo la pared superior de la vena.

· Remueva el torniquete o ligadura antes de remover la aguja
· Use venas superficiales mayores (cefálica, braquial).
· Asegúrese que la aguja penetra la pared superior de la vena (penetraciones parciales
permiten la salida de sangre hacia el tejido blando).
· Aplique presión en el sitio de la punción.
Para prevenir hemólisis:
· Mezcle adecuadamente los tubos que contengan anticoagulante con la muestra

obtenida.
· Evite recolección de sangre de una zona con hematoma.
· Evite la aspiración forzada de sangre si usa jeringa y aguja y dispender la muestra al
contenedor a través de la aguja.
· Asegúrese que el sitio de punción está seco antes del procedimiento.
· Evite manipulaciones, repeticiones o venopunciones traumáticas.
Evite la Hemoconcentración:
Un incremento de grandes moléculas y analitos en la sangre puede deberse a:

· Aplicación prolongada de la ligadura.
· Excesivo masaje o presión al probar el sitio de punción.
· Venas esclerosadas u obstruidas.
· Uso de terapias endovenosas de largo plazo.
Efectos de la aplicación prolongada del torniquete o ligadura:

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· Hemoconcentración.
· Incrementos significativos en proteínas totales, transaminasas, lípidos totales,
colesterol, hierro.
· Afecta al paquete celular sanguíneo.
Factores del paciente que afectan la calidad de la muestra recolectada.
· Uso de fármacos. Considerar en cada procedimiento de ensayos, la posibilidad de

ciertas drogas de interferir en el mismo.
· Ejercicio: La actividad muscular tiene efectos directos sobre la elevación de Creatina
Kinasa, Aspartato aminotransferasa o Transaminasa glutámico oxalacética,
Deshidrogenasa láctica y recuento de plaquetas.
· Stress: No tiene relación directa con los procedimientos de este manual, sin
embargo, la elevación transitoria de cortisol y catecolaminas podría afectar
indirectamente algunos analitos como la glucosa.
· Postura: Los cambios posturales (de supina a sentado) pueden interferir en el ensayo de
ciertos analitos. Ciertas moléculas grandes no son filtrables hacia los tejidos, de modo
que obtendrán una concentración mayor en la sangre. En esta categoría se encuentran
enzimas, proteínas, lípidos, hierro y calcio.
· Otros factores: Edad, sexo, gestación.
PRESERVACION DE LAS MUESTRAS
Mantener como práctica ideal la centrifugación de una muestra, tan pronto como se formó el
coágulo.
El tiempo máximo de espera de una muestra de sangre total para su separación es de una hora.
Pasado este tiempo, sufren variaciones significativas la glucosa, el potasio, fósforo, creatinina y
transaminasas.
Si se requiriera una conservación superior a 1 hora, se recomienda almacenar la muestra a
temperatura ambiente, antes que a 4°C. Esto retardará discretamente la hemólisis.
En el caso de suero o plasma separado, las muestras que no puedan analizarse dentro de las
primeras 4 horas deben ser almacenadas a temperatura de refrigeración (2-8 °C) hasta su
proceso.
TRANSPORTE DE MUESTRAS
El tiempo ideal de traslado de un laboratorio hacia otro centro debiera oscilar entre 45 a 60
minutos.
Utilizar recipientes de material plástico (polietileno o polipropileno) como contenedores de las
muestras transportadas.
Identificar correctamente las muestras trasladadas, enviando en formato externo cualquier
dato adicional que no pudiera escribirse en el tubo o contenedor.
Depositar estas muestras en sobres o cajas que puedan permitir el uso de unidades o bolsas
refrigerantes (los envases de polietileno son adecuados para este fin).

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Patologica
Asegurarse que los tubos se encuentren perfectamente sellados, evitando derrames o

contaminaciones con las soluciones refrigerantes.
En caso de recurrir a envíos por correo o courier, asegurarse de las condiciones de entrega y
embalaje del material enviando, respetando la cadena de frío si es esencial. Actualmente
existen compañías que mantienen experiencia en traslados de material biológico.
Verifique con el centro referencial las condiciones de envío de las muestras, así como su
recepción exitosa.

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Patologica
METODOLOGIA E INSTRUMENTACIÓN
FOTOMETRIA
El término equivale a “medición de luz”, lo que se traduce en la práctica laboratorial como el

proceso de determinar la intensidad de luz absorbida o emitida por una sustancia coloreada.
Ley de Beer
La Ley de Beer explica mediante una fórmula matemática que la concentración de una sustancia
está en relación directa a la cantidad de luz absorbida o en relación inversa al logaritmo de la
luz transmitida. L a relación establecida entre Absorbancia (A) y Transmitancia (T) se expresa
de la siguiente manera:
A = log 100 = log 100 – log % T = 2 – log % T % T

En el terreno de la foto colorimetría, sin embargo, usamos una fórmula práctica que nos
permite relacionar la concentración frente a la absorbancia de una solución:
Fotómetros y Espectrofotómetros.
Son los instrumentos esenciales para realizar labores de foto colorimetría y, en general,
para la realización de los procedimientos de bioquímica. Los fotómetros mantienen en su
interior ( a manera de tambores) diversos filtros, los cuales dejan pasar ciertas longitudes
de onda , las cuales incidirán sobre la solución a ser medida. El resto de las longitudes de
onda son absorbidas por este filtro. Los espectrofotómetros, en cambio, permiten
mediante prismas o rejillas de difracción seleccionar longitudes de onda más estrechas.
En general, estos últimos permiten obtener bandas que, en promedio, no sobrepasan los
0.5 a 1.5 nm, a diferencia de los filtros que obtiene aislamientos de luz con bandas
promedios de 5 a 10 nm.
Componentes de un Fotómetro o Espectrofotómetro
Fuente de energía luminosa: Se requieren lámparas específicas para mediciones en el

espectro de luz visible (360 a 950 nm aproximadamente) y en el ultravioleta (no visible,
de 220 a 360 nm aproximadamente). Para las mediciones con luz visible se usan lámparas
de wolframio o tungsteno y para las del rango ultravioleta, son apropiadas las de
hidrógeno o deuterio.
Selector de longitud de onda: Se usan filtros o monocromadores (prismas, rejillas de

difracción). La selección de una determinada longitud de onda dependerá del color de la
solución a ser medida.
Color de la Solución Longitud de Onda Color absorbido a

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Patologica
Seleccionada (nm) dicha longitud de

onda.
Amarillo Verdoso 380-430 Violeta
Amarillo 430-475 Azul

Naranja 475-495 Verde Azulado
Rojo 495-505 Azul verdoso
Púrpura 505-555 Verde
Violeta 555-575 Verde amarillo
Azul 575-600 Amarillo
Azul verdoso 600-620 Naranja
Verde azulado 620-700 Rojo
Cubetas: Son los recipientes donde se colocará la solución a ser medida. Los hay de diverso
tamaño y material de construcción.
Detectores de Energía Radiante o Luminosa: Se encargan de transformar la energía luminosa
en energía eléctrica.
Dispositivos de Lectura: Para transformar la energía eléctrica en un valor de absorbancia o
transmitancia.
Métodos de Análisis
La medida de la concentración de sustancias por fotometría se realiza por cuatro tipos de

métodos: los de absorbancia, los de punto final, tiempo fijo y los cinéticos.
Métodos de Punto Final
· En estos métodos se incuban según cada procedimiento, reactivos y muestra, además

del mismo reactivo con el patrón o standard, esperando un tiempo determinado para
lograr la finalización de la reacción. Al final se leen las absorbancias de la muestra, del
patrón o estándar, del blanco de reactivos y debe conocerse la concentración del
patrón.
Concentración de la muestra = Factor x (Absorb. Muestra-Abs. Blanco)

Código: 01

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Patologica
El Factor es obtenido de la siguiente manera:
Factor = Concentración del patrón o Standard

(Abs. Del Patrón-Absorbancia Blanco)
Calibre periódicamente colocando un Standard en cada corrida. De esta forma obtendrá un

factor confiable para su prueba
En algunas reacciones se recomienda el uso de blanco de muestra para reducir la interferencia

que algún compuesto en la misma pudiera causar al proceso.
Sencillamente mida la absorbancia de este blanco de muestra y proceda a la sustracción con la
absorbancia de la muestra.
Métodos Cinéticos.
En estos métodos se determinan variaciones en la absorbancia de una reacción a través de

mediciones por intervalos de tiempo, generalmente no mayor a los 5 minutos (varía de acuerdo
al procedimiento específico y al tipo de instrumentación disponible). Por lo tanto, habrá una
serie de absorbancias obtenidas durante el lapso de tiempo total. Para ello, se consigue
calcular una delta A, mediante la sustracción entre la segunda determinación y la primera, la
tercera y la segunda y así consecutivamente, terminando por promediar dichas diferencias y
aceptando ese promedio como delta A. Luego, se procede a multiplicar dicha cifra por el factor
proporcionado por el fabricante.
CENTRIFUGACIÓN.
Técnica de separación por la cual las partículas de una solución son separadas lejos de un
centro de rotación, gracias al movimiento originado por la fuerza centrífuga. Dicha separación
dependerá de la masa y la forma de las partículas.
Tipos de Centrífugas
Existen dos tipos fundamentales de centrífuga en el trabajo de un laboratorio de Bioquímica.
Estos tipos dependen del cabezal o rotor que soporta los envases donde se colocan los tubos.
Dichos cabezales pueden ser horizontales o angulares. En los primeros, los tubos se centrifugan
en forma horizontal, en forma paralela al eje de rotación. En los llamados angulares, la
disposición de los tubos en ángulo con respecto al eje, permite una centrifugación que empuja
las partículas hacia el fondo y hacia una pared lateral del tubo.
Cálculos de velocidad
La aceleración en una centrífuga se expresa de manera estandarizada como múltiplo de la

Código: 01

Fecha:03/2015
GESTION DE CALIDAD
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Patologica
aceleración de la gravedad. Así, el número de veces de aceleración de la gravedad se indica

como Fuerza Centrífuga Relativa (FCR) y se expresa en “g”.
-5 2
FCR = 1.12 x 10 (rpm) x r
Donde r = radio de giro y rpm = revoluciones por minuto.

De esto se desprende que una centrifugación a 10,000 g variará en rpm en una centrífuga con
radio de giro de 5cm frente a una de 10 cm.
Recomendaciones especiales
· Realizar mantenimientos preventivos en los carbones del instrumento y en las

mediciones de rpm mediante un tacómetro.
· Calibrar si fuera posible al menos una vez al año (esto se consigue por medio de alguna
empresa que brinde dicho servicio metrológico). No es lo mismo calibrar que controlar
las rpm en forma interna.
· Centrifugar con responsabilidad, manteniendo la tapa cerrada durante el proceso y
esperando el tiempo necesario para el frenado completo. Eliminar la costumbre de
abrir la cubierta del instrumento para apurar el proceso de frenado en forma manual.
· Realizar periódicamente una limpieza general y aplicar normas de bioseguridad en caso
de rotura de tubos en su interior. Prevenga contaminaciones y accidentes balanceando
eficazmente los tubos que introduce.
· Mantenga una ficha de mantenimiento en el archivo general de Mantenimiento de
Equipos.
ANALIZADORES AUTOMATIZADOS
Clasificación
Según su grado de automatización:

Automatización completa: Son equipos que partiendo de suero u otro líquido susceptible de
análisis, son capaces de realizar todos los pasos técnicos hasta la entrega de resultados en
forma de concentraciones.
Automatización parcial o Semiautomatización: Son aquellos que requieren de algún manipuleo
previo del suero o líquido a analizar, antes de suministrarlo a la máquina para que lo siga
procesando.
Según la secuencia de análisis

Código: 01

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Patologica
· Seriada: Implica el análisis de las muestras en forma secuencial, una detrás de

otra, no pudiendo existir dos muestras distintas que puedan estar en la misma
etapa operativa.
· Paralela: El analizador trabaja varias muestras en forma simultánea, las cuales
van pasando por los mismos pasos de una técnica.
Según la independencia o no de cubetas o recipientes de reacción
· Discretos: Sea automatizado o no, cada muestra con sus correspondientes

reactivos se encuentra en un recipiente separado. Aunque una muestra puede
cambiar de recipiente, jamás comparte el mismo con otra muestra.
· De flujo continuo : Todas las muestras circulan a través de un mismo tubo, de tal
manera que varias muestras distintas se encuentran simultáneamente, una detrás
de otra , en el mismo recipiente.
Mantenimiento de Analizadores automatizados:
Los analizadores automatizados requieren de un plan de mantenimiento.
Planifique anualmente el mantenimiento que le dará a fotómetros, centrífugas, estufas,

pipetas, refrigeradores y termómetros. Incluya igualmente en fichas separadas, el
correspondiente al analizador de uso.
Poner por escrito las principales indicaciones que el fabricante aconseja para el mantenimiento
diario, semanal, mensual o anual implementar una ficha de mantenimiento de equipos en la
sección de anexos.
Delegue a una persona la responsabilidad del mantenimiento.
Mantener el contacto y datos precisos del distribuidor de su instrumento, con el objeto de
coordinar mantenimientos preventivos y necesidades de reparación.
PIPETAS
Instrumentos empleados para trasvasar un volumen líquido de un recipiente físico hacia otro.
Se emplea en los análisis de laboratorio tanto para reactivos como para muestras biológicas.
Clasificación
Pipetas de vidrio. Pueden ser volumétricas (aspiran y transportan volúmenes) y graduadas

(permiten las aspiración y transporte de volúmenes medidos).
Pipetas Mecánicas: Las llamadas micropipetas mecánicas permiten trabajar en la rutina diaria
con volúmenes de 0.5 a 1000 ul. Pueden ser de desplazamiento de aire (indirectas) o de
desplazamiento directo. Por ser las pipetas ideales para el trabajo bioquímico se citan más

Código: 01

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Patologica
abajo recomendaciones sobre su uso.

Pipetas de Sanz: Recipientes con tapa ajustable y dispensador, útiles para la medición de
muestras y para la distribución repetida de reactivos en el rango de 5-100 ul. .
· Las pipetas mecánicas o micro pipetas se cargan y descargan merced a la acción del
dedo pulgar sobre un pistón.
· Las pipetas mecánicas de pistón presentan tres posiciones en este extremo:l a normal
de reposo, la intermedia de aspiración y la de presión a fondo de dispensación.
· Estas pipetas se cargan apretando el émbolo hasta la posición intermedia y luego se
afloja la presión para llenar la punta. Para descargarlas se aprieta el émbolo hasta el
fondo.
· Al aspirar la muestra con la punta, es importante la técnica de secado de la misma.
Mediante un papel absorbente o tela.
· Finalmente, depositar la muestra o líquido en el contenedor o tubo que recibirá el
primer volumen. Puede introducirse la punta hasta cierta profundidad y expeler la
totalidad de lo aspirado con suavidad, desechando la punta al final de este acto.
Mantenimiento de Pipetas Mecánicas
Mantener una ficha o formato de mantenimiento individual por cada pipeta.

Mantener limpia cada pipeta en su aspecto externo.
En el caso de pipetas mecánicas que usan puntas descartables para las disposiciones de
volumen, prevenir el abastecimiento de ellas; no es buena práctica de laboratorio reutilizar
bajo ningún concepto las mismas.
Contactarse como mínimo una vez al año para la calibración de este material bajo una entidad
especializada en el rubro de metrología.
Disponer una periodicidad no mayor de 3 meses para la verificación de la calibración del
instrumento.
Para la prueba respectiva de verificación de volumen, pueden seguirse el método de análisis
gravimétrico o de pesada de volumen, propuesto por la Organización Mundial de la Salud en
su Manual de Mantenimiento y Reparación del Equipo de Laboratorio.
Baño María
Dispositivo para calentar agua. El calor se obtiene a partir de un módulo eléctrico.

Se utiliza para trabajos a 25°, 30°, 37°, 42° ó 56 °, siendo de utilidad en bioquímica los tres
primeros rangos.

Código: 01

Fecha:03/2015
GESTION DE CALIDAD
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Patologica
· Controlar el nivel de agua, de modo que se mantenga por encima del nivel de la
solución que se ha de incubar.
· Mantener la tapa del baño maría abierta cuando se proceda a la incubación de
recipientes o tubos, evitando contaminaciones y la dilución del material por el
agua condensada.
· Cambiar el agua con regularidad para evitar la proliferación de algas, bacterias u
hongos.
Mantenimiento del Equipo

Desmontar los sistemas de circulación de agua para eliminar algas e impurezas.
Los termómetros de uso en el equipo deben verificarse al recibirlos de los proveedores y
después cada 3 meses, frente a un patrón: hielo o agua hirviendo.
Mantener una ficha ó formato individual para mantenimiento, siguiendo las
recomendaciones arriba citadas, así como las sugeridas por el fabricante.

