CULTIVO Y TIPIFICACIN DE HONGOS DERMATOFITOS

El estudio sistemtico de los hongos cuenta solamente 270 aos,

pero las manifestaciones de este grupo de organismos han sido
conocidos por el hombre desde hace miles de aos. La invasin
fngica en tejido humano fue reconocida a inicios de los 1800.
El termino hongos se utiliza para incluir organismos con ncleos
portadores de esporas aerofilos que por lo general se reproducen
sexual y asexualmente y cuyas estructurassomticas por lo comn
filamentosas y ramificadas estn tpicamente rodeadas por una pared
celular que contiene celulosa y/o quitina.
Los hongos son hetertrofos es decir requieren materia orgnica
preformada que utilizan como fuente de energa y de carbono para la
sntesis de estructuras celulares. La absorcin de los nutrientes se da
por accin de enzimas extracelulares que se liberan en el medio para
obtener nutrientes simples y solubles.
Cada hongo tiene sus exigencias alimenticias algunas son omnvoras
y pueden subsistir sobre cualquier sustrato que contenga sustancia
orgnica (cueros, etc). Otros son ms restringidos pues requieren
protoplasma vivo y determinada especie hospedante.1

Los hongos dermatofitos son un grupo de hongos queratinofilicos,

taxonmicamente relacionados, que son causantes de la
dermatofitosis, infeccin de los tejidos queratinizados (piel, pelo y
uas).
Los agentes etiolgicos se clasifican en tres gneros diferentes:
Microsporum, Trichopyton y Epidermophyton.
El cultivo es un procedimiento de diagnsticoespecfico, que nos
permite tipificar con certeza el gnero y la especie causal de la
micosis causada por hongos dermatofitos. El diagnostico se basa
fundamentalmente en el uso de claves taxonmicas que aplica
criterios morfolgicos, macro y microscpicos, relacionado con la fase
de reproduccin asexual, que observamos en el cultivo.
MATERIALES
-

Tubos conteniendo medio de cultivo agar Sabouraud glucosado

en pico de flauta.

Tubos conteniendo medio de cultivo agar papa glucosadoen

pico de flauta
Asa de siembra
Muestra clnica

PROCEDIMIENTO
-

Procesar las muestras de forma inmediata, preferentemente.

Sembrar por puntura con una diferencia de 1 cm entre puntura
y puntura la muestra clnica.
Sembrar la muestra clnica en cuatro tubos con el medio de
cultivo elegido
Incubar a 25-30C entre 7 a 30 das como mximo

LECTURA
MORFOLOGIA MACROCOPICA
El color de las colonias presenta en general colores claros, desde
tonos blanquecinos, rojos, amarillentos a marrn claro y naranja.
MORFOLOGIA MICROSCOPICA
-

Las caractersticas microscpicas son las que determinan su

identificacin en la mayora de los casos
Se observan en el microscopio a 40X y aplicar los criterios de
las claves taxonmicas2.

EXAMEN DIRECTO CON HIDROXIDO DE POTASIO AL 10%

El KOH al 10% es una solucin que disuelve la queratina y se utiliza
para muestras clnicas con abundantes clulas y restos celulares, sin
afectar la morfologa de los elementos fngicos permitiendo su mejor
visualizacin.
MATERIALES
-

Lamina portaobjeto 75x 25mm, limpia y desengrasada

Lamina cubre objeto 22x 22 mm.
Pipeta de transferencia estril de 2 ml
KOH 10%
Asa de siembra
Plumn marcador

PROCEDIMIENTO
1. Con un plumn marcador escribir
el borde de la lmina
portaobjeto el cdigo de la muestra clnica a examinar.
2. Colocar una gota del KOH 10% en el centro de la lmina
portaobjeto.
3. Esterilizar a la llama el asa de siembra
4. Agregar con el asa de siembra, sobre la gota del KOH, una
porcin de la muestra clnica a examinar.
5. Colocar una laminilla cubreobjetos encima de la preparacin y
dejar a temperatura ambiente por 3 minutos.
6. Observar al microscopio con objetivo de 10x y 40x.
LECTURA
NEGATIVO
-

Cuando hay ausencia de elementos fngicos.

POSITIVO
-

Cuando se observa elementos fngicos se reporta de la

siguiente manera:
Presencia de hifas hialinas, tabicadas o ambas.
Presencia de levaduras
Presencia de hifas y lavaduras

TECNICA DE TINTA CHINA

Es un mtodo de contraste. Permite visualizar la cpsula de
polisacrido de Cryptococcus neoformans, mediante la presencia de
un halo claro y ntido alrededor de lalevadura.
Existen artefactos (hemates, burbujas de aire, leucocitos,gotas de
grasa y partculas de talco) que puedeninterferir y confundir al
analista.
La sensibilidad de la tcnica es de 50% en pacientes sinVIH y se
puede incrementar hasta 88% en pacientes VIHcon meningitis
criptococsica.
IDENTIFICACIN DE Cryptococcus neoformans.
a) Morfologa de las colonias
Son mucoides y brillantes. Sobre el ASD desarrollanun color blanco
amarillento, son poco elevadas y debordes continuos, mientras que
sobre el agar nigerseed (agar semilla de girasol) desarrollan un
colormarrn.

Desarrollo de Cryptococcusneoformanssobre agar

Sabouraud dextrosa despus de 72 horas de crecimiento
a 37 C.

Examen microscpico
Levaduras redondas de 7 a 15 m de dimetro, en algunos casos
pueden producir blastoconidias. Su principal caractersticas es la de
presentar una cpsulaque la circunda, visible al examen directo con
latinta china.
Control positivo: Cryptococcus neoformans.
Control negativo: Candida albicans

Cpsula de polisacrido visible al examen directo con tinta

china (objetivo de 100X).

En una lmina portaobjeto colocar:

- Tinta china 1 gota
- Agua destilada o solucin fisiolgica 1 - 2 gotas
- Emulsificar la muestra.
- Colocar laminilla cubreobjeto