Código: 01
Revisión:01
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE BIOQUIMICA
Fecha:03/2015
GESTION DE CALIDAD Página 31 de 134
Jefe de Servicio de Patología Clínica Jefe de Deparatamento de Patologia Clinica y Anatmomia
Patologica
Método Enzimático Colorimétrico
MÉTODO
La principal función de la glucosa es la de proporcionar energía para los procesos de la vida. El

adenosin trifosfato "ATP" es la fuente de energía universal para las reacciones biológicas. La
oxidación de la glucosa por las vías glucolítica y del ácido cítrico es la fuente principal de energía
para la biosíntesis del ATP.
La regulación de la glucosa sanguínea es esencial para el cerebro, cuya fuente energética primaria
es la glucosa, abastecido por una cantidad constante de la misma. La función de la insulina es
desviar la glucosa extracelular a los sitios de almacenamiento intracelular en la forma de
macromoléculas (glucógeno, lípidos y proteínas). Es así que la glucosa es almacenada en tiempos
de abundancia para los momentos de necesidad.
En respuesta a la glucosa baja en sangre, como en el ayuno, una serie de agentes
hiperglucemiantes actúa en las vías metabólicas intermediarias para formar glucosa a partir de las
macromoléculas almacenadas, de esta forma las proteínas y el glucógeno son metabolizados para
formar glucosa-6-fosfato (gluconeogénesis), la cual es hidrolizada a glucosa en el hígado y liberada
a la sangre para mantener los niveles de glucosa sanguínea.
Cuando se tiene un exceso de glucosa en la sangre por arriba del límite superior normal para una
edad, se presenta la hiperglucemia. Aunque los valores altos de glucosa sérica en ayunas se
relacionan con suma frecuencia con la presencia de diabetes sacarina, el número de enfermedades
y trastornos fisiológicos que pueden llevar a incrementos mayores es vasto. El aumento de la
concentración de glucosa sérica se dan en: respuesta a la tensión arterial, enfermedad de Cushing,
diabetes mellitus, acromegalia, hipertiroidismo, pancreatitis crónica, administración de algunos
fármacos diuréticos clorotiacídicos suprimen la secreción de insulina, coma hiperosmolar no
cetónico.
La hipoglucemia es un trastorno caracterizado por una concentración de glucosa en ayunas, menor
al límite inferior normal para el grupo de edad, esto sucede en: enfermedad hepática, desnutrición,
posgastrectomía, tolerancia deficiente a la glucosa, administración excesiva de insulina,
hipoglucemia funcional o espontánea, ingestión de alcohol en ayunas.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO.
La enzima glucooxidasa cataliza la oxidación de glucosa a gluconato y peróxido de hidrógeno.

La concentración de glucosa es proporcional al H2O2, este puede medirse apareándolo con un
indicador de peroxidasa.
La determinación de glucosa se efectúa mediante el método de Trinder según las siguientes
reacciones:
GOD
Glucosa + O2 + H2O --------------- ► H2O2 + Gluconato
POD

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
2H2O2 + Fenol + 4-AF ------------- ► Quinona + 4H2O .
Abreviaturas: GOD = Glucosa oxidasa

POD = Peroxidasa
4-AF = 4-aminofenazona.
MUESTRA
 Suero o plasma.
 La muestra debe recolectarse en ayuno.
REACTIVOS Y MATERIAL
REACTIVOS:
Monoreactivo : Tampon fosfato 100 mmol/L pH7.5, Glucosa oxidasa > 10 KU/L,
peroxidase > 2 KU/l, 4-aminoantipirina, 0.5 mmol/L, fenol 5
mmol/L.
Estandar: Concentración 100 mg/dL.
MATERIAL.
 Tubos de ensayo de 13 X100mm.
 Micropipeta de 10, 500 y 1000 uL.
 Tips o punteras.
 Vacutainer sin anticoagulante con aguja /jeringa.
 Gradilla.
EQUIPO.
 Analizador bioquímico semiautomático /automático para lecturas 505-510 nm.
 Centrifuga.
 Baño María
PROCEDIMIENTO

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Longitud de onda: 505nm (490-550)

Temperatura: 37°C.
Ajuste a cero con blanco de reactivo.
 Pipetear en tubos de ensayo:

Estándar -- 10µL --
Muestra -- -- 10 µL
Reactivo 500uL 500 uL 500 uL
 Mezclar e incubar 5 a 10 min a 37°C. y Leer.

 Reacción estable 30 minutos a temperatura ambiente.
RESULTADOS
Cálculos.
[ ]
Abs. Muestra x Factor = RESULTADO mg/dL
Linealidad del método:
 El método es lineal hasta valores de 500 mg/dL.

 Si la concentración de glucosa es superior, diluir la muestra a 1:2 con solución salina 0.9% y
multiplicar el resultado por 2.
VALORES NORMALES
mg/dL
Suero o plasma 70 - 110
Neonato nacido a término 30 - 60

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Enzimático Colorimétrico
MÉTODO
La Diabetes Mellitus (DM) es una enfermedad crónica-degenerativa, no infecto-contagiosa,

incurable, pero que puede controlarse ; afecta al 15% de la población mundial de esta proporción,
la Diabetes Mellitus tipo I (DMI) le corresponde el 10%, mientras que la Diabetes Mellitus tipo II
(DMII), el 85%.
La prueba de tolerancia a la glucosa en ayunas es la forma más simple y rápida de medir la glucosa
en sangre y diagnosticar la diabetes.
El paciente no debe haber comido ni bebido nada durante 8 a 12 horas antes del examen (excepto
agua). Durante la prueba se examina la presencia de glucosa cuyos niveles están por encima de
200 mg/dL que indican un diagnóstico de Diabetes Mellitus.
MUESTRA
 Suero o plasma.
 La primera muestra debe recolectarse en ayuno.
REACTIVOS:
Monoreactivo : Tampon fosfato 100 mmol/L pH7.5, Glucosa oxidasa > 10 KU/L,
peroxidase > 2 KU/l, 4-aminoantipirina, 0.5 mmol/L, fenol 5
mmol/L.
Estandar: Concentración 100 mg/dL.
MATERIAL.
 Micropipeta de 10, 500 y 1000 uL.
 Tips o punteras.
 Vacutainers sin anticoagulante con aguja / jeringa.
 Gradilla.
EQUIPO.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
 Analizador bioquímico semiautomático/automático para lecturas 505-510 nm.

 Centrifuga.
 Baño María
PROCEDIMIENTO
 Preparar 75 gr de glucosa (azúcar impalpable) disuelta en 200 ml de jugo de naranja (1.75

gr. De glucosa por kilogramo de peso corporal, máximo hasta 75 gr.)
 Se toma una muestra de sangre venosa en ayunas.
 Posteriormente se le hace tomar al paciente la solución preparada para luego tomar la
muestra de sangre a intervalos de:
- 30 minutos
- 01 hora.
- 01 hora 30 minutos.
- 02 horas (en total 05 muestras)
 Trazar la curva y entregar resultado para su interpretación médica.
RESULTADOS

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Cinético
MÉTODO
Puesto que la urea se sintetiza en el hígado, en la enfermedad hepática sin daño en la función
renal, se presenta nitrógeno ureico sérico bajo, aunque la relación urea a creatinina se puede
conservar normal. La elevación en el nitrógeno ureico sérico no implica necesariamente daño
renal, puesto que la deshidratación puede llevar a concentraciones de nitrógeno ureico tan
altas como 600 mg/L. En los infantes que reciben una fórmula alta en proteínas pueden tener
niveles de nitrógeno ureico de 250 a 300 mg/L. Naturalmente, enfermedades como la
glomerulonefritis aguda, la nefritis crónica, el riñón poliquístico y la necrosis renal elevan el
nitrógeno ureico.
FUNDAMENT0 DEL MÉTODO.

La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea dando amonio y CO2. El amonio formado se valora
mediante una reacción enzimàtica (GLDH), pasando NADH a NAD+.
La disminución de la absorbancia frente al tiempo es proporcional a la concentración de urea.
Ureasa
Urea + H2O --------------► 2 NH3 + CO2
GLDH
NH3 + H+ + 2-oxoglutarato + 2NADH --------►H2O + NAD+ + L-glutamato
MUESTRAS
* Obtener la muestra de manera usual.
* Suero o plasma libre de hemólisis, excepto plasma con heparina de amonio
REACTIVO:
Reactivo 1 Tampón TRIS pH 7.8, 80 mmol/L
Reactivo 2 Ureasa 3750 U/L
Vial enzimas GLDH 6000 U/L
NADH 0.32 mmol/L
α-cetoglutarato 6 mmol/L
Estándar Sol. Urea 50 mg/dl

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO.

Disolver 375 µL del vial enzimas R2 en 125 µL de solución tampón R1 o seguir instrucciones de
inserto.
MATERIALES:
 Micropipeta de 10 y 500 µL
 Piseta con agua desionizada o destilada.
 Tubos de vidrio de 13X100
 Punteras (tips) para micropipeta.
 Gradilla.
EQUIPO
 Analizador Bioquímico semiautomático/automático a 37°C con filtro de 340 nm.
 Centrífuga
PROCEDIMIENTO
Termperatura: 37°C
Longitud de onda: 340 nm.
Paso de luz: 1 cm
Lectura: frente a agua destilada
Estándar Muestra
Estándar 10 µL
Muestra 10 µL
Rvo. de trabajo 500 µL 500 µL
Pipetear en tubo:
Muestra estándar 10 uL
Mezclar y anotar la disminución de extinción entre los 30 y los 90 segundos (Δ Extinción)

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
RESULTADOS
Cálculo.
Con las diferencias de extinción anotadas, aplicar la siguiente ecuación:
Δ. Extinción muestra/ Δ. Extinción estándar x conc. Estándar = conc. Muestra
Factor de conversión: mg/dL x 0.1665 = mmol/L
Linealidad.
El método es lineal hasta valores de 500 mg/dL
Para concentraciones superiores diluir la muestra a 1:2 con solución salina, multiplicando el
resultado por 2.
NOTAS:
Muestra: Suero, plasma u orina.
La orina diluirla a 1:50 con agua destilada.
No emplear suero o plasma turbio o hemolizado.
VALORES NORMALES
Suero: de 15 a 45 mg/dL
Orina: de 20 a 35 g/24 horas

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Cinético
MÉTODO
La creatinina es un producto final del metabolismo muscular. Se origina a partir de la creatina
por pérdida de una molécula de agua. A su vez, la creatina se produce por hidrólisis del fosfato
de creatina, por acción de la creatin-fosfo-kinasa (CPK), apareciendo como metabolitos de
dicha reacción el fosfato energético y la creatina. El radical fosfato puede aportar energía
directamente por dicha reacción o a través de su acoplamiento a una molécula de ADP para
formar ATP y posterior hidrólisis por acción de ATPasa.
La eliminación de creatinina en el cuerpo humano tiene lugar casi exclusivamente a través de
la filtración glomerular, siendo un importante índice del funcionalismo renal. A diferencia de la
urea, la eliminación de creatinina por la orina no viene afectada por la diuresis, al mismo
tiempo que para una misma persona es muy constante su eliminación diaria con casi
independencia de la dieta alimenticia, siendo la masa muscular el factor condicionante más
directo de su excreción total por día. En resumen, podemos decir que la eliminación de
creatinina en un intervalo de 24 horas es un valor constante, dependiente principalmente de la
masa muscular del individuo, y que por otro lado el cálculo del aclaramiento de la creatinina
será un parámetro directo de la función renal.
FUNDAMENT0 DEL MÉTODO.
La reacción química aplicable para fotometría es la descrita por Jaffe, basada en el color
anaranjado que se produce al reaccionar la creatinina con el picrato alcalino. Se logra una gran
especificidad debido a que la creatinina reacciona con el picrato alcalino con más rapidez que
los cromógenos (metilguanidina, picramato), por lo que la medida del incremento de color en
un breve período de tiempo inicial de la reacción valorarán principalmente creatinina, con
poca influencia de los cromógenos inespecíficos, por esto es recomendable la determinación
cinética.
pH > 12
Creatinina + ácido pícrico --------› Complejo de adición rojo
37° C
MUESTRAS
 Suero o plasma heparinizado.
 La creatinina en suero y plasma tiene una estabilidad de al menos de 24 horas a 2-8°C.
 Orina .Diluir previamente a 1:50 con agua destilada, multiplicar el resultado por 50.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
REACTIVOS Y MATERIALES
REACTIVOS:
 Reactivo 1 Ac. pícrico 17.5 mmol/L
 Reactivo 2 Hidróxido sódico 0.29 mol/L
 Estándar Sol. Creatinina 2.0 mg/Dl
Mezcla reactivo de trabajo:

 Mezclar ambos reactivos a partes iguales según necesidades V/V.
 Esta mezcla es estable 10 días a temperatura ambiente.
MATERIALES:
 Micropipeta de 500 µL
 Micropipeta de 50 µL.
 Piseta con agua desionizada o destilada.
 Puntas para micropipeta
 Gradilla.
EQUIPO.
 Analizador Bioquímico Semiautomáticos con filtro de 490-510 nm.
 Centrífuga
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda: 490 nm (490-510)
Temperatura: 37°C
Paso de luz: 1 cm paso de luz
Ajuste del cero con blanco de reactivo.
Estándar Muestra
Estándar 50 µL
Muestra 50 µL
Reactivo 500 uL 500 uL
Mezclar y leer en el Analizador Bioquímico Semiautomático.

Anotar la D.Optica a los 30 segundos (E1) y a los 90 segundos (E2).
Lectura a 492 nm (490-510)
RESULTADOS

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Cálculos
mg/dL creatinina = Δ. Extinción muestra/ Δ. Extinción estándar x conc. Estándar
= conc. Muestra
mg /dL
VALORES NORMALES
En suero o plasma: 0,8 a 1,4 mg/dl.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
MÉTODO
Esta prueba sirve para medir la capacidad de los riñones para depurar la sangre de los
productos de desecho o materiales extraños.
La creatinina se filtra a nivel de glomérulo en condiciones normales la depuración de la
creatinina endógena se acerca a la taza de filtración glomerular.
MUESTRA
 Obtener la muestra de manera usual (suero o plasma libre de hemólisis).

 Orina de 24 horas.
DATOS DEL PACIENTE:

 Peso del paciente en Kg.
 Talla en cm.
 Superficie corporal (SC) Hallar con la tabla de Numograma.
1.73 m2 Estándar Panamericano
1.50 m2 Estándar Perú
 Volumen litro (orina) Considerar solo 2 cifras.
 Volumen > de 2 litros no tomar en cuenta el EXEDENTE.
EQUIPO:
Analizador Bioquímico Semiautomático
MATERIAL:
 1 Micropipeta de 500 µL
 1 Micropipeta de 50 µL.
 1 Piseta con agua desionizada o destilada.
 1 Tubos de vidrio de 13X100
 Puntas para micropipeta
 Gradilla.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
PROCEDIMIENTO
Hallar creatinina en suero mg/dl (Cr.S.)
Hallar creatinina en orina 24 hrs mg/dl (Cr.O.)
REALIZAR PREVIAMENTE UNA DE LAS SIGUIENTES DILUCIONES:

ORINA + H2O DESTILADA
0.1 ml ó 4.9 ml
100 ul ó 4,900 ul
10 ul ó 490 ul
Tomar (50 ul método cinético) o (1.5 ul método colorímetro) de esta dilución procesar como si
fuera creatinina en suero sanguíneo y LEER
EJEMPLO: Cr.O = 1.48 mg/dl

Fórmula:
Creatinina en orina (24 hrs) = mg/dl multiplicar x dilución.
Creatinina en orina = mg/dl x 50 (dilución)
Aplicando:
Creatinina en orina = 1.48 mg/dl multiplicar x dilución.
(24 hrs. o al azar)
Creatinina en orina = 1.48 mg/dl x 50 (dilución)
Creatinina en orina = 74 mg/dl
CÁLCULOS
CALCULAR CON LOS DATOS:
Ejemplo: Creatinina en suero (Cr.S) : 1.4 mg/dl

Creatinina en orina (Cr.O) : 74 mg/dl
Peso : 64 Kg.
Talla : 160 Cm.
Superficie Corporal : 1.53 (con la ayuda del Numograma)
Volumen Litro (V litro) : 2 litros y 50 ml
Entonces: Volumen Litro = 2.05
FORMULA DE DEPURACIÓN DE CREATININA ENDOGENA O R1

DCE(R1) = Cr.O x V litro x factor
100
Factor = 0.7
Reemplazando:

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
DCE(R1) = 74 mg/dl x 2.05 x 0.7

100
DCE(R1) = 106.19 mg/dl
100
DCE(R1) = 1.06
(R1) = 1.06
DEPURACIÓN DE CREATININA CORREGIDA

DCC = R1 x 100 x 1.53 (sc)
Cr.S.
Reemplazando:
DCC = 1.06 x 100 x 1.53
1.4
DCC = 115.8 ml/min.
VALORES NORMALES.
50-150 ml/min
DETERMINACIÓN DE LA SUPERFICIE CORPORAL APLICANDO LA

SIGUIENTE FÓRMULA
SC = log P x 0.425 + log H x 0.725 + 1.8564
SC : Superficie corporal
P : Peso en kg.
H : Talla en cm.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
NOMOGRAMA PARA LA DETERMINACION DEL AREA DE LA SUPERFICIE CORPORAL

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Enzimático
MÉTODO
El ácido úrico es el metabolito final del catabolismo de las bases púricas y su elevación está
asociada a la gota, es decir, los reumatismos hiperuricémicos. En los pacientes con tal
disfunción, aparecen cristales de ácido úrico en las articulaciones y en los tendones, lo que
origina las manifestaciones reumáticas características.
Niveles altos de ácido úrico están también asociados a patología renal por retención de
productos nitrogenados, asociándose en estos casos a valores también altos de urea y de
creatinina.
El ácido úrico es oxidado por la uricasa a alantoína y peróxido de hidrógeno que en presencia
de POD y 4-AF y DCPS forma un compuesto rosáceo.
Uricasa
ác. Úrico + 2H20 + 02 --------------► Alantoína + CO2 + 2H202
PODE
2H202 + 4AF + DCPS ---------------► Quinona + 4H20
4-AF = 4 aminofenazona
DCPS = 2,4, diclorofenol sulfonato
MUESTRAS
 Muestra en ayunas.
 Suero, plasma u orina.
 Orina: Diluir la orina al 1:10 con agua destilada, mezclar y seguir la técnica. Multiplicar el
resultado por 10..
REACTIVOS:
Monoreactivo : Tampón PIPES 100 mmol/L pH 7.0 Uricasa > 50 U/L, peroxidasa > 1 KU/L,
4-aminoantipirina 0.32 mmol/L, ADPS 0.33 mmol/L, tensioactivos no-
iónicos 2 gr/L (p/v). Biocidas.
Estándar : Ácido úrico 6 mg/dL
MATERIALES

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
 Micropipeta de 500 uL.

 Micropipeta de 10 ul.
 Piseta con agua desionizada o destilada
 Puntas para micropipeta.
 Gradilla.
EQUIPO:
 Fotómetro con filtro de lectura de: 520 nm.
 Centrífuga
 Baño María.
 Cronómetro
PROCEDIMIENTO
Longitud de onda: 520 nm
Temperatura: 37°C
Paso de luz: 1 cm paso de luz
Ajuste del cero con blanco de reactivo.

Estándar 10 µL
Muestra 10 µL
Reactivo 500 uL 500 uL 500 uL
Mezclar e incubar durante 5 o 10 min a 37°C.
Efectuar las lecturas de las densidades ópticas del estándar y de la muestra frente al blanco del
reactivo. Coloración estable como mínimo 30 min.
CÁLCULO.
[ ]
Estándar= 6.0 mg/dL

Abs. muestra x Factor = RESULTADO
Cuando la muestra sea orina, multiplicar el resultado por 10.
VALORES NORMALES

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Mujeres Hombres
Suero o plasma
mg/dL 2.5 - 6.0 3.4 -7.0
Orina de 24 horas
mg/dL 250 – 750 250 – 750

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Enzimático
MÉTODO
El colesterol es una sustancia hidrófoba, insoluble en medio acuoso y por tanto insoluble en el
plasma sanguíneo.
El colesterol se sintetiza sobre todo en el hígado, pero también en la piel, intestino, glándulas
suprarrenales, el ovario, el testículo, el riñón y el pulmón. Todas las sustancias que en el organismo
producen ácido acético pueden ser precursoras del colesterol (ácidos grasos, glucosa, algunos
aminoácidos, etc.). El colesterol es esencial para el funcionamiento normal del organismo por ser:
 Componente estructural esencial de membranas de las células animales y partículas

subcelulares.
 Precursor de ácidos biliares.
 Precursor de hormonas esteroides.
 Precursor de vitamina D.
El colesterol es un constituyente primario de las lipoproteínas de baja densidad (LDL), pero puede
encontrarse también en lipoproteínas de alta densidad (HDL) y en las de muy baja densidad (VLDL).
Clínicamente es importante, ya que existe una relación entre la concentración del colesterol
plasmático y la presencia de problemas cardíacos coronarios.
Las concentraciones séricas de colesterol disminuyen en: desnutrición, esteatorrea, hepatitis,

hipertiroidismo, personas con infección aguda y anemia, cáncer.
Las concentraciones séricas de colesterol aumentan en: hiperlipoproteinemia, cáncer de la

cabeza del páncreas, hipotiroidismo, síndrome nefrótico, el tercer trimestre del embarazo,
predisposición genética.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO:

El colesterol esterasa hidroliza los ésteres de colesterol presentes en la muestra dando
colesterol libre y ácidos grasos, en una posterior oxidación enzimática mediante la colesterol
oxidasa se forma H2O2 y colesterona. El H2O2 se valora por la reacción Trinder, mediante un
cromógeno, fenol y 4- Aminoantipirina, en presencia de Peroxidasa, formando una
quinonimina cuya coloración, es proporcional a la concentración de colesterol presente en la
muestra.
Colesterol Esterasa
Ésteres de colesterol + H2O------------------------► Colesterol + Ácidos grasos.
Colesterol oxidasa
Colesterol + O2 -----------------------► 4-coIesterona + H2O2

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Peroxidasa
2H2O2 + 4-amino-antipirina + fenol ----------------►Quinonimina + H2O.
MUESTRAS
 Suero libre de hemólisis.
 La muestra en ayuno total excepto agua.
REACTIVOS: Colesterol total listo para su uso.
COMPOSICION:
Reactivo 1: Tampón pH 6.9 9GmmoI/L
Fenol 26 mmol/L
Reactivo 2:
Vial enzimas Peroxidasa 1250 U/L
Colesterol esterasa
Colesterol oxidasa 300 U/L
4-Aminoantipirina 0.4 mmol/L
ESTÁNDAR: Solución Colesterol 200 mg/dL.
EQUIPO:
 Centrifuga.
 Baño de agua a 25 o 37°C.
 Analizador bioquímico semiautomático (500-550 nm)
 Cronómetro.
MATERIAL:
 Tubos de ensayo de 13 x 100 mm
 Micropipetas de 500 uL
 Micropipeta de 10 uL
 Gradilla.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
PROCEDIMIENTO
 Longitud de onda 505nm
 Cubeta 1 cm paso de luz
 Temperatura Ambiente
 Ajustar el Analizador Bioquímico Semiautomático a cero frente a agua destilada.
DESARROLLO:
Estándar -- 10L --
Muestra -- -- 10L
Rvo. Col. Total. 500 uL 500 uL 500 uL
Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC
RESULTADOS
CÁLCULOS:
[ ]
Abs. Muestra x Factor = RESULTADO
Hasta valores de 600 mg/dL.
VALORES NORMALES
 Valor referencial < 200 mg/dL

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Enzimático
MÉTODO
Las lipoproteínas de alta densidad (HDL, del inglés High density lipoprotein) son aquellas
lipoproteínas que transportan el colesterol desde los tejidos del cuerpo hasta el hígado.
Cuando se miden los niveles de colesterol, el contenido en las partículas, no es una amenaza
para la salud cardiovascular del cuerpo (en contraposición con el LDL).
HDL son las lipoproteínas más pequeñas y más densas, están compuestas de una alta
proporción de proteínas. El hígado sintetiza estas lipoproteínas como proteínas vacías y, tras
recoger el colesterol, incrementan su tamaño al circular a través del torrente sanguíneo. El
objetivo de las HDL es eliminar el colesterol de los tejidos periféricos.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO.
La prueba combina dos pasos específicos: En el primer paso se eliminan y destruyen los
quilomicrones, y los colesteroles VLDL y LDL por reacción enzimática. En el segundo paso, se
determina el colesterol restante de la fracción HDL, a través de reacciones enzimáticas bien
establecidas en presencia de surfactantes específicos para HDL.
HDL – colesterol →
MUESTRA
 SUERO O PLASMA libre de hemólisis

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
REACTIVO:
Reactivo enzimático : Tampón GOOD 100 mmol/L pH 7.0, MgCl2 18 mmol/L, CE 800 I/L,
CO 500 U/L, Catalasa 100 KU/L, HDAOS 0.7 mmol/L
Reactivo POOD/4-AA : POOD 4 ku/l, 4-AA 4 mmol/L, N3Na < 0.1%, tensioactivos
específicos < 1.5% (v/v)
Calibrador : HDL 61 mg/dL
EQUIPO:
 Centrifuga.
 Cronómetro.
MATERIAL:
 Gradilla.
PROCEDIMIENTO
Condiciones de ensayo:
Longitud de onda: 660/546 nm.
Temperatura: 37°C
Preparación: R1 4 + R2 1
400 ul 100ul
Rvo. de trabajo: 500 ul
Pipetear en tubos:
Reactivos Blanco Estándar Muestra
Rvo. Col. T 500ul 500ul 500ul
H2O destilada 25ul -- --
Estándar -- 25ul --
Suero (Mx)* -- -- 25ul
Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C

* Desproteinizado (según inserto)

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
CALCULO DE LOS RESULTADOS

HDL Colesterol (mg/dL) =
[ ]
Factor 
61  mg / dL
AbsSt
VALORES NORMALES
En Varones: 30 a 70 mg/dl.
En Mujeres: 30 a 85 mg/dl

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Enzimático
MÉTODO
El colesterol transportado por las LDL se puede depositar en los tejidos periféricos y asociarse
con un aumento de riesgo de enfermedad cardiaca y vascular periférica y arterioesclerótica.
Los niveles de HDL y LDL forman parte de una prueba de perfil lipídico que además evalúa el
Colesterol y TG.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO: los HDL, VLDL y quilomicrones son selectivamente

fragmentados por detergentes y luego sometidas a cuantificación mediante la reacción con
enzimas modificadas, con PEG y un cromógeno como se muestra en el esquema reaccional.
LDL – colesterol →
MUESTRAS
 Suero o plasma sin hemólisis.
REACTIVO:
Reactivo 1 : Sulfato de magnesio 2.5 mmol/L, HDAOS 0.8 gr/L, Buffer ideal (pH
7.0 +- 0.1), estabilizadores, detergentes y preservantes.
Enzima : Colesterol oxidasa > 5000 U/L, colesterol esterasa > 800 U/L,
peroxidasa > 15000 U/L, 4 aminoantipirina 0.5 mmol/L, Buffer
ideal (pH 6.8 +- 0.1), surfactantes y preservantes.
Calibrador : LDL 118 mg/dL

EQUIPO:
 Centrifuga.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica

 Cronómetro.
MATERIAL:
 Gradilla.
PROCEDIMIENTO
Condiciones de ensayo:
Longitud de onda: 660/546 nm.
Temperatura: 7°C
Preparación: R1 4 + R2 1
(400 ul) + (100ul)
Rvo. de trabajo: 500 ul
Pipetear en tubos:
Reactivos Blanco Estándar Muestra
Rvo. Col. T 500ul 500ul 500ul
H2O destilada 25ul -- --
Estándar -- 25ul --
Suero (Mx)* -- -- 25ul
Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C

* Desproteinizado (según inserto)
CALCULO DE LOS RESULTADOS
LDL Colesterol. (g/l) = mg/dL
[0,624]
Donde f  mg / dL
AbsSt
VALORES NORMALES
En Varones: 35 a 165 mg/dl.

En Mujeres: 40 a 203 mg/dl

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Enzimático
MÉTODO
Los triglicéridos están constituidos por glicerol y ácidos grasos. Estos forman parte de las 5 clases
de lipoproteínas que transportan a los lípidos en el plasma: quilomicrones, constituidos casi
totalmente por triglicéridos dietéticos; lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL); lipoproteínas de
densidad intermedia (IDL); lipoproteínas de baja densidad (LDL), conocidas también como
lipoproteínas beta y lipoproteínas de alta densidad (HDL), también conocidas como lipoproteínas
alfa.
Los padecimientos en los cuales predominan los triglicéridos son: xantoma eruptivo, lipemia
retiniana, organomegalia, pancreatitis, intolerancia a la glucosa, hiperuricemia, aterosclerosis
prematura, diabetes mellitus insulinopénica, disglobulinemia, lupus eritematoso, embarazo, uso de
hormonas, enfermedad por almacenamiento de glucógeno, alcoholismo, enfermedad de Gaucher,
mieloma.
FUNDAMENTOS DEL MÉTODO:

Los triglicéridos son hidrolizados enzimáticamente a glicerol, el cual, mediante Glicerol cinasa y
Glicerol-P-oxidasa, libera el peróxido de hidrógeno que se valora mediante la reacción de Trinder,
de acuerdo a las siguientes reacciones.
LPL
Trigliceridos + H2O ----------------► Glicerol + Acidos grasos
GK
Glicerol + ATP ----------------► Glicerol-3-P + ADP
GPO
Glicerol-3-P + O2 ----------------► Dihidroxiacetona-P + H2O2
POD
H2O2 + 4-AF + p-clorofenol----------------► Quinona + H2O
La cantidad de la quinona formada es proporcional a la concentración de triglicéridos.
Abreviaturas: LPL = Lipoproteinlipasa; GK = Glicerol Cinasa; GOP = Glicerol- P-oxidasa; POD =

Peroxidasa.
MUESTRA

 La muestra en ayuno.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
REACTIVOS: Tampón GOOD pH 7.5 50mmol/L

Tampón p-clorofenol 2mmol/L
Lipoproteinlipasa 150000 U/L
Glicerol Kinasa 500 U/L
Glicerol-P-oxidasa 2500 U/L
Peroxidasa 440 U/L
4-Aminofenazona 0.1 mmol/L
ATP 0.1 mmol/L
ESTÁNDAR Sol. Triglicéridos 200 mg/dL
PREPARACION:
Reactivo Triglicéridos listo para su uso.
EQUIPOS:
 Analizador Bioquímico Semiautomático/Automático.
 Centrifuga.
 Baño maría.
MATERIAL:
 Tubos de ensayo de 13 x 100 mm.
 Micropipetas de 10 y 500 uL
 Gradilla.
 Cronómetro
PROCEDIMIENTO
 Longitud de onda: 505nm
 Temperatura: 37°C
 Cubeta: 1 cm paso de luz
 Ajustar el Analizador Bioquímico Semiautomático a cero frente a agua destilada.
DESARROLLO:

Estándar -- 10 uL --
Muestra -- -- 10 uL
Rvo. Triglicéridos 500ul 500 ul 500 ul
Mezclar e incubar 5 min a 37°C y leer

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
RESULTADOS
CÁLCULOS:
[ ]
El método es lineal hasta valores de 1000mg/dL
VALORES NORMALES
 Valor referencia < 160 mg/dL

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Colorimétrico
MÉTODO
El calcio es el quinto elemento más abundante en el cuerpo humano. El cuerpo humano contiene
cerca de 1200 g de calcio en las personas adultas y aproximadamente 28 g en los neonatos (recién
nacidos a término). Casi todo el calcio del cuerpo (99%) reside en el hueso. El remanente reside en
los fluidos del cuerpo y tiene un papel crítico muy importante en un sin número de procesos
fisiológicos incluyendo la contracción muscular, la neurotransmisión, el transporte de membrana,
las reacciones enzimáticas, la secreción hormonal y la coagulación sanguínea. En la circulación, el
calcio existe en tres formas: 45% del calcio sérico total es la forma biológicamente activa de calcio
iónico, 45% está unido a la proteína principalmente albúmina y 10% está unido a complejos
aniónicos (fosfato, lactato, citrato).
La acidez gástrica, la aportación suficiente de vitamina D, son factores que regulan la absorción y
retención del calcio. En el adulto, el calcio dietético es absorbido por el intestino mediante
proteínas específicas unidas al calcio. Este proceso está bajo el control activo de la vitamina D. La
mayoría del calcio que se absorbe se deposita en los huesos. La principal ruta de excreción de
calcio en el cuerpo es a través de los riñones.
Se encuentran valores altos de calcio en el hiperparatiroidismo, lesiones osteolíticas,
acidosis tubular renal y se encuentra disminuido en el hipoparatiroidismo, raquitismo,
insuficiencia renal.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO

El calcio con la cresolftaleína en un medio alcalino forma un complejo violeta, cuya intensidad de
color es directamente proporcional a la cantidad de calcio existente en la muestra.
MUESTRAS

 Muestra en ayuno.
 El calcio en suero permanece estable durante: 10 días a 2-8°C.
REACTIVOS: Tampon etalnolamina 500 mmol/L.
Cresolftaleína 0.62 mmol/L
Cromógeno 8-hidroxiquinoleína 69 mmol/L

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
ESTÁNDAR: Sol. Calcio 10 mg/dL
EQUIPO
 Analizador Bioquímico Semiautomático para lecturas de 550-590 nm.
 Centrifuga.
 Baño maría
MATERIAL
 Tubos de ensaye de 13 X100mm.
 Micropipetas de 10, 500 ul.
 Gradilla.
PROCEDIMIENTO
 Temperatura: 37°C.
 Cubeta: 1cm. Paso de luz
 Ajuste a cero con agua destilada.
DESARROLLO:
Rvo. De trabajo 500 uL 500 uL 500 uL
Coloración estable 40 minutos.
RESULTADOS
CÁLCULOS:
[ ]

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica

 Si la concentración es superior, diluir la muestra a 1:2 con solución salina 0.9% y
VALORES NORMALES
 Suero recién nacidos 8.0-13.0 mg/dL.
 Niños 10.0-12.0 mg/dL
 Adultos 8.8-10.4 mg/dL

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
MÉTODO
El hueso en humanos contiene de 80 a 85% del fósforo corporal total; aparentemente 9% se

encuentra en músculo y el resto está en las vísceras y líquido extracelular. La concentración
intracelular de fósforo (fosfatos y fósforo inorgánico) es mayor que la de los niveles
extracelulares. El fósforo es esencial para la integridad estructural de la membrana celular y es
un componente importante de los ácidos nucleicos y de los nucleótidos de alta energía como
ATP. La mayor parte del fosfato extracelular (85) % se localiza en los huesos, donde se combina
con el calcio en la hidroxiapatita. Casi 85% del fosfato sérico existe como monofosfato
inorgánico o fosfato diácido. En estas formas actúa como principal amortiguador del sistema
urinario para facilitar la excreción de H+. El restante 12 a 15% está enlazado con proteínas. El
fósforo del suero existe principalmente en forma de fosfato inorgánico.
La hiperfosfatemia es muy a menudo en la insuficiencia renal aguda y crónica, cuando
la relación de la filtración glomerular está reducida en menos del 25% de lo normal. La
hiperfosfatemia también puede resultar de un aumento de la carga de fosfato
corporal, la cual puede resultar de los enemas y los laxantes conteniendo fosfatos,
transfusiones de sangre o hiperalimentación. La reabsorción tubular renal de fosfatos
es responsable de la hiperfosfatemia observada en el hipoparatiroidismo,
hipertiroidismo, hipogonadismo y exceso de hormona de crecimiento. La
hipofosfatemia moderada, la cual se define como la concentración de fósforo en suero
entre 10 y 25 mg/L en los adultos, es generalmente asintomática. En los niños, las
concentraciones de fósforo en suero por abajo de 40 mg/L son a menudo consideradas
anormales. La hipofosfatemia puede resultar de una disminución en la reabsorción
intestinal de fosfato o por un aumento en la pérdida urinaria de fosfatos y un
desplazamiento endógeno del fósforo inorgánico de los compartimientos de los fluidos
extracelulares a los intracelulares.
El fósforo es cuantificado según la reacción siguiente:
Molibdato amónico + Sulfúrico------------►Complejo fosfomolibdato
La absorción máxima del complejo se mide a 340 nm.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
MUESTRAS

 La muestra en ayuno.
REACTIVO: Acido sulfúrico 210 mM

Molibdato amónico 0.40 mM
Detergente
ESTÁNDAR Sol. Fósforo 5.0 mg/dL
EQUIPO
 Analizador Bioquímico Semiautomático/Automático.
 Centrifuga.
 Baño maría.
MATERIAL
 Micropipetas de 500 ul.
 Gradilla.
PROCEDIMIENTO
 Ajuste a cero con blanco de reactivo.
DESARROLLO:

Rvo. de trabajo 500 uL 500 uL 500 uL

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
RESULTADOS
CÁLCULOS:
[ ]

 Si la concentración es superior, diluir la muestra a 1:2 con solución salina 0.9% y
VALORES NORMALES
 Mujeres 1.5-6.8 mg/dL
 Hombres 2.1 -5.6 mg/dL
 Niños 4.0-7.0 mg/dL

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
MÉTODO
La bilirrubina se origina por degradación del grupo hem de la hemoglobina, que a su vez
aparece en el plasma como consecuencia de la destrucción de los glóbulos rojos en el sistema
retículo endotelial. La hemoglobina, una vez liberada en el interior del eritrocito, se combina
con las haptoglobinas, proteínas plasmáticas específicas para su transporte. En una primera
etapa y tras su liberación de la haptoglobina, se forma, por acción de una oxigenasa, un grupo
formilo, con lo que se rompe el anillo tetrapirrólico del hem, formándose el compuesto
denominado biliverdina, que en una etapa posterior y por acción de una reductasa se
transforma en bilirrubina.
Se basa en la reacción de Malloy-Evelyn modificado.

El ácido sulfanílico reacciona con el nitrito de sodio (NO2) para formar ácido sulfanílico
diazotado. En presencia de acelerador (cetrinida), la bilirrubina conjugada o no conjugada
reacciona con el ácido sulfanílico diazotado para formar azobilirubina (Bilirrubin total 4+1).
En ausencia de acelerador, solo la bilirrubina conjugada reacciona para dar azobilirrubina
(Bilirrubin Direct 4+1).
El aumento de la absorbancia a 550 nm es proporcional a la concentración de la bilirrubina.
Ácido sulfanílico + NaNo2 --------> Ácido sulfanílico diazotado

Bilirrubina + Ácido sulfaníllico diazotado -------> Azobilirrubina
MUESTRAS
Reactivo 1 Acido sulfanílico 30 mmol/L
(BD) Bilirrubina directa Ácido clorhídrico 150 mmol/L
Reactivo 2 Acido sulfanílico 30 mmol/L

(BT) Bilirrubina total Ácido clorhídrico 50 mmol/L
Dimetilsulfóxido 7 mol/L
(DMSO)
Reactivo 3 Nitrito de sodio 29 mmol/L

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
EQUIPO
 Analizador Bioquímico Semiautomático.
 Centrifuga.
 Baño maría
MATERIAL
 Gradilla.
PROCEDIMIENTO
 Longitud de onda: BT 546nm
BD 578nm
 Temperatura 37°C
 Lectura frente a agua destilada
BILIRRUBINA TOTAL:
Reactivos Banco de muestra Muestra Estándar
Agua destilada 50ul -- --
Suero (M) -- 50ul --
Estándar -- -- 50ul
Rvo. AT 500ul -- --
Rvo. de trabajo* -- 500ul 500ul
Mezclar y poner en baño mari por 5’. Lectura 540 nm frente a agua destilada.
Leer absorbancia de la muestra a 540 nanómetros frente a blanco de reactivo.
* Preparar (R1 = 400ul) + (R2 = 100ul), volumen total = 500ul
BILIRRUBINA DIRECTA:
Reactivos Banco de muestra Muestra
Agua destilada 50ul --
Suero (M) -- 50ul
Rvo. AD 500ul --
Rvo. de trabajo* -- 500ul
Mezclar y poner en baño maria por 3’. Lectura 540 nm frente a agua destilada.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Leer absorbancia de la muestra a 540 nanómetros frente a blanco de reactivo.

* Preparar (R1 = 400ul) + (R2 = 100ul), volumen total = 500ul
** Neonatos 10ul de suero, lectura y multiplicar el resultado x 5.
RESULTADOS
CÁLCULOS: (Total o Directa)
[ ]

Factor:
Abs muestra - Abs (blanco muestra) x factor* = mg / dL de bilirrubina en la muestra
[ ]
*
Factor teórico: Bilirrubina (T) = 19.1; Bilirrubina (D) = 14

Factor de conversión: mg/dL x 17.1 = mol / L.
 Este método es lineal hasta valores de 20 mg/dL
VALORES NORMALES
 Bilirrubina total: hasta 1.0 mg/dL
 Bilirrubina directa: hasta 0.2 mg/dL
Recién nacido (BILIRRUBINA TOTAL):

Prematuro A término
 Hasta 24 Hr. 1.0 – 6.0 mg/dL 2.0 – 6.0 mg/dL
 Hasta 48 Hr. 8.0 – 8.0 mg/dL 6.0 – 7.0 mg/dL
 3-5 días 10.0 – 15.0 mg/dL 4.0 – 12.0 mg/dL

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
(Creatincinasa) Método Cinético
MÉTODO
La Kinasa se encuentra más abundancia en el músculo esquelético. Las otras fuentes en que se
encuentra, por orden de mayor a menor actividad, son: cerebro, recto, estómago, vejiga, colon,
útero, próstata, intestino delgado y riñón. Se detectan cantidades despreciables en hígado,
placenta y tejido tiroideo.
La CK se eleva principalmente en afecciones o enfermedades que afectan el tejido músculo
esquelético, el miocardio o el cerebro. Se observan notables incrementos de CK total en infarto
agudo al miocardio, en afecciones del músculo esquelético y después de un choque o colapso
circulatorio. En general la CK se eleva en infarto agudo al miocardio y es de gran utilidad clínica
para detectarlo. La CK total comienza a incrementarse después de 15 horas de ocurrir un infarto
agudo al miocardio. La actividad máxima se observa a las 24 horas y regresa a la normalidad a los 3
días. La miocarditis también provoca actividad notablemente alta de CK durante la fase
inflamatoria de la afección.
La CK se eleva además en diversas enfermedades o lesiones del músculo esqueletico.
Los valores de creatincinasa y sus isoenzimas se utilizan en el diagnóstico y tratamiento de los
infartos de miocardio y de miopatías como la distrofia muscular progresiva tipo Duchenne.
La creatincinasa (CK) es una enzima del citoplasma y la mitocondria que cataliza tanto la formación
de ATP como la fosforilación reversible de creatinina, con el ATP como grupo donador de fosfato.
La CK requiere activadores metálicos, particularmente Mg2+ , para que la enzima alcance toda su
actividad catalítica.
La actividad de CK es de particular importancia en el tejido muscular, en donde cataliza la síntesis
de fosfato de creatinina, una molécula que almacena enlaces de alta energía. Para efectuar una
contracción muscular se utiliza el grupo fosfato para formar ATP a fin de proporcionar de inmediato
energía a los músculos.
En la reacción, la creatincinasa cataliza la transferencia de un grupo fosfato del sustrato fosfato de

creatina al difosfato de adenosina (ADP). La subsiguiente formación de trifosfato de adenosina
(ATP) se mide mediante el uso de dos reacciones asociadas, catalizadas por la hexocinasa (HK) y la
glucosas- fosfato deshidrogenasa (G6PDH), lo que produce dinucleótido de nicotinamida adenina
reducida (NADH) a partir del dinucleótido de nicotinamida adenina (NAD). El ensayo (CK) contiene
el activador monotioglicerol.
ESQUEMA DE LA REACCIÓN QUÍMICA

↔
↔
↔
↔

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
MUESTRA
 Suero, plasma heparinizado ó con EDTA.
REACTIVO 1 lmidazol pH 6.7, 100 mmol/L , Tampón Glucosa 20 mmol/L , Acetato Magnesio 10
mmol/L , EDTA 2 mmol/L
REACTIVO 2 ADP 2 mmol/L, Comprimidos AMP 5 mmol/L , Diadenosin-5-P 10 mmol/L , NADP+

2 mmol/L, Hexoquinasa (HK) 2500 U/L, G-6-PDH 1500 U/L, N-acetilcisteina 20 mmol/L, Creatin-
fosfato 30 mmol/L
EQUIPO
 Cronómetro.
 Baño María
MATERIAL
 Micropipetas de 50, 100 y 500 ul.
 Gradilla.
PROCEDIMIENTO
DESARROLLO:
BUF (R1) 400 uL + Enzima (R2) 100 uL
Suero 25 uL
Mezclar e incubar 4 minutos a 37° C.

Primera lectura a los 120 segundos
Segunda lectura a los 120 segundos
Repetir la lectura a 1,2 y 3 minutos. Calcular ΔE/min.
RESULTADOS
CÁLCULOS:
Factor: 4024

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Longitud de onda : 340 nm

Para valores superiores, se diluirá la muestra a 1:10 con solución salina 0.9%.
VALORES NORMALES
Hombres 26-174 U/L
Mujeres 26-174 U/L
OBSERVACIONES
La hemólisis interfiere en la prueba a concentraciones superiores a 200 mg/dL de

hemoglobina.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Rápido Separación de Resina de Intercambio Iónico
MÉTODO
La hemoglobina glicosilada HbA1 es un examen que permite una visión retrospectiva del
control de la diabetes, así como la determinación de la glucosa en suero, es una foto del
momento, la HbA1 es la película o fotografía de los últimos tres meses aproximadamente.
Los glóbulos rojos que circulan en la sangre contienen una proteína llamada hemoglobina, la
glucosa, que también circula en la sangre tiene entre sus características el poder de adherirse
a la hemoglobina del glóbulo rojo y así se queda con él durante su promedio de vida, que es de
más o menos 90-120 días.
Por lo que el examen de la hemoglobina glicosilada mide la cantidad de glucosa adherida a los
glóbulos rojos, cuyo resultado se expresa en porcentaje (%) que finalmente indica el nivel
promedio de glicemias durante el trimestre anterior a la prueba.
La hemoglobina glicosilada puede verse afectada por alteraciones del recambio de glóbulos
rojos como en las hemorragias, anemia hemolítica, transfusiones, embarazo y otros que
producen falsos HbA1 bajos; y por otro lado, la ingesta de dosis elevadas de ácido acetil
salicílico (aspirina, vitamina C, alcohol y altas cifras de lípidos en sangre) producirán una HbA1
aumentada.
FUNDAMENTOS DEL MÉTODO:

La sangre total se mezcla con un reactivo hemolisante que contiene un detergente y una
concentración alta de iones de borato. La eliminación de la base lábil de Schiff se consigue así
durante la hemólisis. La preparación hemolisada se mezcla x 5 minutos con una resina de
intercambio catiónico de enlaces débiles durante este tiempo la HbA0 se une a la resina.
Después del periodo de mezcla se usa un separador de resina, para remover la resina del
líquido sobrenadante que contiene la HbA1. El porcentaje de glicohemoglobina sobre la
hemoglobina total se determina midiendo la absorbancia de la fracción de glicohemoglobina y
la hemoglobina total 415 nm, en comparación el estándar provisto, el cual se somete al mismo
procedimiento de separación y medición.
MUESTRA
SANGRE TOTAL con EDTA (no necesario en ayunas)

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
REACTIVO
LYSE Reactivo lisante : pH 7.0 +- 0.1, borato 1 mmol/L, detergente 0.25%

RGT : Resina de intercambio iónico (pre envasado en tubos de plástico, buffer
imidazol pH 7.6 +- 0.1, 30 mmol/L, borato 150 mmol/L.
STD : Para 1.0 ml estándar (hemoglobina liofiliazada) [10%]
CUP : Tubos de plástico para la hemolisis.
SEP : Separadores de resina.
Control positivo
Control negativo.
EQUIPO
 Centrífuga.
 Rotador
MATERIAL
 Gradilla.
PROCEDIMIENTO
1. Pipetear en un tubo de ensayo:
Sangre total (EDTA) 50ul
Rvo. 1 200ul (Hemolizado)
2. Mezclar y dejar a temperatura ambiente 10-15 minutos, este hemolizado será utilizado
para los pasos 5 y 10.
3. Destapar la parte superior de la columna y romper la lengüeta de la parte inferior.
4. Con la ayuda del extremo plano de una pipeta, juntar el disco superior con la resina sin
comprimirla, dejar gotear hasta que el líquido alcance el nivel del disco, descartar el eluido.
A. SEPARACIÓN Y LECTURA DE HbA1C
5. Aplicar cuidadosamente sobre el disco superior.
Hemolizado 50ul descartar el eluido

(del paso 1)

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
6. Cuando haya penetrado todo el hemolizado, agregar:

Reactivo (2) 200ul descartar el eluido
7. Pipetear:
Reactivo (2) 2ml descartar el eluido
8. Colocar la columna sobre un tubo de ensayo y agregar:
4ml de reactivo (3).
9. Mezclar y leer la absorbancia de la fracción de HbA1c a 415nm, poniendo el blanco con H2O
destilada.
B. LECTURA DE LA Hb TOTAL:
10. Pipetear en un tubo de ensayo:

Reactivo (3) 3ml
Hemolizado 12.5ul
(del paso 1 hemolizado)
11. Mezclar y leer la absorvancia Hb total a 405nm con blanco de agua destilada
CALCULOS:
FORMULA
TABLA DE EQUIVALENCIAS
HbA1 % Glucosa mg/dL

6.0 126
6.5 140
7.0 154
7.5 169
8.0 183
8.5 197
9.0 212
9.5 226
10.0 240
OBJETIVO
 Valorar el objetivo de un diabético en cuanto dosificación o cumplimiento.
 Comparar los tratamientos y pautas utilizadas.
 Mediar los aumentos de glucosa en diabéticos recién diagnosticados.
 Valorar los cambios de glucosa en diabéticos leves.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
 Individualizar el tratamiento en los diabéticos.

 Valoración de diabéticos frente a grados, variaciones de glicemia.
 Diferencia la hiperglicemia de los diabéticos por otras causas (estrés, infarto)
VALORES NORMALES
Normal o no diabéticos : 4.0 – 6.5 % HbA1c
Objetivo : 6.0 – 7.0 % HbA1c
Buen control : 7.0 - 8.0 % HbA1c
Mal control/desequilibrio metabólico : > 8.0 % HbA1c

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
MÉTODO
La prueba de adenosina deaminasa (ADA) es un examen muy usado para el diagnóstico de la
tuberculosis, especialmente extrapulmonar, es una prueba colorimétrica que se basa en la
cuantificación del amonio que surge como resultado de la acción de la enzima adenosina
deaminasa; la prueba de ADA en los líquidos biológicos y pleural fundamentalmente, es un
examen diagnóstico útil en pacientes con efusión pleural de etiología incierta, sobre todo en
lugares donde existe una prevalencia de tuberculosis alta; así es una prueba que ayuda a
diferenciar de otras causas de derrame pleural como neumonías, neoplasias, colagenopatías,
etc., lo cual no permite tomar decisiones terapéuticas tempranas. El test de ADA debe también
ser corroborado con el recuento diferencial de leucocitos (linfocitos y neutrófilos) en el líquido
pleural incrementa la precisión diagnóstica de tuberculosis cuando existe una mayor cantidad
de linfocitos.
La determinación del a actividad de la enzima adenosina deaminasa en liquido pleural,
peritoneal y cefalorraquídeo pude ayudar al diagnóstico de la tuberculosis que afecta a pleura,
peritoneo y meningitis respectivamente.
FUNDAMENTOS DEL MÉTODO

La Adenosina deaminasa ADA en medio tamponado ácido, reacciona con la adenosina
produciendo inosina y amoniaco. Según la reacción
ADA
Adenosina + PO4 + H2O Inosina + NH3
Los iones de amonio que se forman se valoran por el método berthelot, donde el amoniaco en
presencia de una base reacciona con el fenol o hipoclorito de sodio, formando azul de
indofenol.
MUESTRAS
SUERO: Líquido pleural, ascítico, pericárdico, cefalorraquídeo.
REACTIVO.
 Buffer ph 6.5
 ADNA (adenosina) contiene adenosina y nitrurio de sodio en solución tamponada,
preservada y estabilizada.
 Reactivo desarrollador. Contiene ácido carbólico, cloramina y catalizador estabilizada y
preservada., refrigerar de 2-8°C.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
 Reactivo alcalino, contiene solución de hidróxido de sodio e hipoclorito de sodio con

catalizador, preservante y estabilizantes, refrigerar de 2-8°C.
 Estandar: 50 U/L, contiene solución de sulfato de amonio en medio tamponado y
estabilizado, refrigerar de 2-8°C
EQUIPO
 Centrífuga.
 Baño María
MATERIAL
 Gradilla.
PROCEDIMIENTO
BLANCO BLANCO
STANDAR MUESTRA
REACTIVO MUEST.
BUFER FOSFATO 250 ul
SOL. ADENOSINA
STANDART 250 ul 250 ul
MUESTRA 250 ul
AGUA DESTILADA 15 ul 15 ul
Mezclar – incubar 37 º C x 1 hora
RVO. COLOR 1 700 ul 700 ul 700 ul 700 ul
MUESTRA 15 ul
RVO. COLOR 2 700 ul 700 ul 700 ul 700 ul
Mezclar – incubar 37 º C x ½ hora factor: 259.7
Lectura en Analzador Bioquímico Semiautomático.
Agua
Blanco de muestra (Absorbancia)
Muestra (Absorbancia)
Resultado/ directamente / actividad en U/L
VALORES NORMALES
Suero : 13-21 U/L
Liquido pleural : 0-45 U/L
Liquido ascitico : 0-40 U/L
Liquido pericardico : 0-20 U/L
Liquido cefalorraquideo : 0-6 U/L

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
(ASAT) Método Cinético
MÉTODO
Las transaminasas ASAT y ALAT catalizan la conversión de aspartato y alanina a oxaloacetato y
piruvato respectivamente. En el hígado se encuentran los niveles más altos de ALAT, mientras que
la ASAT se encuentra presente en el corazón, músculo esquelético e hígado en cantidades
similares. La actividad en el suero de tanto la ASAT como la ALAT aumenta rápidamente durante el
comienzo de la ictericia viral y permanece elevada por 1 a 2 semanas. En las hepatitis tóxicas
también se elevan la ALAT y la ASAT, pero la LDH se eleva mucho más como resultado de la
necrosis celular hepática. En los pacientes con hepatitis crónica activa también se observan
aumentos en la ASAT y ALAT.
La necrosis hepática aguda se acompaña por incrementos significativos en las actividades tanto la
ALAT y la ASAT. El aumento en la actividad de la ALAT es generalmente mayor que el incremento en
la actividad de la ASAT. En la cirrosis del hígado las actividades de las transaminasas séricas
generalmente no se elevan por encima de 300 U/L, sin importar la causa de la enfermedad
cirrótica. Las elevaciones en las ALAT y ASAT séricas observadas en el síndrome de Reye, son
atribuibles directamente al daño hepático, y el incremento en la ALAT es generalmente mayor que
el incremento en la ASAT. También se incrementa la actividad de las transaminasas en la actividad
neoplásica.
En el diagnóstico de la enfermedad del hígado, la medición de los niveles séricos de ASAT y ALAT es
valiosa. Sin embargo, la mejor manera de usar estos análisis es junto con otros análisis de enzimas
como la LDH y la creatina cinasa, y con otras mediciones de la función renal y hepática como la
urea sanguínea, la creatinina, el amoníaco y la bilirrubina. Esto es importante cuando se establece
el diagnóstico puesto que la ALAT y la ASAT están presentes en otros tejidos además del hígado y la
actividad sérica de estas enzimas puede reflejar una enfermedad orgánica en tejidos distintos al
hígado. Las actividades séricas de la ALAT y la ASAT se elevan en el infarto del miocardio, infarto
renal, distrofia muscular progresiva y otro gran número de enfermedades que solamente afectan al
hígado de una manera secundaria, como la enfermedad de Gaucher, la enfermedad de Niemann-
Pick, la mononucleosis infecciosa, la leucemia mielocítica, la cetoacidosis diabética y el
hipertiroidismo.
Se mide la actividad de la aspartato aminotransferasa mediante un método cinético

enzimático. En la reacción, la aspartato aminotransferasa cataliza la transaminación reversible
de L-aspartato y a-cetoglutarato a oxaloacetato y L- glutamato. Luego, el oxaloacetato se
reduce a malato en presencia de malato deshidrogenasa (MDH), con la oxidación concurrente
de a dinucleótido de nicotinamida adenina reducida (NADH) a dinucleótido de nicotinamida
adenina (NAD).

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
ESQUEMA DE LA REACCION QUIMICA
MUESTRAS
 Suero o plasma
Tampón L-Aspartato 200 mmol/L
REACTIVO 2 NADH 0.i8 mmol/L

Comprimido LDH 800 U/L MDH 600 U/L
α-cetoglutarato i2 mmol/L
EQUIPO
 Centrifuga.
 Cronómetro
MATERIAL
 Micropipeta de 50, 100, 500 y 1000 ul.
 Gradilla.
PROCEDIMIENTO
DESARROLLO:

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica

Semimicro test
Muestra 50 L
Mezclar, y leer. Primera lectura a los 30 segundos. Segunda lectura a los 90 segundos.

Muestra 50ul
RESULTADOS
CÁLCULOS:
Factor : -1745 (según inserto)
Si la linealidad es superior la muestra deberá diluirse a 1:10 con solución salina 0.9%. Resultado
multiplicar x 10
VALORES NORMALES
Hasta 35 U/L
OBSERVACIONES
La hemólisis interfiere en el resultado.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
(ALAT) Método Cinético
MÉTODO
Los valores de alanina aminotransferasa se utilizan en el diagnóstico y tratamiento de ciertas
enfermedades hepáticas (p. ej., hepatitis viral y cirrosis) y cardíacas.
En la reacción, la alanina aminotransferasa cataliza la transaminación reversible de un grupo amino

de la L-alanina al a-cetoglutarato con formación de piruvato y L-glutamato. Luego, el piruvato se
reduce a lactato en presencia de lactato deshidrogenasa (LDH) con la oxidación concurrente de
alfa-dinucleótido de nicotinamida adenina reducido (NADH) a dinucleótido de nicotinamida
adenina (NAD).
La oxidación de NADH a NAD es directamente proporcional a la actividad de GPT.
MUESTRAS
 Suero o plasma.
Tampón L-Alanina 500 mmol/L
REACTIVO 2 NADH 0.18 mmol/L

Comprimidos LDH 1200 U/L
α-cetoglutarato 15 mmol/L
EQUIPO
 Centrifuga.
 Cronómetro

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
MATERIAL
 Micropipeta de 50, 100, 500 ul.
 Gradilla.
PROCEDIMIENTO
DESARROLLO:

Muestra 50 L
Mezclar, y leer. Primera lectura a los 30 segundos. Segunda lectura a los 90 segundos.

Muestra 50ul
RESULTADOS
CÁLCULOS:
Factor incluido en el inserto del reactivo (1746).
Si los valores son superiores a la linealidad, la muestra deberá diluirse a 1:10 con solución salina
0.9%. El resultado debe multiplicarse por la dilución.
VALORES NORMALES
Hasta 45 U/L
OBSERVACIONES
La hemólisis interfiere en la determinación.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Cinético
MÉTODO
El páncreas puede ser la "glándula maestra” del cuerpo si se consideran los graves trastornos
digestivos y metabólicos que aparecen cuando se pierden sus funciones exocrinas y endocrinas. El
principal trastorno al que conduce la pérdida de la función endocrina es la diabetes mellitus, que
cuenta con mayor morbilidad y mortalidad que todas las otras enfermedades pancreáticas juntas.
La pérdida de la función exocrina es común en la fibrosis quística y en algunos sujetos con ataques
repetidos de pancreatitis generalmente causados por el abuso crónico del alcohol. Existen algunas
pruebas de función pancreática que junto con la de grasa en materia fecal son las más importantes.
La pancreatitis aguda es una de las principales emergencias médicas; el alcoholismo y las
enfermedades del tracto biliar son las causas predominantes. La pancreatitis crónica generalmente
es la secuela de múltiples brotes de la enfermedad aguda y los resultados de laboratorio
normalmente no son muy útiles para el diagnóstico. El adenocarcinoma de páncreas, la forma
común de la enfermedad maligna, es funesta para casi todos los pacientes debido a la naturaleza
invasiva del cáncer y su progresión rápida y silenciosa. Las neoplasias de los islotes de Langerhans
son un reto bioquímico para su diagnóstico. Excepto los gastrinomas que producen el síndrome de
Zollinger-Ellison, la mayoría de estos tumores no son malignos pero pueden poner en peligro la
vida debido a la liberación no controlada de factores endocrinos y la estimulación a sus órganos
blancos.
La amilasa alfa (AMS) es una metaloenzima que requiere calcio y pertenece a la clase de hidrolasas.
La reacción enzimática que cataliza la amilasa alfa es la hidrólisis aleatoria de enlaces glicosídicos
alfa-1,4 internos del almidón, glucógeno y otros polímeros de la glucosa. Los productos de
digestión de la amilasa, que es una mólecula de almidón lineal que contiene sólo enlaces alfa 1,4,
son maltosa, maltotrinosa y otras dextrinas.
Las principales fuentes tisulares de esta enzima son las glándulas salivales y las células acinares del
páncreas. La principal función de la amilasa alfa se debe a la fracción pancreática, que ayuda a la
digestión del almidón, glucógeno y sus productos de descomposición en el intestino delgado. La
AMS de la saliva inicia la digestión de almidón en la cavidad oral, pero su acción termina con
rapidez a consecuencia del pH ácido del jugo gástrico durante la deglución.
Estas enzimas contienen una actividad residual de a-amilasa que reducen significativamente la
estabilidad del reactivo. El método que presentamos no utiliza enzimas, evitando así este problema
de estabilidad.
En la reacción, la amilasa cataliza la hidrólisis del sustrato definido (maltotetraosa) a maltosa. La

velocidad de formación de maltosa se mide mediante el uso de tres reacciones relacionadas que
catalizadas por la maltosa fosforilasa (MP), la b-fosfoglucomutasa (PGM), y la glucosa-6-fosfato
deshidrogenasa (G6PDH), dan como resultado la producción de b-dinucleótido de nicotinamida
adenina reducido (NADH) a partir de b-dinucleótido de nicotinamida adenina (NAD).

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
La cantidad de CNP formado puede ser detectado espectrofotométricamente a 405 nm dando una
medida directa de la actividad de la a-amilasa de la muestra. La reacción no está inhibida por
factores endógenos.
MUESTRAS
 Suero, plasma u orina.
 Una vez efectuada la extracción, centrifugar y separar el suero lo antes posible
REACTIVO: MES tampón pH 6.0, 100 mmol/L, 2-Cl-4-Nitrofenil-a-D-maltotriosido (CNPG3)
2.25 mmol/L, Cloruro de sodio 350 mmol/L, Acetato de calcio 6 mmol/L, Tiocianato de potasio
900 mmol/L, Azida de Sodio 0.095%.
EQUIPO
 Cronómetro
MATERIAL
 Micropipetas de 10, 500 ul.
 Gradilla.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
PROCEDIMIENTO
 Ajuste a cero con agua destilada.
DESARROLLO:

Muestra 12.5 uL
Mezclar y leer.
Primera lectura a los 60 segundos.
RESULTADOS
FACTOR : 2930, ver inserto del reactivo.
CÁLCULOS:
Calcular la actividad de la a-amilasa de la muestra usando el siguiente factor:
Factor incluido en el inserto del fabricante del reactivo.
Suero, plasma
Unidades SI: U/L

Este método es lineal hasta 2000 U/L. Si es superior, debe diluirse la muestra con solución salina
1:2 y repetir el ensayo, multiplicando el resultado por 2
VALORES NORMALES
 Suero, plasma < 120 U/L
 Orina <450 U/L
OBSERVACIONES
No se deben procesar muestras hemolizadas.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Cinético
MÉTODO
La lipasa (LPS) es una enzima que pertenece a las hidrolasas, hidroliza los ésteres de glicerol de
triglicéridos de ácidos grasos de cadena larga. La lipasa hidroliza preferencialmente los enlaces
estéricos de los carbonos 1 y 3 de la molécula de triglicéridos y produce dos moléculas de ácido
graso y una molécula de 2-monoglicérido.
Se observa actividad de lipasa en páncreas mucosa intestinal, estómago, leucocitos y tejido
adiposo. Sin embargo, sólo la lipasa pancréatica tiene significado clínico; su principal función
consiste en hidrolizar los triglicéridos de la dieta que han sido emulsificados por ácidos biliares y
ayudan así a la absorción de grasas en el intestino delgado.
Como la lipasa se produce principalmente las células acinares del páncreas, su utilidad clínica se
relaciona casi de manera exclusiva con el diagnóstico de laboratorio de pancreatitis aguda. Otras
afecciones en las cuales se incrementa la actividad de lipasa incluyen intoxicación aguda con
alcohol y traumatismos accidentales o quirúrgicos del abdomen.

La lipasa pancreática en presencia de colipasa, desoxicolato, además de iones calcio, hidroliza el
sustrato 1-2-O-dilauryl-rac-glycerol-3-glutárico acido-(6' - metilresorufina)-ester, según la secuencia
de las siguientes reacciones:
1 -2-O-dilauryl-rac-glycero-3-glutárico ácido-(6' -metilresorufina)-ester >1-2-O-dilauril-rac-glycerol +
glutáricoacido-6'-metilresorufina ester (no estable) > ácido glutárico + Metilresorufina
MUESTRAS
 Suero no hemolizado o plasma.
REACTIVO 1 Tampón TRIS pH: 8.4, 40 mmol/L
Colipasa 40 000 U/L
Desoxicolato 1.8 mmol/L
Estabilizante
REACTIVO 2 Tartrato pH: 4.0, 1.6 mmol/L

Sustrato 0.24 mmol/L
Cloruro de calcio 0.1 mmol/L
Detergente
Estándar Lipasa
ESTÁNDAR: Solución lipasa 200 mg/dL.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
EQUIPO:
 Centrifuga.
 Baño maría a 37°C.
 Analizador bioquímico semiautomático.
MATERIAL:
 Gradilla.
R1 R2
Reactivo de trabajo 500 uL - 500 uL
PROCEDIMIENTO
 Longitud de onda 580nm
 Cubeta 1 cm paso de luz
 Temperatura 37°C
DESARROLLO:
Estándar Muestra
Estándar 10L --
Muestra -- 10L
Reactivo de trabajo 550 uL 550 uL
Mezclar y leer.
Primera lectura a los 60 segundos
RESULTADOS
FACTOR:
CÁLCULOS:
ΔE/min muestra x actividad estándar = U/L Lipasa
El método es lineal hasta actividades de: 250 U/L
VALORES NORMALES
LIPASA : < 30 U/L

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Punto final
MÉTODO
El hígado tiene la capacidad de duplicar la producción y salida de proteínas durante las
enfermedades asociadas con pérdida de proteínas. En consecuencia, no debe sorprender que las
mediciones de proteínas totales no se alteren sino hasta que haya ocurrido una disminución
extensiva de la función hepática.
La albúmina se disminuye en la enfermedad hepática crónica y generalmente se acompaña por
un incremento en las globulinas beta y gamma, debido a la producción de IgG e IgM en la
hepatitis crónica activa y de la IgM e IgA en la cirrosis biliar o alcohólica respectivamente.
Las proteínas séricas, globulina alfa2 y beta se aumentan en la ictericia obstructiva. Este
incremento en la alfa2-globulina y la beta globulina en la ictericia obstructiva está asociada con
interferencias en el metabolismo normal de las lipoproteínas. Por consiguiente, no se puede
hacer claramente el fenotipo de un desorden lipídico en presencia de enfermedad hepática.
El hígado produce los factores de coagulación y estos pueden disminuir significativamente en
la presencia de enfermedad hepática.
En la reacción del biuret se forma un quelato entre el ión del Cu2+ y los enlaces peptídicos de
las proteínas en medio alcalino con la formación de un complejo coloreado violeta, cuya
absorbancia se mide fotométricamente. La intensidad del color producido es proporcional a la
concentración de proteínas en la muestra.
pH:›12
→
MUESTRAS
 Suero, plasma
REACTIVO 1 Tartrato K-Na 15 mmol/L
Yoduro sódico 100 mmol/L
Yoduro de potasio 5 mmol/L
Sulfato de cobre II 5 mmol/L
STANDARD Sol. Proteínas 7 g/dL

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
EQUIPO
 Baño María.
 Centrifuga.
MATERIAL
 Gradilla.
PROCEDIMIENTO
DESARROLLO:
Reactivo de trabajo 500 uL 500 uL 500 uL
Mezclar e incubar 10 min a 37°C. Leer, frente al blanco de reactivo, a 540 nm. Coloración
estable 30 minutos.
RESULTADOS
CÁLCULOS:
[ ]

VALORES NORMALES
 Recién nacidos : 5.2 - 9.1 mg/dL
 Niños (hasta 3 años) : 5.4 - 8.7 mg/dL
 Adultos : 6.1 – 7.9 mg/dL

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
ALBÚMINA
MÉTODO
La proteína tiene diversas funciones; desempeña un papel importante en el mantenimiento de la
presión osmótica coloide de la sangre, en el transporte de varios iones, ácidos y hormonas y en la
nutrición. Los valores bajos de albúmina pueden explicar la toxicidad de algunos fármacos en
niveles "bajos” cuando sólo se mide la concentración total de éstos en suero. La mayor cantidad de
droga libre puede causar entonces, una respuesta tóxica.
En la desnutrición, los niveles plasmáticos de albúmina disminuyen mucho más que los de la
gammaglobulina. Otras de las funciones importantes de la albúmina es el mantenimiento del 75%
de la presión osmótica coloide del plasma.
La hiperalbuminemia usualmente es atribuible a deshidratación o hemoconcentración. La
hipoalbuminemia en general se debe a 1) hemodilución, 2) síntesis inferior a la pérdida y 3)
enfermedades que causan una gran pérdida de albúmina.
El esfuerzo físico, hipertensión, infección del tracto urinario y la enfermedad cardíaca congestiva
puede también aumentar la excreción urinaria de albúmina.
. La albúmina tiene la propiedad de fijarse a una amplia variedad de aniones orgánicos, incluyendo
moléculas complejas de colorantes. . La Asociación Americana de Química Clínica recomendó un
método con verde de bromocresol. En este procedimiento la absorbancia del verde de bromocresol
unido a la albúmina se mide a 628 nm en un buffer de succinato. La púrpura de bromocresol
reacciona con la albúmina a pH 5.2 y su desplazamiento de color se mide a 603 nm.
El método está basado en la unión específica del verde de bromocresol (VBC), un colorante nionico
y la proteína a un pH ácido con el consiguiente desplazamiento del espectro de absorcion del
complejo. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de albúmina en la
muestra.
MUESTRAS
 Suero, plasma
REACTIVO Solución de Verde Bromocresol a pH 4.2
ESTÁNDAR Albúmina 5.0 g/dL

EQUIPO

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica

 Centrifuga.
 Baño maría
 Cronómetro
MATERIAL
 Gradilla.
PROCEDIMIENTO
 Temperatura: Ambiente.
DESARROLLO:
Reactivo al uso 500 uL 500 uL 500 uL
Mezclar y esperar a 37°C x 5 minutos.
RESULTADOS
CÁLCULOS:
[ ]
Hasta valores de 6.0 g/dL

Valores superiores se diluirán a la 1:2 con solución salina.
VALORES NORMALES
Suero: de 3.5 a 4.8 g/dL

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Cinético
MÉTODO
La fosfatasa alcalina se encuentra ampliamente distribuida en los del cuerpo humano (hígado,
hueso, placenta, intestino, bazo y riñon).
En el hígado, la actividad de la ALP se localiza en la membrana celular que une el borde sinoidal de
las células del párenquima a los canáliculos biliares. En los huesos la actividad de la ALP se localiza
en la menbrana celular que une el borde sinoidal de las células del parénquima a los canalículos. En
los huesos, su actividad se confina a los osteoblastos.
El aumento de actividad de fosfatasa alcalina en suero se observa enfermedades óseas y hepáticas.
La fosfatasa alcalina suele elevarse más en caso de afecciones de los conductos biliares, que en las
que se produce principalmente la lesión hepatocelular. Por lo tanto en la enfermedad hepática
coléstática u obstrucción hepatobiliar, la ALP suele incrementarse hasta 10 o 15 veces más que los
valores normales.
También incrementan la actividad de la fosfatasa alcalina son: la mononucleosis infecciosa, la
colangiolitis, la cirrosis total, carcinoma hepatocelular primario y carcinoma hepático metastático
secundario, así como en afecciones óseas con incremento de actividad osteoblástica, en general los
niveles de fosfatasa alcalina se elevan.
En algunas afecciones que incluyen hipotiroidismo, escorbuto, hipofosfatemia, Kwashiorkor (niño
rojo), cretinismo y anemia grave, se observa reducción de la actividad de fosfatasa alcalina.
También se incrementa la actividad de la fosfatasa alcalina sérica durante la pubertad debido al
crecimiento acelerado de los huesos y, durante el tercer trimestre del embarazo debido a la
liberación de la fosfatasa alcalina por la placenta
Se mide la actividad de la fosfatasa alcalina con un método cinético que utiliza un tampón de 2-
amino-2-metil-1-propanol (AMP). En la reacción, la fosfatasa alcalina cataliza la hidrólisis del
sustrato incoloro éster de fosfato orgánico, el p- nitrofenilfosfato, a un producto de color amarillo
(p-nitrofenol y fosfato). Esta reacción ocurre a un pH alcalino de 10.3.
MUESTRAS
 Suero, plasma.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
REACTIVO 1 Tampón dietanolamina (DEA) pH 10,4 1 mmol/L

Tampón Cloruro de magnesio 0.5 mmol/L
REACTIVO 2 p-nitrofenilfosfato pNPP) 10 mmol/L

Comprimidos/polvo
EQUIPO
 Centrifuga.
MATERIAL
 Gradilla.
PROCEDIMIENTO
DESARROLLO:

Semimicro test
Muestra (suero) 10L
Mezclar y leer.
Segunda lectura a los 90 segundos.
RESULTADOS
Factor: 2764.
CÁLCULOS:
405nmΔE/min x 2764= U/L

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica

Si el ΔE/min, es superior a 0.250 se repetirá la determinación diluyendo la muestra a 1:10 con
solución salina 0.9%.
VALORES NORMALES
37ºC
Adultos 38-130 U/L

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Cinético
MÉTODO
Cuando solamente está implicado un órgano específico, como el hígado, la medición del la LDH
total puede ser útil. La LDH se incrementa con las hepatitis virales o tóxicas, en la obstrucción biliar
extrahepática, en la necrosis aguda del hígado y en la cirrosis del hígado. Sin embrago, en
condiciones en las que puedan estar implicadas varios órganos, la medición del LDH total es menos
útil que la medición de las isoenzimas de la LDH. Las isoenzimas LDH5 y LDH4 son las responsables
de la actividad primaria del hígado, mientras que las isoenzimas LDH., y LDH2 son las responsables
por la actividad predominante de la LDH en el corazón y el riñón. Puesto que los glóbulos rojos
también contienen mucha LDH.,, se debe evitar el análisis de muestras de suero bemolizadas. En
las condiciones hepáticas, la electroforesis de la LDH muestra que la elevación en la LDH total se
debe a la liberación de LDH4 y LDH5 al suero.
La mayor actividad de la LDH se presenta en el riñón y el corazón, y la menor en el pulmón y el
suero. La LDH se localiza en el citoplasma celular y es por tanto liberada al suero cuando las células
se dañan o necrosan.
Los valores de lactato deshidrogenasa se utilizan en el diagnóstico y tratamiento de enfermedades
hepáticas tales como la hepatitis viral aguda, la cirrosis y el carcinoma hepático metastásico,
también en enfermedades cardíacas como el infarto del miocardio, y tumores de pulmón o de
riñón.
En la reacción, la LDH cataliza la oxidación reversible de L-lactato a piruvato con la reducción

concurrente de dinucleótido de nicotinamida adenina (NAD) a dinucleótido de nicotinamida
adenina reducido (NADH).
La deshidrogenasa láctica está presente en muchos tejidos. La LDH cataliza la interconversión de
piruvato y lactato:
La oxidación de NADH a NAD+ acompañada por una disminución de absorbancia a 340 nm es

directamente proporcional a la actividad de LDH.
MUESTRAS

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
REACTIVO 1 Tris pH.7.5, 50 mmol/L
Tampón Piruvato 0.6 mmol/L
REACTIVO 2 Comprimidos NADH 0.18 mmol/L
EQUIPO
 Centrifuga.
 Cronómetro.
MATERIAL
 Gradilla.
REACTIVO DE TRABAJO:
SUB 100 uL
BUF 400 uL
PROCEDIMIENTO
DESARROLLO:

Muestra (suero) 5L
Mezclar y leer:

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
RESULTADOS
FACTOR : -16030 ó según inserto.
CÁLCULOS:
340 nm (ΔE/min) x -16030 = U/L
Si el ΔE/min a 340 nm es superior, repetir la prueba diluyendo la muestra a 1:10 con solución
salina 0.9%.
VALORES NORMALES
< 244 U/L
OBSERVACIONES
La hemólisis interfiere en la determinación.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método Cinético
MÉTODO
Aunque la mayor actividad de la GGT se presenta en el tejido renal, la elevación de la GGT
generalmente es un indicador de la enfermedad hepática. La GGT sérica se eleva antes que las
otras enzimas hepáticas en enfermedades como la colecistitis aguda, la pancreatitis aguda, la
necrosis hepática aguda y subaguda, y neoplasias de sitios múltiples que cursan con metástasis
hepáticas. Puesto que la GGT es una enzima microsomal hepática, la ingestión crónica de alcohol o
drogas como los barbitúricos, los antidepresivos tricíclicos y los anticonvulsivantes inducen la
producción de enzimas microsomales. Estas elevaciones inducidas por drogas preceden cualquier
otro cambio en las enzimas del hígado y si se suspende la ingestión de la droga en ese momento,
los cambios del hígado son generalmente reversibles. La GGT permite la diferenciación de otras
enfermedades hepáticas en las cuales por sus condiciones se eleva la fosfatasa alcalina sérica,
puesto que los niveles de GGT son normales en la enfermedad de
Paget, el raquitismo y la osteomalacia y en los niños y mujeres embarazadas sin enfermedad
hepática. Asimismo, puesto que la próstata tiene una actividad significativa de GGT, la actividad
sérica es mayor en hombres sanos que en mujeres. La mayor utilidad de la GGT està en el
diagnóstico de colestasis causadas por la ingestión crónica de alcohol o drogas, colestasis
mecánicas o virales, metástasis hepáticas, desórdenes óseos con elevaciones de la fosfatasa
alcalina, pero en los que la GGT es normal y desórdenes de músculo esquelético en los cuales la
transaminasa ASAT está elevada pero la GGT está normal.

Se mide la actividad de la Y-glutamil transferasa mediante un método cinético enzimático. En la
reacción, la Y-glutamil transferasa cataliza la transferencia de un grupo gamma-glutamil desde el
sustrato incoloro gamma-glutamil-p-nitroanilina, al aceptor, glicilglicina, y genera un producto
coloreado, la p-nitroanilina.

MUESTRAS
 Suero.
REACTIVO 1 Sol. Tampón TRIS pH 8.25 100 mmol/L, Glicilglicina 100 mmol/L,
Comprimidos/ L-Y-glutamil-3-carboxi-, Polvo p-nitroanilida 3 mmol/L

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
EQUIPO
 Centrifuga.
MATERIAL
 Micropipeta de 100 ul.
 Gradilla.
REACTIVO DE TRABAJO:
SUB 100 ul
BUF 400 uL
PROCEDIMIENTO
DESARROLLO:
Muestra (suero) 50 L
Mezclar y leer:
Calcular el valor medio de los incrementos de extinción por minuto. (AE/min)

RESULTADOS
FACTOR : 1309.
CÁLCULOS:
A 405 nm
AE/min x 1309= (U/L)
 El método es lineal hasta actividades de 250 U/L. Para valores superiores, se diluirá la
muestra a 1:10 con solución salina 0.9%.
VALORES NORMALES
< 68 U/L

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Métodos hemolítico y latex
MÉTODO
Se encuentra presente en casi todas la personas en títulos bajos, se debe a las infecciones
estreptocócicas, sin embargo un título alto o reciente de antiestreptolisinas “O” indica una
infección reciente producida por Estreptococo beta hemolítico del grupo “A”. En la amigdalitis,
escarlatina, sepsis puerperal, erisipela, etc.
Tiene además especial interés en los procesos que aparecen como segunda enfermedad:
fiebre reumática y glomérulo nefritis aguda.
METODO HEMOLÍTICO. (LIOFILIZADA)

Al colocar las estreptolisinas “O” en contacto con la sangre del paciente que contiene los
anticuerpos antiestreptolisina, éstos neutralizan a la estreptolisina “O” sin producir la
hemólisis de los glóbulos rojos. Al agregar un reductor, la estreptolisina “O” que no fue
neutralizada por los anticuerpos produce la hemólisis de los glóbulos rojos del paciente, la
ausencia de hemólisis indica la presencia en la muestra de títulos de antiestreptolisina
superiores a 200 U Tood.
MÉTODO ASO LATEX es una prueba rápida de aglutinación para la detección directa
semicuantitativa de niveles clínicamente significativos de anticuerpos antiestreptolisinas “O”
en suero
La determinación se efectúa ensayando una suspensión de partículas de látex recubiertos con
estreptolisina frente a los sueros problema. La presencia o ausencia de aglutinación visible es
indicativa de la presencia o ausencia de antiestreptolisinas “O” en las muestras ensayadas a
niveles significativos.
MUESTRAS
Se recomienda usar sólo suero
REACTIVO:

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método titulación:
 Estreptolisina-O: Estreptolisina liofilizada preparada.
 Buffer concentrado: Solución de buffer fosfato conteniendo fosfatos 0.36 mol/l y NaCl 1.2
mol/l para pH final 6.5
 Agua destilada
 Eritrocitos frescos humanos grupo “O”
 Solución fisiológica.
 Control positivo.
 Control negativo.
* Suspención de eritrocitos: Lavar por tres veces con solución fisiológica centrifugando a 2000
rpm por 5 minutos cada vez, decantar el sobrenadante y preparar una suspensión del 3 al 5%
con buffer pH 6.5
Método Látex:
 Reactivo de latex.
EQUIPO:
 Centrífuga.
 Baño maría a 37°
 Cronómetro
MATERIALES:
Método Látex
 Placa de vidrio.
 Tapa gotero.
 Palillos descartables.
 Cronómetro
 Lámpara o fuente de luz.
Método Titulación
 Tubos de ensayo 100 mm x 13 mm.
 Pipetas de vidrio graduados.
 Pipetas automáticas de rango variable (5-50 uL, 100-500 uL, 100-1000 uL)
 Gradilla.
* Volumen final de la reacción 2 ml.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
PROCEDIMIENTO
MÉTODO CUALITATIVO.
1. Lleve el reactivo y las muestras a temperatura ambiente antes de empezar.

2. Sacuda suavemente el frasco del reactivo para dispersar y suspender las partículas de
látex.
3. Coloque en celdas separadas de la misma placa de vidrio los siguientes:
Muestra no diluida 1 gota
Control positivo 1 gota
Control negativo 1 gota
4. Mezcle suavemente los contenidos del reactivo látex, incluyendo el contenido en la
cuentagotas de vidrio. Llene la cuentagotas con la suspensión de látex y coloque una gota
al lado de la gota de la muestra en cada celda usada.
5. Mezcle con mezcladores separados y extienda con suavidad el fluido sobre cada celda.
6. Gire la placa de vidrio por 2 minutos manualmente para que la mezcla gire lentamente
dentro de las celdas o poner la placa en un rotor automático de 80-100 rpm.
7. Después de dos minutos, examine cada celda para la ausencia o presencia de
aglutinación.
MÉTODO CUANTITATIVO.
Preparar diluciones de la siguiente forma: 1:10 (0.2 ml de suero + 1.8 ml de Buffer); 1:100
(0.5ml de dilución 1:10 + 4.5 de Buffer); 1:500 (1 ml de dilución 1:100 + 4 ml Buffer).
Luego proceder de la siguiente forma:
Dil. del suero 1:10 1:100 1:500 CONTROLES
Tubo Nº 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
Suero diluido (ml) 0.2 1 0.8 0.6 0.4 0.3 1 0.8 0.6 0.4 0.2 - -
Buffer (ml) 0.8 - 0.2. 0.4 0.6 0.7 - 0.2 0.4 0.6 0.8 1.5 1
O-Estreptolisina (ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 - 0.5
Mezclar y mantener a baño maría a 37º C 15 minutos
Eritrocitos 5% (3%) (ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Mezclar agitando ligeramente y mantener en baño María a 37ºC durante 15 minutos, agitar
nuevamente y continuar en baño María durante 30 minutos más. Centrifugar 3 minutos a 1500 r.p.m.
y leer.
Unidades Todd/ml 50 100 125 166 250 333 500 625 833 1250 2500 (-) (+)
RESULTADOS
A. MÉTODO CUALITATIVO (LATEX)

POSITIVO: Aglutinación visible (+, ++, +++)
NEGATIVO: No hay aglutinación.
Una aglutinación indica que hay una concentración de ASO mayor de 200 IU/ml +- 20% en
la muestra. Las muestras que no muestran aglutinación contienen concentraciones de ASO
menores a 200 IU/ml.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
B. MÉTODO CUANTITATIVO (TITULACIÓN). El título de la muestra se expresa mediante la

inversa de la mayor dilución en la cual se observa ausencia total de hemólisis.
El tubo 12 (control eritrocitario) no deberá presentar hemólisis, el tubo 13 (control O-
Estreptolisina) deberá mostrar hemólisis completa.
VALORES NORMALES
Suero hasta 166 Unidades de Antiestreptolisina O

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
MÉTODO
La PCR es una proteína termolabil que no atraviesa la barrera placentaria, cuya movilidad
electroforética se encuentra entre las zonas de las alfa y beta globulinas. Su nombre se debe a
la capacidad para precipitar los polisacáridos C de los neumococos.
Es una de las llamadas proteínas de fase aguda que se incrementa en el suero sanguíneo en
una gran variedad de enfermedades inflamatorias o como respuesta a necrosis tisular.
Su determinación es importante debido a que aumenta rápidamente al comienzo de la
enfermedad, 24-26 horas luego de la inflamación o injuria tisular y desaparece en la etapa de
recuperación, apareciendo sólo durante la fase activa del proceso inflamatorio.
La PCR se encuentra aumentada en: artritis reumatoidea activa, infecciones virales,
tuberculosis, fiebre reumática activa, infarto agudo de miocardio y también luego de una
operación quirúrgica y en transfusiones sanguíneas.
La determinación de PCR no solo indica la intensidad de la enfermedad sino también la
respuesta del paciente a un tratamiento dado.
La PCR es la más sensible de fase aguda. Se eleva dos horas después de una lesión aguda. Hace
pico y empieza a disminuir a las 48 horas. Es un indicador de procesos inflamatorios más
sensible que la sedimentación globular y el leucograma.
La PCR se detecta en suero por reacción con un anticuerpo específico absorbido sobre un
soporte inerte de látex, la PCR se une a los anticuerpos absorbidos produciendo la aglutinación
de las partículas de látex, visible microscópicamente.
MUESTRA
 Suero.
REACTIVO:
 Reactivo de Látex PCR
 Buffer glicina salina
 Reactivo de control positivo.
 Reactivo de control negativo

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
EQUIPO:
 Centrífuga.
 Rotor automático
 Cronometro
MATERIALES:
 Placa de vidrio de fondo negro con celdas enumeradas.
 Micropipetas de rango variable.
 Cuentagotas (gotero)
 Palillos o varilla de vidrio para mezclar
PROCEDIMIENTO
MÉTODO CUALITATIVO.
1. Lleve el reactivo y las muestras a temperatura ambiente antes de empezar.
2. Sacuda suavemente el frasco del reactivo para dispersar y suspender las partículas de
látex, No sacuda vigorosamente.
cuentagotas de vidrio. Llene la cuentagotas con la suspensión de látex y coloque una gota
al lado de la gota de la muestra en cada celda usada.
6. Gire la placa de vidrio por 2 minutos manualmente para que la mezcla gire lentamente
dentro de las celdas o poner la palca en un rotos automático a 80-100 rpm.
7. Después de dos minutos, examine cada celda para la ausencia o presencia de
aglutinación.
MÉTODO SEMI-CUANTITATIVO
Esta reacción puede ser usada para estimar la concentración de PCR usando una serie de
diluciones. La muestra del paciente se diluye con Glicina-salina, o suero fisiológico.
Volumen de muestra 50µl 50µl 50µl 50µl
6 x titulo 6x2 6x4 6x8 6x16
mg/ml 12 24 48 96
0.05 0.05 0.05 0.05
S
Buffer o S.F. Suero 1:2 1:4 1:8 1:16

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
RESULTADOS
A. MÉTODO CUALITATIVO.
POSITIVO: Aglutinación (+, ++, +++) según la intensidad de la aglutinación.
NEGATIVO: No hay aglutinación.
B. MÉTODO SEMI-CUANTITATIVO. El título de la muestra corresponde a la máxima dilución que

presenta reactividad (aglutinación), la dilución siguiente debe ser negativa.
Dilución de aglutinación Concentración de PCR
1:2 ≥ 12 mg/ml
1:4 ≥ 24 mg/ml
1:8 ≥ 48 mg/ml
1:16 ≥ 96 mg/ml

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
MÉTODO
La artritis reumatoide es un síndrome crónico cuya etiología es desconocida, se caracteriza por
una inflamación inespecífica y generalmente simétrica de las articulaciones que a veces
evoluciona hacia la destrucción de las estructuras articulares y periarticulares.
En la articulación enferma se produce un engrosamiento de la membrana sinovial con
formación de pliegues y proliferación de linfocitos. Estas células que forman folículos linfoides
son las responsables de las síntesis de factores reumatoideos y otras inmunoglobulinas. Los
factores reumatoides son generalmente de tipo IgM anti-IgG es decir que reaccionan con las
fracciones de las IgG. También se han encontrado factores reumatoides de tipo IgG aunque en
mucha menor proporción de casos.
FUNDAMENTO DE MÉTODO:
El factor reumatoideo de tipo IgM se detecta en presencia de gamma-inmunoglobulina o

fracción II de Cohn (que en este caso es el antígeno) absorbido sobre un soporte inerte de
latex-poliestireno. Éste antígeno se une a los FR (anti-IgG) produciendo una aglutinación de las
partículas de latex-poliestireno, visible microscópicamente.
MUESTRA
 SUERO
REACTIVO:
 Reactivo de Latex FR
 Buffer glicina salina
EQUIPO:
 Centrífuga.
 Rotor automático.
 Cronometro.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
MATERIALES:
 Placa de vidrio de fondo negro con celdas enumeradas.
 Micropipetas de rango variable.
 Cuentagotas (gotero)
 Palillos o varilla de vidrio para mezclar
PROCEDIMIENTO
MÉTODO CUALITATIVO:
1. Lleve el reactivo y las muestras a temperatura ambiente.
2. Sacuda suavemente el frasco del reactivo para dispersar y suspender las partículas de látex,
cuentagotas de vidrio. Llene la cuentagotas con la suspensión de látex y coloque una gota al
lado de la gota de la muestra en cada celda usada.
6. Gire la placa de vidrio por 2 minutos manualmente para que la mezcla gire lentamente dentro
de las celdas o poner en un rotor automático a 80-100 rpm.
7. Después de dos minutos, examine cada celda para la ausencia o presencia de aglutinación.
MÉTODO SEMI-CUANTITATIVO:
Esta reacción puede ser usada para estimar la concentración de FR usando una serie de diluciones.
La muestra del paciente se diluye con Glicina-salina, o Suero fisiologico.
FR LATEX
Volumen de muestra 50µl 50µl 50µl 50µl

6 x titulo 6x2 6x4 6x8 6x16
mg/ml 12 24 48 96
0.05 0.05 0.05 0.05
Buffer Suero 1:2 1:4 1:8 1:16

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
RESULTADOS
A. MÉTODO CUALITATIVO. Una aglutinación indica que hay una concentración de FR mayor de
20 IU/ml en la muestra. Las muestras que no muestran aglutinación contienen
concentraciones de FR menores a 20 IU/ml.
B. MÉODO SEMI-CUANTITATIVO. La concentración del suero es recíproco de la dilución más alta

que exhibe una reacción positiva. Una estimación de la concentración del FR se puede
expresar en IU/ml usando la ecuación siguiente:
IU/ml de la muestra = IU/ml control x concentración del suero.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Determinación de reaginas Plasmáticas
MÉTODO
La prueba de RPR es una prueba de floculación no treponemica macroscópica que se
utiliza,para detectar y cuantificar reaginas ,un anticuerpo anti lipoideo encontrado en el
suero o plasma de personas con sífilis y ocasionalmente en personas con infecciones agudas o
crónicas entre otras condiciones aparte de la sífilis
El antígeno carbón es un preparado no treponémico especialmente diseñado para la detección
y semicuantificación por coaglutinación macroscópica en porta o microplaca de reaginas
plasmáticas, un grupo de anticuerpos dirigidos contra componentes tisulares producidos por
los pacientes infectados por Treponema pallidium.
El RPR contiene microparticulas de carbón para realizar la diferencia entre un resultado
positivo o negativo .Si una muestra contiene reaginas ocurre la floculación con las partículas
de carbón contenidas en la suspensión del antígeno,la cual aparece como un acumulo negro
Las muestras no reactivas se observan co un ligero color gris.
La determinación rápida de las reaginas plasmáticas se efectúa ensayando el antígeno (una
asociación de lípidos complejos y carbón) frente a las muestras problema. La presencia o
ausencia de una aglutinación visible es indicativa de la presencia o ausencia de reaginas
luéticas en las muestras ensayadas.
MUESTRA
 SUERO
REACTIVOS
Suspensión de Antigeno RPR
Suspensión de cardiolipina con microparticulas de carbon
PREPARACION DE REACTIVO
La suspensión del antígeno debe agitarse por 5-10 segundos antes de abrirse para
resuspender las partículas de carbón.
EQUIPOS:
 Centrífuga.
 Rotor automático.
 Cronómetro
MATERIALES:

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
 Micropipetas de rango variable 50 ul.

 Tarjetas de prueba círculos de 18 mm superficie de prueba
 Aguja 20 G
 Frasco dispensador
 Pipetas agitadoras
PROCEDIMIENTO
MÉTODO CUALITATIVO:
 Colocar una gota (50uL) de suero en la placa.o tarjeta de prueba

 Extender con un palillo en toda la celda o circulo.
 Adicionar una gota del reactivo RPR (40 uL)
 Poner al rotor a 900 RPM x 8 min. O rotar manualmente
RESULTADOS
Aglutinación: REACTIVO (continuar con el paso 2 o método cuantitativo)

No aglutinación: NO REACTIVO.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Líquido Céfalo Raquídeo
MÉTODO
Se basa en un examen físico, examen químico y examen citológico.

El líquido cefalorraquídeo es un ultrafiltrado de plasma que se forma en los plexos coroideos,
se obtiene generalmente por punción lumbar en tres frascos o recipientes estériles
(citoquímico, bacteriológico GRAM, BK, PAP)
MUESTRAS
Recepción en 3 frascos o tubos conteniendo 2-10 ml de muestra

 Tubo 1 : muchas veces contaminada con sangre (puede descartarse)
 Tubo 2 : para pruebas bioquímicas especialmente
 Tubo 3 : para cultivo, GRAM, BK.
REACTIVO
PANDY
 10 gr. De Fenol.
 150 ml de agua destilada.
PROCEDIMIENTO
1. EXAMEN FÍSICO
 Color: normal, incoloro, cristalino (cristal de roca).
 Cantidad: 2,5 ml a más
 Aspecto: transparente, ligero turbio hemático (normal: transparente)
 Densidad: VN (1 006 – 1 008)
 Coagulo y Película: debe anotarse la presencia o ausencia.
2. EXAMEN QUÍMICO
 Glucosa: ver técnica de bioquímica
 Proteínas: ver técnica de bioquímica (Reactivo Prot LCR-U)
 PANDY: a continuación se detalla

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
2.1. TÉCNICA
TUBO D
Muestra L.C.R 100 uL
Rvo PANDY (en estufa) 1 ml
2.2. RESULTADOS (LECTURA)

POSITIVO: Enturbia +, ++ y +++.
NEGATIVO: No hay reacción sigue transparente.
.3. EXAMEN CITOLÓGICO
Para este examen se realiza un recuento celular y recuento diferencial.
3.1. RECUENTO CELULAR (RC)

- Se aspira líquido de dilución en pipeta de G.B. hasta la marca 1 luego se llena
hasta la marca 11 con L.C.R. se lleva agitar por 10 minutos.
- Reposar 2 minutos dentro de una placa Petri con papel absorbente húmedo; leer
en la totalidad de la zona de la cámara de Neubauer (hemocitómetro)
Fórmula recuento celular:
Células contadas X 100

RC   leucocitos / mm3
81
3
- Valores Normales: 0– 10 leucocitos / mm
- En Lactantes: hasta 30 leucocitos / mm3
3.2 RECUENTO DIFERENCIAL

- Con el Sedimento del L.C.R. en proceso se realiza un frotis en lámina portaobjetos.
- Colorear con Wrigth y luego se hace un recuento de linfocitos y
polimorfonucleares en cien elementos.
- Informe de resultado en porcentaje, por eso la suma debe ser del 100% de
elementos:
Mononucleares (linfocitos, monocitos)
Polimorfoucleares (segmentados)
4. EXAMEN BACTERIOLÓGICO
- Gram.
- BK
- Si pide cultivo se transcribe a la sección de Microbiología.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
RESULTADOS
Volumen : ............... c.c.

Color : ...............
Aspecto : ...............
pH : ...............
Densidad : ...............
Glucosa : ............... mg/dl
Proteínas totales : ............... mg/dl
PANDY : ...............
Recuento Celular : ............... celulas/mm3
Recuento Diferencial :
Mononucleares : ............... %
Polimorfonucleares : ............... %
Observaciones : .............................................................

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Líquido Pleural, Ascítico, Sinovial y Otros
MÉTODO
Los trasudados son líquidos patológicos de origen no inflamatorio, efusiones (derrames)

pleurales, pericárdicos, peritoneal (ascitis), sinovial. Se forman como consecuencia de
trastornos circulatorios con congestión pasiva y edema.
Los exudados son líquidos patológicos de origen inflamatorio frecuentemente debido a
infecciones bacterianas, en estos el color es variable, lechoso, sanguinolento o a veces
incoloros y su aspecto de lípido a opaco contiene generalmente células y otras sustancias.
Se basa en un examen físico, examen químico y examen citológico; Y deben obtenerse en tres
frascos o recipientes estériles (citoquímico, bacteriológico GRAM, BK, PAP)
MUESTRAS
Recepción en 3 frascos o tubos conteniendo 2-10 ml de muestra

 Tubo 1 : muchas veces contaminada con sangre (puede descartarse)
 Tubo 2 : para pruebas bioquímicas especialmente
 Tubo 3 : para cultivo, GRAM, BK.
REACTIVO
RIVALTA
 Agua destilada 100 ml.
 Ácido acético glacial 1 ml
PROCEDIMIENTO
1. EXAMEN FÍSICO
 Color: normal, incoloro, cristalino (cristal de roca).
 Cantidad: 2-10 ml a más
 Aspecto: transparente, ligeramente turbio, hemático (normal: transparente)
 Densidad: VN (1 006 – 1 008)
 Coagulo y Película: debe anotarse la presencia o ausencia.
2. EXAMEN QUÍMICO
 Glucosa: ver técnica de bioquímica
 Proteínas: ver técnica de bioquímica
 RIVALTA: a continuación se detalla

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
2.1. TÉCNICA
TUBO D
Agua destilada 5 ml.
Ácido acético 4 gotas
Muestra problema 3 gotas
2.2. RESULTADOS (LECTURA)

POSITIVO: Inmediatamente de forma nubosidad blanquecina y se informa en +, ++ y
+++; según la nubosidad.
NEGATIVO: No hay reacción (transparente).
.3. EXAMEN CITOLÓGICO

Para este examen se realiza un recuento celular y recuento diferencial.
3.1. RECUENTO CELULAR (RC)

- Se aspira líquido de dilución en pipeta de G.B. hasta la marca 1 luego se llena
hasta la marca 11 con Líquido problema, se lleva agitar por 10 minutos.
- Reposar por 2 minutos en placa Petri con papel absorbente húmedo; leer en la
totalidad de la zona de la cámara de Neubauer (hemocitómetro)
Fórmula recuento celular:
Células contadas X 100

RC   leucocitos / mm3
81
3
- Valores Normales: 0– 10 leucocitos / mm
- En Lactantes: hasta 30 leucocitos / mm3
3.2 RECUENTO DIFERENCIAL

- Con el Sedimento del líquido problema en proceso se realiza un frotis en lámina
portaobjetos.
- Colorear con colorante de Wrigth y hacer el recuento de linfocitos, monocitos
(mononucleares) y polimorfonucleares en cien elementos.
- Informe de resultado en porcentaje, por eso la suma debe ser del 100% de
elementos:
Mononucleares (linfocitos, monocitos)
Polimorfoucleares (segmentados)
4. EXAMEN BACTERIOLÓGICO
- Gram.
- BK
- Si pide cultivo transferir a la sección de Microbiología.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
RESULTADOS
Volumen : ............... c.c.

Color : ...............
Aspecto : ...............
pH : ...............
Densidad : ...............
Glucosa : ............... mg/dl
Proteínas totales : ............... mg/dl
RIVALTA : ...............
Recuento Celular : ............... celulas/mm3
Recuento Diferencial :
Mononucleares : ............... %
Polimorfonucleares : ............... %
Observaciones : .............................................................

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Thevenon: Benzina Base
MÉTODO
BENZIDINA BASE.
El Test de THEVENON se realiza para la detección de hemorragias para la detección de sangre

oculta en heces.
MUESTRA
Heces (5 gr.)
* Paciente con dieta libre carne y/o exceso de verduras 72 horas antes del examen.
REACTIVOS
 Benzidina base.
 Acido acético 50%
 Agua oxigenada
MATERIALES
 Lamina portaobjetos
 Palillos
 Pipeta automática (10-100 uL)
 Punteras
PROCEDIMIENTO
 Disolver una pizca de Benzidina base en un Vial + 01 ml. De Acido Acético (50%) y mezclar
hasta lograr una disolución completa
 Obtener 1 ó 2 gotas de esta mezcla sobre una lámina portaobjeto y mezclar con una pizca
de heces utilizando un palillo, hasta obtener una mezcla homogénea.
 Agregar 1 ó 2 gotas de agua oxigenada y mezclar.
 Observar Resultados

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
RESULTADOS
* POSITIVO: Color azul según intensidad:
- Positivo (+)
- Positivo (++)
- Positivo (+++)
* NEGATIVO: No cambia al color azul.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
EN ORINA Y LCR
MÉTODO
Es un examen que mide la cantidad de proteína excretada en la orina en un período de 24
horas.
Proteinuria se define como una concentración de proteínas en la orina mayor a 300 mg/24
horas. Si es mayor entonces, generalmente se asocia a síndrome. nefrótico, donde sus causas
más frecuentes son todo tipo de glomerulopatías, enfermedades sistémicas del tejido
conectivo, diabetes mellitus, mieloma múltiple, amiloidosis, alteraciones circulatorias, como
insuficiencia cardiaca crónica, pericarditis, trombosis de la vena renal; algunas infecciones
bacterianas y virales, tumores y linfoma, entre otros.
MUESTRAS
* La técnica de la recogida de la orina de 24 horas consiste en recoger toda la orina de
un día completo, desechando la primera orina del día, pero incluyendo la primera
orina del día siguiente, para así concluir el ciclo de 24 horas.
* La recogida de orina deberá realizarse en un recipiente limpio y adecuado, de preferencia
estéril..
PROCEDIMIENTO
ORINA 24 HORAS
Muestra : 10 μl (Orina/LCR)
Reactivo de Trabajo : 500 ul
Incubar 5’ a 37ºC
Multiplicar el resultado de la lectura por el volumen de la orina en mililitros recolectada en 24
horas.
EJEMPLO:
Proteinuria Orina (24 Hrs.) = R1 = 5.7 mg/l
Volumen orina recolectada (24 hrs) = 1600 ml.
Multiplicar 5.7 mg/l x 1600 ml = 9120 / 100 = 91.2 mg/l/24 hrs.
RESULTADO:
= R1 x V1 /100
= 5.7 x 1600 / 100
Resultado Final = 91.2 mg/l/24 Horas
VALORES NORMALES
30-140 mg/l/24 Horas

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
MÉTODO
El espermatograma es quizás la prueba más sencilla de análisis del semen. En ella se evalúan
las características macroscópicas del eyaculado como volumen, pH, viscosidad, color y las
microscópicas como son la concentración y movilidad.
El estudio del semen es la prueba por excelencia para diagnosticar la infertilidad de origen
masculino
La infertilidad se define como la incapacidad de lograr un embarazo después de un año de
relaciones sexuales sin protección. Esta condición afecta a una de cada 5 parejas en edad
reproductiva. En el 40% de los casos la infertilidad se debe a un factor masculino por lo que se
hace indispensable hacer una evaluación exhaustiva del paciente.
MUESTRAS
 Tener entre tres y cinco días de abstinencia sexual.
 Tener entre tres y cinco días de abstinencia alcohólica
 El recojo de la muestra se realizara en un ambiente próximo al laboratorio, antes de una
hora.
 Muestra obtenida por masturbación, directamente a un colector estéril, de preferencia
graduado para medir volumen.
 Rotular la muestra con los datos del paciente.
PROCEDIMIENTO
1. EXAMEN MACROSCOPICO
- Aspecto: normal espeso, viscoso y blanco (opalescente, gris).
- Volumen: medir con probeta graduado Normal mayor de 2,5 ml.
2. VISCOSIDAD
- Anormal: filamento de 2 cm de longitud.
- pH: 7,2 – 7,8 medir antes de una hora.
> Infección.
< Azoospermia
3. EXAMEN MICROSCOPICO

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
MOVILIDAD:
Deposite una gota (20  l) de la muestra de semen sobre una lamina portaobjetos y cubrir
con lamina cubreobjetos, observa con 40 x e informar en porcentaje (%) según categorías:
a. movilidad progresiva, rápida lineal: “buena excelente”

b. movimiento lineal o no lineal lento: “débil o moderado”
c. motilidad no progresiva, si el espermatozoide es: “inmóvil”
4. CONCENTRACIÓN
- Cantidad media de espermatozoides en varios campos microscópico observados a 40X y
multiplicado por 10 6
Ejm: 40 espermatozoides seria: 40’000 000 /ml.
5. VIABILIDAD
- Las células muertas cuyas membranas plasmáticas están dañadas permiten la entrada
del colorante EOSINA.
- Luego se contarán 100 espermatozoides diferenciando los vivos (no coloreados) de las
muertas (coloreados) e informar en porcentaje (%).
6. RECUENTO DE ESPERMATOZO.
- Se utiliza la dilución 1:20
- Ejm: 50uL de semen con 950 uL de diluyente (alternativamente en solución fisiológica de
9‰).
6.1. DILUYENTE
- 50g de NaHCO 3 y 10ml de formalina al 35% V/V (obtativamente 50ml de solución
acuosa de violeta de genciana) mas agua destilada hasta completar 1000ml (1L) o
solución fisiológica al 9‰.
- Dejar la cámara de Neubauer en una placa petri húmeda por 5 minutos.
- Contar en el cuadrado central de la cámara de Neubauer, es decir donde se hace
recuento de glóbulos rojos con objetivo de 10X y 40X.
- Menos de 10. Espermatozoides por cuadrado, contar los 25 cuadrados grandes
Ejm: 2 espermatozoides en 25 cuadrados 10:2 0  0.2 x 10 6 = 200,000/ml

- De 10 a 40: Espermatozoides, contar 10 cuadrados grandes
- Más de 40: espermatozoides, contar 5 cuadrados grandes.
Espermatozoides millones/ml
Aumentar 6 ceros al número de espermatozoides contados.
DILUCIÓN # cuadrados grandes contados

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
(semen + diluyente ) 25 10 5
(1 + 9) 10 4 2
(1 + 19) 5 2 1
(1 + 49) 2 0.8 0.4
VALORES NORMALES
* Normal: > a 70’000 000/ml

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Prueba Rápida
MÉTODO
La inmunocromatografía para HIV sirve como diagnóstico temprano del SIDA ha sido diseñado para la
detección rápida y cualitativa de los anticuerpos IgG, IgA e IgM contra los virus de la inmunodeficiencia
humana VIH-1 y VIH-2 en la sangre total, el suero o el plasma humano.
La evaluación de paneles comerciales conteniendo anticuerpo VIH-1 del subtipo O ha dado resultados
positivos lo que demuestra que este subtipo puede detectarse con ésta prueba.
Los resultados se muestran en el dispositivo como dos líneas separadas que identifican presencia de
VIH-1 o VIH-2. Sin embargo, este método no está destinada para diferenciar entre una infección por el
VIH-1 o el VIH-2.
FUNDAMENTO
El ensayo emplea antígenos recombinantes representando las regiones inmunodominantes de las
proteínas de la envoltura de los virus VIH.1 y VIH.2 Antigenos de captura gp41 y p24 del VIH.1 son
fijados sobre la membrana en la línea de prueba 1,y el antígeno de captura gp36 del VIH 2 es
inmovilizado en la línea de prueba 2 .Los mismos antígenos marcados con un colorante se encuentran
en el vellón de conjugado del dispositivo.Una región angosta de la tira reactiva ,sensibilizada con
anticuerpos anti VIH sirve de línea de control C.
Cuando la muestra migra a travez del vellón de conjugado de anticuerpos anti VIH.1 o anti VIH.2
especificos a los antígenos recombinantes se ligan especificamente al conjugado coloreado formando
inmunocomplejos los que son inmovilizados por los antígenos de captura recombinantes fijadas en las
líneas de prueba 1 y 2 produciendo allí líneas rojas violetas .El exedente del conjugado se fija en la línea
de control C que indica el funcionamiento correcto de la prueba.
MUESTRA
SANGRE TOTAL, SUERO O PLASMA.
PROCEDIMIENTO
 Antes de comenzar el ensayo, las muestras, los TEST y el diluyente deben llevarse a
temperatura ambiente (15-25 º C)
 Sosteniendo el tip u otra pipeta verticalmente, depositar 20 ul de sangre total o 10 ul de
suero o plasma en la ventana de muestra (S) en la parte inferior del dispositivo.
 Agregar 3 gotas (aproximadamente 120 ul) de diluyente a la ventana d muestra.
 Leer los resultados dentro de los 5-20 minutos. Las muestras muy reactivas producirán una
línea de prueba ya después de algunos minutos. Las muestras de baja reactividad pueden

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
requerir un periodo más largo de incubación hasta un máximo de 20 minutos. ( no

interpretar las pruebas si transcurren más de 20 minutos)
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS.
C C C C C
2 2 2 2 2
1 1 1 1 1
Fig.1 Fig2 Fig.3 Fig.4 Fig.5
NEGATIVO (Fig.1)
Sólo la línea de control © coloreada aparece en la parte superior de la ventana rectangular indicando la
realización apropiada del ensayo y el funcionamiento correcto de los reactivos.
POSITIVO (Fig. 2, 3 y 4)
Aparición de una o dos líneas coloreadas adicionales debajo de la línea C indica un resultado positivo
para anticuerpos del VIH-1 (Línea en 1) y/o del VIH-2 (línea en 2) en la muestra. Debido a una reactividad
cruzada importante, los anticuerpos anti VIH-1 pueden reaccionar con los antígenos del VIH-2 y
viceversa, y en ocasión, dos líneas coloreadas pueden aparecer, aunque la infección ha sido causada por
un solo tipo de virus.
Aún una línea débil debe interpretarse como resultado reactivo. Intensidades diferentes entre la línea
de control y la línea de prueba pueden ocurrir, pero éstas son irrelevantes para la interpretación.
NO VÁLIDO (Fig. 5)
* Si no aparece ninguna línea de control, aún si aparece una línea de prueba, repita la prueba con un
nuevo TEST.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
Método cualitativo
MÉTODO
Se define como proteinuria a la excreción de proteína urinaria mayor de 150 mg/día
El test de turbidez de ácido sulfosalicílico (ASS) es un método cualitativo que detecta cualquier tipo de
proteína urinaria mediante precipitación de ácido. Este método es especialmente útil si se sospecha la
presencia de cadenas livianas en la orina (riñón de mieloma).
El dipstick es una cinta reactiva que contiene un indicador colorimétrico (Tetrabromofenol) que vira de
color cuando se une a proteínas. Es un método, altamente específico pero no muy sensible, que detecta
principalmente albúmina en concentraciones mayores a 30 mg/dl (300-500 mg/día). No detecta, por lo
tanto, microalbuminuria ni otro tipo de proteínas urinarias (cadenas livianas por ejemplo).
La orina muy concentrada y los medios de contraste radiológicos pueden producir falsos positivos del
dipstick.
La proteinuria generalmente representa enfermedad renal, y es un marcador de riesgo de
morbimortalidad cardiovascular y de progresión de nefropatía.
Existen condiciones fisiológicas o patológicas que pueden producir proteinuria transitoria o
intermitente, como ejercicio, fiebre, embarazo, insuficiencia cardiaca y proteinuria ortostática
PREECLAMSIA:
Síndrome que se presenta a partir de la 20ª semana de gestación o los primeros 14 días del puerperio
caracterizado por hipertensión con disfunción orgánica múltiple, proteinuria, edemas, TA > 140-90.
Puede ser :
Leve: TA > 140-90 y analítica de orina con proteinuria y edemas.
Grave: TA> 160-110, proteinuria mayor o igual a 500 mg/dl trombocitopenia, elevación de enzimas
hepáticas, cefalea persistente o trastornos visuales, dolor epigástrico persistente y oliguria (Síndrome de
Hellp).
SINTOMATOLOGÍA:
 Edema (hinchazón de manos y cara al levantarse)

 Aumento de peso
 Dolores de cabeza
 Disminución del gasto urinario
 Náuseas y vómitos
 Inflamación facial
 Presión sanguínea alta
 Agitación
 Cambios en la visión (luces chispeantes en los ojos)
 Dolor abdominal

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
CONSECUENCIAS
La proteinuria puede ser indicio de:
* Amiloidosis * Pielonefritis bacteriana

* Tumor en la vejiga * Nefropatía diabética
* Síndrome de Goodpasture * Glomerulonefritis
* Lupus eritematoso * Hipertensión maligna
* Mieloma múltiple * Síndrome nefrótico
* Enfermedad poliquística del riñón * Preeclampsia
* Terapia con fármacos nefrotóxicos
* Envenenamiento por metales pesados
* Insuficiencia cardíaca congestiva (perfusión inadecuada de los riñones)
MUESTRA
 Orina.
REACTIVOS:
 Reactivo de ácido sulfosalicílico.
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO.

 Poner 20 gr de ac. sulfosalicilico
 Mezclar en agua destilada 100ml
 Sacudir hasta disolución total
 Solucion al 20%
El acido sulfosalicilico es muy estable a temperatura ambiente durante tiempo indefinido en
un frasco cerrado
MATERIAL.
 Tips o puntera.
 Vacutainer sin anticoagulante con aguja
 Gradilla.
EQUIPO.
 Centrifuga.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
PROCEDIMIENTO
En un tubo de ensayo o un frasco limpio:

1) Colocar Más o menos 1 cc. de orina centrifugada (sobrenadante).
2] Colocar 5 gotas de ácido sulfosalicilico al 20%
3] Agitar suavemente
5] Evaluar el grado de turbidez (nubosidad)
RESULTADOS
NEGATIVO:
 Transparente o no hay cambio.
POSITIVO:
 (+) : Algo de turbidez.
 (++) : Turbidez mayor.
 (+++) : Precipita en forma franca.
 (++++) : Precipita inmediatamente.

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
SELECTRA PRO M ELITECH (Clinical Systems)
INDICACIONES
ANTES DE INICIAR SU TRABAJO TENES EN CUENTA LO SIGUEINTE:
 Si el equipo se encuentra en modo INACTIVO presionar F1 Reiniciar Sistema
* El equipo debe encontrase en el modo EN ESPERA.

INDICACIONES
PROCEDIMIENTO DE USO DIARIO
¡¡ATENCION!!
 Verificar DEPOSITO con Agua Bidestilada más 12.5 de solución de lavado.

 Verificar DEPÓSITO de deshecho (vacío).
 Verificar HCl fco. (posición 12): 25 ml de agua bidestilada más 50ul de solución de lavado.
 Verificar tubo con Agua Bidestilada en el rotor W.
 Verificar stock reactivos en el equipo

F5 Informe de Rvo.
- Según corresponda F4 F5 F6
10 ml 25 ml 50 ml
ó
- Luego:
Confirmar rellenar Ctrl - F2

Confirmar rellenar
Confirmar rellenar Shift - F2
- Luego F10
MANTENIMIENTO DIARIO

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
F10 Menú principal

F5 Funciones especiales.
F1 Rotor Sistema .
. Rotor / Lavado agujas.
F1 F2 F3
. Blanco de Rotor
F2 Blanco de Rotor.
CORRIDA DE CALIBRACIONES / CONTROLES
F10 Menú Principal

F8 Solicitud de Muestra
- Tipo de Solicitud
- ……….Rutina
Control
Calibrar
- Control
Elitrol 1
Elitrol 2
Otros 1
Otros 2

Código: 01
Revisión:01
Fecha:03/2015
Patologica
SOLICITUD RUTINA TRABAJO DIARIO
F10 MENU PRINCIPAL

F8 Solicitud de Muestras RUTINA
. Tipo de Muestra
. Numero de muestra
. Nombre del paciente.
. PRUEBAS.
. …
. …
. …
F9 Carga de muestra.
Posición/Numero de muestra/ Nombre.
F8 Solicitud de muestra/ Nueva muestra
F9 Carga de Muestra
F3 Iniciar Medición / Continuar medición
F7 Evaluar Muestra (copiar resultados).
F9 Carga de Muestra ---> F4 Confirmar descarga ---> F10 Menú principal.

PATOLOGIA CLINICA – REGISTRO DE CALIBRACIONES Y CONTROLES FECHA
AREA DE BIOQUIMICA H.R. “M.N.B.” – PUNO. HORA
VALOR FEC VALOR DECISION VALOR DECISION VALOR DECISIÓN VALOR DECISIÓN
FECHA ELITROL I ELITROL II OTROS OTROS
MES HALLADO HA HALLADO HALLADO HALLADO HALLADO
L. L. L. L. L. L. L.
CALIBRAR FIN FIN L. SUP FIN FIN
INF. SUP INF. INF. SUP INF. SUP
F. ALCALINA 126 182 342 492
GTP/ALT 41.2 59.2 127.2 183.0
GOT/ AST 34.2 49.2 111.9 161.1
B. TOTAL 0.80 1.16 3.69 5.31
B. DIRECTA 0.34 0.54 1.98 3.24
COLESTEROL 84 114 184 250
HDL 26 36 62 84
LDL 39 53 61 83
GLUCOSA PAP 79 107 215.1 290.9
LDH 133 191 258 370
ORIN PROT 10 140 50 190
TRIGLICERIDOS 98 136 183 253
AC. URICO 3.72 5.04 10.17 13.77
PROTEINAS 6.01 7.65 4.76 6.06
ALBUMINA 3.84 5.52 2.76 3.96
CREATININA 0.76 1.08 3.04 4.38

PATOLOGIA CLINICA – REGISTRO DE MANTENIMIENTO DIARIO CODIGO: FO-GG-PV-09
AREA DE BIOQUIMICA H.R. “M.N.B.” – PUNO.
CHECK LIST DE MANTENIMIENTO PREVENTIVO VERSION: 01
Sistema de Gestión Integrado PAGINA:
MES: EQUIPO: SLECTRA PRO M AREA: BIOQUIMICA ENCARGADO: JEFE DE AREA: Blgo. Mario David Arela Mamani
N° MANTENIMIENTO DIARIO 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
1 Asegurarse que el contenedor de deshechos este vacía.
Asegurarse de que el depósito de agua esté lleno. Rellene si es
2
necesario.
Revise las jeringas: asegurarse que no exista fuga de líquidos ni exista
3
burbujas de aire.
Retire la tapa del rotor, revisar la operatividad del agitador, debe girar
4
con facilidad.
Compruebe si la unidad de refrigeración está funcionando
5 adecuadamente (palpar el rotor de reactivos, si hay condensación se
debe secar el agua).
Realizar: en rotor/lavado de agujas, lavar/llenar rotor (F2),
6 seguidamente blanco del rotor y revisar la gráfica, anotar de cubetas a
340nm.
7
9
Ejecutado por Analista (escribir el cuadro correspondiente al día, iniciales del
nombre)
N° MANTENIMIENTO SEMANAL Semana 1 Semana 2 Semana 3 Semana 4 Semana 5 N° PERSONAL: ANALISTA INICIALES
1
1
2
3
2
4
5
3
6
Ejecutado por Analistas (rubrica o iniciales de nombre) 7
N° MANTENIMIENTO PREVENTIVO (mensual y semestral) ENERO FEBRERO MARZO ABRIL MAYO JUNIO JULIO AGOSTO SETIEMBRE OCTUBRE NOVIEMBREDICIEMBRE
4
Ejecutado: Item 1 al 3: Analista – Item 4: Servicio técnico
OBSERVACIONES:
_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

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2.1METODOLOGIA E INSTRUMENTACIÓN EN LOS EXÁMENES BIOQUÍMICOS:

Componentes de un Fotómetro o Espectrofotómetro

Amarillo 430-475 Azul

Blgo. Mario David Arela Mamani Página 5 Manual de Bioquímica

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE BIOQUIMICA Revisión:01

Rojo 495-505 Azul verdoso

2.1.2 MÉTODOS DE ANÁLISIS BIOQUÍMICOS:

2.1.2.1 Métodos de Punto Final

a. PARA DETERMINACIÓN DE LA GLUCOSA (MÉTODO DE PUNTO FINAL)

 Fundamento del método.

Blgo. Mario David Arela Mamani Página 6 Manual de Bioquímica

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La determinación de glucosa se efectúa mediante el método de Trinder según las

Abreviaturas: GOD = Glucosa oxidasa

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE BIOQUIMICA Revisión:01

Reactivo 500uL 500 uL 500 uL

Abs. Muestra x Factor = RESULTADO mg/Dl

Linealidad del método:

Calibre periódicamente colocando un Standard en cada corrida. De esta forma

Dentro de este método se encuentran las pruebas de:

2.1.2.2 MÉTODOS DE TIEMPO FIJO.

Blgo. Mario David Arela Mamani Página 8 Manual de Bioquímica

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE BIOQUIMICA Revisión:01

 Fundamento del método.

 Mezcla reactivo de trabajo:

Blgo. Mario David Arela Mamani Página 9 Manual de Bioquímica

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE BIOQUIMICA Revisión:01

- Longitud de onda: 490 nm (490-510)

Mezclar y leer en el Analizador Bioquímico Semiautomático.

2.1.2.3 MÉTODOS CINÉTICOS.

a. PARA DETERMINACION DE ASPARTATO AMINO TRANSFERASA – TGO

 Fundamento del método:

Blgo. Mario David Arela Mamani Página 10 Manual de Bioquímica

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE BIOQUIMICA Revisión:01

nicotina mida adenina reducida (NADH) a dinucleótido de nicotina mida adenina

 Esquema De La Reacción Química

REACTIVO 2 NADH 0.i8 mmol/L

Semi micro test

Blgo. Mario David Arela Mamani Página 11 Manual de Bioquímica

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS DE BIOQUIMICA Revisión:01

* Preparación reactivo de trabajo: R1 400ul + R2 100ul

Dentro de este método se encuentran:

Blgo. Mario David Arela Mamani Página 12 Manual de Bioquímica

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